专利摘要

本发明涉及药物化学领域，具体涉及一种雪胆甲素衍生化产物雪胆素呋喃酮及其制备方法和应用。本发明雪胆素呋喃酮为天然产物雪胆甲素衍生化的一个非四环三萜新骨架，以雪胆甲素为先导物进行设计合成的本发明雪胆素呋喃酮，在保持对癌细胞一定抑制活性的同时，大大降低了对人正常细胞的毒性，即很大程度上提高了化合物的选择性。

权利要求

1.一种雪胆甲素类化合物雪胆素呋喃酮，其特征在于，结构式如下：

2.权利要求1所述的雪胆素呋喃酮的制备方法，其特征在于，反应路线如下：

3.根据权利要求2所述的雪胆素呋喃酮化合物的制备方法，其特征在于，包含如下步骤：将雪胆甲素溶于乙醇中，于氮气保护下，加入氢氧化钾，加热回流反应4h，TLC检测原料消失,反应液冷却至室温，浓缩，乙酸乙酯萃取，得粗品,所得粗品经硅胶柱层析纯化，得雪胆素呋喃酮。

4.根据权利要求3所述的雪胆素呋喃酮化合物的制备方法，其特征在于，所述雪胆甲素与氢氧化钾的摩尔比为1:3。

5.根据权利要求3所述的雪胆素呋喃酮化合物的制备方法，其特征在于，所述硅胶柱层析的洗脱剂为二氯甲烷-甲醇20：1。

6.根据权利要求3所述的雪胆素呋喃酮化合物的制备方法，其特征在于，所述反应条件为加热回流。

7.权利要求1所述的雪胆素呋喃酮化合物在制备抑制人黑色素瘤A375细胞增殖药物中的应用。

8.权利要求1所述的雪胆素呋喃酮化合物在制备抑制人卵巢腺癌SKOV3细胞增殖药物中的应用。

9.权利要求1所述的雪胆素呋喃酮化合物在制备抑制人结肠癌LOVO细胞增殖药物中的应用。

说明书

技术领域

本发明涉及药物化学领域，具体涉及雪胆甲素类化合物雪胆素呋喃酮及其制备方法和应用。

背景技术

雪胆甲素(cucurbitacin IIa，Cu IIa)是葫芦烷型四环三萜类化合物，主要存在于葫芦科雪胆属植物雪胆(Hemsleya)的块根中，具有抗肿瘤、抑菌、抗胃溃疡、清热、解毒、止痛、抗HIV等作用，广泛用于治疗肝炎、冠心病和气管炎等疾病。

因天然产物具有较好的药理活性，目前很多上市药物都是由天然产物衍生而来的。研究发现雪胆甲素具有抑制人宫颈癌细胞(Hela细胞)增殖的活性，其IC50为0.389μM，对肺癌细胞NCI-H460和A549的IC50分别为224.9nM，108.3nM。由于雪胆甲素对正常细胞HEK293的IC50为0.5μM，选择性较差，因此，提高雪胆甲素类衍生物对细胞的选择性，增强对肿瘤细胞的抗增殖活性，减小对正常细胞的毒性，对雪胆甲素的结构优化及其衍生物的成药性研究具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种雪胆甲素类化合物雪胆素呋喃酮，其结构式为

本发明的另一目的是提供上述雪胆素呋喃酮的制备方法。

本发明的另一目的是提供上述雪胆素呋喃酮在制备抗癌药物中的应用。

本发明是通过如下技术方案实现的：

一种雪胆甲素类化合物雪胆素呋喃酮，结构式如下：

上述的雪胆素呋喃酮的制备方法，反应路线如下：

上述的雪胆素呋喃酮化合物的制备方法，其特征在于，包含如下步骤：

将雪胆甲素溶于乙醇中，于氮气保护下，加入氢氧化钾，加热回流反应4h，TLC检测原料消失，反应液冷却至室温，浓缩，乙酸乙酯萃取，得粗品，所得粗品经硅胶柱层析纯化，即得。

上述的雪胆素呋喃酮化合物的制备方法中，所述雪胆甲素与氢氧化钾的摩尔比为1:3。

上述的雪胆素呋喃酮化合物的制备方法中，所述硅胶柱层析的洗脱剂为二氯甲烷-甲醇20：1。

上述的雪胆素呋喃酮化合物的制备方法中，所述反应条件为加热回流4h.

上述的雪胆素呋喃酮化合物的制备方法，详细步骤为：

将雪胆甲素(562mg,1mmol)溶于乙醇(50mL)中，于氮气保护下，加入氢氧化钾(186mg,3mmol)，加热回流反应4h，TLC检测原料消失(二氯甲烷-甲醇20:1)。反应液冷却至室温，浓缩，乙酸乙酯萃取，得粗品。所得粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷-甲醇20：1)纯化，即得。

上述的雪胆素呋喃酮化合物在制备治疗肠癌、乳腺癌药物中的应用。

上所述的雪胆素呋喃酮化合物在制备治疗人黑色素瘤药物中的应用。

上所述的雪胆素呋喃酮化合物在制备抑制人卵巢癌SKOV3细胞增殖药物中的应用。

上述的雪胆素呋喃酮化合物在制备抑制人结肠癌LOVO细胞增殖药物中的应用。

本发明的有益效果在于：

(1)本发明提供了一种雪胆甲素类化合物雪胆素呋喃酮。

(2)活性结果显示，以雪胆甲素为先导物进行设计合成的本发明雪胆素呋喃酮化合物，在保持对癌细胞一定抑制活性的同时，大大降低了对人正常细胞的毒性，即很大程度上提高了化合物的选择性。本发明雪胆素呋喃酮化合物为天然产物雪胆甲素衍生化的一个非四环三萜新骨架，其结构改造在抗肿瘤药物的研发方面具有非常大的潜力，单晶数据确定了其键长、键角等空间特征，为进一步的结构修饰提供了较好的参考。

附图说明

图1为本发明的雪胆素呋喃酮化合物的晶体结构图。

图2为本发明雪胆素呋喃酮类化合物的红外谱图。

图3为本发明雪胆素呋喃酮化合物的紫外谱图。

图4为本发明雪胆素呋喃酮化合物的高分辨谱图。

图5为本发明雪胆素呋喃酮化合物的1H-NMR。

图6为本发明雪胆素呋喃酮化合物的13C-NMR谱图。

图7为本发明雪胆素呋喃酮化合物的HSQC NMR谱图。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施方式来对本发明作更进一步的说明，以便本领域的技术人员更了解本发明，但并不以此限制本发明。

实施例1本发明雪胆素呋喃酮化合物的合成方法：

将雪胆甲素(562mg,1mmol)溶于乙醇(50mL)中，于氮气保护下，加入氢氧化钾(186mg,3mmol)，加热回流反应4h，TLC检测原料消失(二氯甲烷-甲醇20:1)。反应液冷却至室温，浓缩，乙酸乙酯萃取，得粗品。所得粗品经硅胶柱层析(二氯甲烷-甲醇20：1)纯化，得白色固体雪胆素呋喃酮(419mg,77％)。 1H NMR(400MHz,methanol-d4)δ(ppm):5.73(d,J＝5.6Hz,1H),4.18(t,J＝7.9Hz,1H),3.55(ddd,J＝11.4,9.2,4.1Hz,1H),3.33(s,1H),2.84(d,J＝9.3Hz,1H),2.58(d,J＝7.0Hz,1H),2.53-2.32(m,4H),2.28(d,J＝4.7Hz,4H),1.99-1.82(m,3H),1.78(dt,J＝12.4,4.1Hz,1H),1.40(s,4H),1.29(s,3H),1.22(s,3H),1.16(s,3H),1.13(s,3H),1.06(s,3H),1.01(m,1H),0.96(s,3H),0.86(s,3H).13C NMR(150MHz,methanol-d4):δ(ppm):215.52,209.81,180.08,142.72,119.80,112.71,90.63,81.88,72.84,71.54,71.18,59.57,51.54,49.80,49.42,48.83,46.48,44.38,43.35,36.12,34.89,34.75,29.84,28.87,25.34,24.71,22.56,22.30,20.53,20.39,19.50,15.74.IR(KBr,cm-1):νO-H 3419(vs),νc≡o 1693(vs),1618(vs).HRMS(ESI):m/z calcd for C32H49O7(M+H)+545.3478,found545.3442,1111.6671(2M+Na)+.

表1本发明雪胆素呋喃酮化合物的晶体数据

本发明雪胆素呋喃酮化合物的结构确认图谱见图1—图7。

实施例2本发明雪胆素呋喃酮化合物的体外抗肿瘤实验

2.1SRB实验原理及配制方法

将细胞接种在96孔板中，然后用不同浓度的药物处理。培养72小时后，用10％三氯乙酸在4℃下固定1小时，用水洗涤5次，风干。存活的细胞在室温下用0.4％(w/v)的磺酰罗丹明B(SRB)染色20分钟，用1％的乙酸洗涤5次。用10mM Tris溶解结合的SRB，在540nm处测量吸光度。

2.2实验材料和仪器

2.2.1实验仪器

表2实验仪器

2.2.2实验材料

待测化合物分别用二甲基亚砜(DMSO)溶解，用含15％胎牛血清RPMI-1640培养基配制成1mg/mL备用，在进行分组给药时，用该培养基进行倍数稀释至所需浓度。

表3实验试剂

2.2.3细胞株

人结肠癌细胞(LOVO)、人卵巢腺癌细胞(SKOV 3)、人黑色素瘤细胞(A375)、人心肌成纤维细胞(HCFB)，均购买于中国科学院细胞库，使用含15％胎牛血清的DMEM(HighGlucose)培养基，置于37℃，5％的CO2培养箱内培养。

2.3实验方法

磺酰罗丹明B(Sulforhodamine B，SRB)比色法：人结肠癌细胞(LOVO)、人卵巢腺癌细胞(SKOV 3)、人黑色素瘤细胞(A375)、人心肌成纤维细胞(HCFB)均为贴壁细胞，根据肿瘤细胞生长速率，将处于对数生长期的贴壁肿瘤细胞洗涤，经0.25％的EDTA胰酶消化，调整细胞数为1×105/mL接种于96孔板内，每孔100μL，37℃下于CO2孵箱内培养，24h后给药(浓度为10μM)，设置空白对照、DMSO(0.8％)溶剂对照和顺铂阳性对照。于37℃，5％的CO2培养箱内培养72h后，用10％三氯乙酸在4℃下固定1小时，用水洗涤5次，风干。存活的细胞在室温下用0.4％(w/v)的SRB染色20分钟，用1％的乙酸洗涤5次。结合SRB用10mM Tris缓冲液溶解，在540nm处测量吸光度。通过graphpad prism软件计算IC50值。

2.4实验结果

表4本发明雪胆素呋喃酮化合物和雪胆甲素对细胞的活性

2.5结果与讨论

活性结果显示，以雪胆甲素为先导物进行设计合成的本发明雪胆素呋喃酮化合物，在保持对癌细胞一定抑制活性的同时，大大降低了对人正常细胞HCFB的毒性，即很大程度上提高了化合物的选择性。本发明雪胆素呋喃酮化合物为天然产物雪胆甲素衍生化的一个非四环三萜新骨架，其结构改造在抗肿瘤药物的研发方面具有非常大的潜力，单晶数据确定了其键长、键角等空间特征，为进一步的结构修饰提供了较好的参考。

雪胆素呋喃酮及其制备方法和应用专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。