IPC分类号 : C08L5/08,C08L39/00,C08L1/28,C08K9/04,C08K9/02,C08K3/22,C08J3/24,H01F1/42,C09K11/88,C09K11/02,C08B37/08
专利摘要
本发明属于纳米材料制备领域，具体涉及一种磁性荧光复合纳米颗粒的制备方法，首先以带负电荷的羧甲基壳聚糖修饰的磁性纳米粒子为核，然后在聚二烯丙基二甲基胺盐酸盐（PDDA）、离子交联剂和聚阴离子型高分子有机物的作用下，通过离子交联法连接水溶性量子点得到磁性荧光复合纳米颗粒。本发明所述的荧光量子点均匀分布在磁性纳米颗粒的表面，其中磁性纳米颗粒的粒径大小在10-200nm，量子点的粒径在1.5-10nm。本发明反应条件温和，操作方法简单，制备的复合纳米颗粒具有良好的发光性能和磁性能，可用作生物体内靶向定位和生物荧光成像方面。
权利要求
1.一种磁性荧光复合纳米颗粒的制备，其特征在于：以带负电荷的羧甲基壳聚糖修饰的磁性纳米粒子、聚二烯丙基二甲基氯化铵（PDDA）、离子交联剂和聚阴离子型高分子有机物通过离子交联法连接水溶性量子点得到，所述荧光量子点以单分散形式均匀分布在磁性纳米颗粒的表面，其中磁性纳米颗粒的粒径大小在10-200 nm，量子点的粒径在1.5-10 nm。
2.根据权利要求1所述的一种磁性荧光复合纳米颗粒的制备，其特征在于，所述的制备方法包括以下步骤：
（a） 采用共混包埋法制备羧甲基壳聚糖磁性纳米复合物（Fe3O4-CMCH）：①称取50-500mg磁性纳米颗粒溶于30 mL pH =7.4，浓度为0.01mol/L的PBS缓冲溶液中，通氮气去氧，利用超声波清洗机将磁性粒子分散均匀；②称取10-800 mg羧甲基壳聚糖溶于20 mL pH=7.4的PBS缓冲溶液中，同时加入0.1-0.5 g 1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐（EDAC）活化羧甲基壳聚糖表面的基团；③将①和②两溶液混合，在恒温水浴振荡器中25℃振荡2-6 h，再依次用蒸馏水和PBS( pH=7.4)缓冲溶液充分洗涤，即得到羧甲基壳聚糖磁性纳米复合物；
（b）采用离子交联法制备磁性荧光复合纳米颗粒：
取制备的浓缩的水相量子点溶于蒸馏水中，加入聚阴离子型高分子有机物和离子交联剂，其中聚阴离子型高分子有机物和离子交联剂的质量浓度分别为0.33-6.67 mg/mL和0.67-2.67 mg/mL，得到反应溶液A；取0.005-0.05g步骤（a）中制备的羧甲基壳聚糖修饰的磁性纳米复合物溶于蒸馏水中，超声20-60 min，使磁性纳米微粒分散均匀，并加入聚二烯丙基二甲基氯化铵得到反应溶液B；将反应溶液A逐滴加入到反应溶液B中，常温下振荡反应2-10 h，离心分离，蒸馏水洗涤，即得到磁性荧光复合纳米颗粒；其中聚二烯丙基二甲基氯化铵：聚阴离子型高分子有机物：离子交联剂的质量比为1:0.1-2:0.01-0.5。
3.根据权利要求1或2所述的一种磁性荧光复合纳米颗粒的制备，其特征在于，所述的磁性荧光复合纳米颗粒的粒径为10-220 nm；所述的磁性纳米颗粒（MNPs）为超顺磁、顺磁或铁磁性的金属及金属氧化物，选自Fe3O4、Fe2O3、MeFe2O4(Me=Co、Mn、Ni)、化合物钕铁硼、钐钴等、金属Fe、Co、Ni以及合金Fe2Co、Ni2Fe的金属氧化物的纳米颗粒中的一种；磁性纳米颗粒的制备方法包括共沉淀法、水热法；磁性纳米颗粒表面含有羟基、氨基、羧基中的至少一种。
4.根据权利要求1或2所述的一种磁性荧光复合纳米颗粒，其特征在于，所述的量子点为表面带有亲水基团的水溶性量子点，量子点为II-VI族半导体材料，或者为II-VI族半导体材料形成的复合材料，所述量子点粒径为1.5-10 nm；优选的量子点为ZnSe、CdSe、CdTe、CdS、ZnSe/ZnS、CdS/ZnS、CdSe/ZnS、CdTe/ZnS、ZnXCd1-XSe、CdSe1-XSX、CdSe1-XTeX、CdSe/ZnSe、CdS/ZnSe、CdTe/ZnSe、CdSe/CdS、CdTe/CdS、CdS/ZnXCd1-XS、ZnSe/ZnXCd1-XS、CdSe/ZnXCd1-XS或CdTe/ZnXCd1-XS中的一种，其中0＜X＜1。
5.根据权利要求1或2所述的一种磁性荧光复合纳米颗粒，其特征在于，所述的离子交联剂包括三聚磷酸盐、四聚磷酸盐、六偏磷酸盐、焦磷酸盐、钼酸盐、透明质酸或γ-聚谷氨酸中的一种或几种；聚阴离子型高分子有机物羧甲基纤维素钠、纤维素硫酸钠、纤维素羧酸钠、羧酸纤维素、羧甲基壳聚糖、羧甲基纤维素钾或羧甲基纤维素钠钾中的一种或几种；所述的羧甲基壳聚糖可选用O-羧甲基壳聚糖或N, O-羧甲基壳聚糖；聚二烯丙基二甲基氯化铵的分子量和质量浓度分别为1×105-2×105和0.51-5.1 mg/mL。
6.根据权利要求2所述的一种磁性荧光复合纳米颗粒，其特征在于，步骤（a）中羧甲基壳聚糖在磁性纳米颗粒表面的厚度为3-10 nm；步骤（b）中羧甲基壳聚糖磁性纳米复合物与量子点的摩尔比为1:1-1:20。
7.根据权利要求4所述的水溶性量子点的制备，其特征是：所述量子点表面含有巯基、羧基、氨基中的至少一种；半导体量子点合成中所使用的亲水基团配体包括3-巯基丙酸、巯基乙酸、L-半胱氨酸、2-巯基丙酸、巯基丁酸、巯基戊酸、巯基己酸、巯基丁二酸、巯基乙醇、谷胱甘肽、巯基丙醇或巯基乙胺中的一种或几种。
说明书
技术领域
本发明涉及一种多功能纳米复合微球的制备方法，具体涉及一种磁性荧光复合纳米颗粒的制备方法，该复合微粒同时具备了量子点的荧光性能和磁性纳米颗粒的磁性能，可用作生物体内靶向定位和生物荧光成像方面。
背景技术
量子点和磁学纳米微粒已经在很多领域尤其是生物医学领域显示出明显的优势。但他们往往只具有单一的功能，如量子点的荧光标记、磁性微粒的磁性分离等，如果将两种功能-分离和标记功能溶于一体，通过一定的物理化学工艺制备出新型的磁性荧光纳米复合材料，使其作为荧光探针的同时，还具有良好的磁响应特性。因此，磁性荧光纳米颗粒具有磁分离与荧光示踪双重功能，其性能和应用范围都远远超过了单一功能的纳米粒子，不仅可以进行生物分子水平上的检测和分离；还实现了多种模式成像，即荧光成像、磁共振成像(MRI)和激光共聚焦显微成像。
到目前为止，磁性荧光复合材料的常用制备方法包括层层自组装法、包埋法、以及共价结合法等。包埋法(encapsulation)是目前较为简单成熟的一种实现磁性纳米粒子与量子点组装的方法。主要过程是，预先制备磁性纳米粒子和量子点，然后将利用表面活性剂、聚电解质分子等将其一起包埋于内核中，从而形成磁性荧光复合的纳米/微米球。利用聚合物在包覆两种纳米粒子的同时还能保留聚合物的特性。其外壳材料要求有良好的生物相容性和结构稳定性，同时还要易于进一步表面功能化修饰，以便与特定的目标分子进行连接，最终实现靶向性。
以可生物降解的高分子材料作为包覆材料，具有无毒、可生物降解、良好的组织相容性等特点，在医学及生物领域有着广泛的应用前景。羧甲基壳聚糖作为壳聚糖的一种衍生物，是壳聚糖经羧甲基化得到的带负电荷的水溶性多糖，它具有无毒、无刺激、无致敏性、无致突变作用、无溶血效应，良好的生物相容性、生物降解性和黏附性，同时克服了壳聚糖只能溶于酸性溶液的缺陷，显示出了普通壳聚糖不具有的优良性质。
离子交联法是指在离子交联剂作用下，原料中的大分子链间通过化学键联结起来，形成网状或体形结构高分子材料的方法。离子交联法通常也叫物理交联法，其优点是制备过程中不使用有机溶剂，避免了大部分化学交联剂如戊二醛交联剂对人体的危害，所以这种方法被广泛使用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种离子交联法制备磁性荧光复合纳米颗粒的方法，该方法制备的复合纳米微粒具有磁响应性强、光稳定性高、制备工艺简单、分散性好且尺寸均匀等优点，同时由于高分子有机物的包覆作用，制备出的复合纳米颗粒还具有高的比表面积、良好生物相容性、生物功能性及生物可降解性等特点，在纳米生物技术领域具有更广泛的应用。
本发明是通过以下措施实现的：
一种磁性荧光复合纳米颗粒的制备方法，采用以下步骤：
（a）采用共混包埋法制备羧甲基壳聚糖磁性纳米复合物（CMCH-MNPs）：
①称取50-500mg磁性纳米颗粒溶于30 mL pH =7.4，浓度为0.01mol/L的PBS缓冲溶液中，通氮气去氧，利用超声波清洗机将磁性粒子分散均匀；②称取10-800 mg羧甲基壳聚糖溶于20 mL pH =7.4的PBS缓冲溶液中，同时加入0.1-0.5 g 1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐（EDAC）活化羧甲基壳聚糖表面的基团；③将①和②两溶液混合，在恒温水浴振荡器中25℃振荡2-6 h，再依次用蒸馏水和PBS( pH=7.4)缓冲溶液充分洗涤，即得到羧甲基壳聚糖磁性纳米复合物；
（b）采用离子交联法制备磁性荧光复合纳米颗粒：
取制备的浓缩的水相量子点溶于蒸馏水中，并加入聚阴离子型高分子有机物和离子交联剂，其中聚阴离子型高分子有机物和离子交联剂的质量浓度分别为0.33-6.67 mg/mL和0.67-2.67 mg/mL，得到反应溶液A；取0.005-0.05g步骤（a）中制备的羧甲基壳聚糖修饰的磁性纳米复合物溶于蒸馏水中，超声20-60 min，使磁性纳米微粒分散均匀，并加入聚二烯丙基二甲基氯化铵得到反应溶液B；将反应溶液A逐滴加入到反应溶液B中，常温下振荡反应2-10 h，离心分离，蒸馏水洗涤，即得到磁性荧光复合纳米颗粒；其中聚二烯丙基二甲基氯化铵：聚阴离子型高分子有机物：离子交联剂的质量比为1:0.1-2:0.01-0.5。
本发明所述的磁性荧光复合纳米颗粒的制备，磁性荧光复合纳米颗粒的粒径为10-220 nm；磁性纳米颗粒（MNPs）是具有超顺磁、顺磁或铁磁性的金属及金属氧化物，选自Fe3O4、Fe2O3、MeFe2O4(Me=Co、Mn、Ni)、化合物钕铁硼、钐钴等、金属Fe、Co、Ni以及合金Fe2Co、Ni2Fe的金属氧化物的纳米颗粒中的一种；磁性纳米颗粒的制备方法包括共沉淀法、水热法；磁性纳米颗粒表面含有羟基、氨基、羧基中的至少一种。
本发明所述的量子点为表面带有亲水基团的水溶性量子点，量子点为II-VI族半导体材料，或者为II-VI族半导体材料形成的复合材料，所述量子点粒径为1.5-10 nm；优选的量子点为ZnSe、CdSe、CdTe、CdS、ZnSe/ZnS、CdS/ZnS、CdSe/ZnS、CdTe/ZnS、ZnXCd1-XSe、CdSe1-XSX、CdSe1-XTeX、CdSe/ZnSe、CdS/ZnSe、CdTe/ZnSe、CdSe/CdS、CdTe/CdS、CdS/ZnXCd1-XS、ZnSe/ZnXCd1-XS、CdSe/ZnXCd1-XS或CdTe/ZnXCd1-XS中的一种，其中0＜X＜1。
本发明所述的离子交联剂包括三聚磷酸盐、四聚磷酸盐、六偏磷酸盐、焦磷酸盐、钼酸盐、透明质酸或γ-聚谷氨酸中的一种或几种；聚阴离子型高分子有机物羧甲基纤维素钠、纤维素硫酸钠、纤维素羧酸钠、羧酸纤维素、羧甲基壳聚糖、羧甲基纤维素钾或羧甲基纤维素钠钾中的一种或几种；所述的羧甲基壳聚糖可选用O-羧甲基壳聚糖或N, O-羧甲基壳聚糖；聚二烯丙基二甲基氯化铵的分子量和质量浓度分别为1×105~2×105和0.51~5.1 mg/mL。
本发明所述的磁性荧光复合纳米颗粒制备，步骤（a）中羧甲基壳聚糖在磁性纳米颗粒表面的厚度为3-10 nm；步骤（b）中羧甲基壳聚糖磁性纳米复合物与量子点的摩尔比为1:1~1:20。
本发明所述量子点表面含有巯基、羧基、氨基中的至少一种；半导体量子点合成中所使用的亲水基团配体包括3-巯基丙酸、巯基乙酸、L-半胱氨酸、2-巯基丙酸、巯基丁酸、巯基戊酸、巯基己酸、巯基丁二酸、巯基乙醇、谷胱甘肽、巯基丙醇或巯基乙胺中的一种或几种。
本发明的有益效果：
（1）本发明中选用水溶性羧甲基壳聚糖及其它多糖衍生物代替普通的壳聚糖，避免酸性介质的使用，排除了酸性介质带来的不良影响，扩大了在生物医学领域的应用范围；
（2）本发明通过离子交联法利用相反电荷聚电解质物质之间的静电作用组装成磁性荧光复合纳米颗粒，无需使用有机溶剂，反应条件温和，可最大限度保护生物分子的活性；
（3）本发明选择聚二烯丙基二甲基氯化铵（PDDA）作为阳离子聚电解质，它具有安全、无毒、易溶于水且水解稳定性好、凝聚力强等特性，避免了使用其它有机聚合物电解质造成的生物毒性；
（4）本发明中由于羧甲基壳聚糖对磁性微粒的修饰作用，有效避免了磁性材料的泄漏及对量子点的荧光淬灭作用；最终产物的粒径大小、荧光性能及磁性能，可以通过调控水溶性量子点与磁性纳米颗粒的摩尔比、聚阴离子型高分子有机物的浓度、离子交联剂浓度等，制得不同性能的磁性荧光复合纳米颗粒，可以用来进行生物体定向药物运输和生物体荧光成像；同时，本发明制备工艺简单、条件温和，对活性物质能起到最大程度的保护。
附图说明
图1 磁性荧光复合纳米颗粒的XRD图谱
图2 磁性荧光复合纳米颗粒的荧光光谱和吸收光谱
图3磁性荧光复合纳米颗粒的TEM照片
图4磁性荧光复合纳米颗粒的磁滞回线。
具体实施方式
下面通过具体实施例说明本发明的技术方案，但是本发明的技术方案不以具体实施例为限。
实施例1：
1.1 水相制备CdTe量子点。在氮气保护下，将0.0945g NaBH4与0.0063g Te粉溶于5 mL蒸馏水中，加热至40℃，完全溶解后得到NaHTe溶液；取0.293 g Cd(Ac)2溶入100 mL蒸馏水中，待其完全溶解后加入2.0 mmol巯基乙酸，用1mol/L的NaOH溶液调节pH=11，得到Cd的前驱体溶液；将Cd的前驱体转入三口瓶中，在氮气保护下迅速注入NaHTe溶液，油浴100℃回流，磁力搅拌3h后取出放入冰箱中快速冷却至室温，得到红色溶液，即为制备好的CdTe QDs溶液。
1.2 采用水热法制备Fe3O4纳米颗粒。称取3 g FeCl3溶于80 mL乙二醇中搅拌超声溶解，加入分子量为2000的聚乙二醇2 g，醋酸钠7 g，搅拌超声使之溶解，将前驱体溶液转入水热反应釜中，在200℃反应5 h，反应完成后将所得溶液用水与无水乙醇交替洗涤，经真空干燥，得到干燥的Fe3O4磁性纳米颗粒。
1.3采用共混包埋法制备羧甲基壳聚糖磁性纳米复合物（Fe3O4-CMCH）。称取0.08 g Fe3O4磁性纳米颗粒溶于30 mL pH =7.4，浓度为0.01mol/L的PBS缓冲溶液中，通氮气去氧，利用超声波清洗机将磁性粒子分散均匀，得到分散均匀的Fe3O4纳米颗粒溶液；称取0.2 g羧甲基壳聚糖溶于20 mL pH =7.4的PBS缓冲溶液中，同时加入0.1 g 1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐（EDAC）活化羧甲基壳聚糖表面的基团；之后将羧甲基壳聚糖溶液加入Fe3O4纳米颗粒溶液，在恒温水浴振荡器中25℃振荡2 h，反应结束后用磁铁收集产物，再依次用蒸馏水和PBS( pH=7.4)缓冲溶液充分洗涤，即得到羧甲基壳聚糖磁性纳米复合物。
1.4采用离子交联法制备磁性荧光复合纳米颗粒。取1.1制备的浓缩的水相CdTe量子点，异丙醇分离提纯后溶于5mL蒸馏水中，并加入多聚磷酸钠和羧甲基壳聚糖，其中多聚磷酸钠和羧甲基壳聚糖的浓度分别为1 mg/mL和1.5 mg/mL，CdTe量子点浓度为0.04mol/L，得到反应溶液A；取0.01g步骤1.3中制备的羧甲基壳聚糖修饰的磁性纳米复合物溶于10 mL蒸馏水中，超声30 min，使磁性纳米微粒分散均匀，并加入质量浓度为1 mg/mL 聚二烯丙基二甲基氯化铵，得到反应溶液B；将A溶液逐滴加入B溶液中，在25℃的恒温水浴振荡器中振荡4h，磁铁收集反应产物，用蒸馏水清洗反应产物，即得磁性荧光双功能纳米材料。图1磁性荧光复合纳米颗粒的XRD图谱。
实施例2：
2.1采用水相法制备CdTe/ZnS量子点. 首先采用化学共沉淀法制备CdTe量子点，制备方法如上述实施例1中所述，不同点是反应时间为4h。取制备好的CdTe量子点溶在30 mL蒸馏水中，其中CdTe量子点的浓度为1.67×10-3 mol/L，加入0.0329 g Zn(Ac)2、0.0921 g还原性谷胱甘肽，用配置好的浓度为1 mol/L NaOH溶液调节pH值为8，在磁力搅拌下，油浴100℃回流，磁力搅拌反应2 h后放入冰箱快速冷却至室温，得到水溶性高发光效率的CdTe/ZnS量子点。
2.2采用水热法制备Fe3O4磁性纳米颗粒。取2.78 g FeSO4·7H2O、4.32 g FeCl3·6H2O溶于30 mL蒸馏水中，磁力搅拌溶解后，再加入30 mL乙二醇，搅拌均匀后在氮气保护下，加入三口瓶中，用配置好的浓度为2 mol/L的NaOH溶液调节pH至9-11，加入表面活性剂聚乙烯吡咯烷酮0.15 g，充分搅拌后反应30min，制得Fe3O4磁性纳米颗粒的前驱体。将Fe3O4磁性纳米颗粒的前驱体转入水热反应釜中，在160℃下反应6h。反应完成后将所得溶液用水与无水乙醇交替洗涤，经真空干燥，得到干燥的Fe3O4磁性纳米颗粒。
2.3采用共混包埋法制备羧甲基壳聚糖磁性纳米复合物（Fe3O4-CMCH）。称取0.2 g Fe3O4磁性纳米颗粒溶于30 mL pH =7.4，浓度为0.01mol/L的PBS缓冲溶液中，通氮气去氧，利用超声波清洗机将磁性粒子分散均匀，得到分散均匀的Fe3O4纳米颗粒溶液；称取0.5 g羧甲基壳聚糖溶于20 mL pH =7.4的PBS缓冲溶液中，同时加入0.3 g 1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐（EDAC）活化羧甲基壳聚糖表面的基团；之后将羧甲基壳聚糖溶液加入Fe3O4纳米颗粒溶液，在恒温水浴振荡器中25℃振荡4 h，反应结束后用磁铁收集产物，再依次用蒸馏水和PBS( pH=7.4)缓冲溶液充分洗涤，即得到羧甲基壳聚糖磁性纳米复合物。
2.4 采用离子交联法制备磁性荧光复合纳米颗粒。取2.1制备的浓缩的水相CdTe/ZnS量子点，异丙醇分离提纯后溶于5mL蒸馏水中，并加入四聚磷酸钠和羧甲基纤维素钠，其中四聚磷酸钠和羧甲基纤维素钠的浓度分别为1.5 mg/mL和3 mg/mL，CdTe/ZnS量子点浓度为0.05mol/L，得到反应溶液A；取0.02 g步骤2.3中制备的羧甲基壳聚糖修饰的磁性纳米复合物溶于10 mL蒸馏水中，超声30 min，使磁性纳米颗粒分散均匀，并加入质量浓度为2 mg/mL 聚二烯丙基二甲基氯化铵，得到反应溶液B；将A溶液逐滴加入B溶液中，在25℃的恒温水浴振荡器中振荡6h，磁铁收集反应产物，用蒸馏水清洗反应产物，即得磁性荧光双功能纳米材料。图2为制备的磁性荧光复合纳米颗粒的荧光光谱和吸收光谱。
实施例3：
3.1 ZnSe/ZnS量子点溶液的制备。首先采用化学共沉淀法制备ZnSe量子点，在氮气保护下，将0.01g NaBH4与0.0061g Se粉溶于2 mL蒸馏水中，加热至40℃，完全溶解后得到NaHSe溶液；取0.0439 g Zn(Ac)2溶入20 mL蒸馏水中，待其完全溶解后加入还原型谷胱甘肽0.0737g，用1mol/L的NaOH溶液调节pH=11.5，得到Zn的前驱体溶液；将Zn的前驱体转入三口瓶中，在氮气保护下迅速注入NaHSe溶液，油浴100℃回流，磁力搅拌1h后取出放入冰箱中快速冷却至室温，得到无色透明溶液，即为制备好的ZnSe QDs溶液。取制备好的ZnSe量子点15 mL，其中ZnSe量子点的浓度为2.7×10-3 mol/L，加入0.0138 g Zn(Ac)2、0.0277 g还原性谷胱甘肽和0.01 g硫脲，用配置好的浓度为1 mol/L NaOH溶液调节pH值为10.5，在磁力搅拌下，油浴100℃回流，磁力搅拌反应2 h后放入冰箱快速冷却至室温，得到淡黄色水溶性高发光效率的ZnSe/ZnS量子点。
3.2磁性纳米颗粒的制备。采用专利公开号为CN101597495A的方法制备Fe3O4/CoO核壳结构磁性纳米颗粒。
3.3采用共混包埋法制备羧甲基壳聚糖磁性纳米复合物。称取0.35 g Fe3O4/CoO磁性纳米颗粒溶于30 mL pH =7.4，浓度为0.01mol/L的PBS缓冲溶液中，通氮气去氧，利用超声波清洗机将磁性粒子分散均匀，得到分散均匀的Fe3O4/CoO纳米颗粒溶液；称取0.65 g羧甲基壳聚糖溶于20 mL pH =7.4的PBS缓冲溶液中，同时加入0.3 g 1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐（EDAC）活化羧甲基壳聚糖表面的基团；之后将羧甲基壳聚糖溶液加入Fe3O4/CoO纳米颗粒溶液，在恒温水浴振荡器中25℃振荡5 h，反应结束后用磁铁收集产物，再依次用蒸馏水和PBS( pH=7.4)缓冲溶液充分洗涤，即得到羧甲基壳聚糖磁性纳米复合物。
3.4采用离子交联法制备磁性荧光复合纳米颗粒。取3.1制备的浓缩的水相ZnSe/ZnS量子点，异丙醇分离提纯后溶于5mL蒸馏水中，并加入焦磷酸钠和纤维素硫酸钠，其中焦磷酸钠和纤维素硫酸钠的浓度分别为2 mg/mL和4 mg/mL，ZnSe/ZnS量子点浓度为0.1 mol/L，得到反应溶液A；取0.035 g步骤3.3中制备的羧甲基壳聚糖修饰的磁性纳米复合物溶于10 mL蒸馏水中，超声30 min，使磁性纳米微粒分散均匀，并加入质量浓度为2 mg/mL 聚二烯丙基二甲基氯化铵，得到反应溶液B；将A溶液逐滴加入B溶液中，在25℃的恒温水浴振荡器中振荡6h，磁铁收集反应产物，用蒸馏水清洗反应产物，即得磁性荧光双功能纳米材料。图3为制备的磁性荧光复合纳米颗粒的TEM照片。
实施例4：
4.1 采用水相法制备CdSe量子点. 在氮气保护下，将0.0106 g NaBH4与0.0063 g Se粉溶于2 mL蒸馏水中，加热至40℃，完全溶解后得到NaHSe溶液；取0.0533 g Cd(Ac)2溶入20 mL蒸馏水中，待其完全溶解后加入1.0 mmol 巯基丙酸，用1mol/L的NaOH溶液调节pH=11.5，得到Cd的前驱体溶液；将Cd的前驱体转入三口瓶中，在氮气保护下迅速注入NaHSe溶液，油浴100℃回流，磁力搅拌1h后取出放入冰箱中快速冷却至室温，得到无色透明溶液，即为制备好的CdSe QDs溶液。
4.2 磁性纳米颗粒的制备。采用专利公开号为CN 101928043 A的方法制备α-Fe2O3磁性纳米颗粒。
4.3采用共混包埋法制备羧甲基壳聚糖磁性纳米复合物（CMCH-MNPs）。称取0.5 g α-Fe2O3磁性纳米颗粒溶于30 mL pH =7.4，浓度为0.01mol/L的PBS缓冲溶液中，通氮气去氧，利用超声波清洗机将磁性粒子分散均匀，得到分散均匀的α-Fe2O3纳米颗粒溶液；称取0.8 g羧甲基壳聚糖溶于20 mL pH =7.4的PBS缓冲溶液中，同时加入0.5 g 1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐（EDAC）活化羧甲基壳聚糖表面的基团；之后将羧甲基壳聚糖溶液加入α-Fe2O3纳米颗粒溶液，在恒温水浴振荡器中25℃振荡6 h，反应结束后用磁铁收集产物，再依次用蒸馏水和PBS( pH=7.4)缓冲溶液充分洗涤，即得到羧甲基壳聚糖磁性纳米复合物。
4.4采用离子交联法制备磁性荧光复合纳米颗粒。取4.1制备的浓缩的水相CdSe量子点，异丙醇分离提纯后溶于5 mL蒸馏水中，并加入钼酸钠和羧酸纤维素，其中钼酸钠和羧酸纤维素的浓度分别为2.5 mg/mL和6 mg/mL，CdSe量子点浓度为0.25 mol/L，得到反应溶液A；取0.05 g步骤4.3中制备的羧甲基壳聚糖修饰的磁性纳米复合物溶于10 mL蒸馏水中，超声30 min，使磁性纳米微粒分散均匀，并加入质量浓度为5 mg/mL 聚二烯丙基二甲基氯化铵，得到反应溶液B；将A溶液逐滴加入B溶液中，在25℃的恒温水浴振荡器中振荡10 h，磁铁收集反应产物，用蒸馏水清洗反应产物，即得磁性荧光双功能纳米材料。图4为制备的磁性荧光复合纳米颗粒的磁滞回线。
一种磁性荧光复合纳米颗粒的制备方法专利购买费用说明
Q：办理专利转让的流程及所需资料
A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。
1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。
2：按规定缴纳著录项目变更手续费。
3：同时提交相关证明文件原件。
4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。
Q:专利著录项目变更费用如何缴交
A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式
Q：专利转让变更，多久能出结果
A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。
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