专利摘要

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种新型冠状病毒鼠适应株SARS‑CoV‑2/WBP‑1及应用，所述的鼠适应株的保藏编号为CCTCCNO:V202031。该毒株在普通小鼠体内能够有效复制，并引发严重急性呼吸综合征的症状，包括引起小鼠死亡，体重极度下降，肺功能损伤，弥补了现有技术的不足，为疫苗研制、抗病毒药物研发、病毒感染机制和机体免疫反应等研究提供了有力的动物模型。

权利要求

1.一种新型冠状病毒鼠适应株，所述的鼠适应株的保藏编号为CCTCC NO:V202031。

2.权利要求1所述的新型冠状病毒鼠适应株在制备新型冠状病毒鼠模型中的应用。

3.权利要求1所述的新型冠状病毒鼠适应株在用于制备新型冠状病毒药物筛选模型中的应用。

4.权利要求1所述的新型冠状病毒鼠适应株在制备新型冠状病毒鼠适应株对照品中的应用。

5.权利要求1所述的新型冠状病毒鼠适应株在制备新型冠状病毒疫苗中的应用。

6.权利要求1所述的新型冠状病毒鼠适应株在在制备新型冠状病毒鼠适应株的突变株中的应用。

7.权利要求1所述的新型冠状病毒鼠适应株在制备研究新型冠状病毒病毒学或是免疫学的试剂中的应用。

8.根据权利要求2所述的应用，所述的鼠为小鼠。

9.根据权利要求所述的新型冠状病毒鼠适应株的核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示。

说明书

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种新型冠状病毒鼠适应株SARS-CoV-2/WBP-1及应用。

背景技术

严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(severe acute respiratory syndromecoronavirus 2,SARS-CoV-2)简称新型冠状病毒，其引起的新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 19,COVID-19)于2019年底出现并呈现全球爆发，严重危害人类健康和公共卫生安全，给世界社会和经济带来巨大负担，引发全球范围内的高度关注。截止到2020年8月中旬，全球累计新冠肺炎确诊病例超过2000万例，死亡人数超过76万。目前关于新冠肺炎的研究主要集中在病毒流行病学调查、病毒检测方法、临床分离毒株序列比对和分析等方面，关于新型冠状病毒的入侵、复制、致病机制、免疫调控机制及抗病毒等研究还处于探索阶段。许多国内外学者推测新冠病毒或将类似于流感病毒，与人类长期共存。已有的研究报道和数据表明SARS-CoV-2的致死率远高于流感，然而到目前为止还没有专门针对新型冠状病毒治疗和预防的制剂或疫苗可以使用，因此亟需找到针对SARS-CoV-2的有效预防和治疗方法。研制新型冠状病毒疫苗及药物，有效控制新冠肺炎疫情，是摆在全世界科研工作者面前的一个重大使命，但目前新冠疫苗和药物研究中存在的一个难题就是缺少临床试验前的动物评价模型，包括对疫苗和药物安全性和有效性等的评估。

根据已有的文献报道，用于研究病毒发病机制的小动物模型如小鼠、仓鼠和豚鼠等对SARS类冠状病毒具有天然抗性，动物感染后不致病，冠状病毒诱发的严重呼吸系统疾病模型一直难以获得。目前主要使用人类血管紧张素转换酶2(hACE2)转基因小鼠进行药物和疫苗效果的动物评价，虽然hACE2转基因小鼠表现出一定的症状，但症状轻微、不致死，而且hACE2转基因小鼠价格昂贵，不易获得。因此，亟需一株对普通小鼠具有高致病性的新型冠状病毒毒株。SARS-CoV-2小鼠适应性毒株能够加快疫苗研制、抗病毒药物研发以及致病机理等研究。SARS-CoV-2动物模型构建对于评估抗病毒治疗和疫苗效果以及了解COVID-19的发病机制具有重要意义。但是关于能够有效感染小鼠产生适应性突变的新冠病毒毒株目前还未见报道。

发明内容

本发明的一个目的在于提供了一种新型冠状病毒鼠适应株SARS-CoV-2/WBP-1，所述的病毒的保藏编号为CCTCC NO:V202031。

本发明的另一个目的是提供一种新型冠状病毒鼠适应株SARS-CoV-2/WBP-1的应用。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术措施：

一种新型冠状病毒鼠适应株SARS-CoV-2/WBP-1，将人源新型冠状病毒毒株感染小鼠，获得肺脏组织病毒匀浆液，将获得的组织病毒液再次感染小鼠，直至小鼠出现因病毒感染而死亡，从感染死亡小鼠体内分离病毒，进行RT-PCR检测和病毒空斑纯化；最终获得了对小鼠稳定致死的鼠适应株WBP-1，该毒株已于2020年8月17日送至中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，分类命名：新型冠状病毒SARS-CoV-2/WBP-1，保藏编号为CCTCC NO：V202031，地址：中国武汉武汉大学。将纯化获得的SARS-CoV-2/WBP-1鼠适应毒株进行全基因组测序，其序列为SEQ ID NO.1所示。该毒株本发明简称为WBP-1或鼠适应株WBP-1。

WBP-1鼠适应株可以在VERO细胞中增值并产生细胞病变。WBP-1在VERO细胞上增殖时，感染病毒后，37℃5％CO2恒温培养箱培养48-72h，80％以上细胞出现病变。

一种新型冠状病毒鼠适应株SARS-CoV-2/WBP-1的应用，包括：

1)利用该毒株制备成新型冠状病毒鼠模型，包括利用本领域的常规方式将该病毒感染鼠，以获得患病动物模型；

2)或是用于制备成新型冠状病毒药物筛选模型，包括利用本领域的常规方式将该病毒感染鼠构建得到动物模型后，用于筛选预防或治疗新冠肺炎的药物；

3)或是用于制备新型冠状病毒鼠适应株对照品，包括利用SEQ ID NO.1所示的序列进行对照，与新的鼠适应株进行比对；

4)或是制备成新型冠状病毒疫苗，包括利用本领域的常规方式，制备成灭活疫苗；或是利用本发明毒株中的一段特异性突变序列制备成疫苗；

5)或是用于制备成新型冠状病毒鼠适应株的突变株；包括利用本领域的常规方式，通过突变本发明的鼠适应株的基因序列后，获得新的鼠适应株的突变株。

6)或是用于制备成用于研究新型冠状病毒病毒学或是免疫学的试剂中的应用。

以上所述的应用中，优选的，所述的鼠为小鼠；

以上所述的应用中，优选的，所述的小鼠为Balb/c小鼠。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

本发明首次报道了一株鼠适应性新型冠状病毒毒株WBP-1，该毒株在普通小鼠体内能够有效复制，并引发严重急性呼吸综合征的症状，包括引起小鼠死亡，体重极度下降，肺功能损伤，弥补了现有技术的不足，为疫苗研制、抗病毒药物研发、病毒感染机制和机体免疫反应等研究提供了有力的动物模型。

附图说明

图1为本发明实验技术路线图。

图2为SARS-CoV-2鼠适应株WPB-1对小鼠存活率的影响示意图。

图3为SARS-CoV-2鼠适应株WPB-1对小鼠体重的影响示意图。

图4SARS-CoV-2鼠适应株WPB-1感染小鼠肺脏组织病理切片图；

其中，A，C为感染SARS-CoV-2鼠适应株WPB-1病毒组；B，D为DMEM对照组；黑色箭头表示肺泡间质增宽，淋巴细胞侵润，肺泡萎缩；灰色箭头表示有大量纤维素样渗出物。(A，B为放大200×；C，D为放大400×)。

具体实施方式

本发明实施例中的试验方法和条件如无特殊说明，均为常规方法。这些实施例仅用于说明本发明，本发明的保护范围不受这些实施例的限制。本发明所述的技术方案，如无特殊说明，均为领域的常规方案；所述试剂或材料如无特殊说明，均来源于商业渠道。本发明中所有与严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV-2)活病毒相关的试验均在生物安全三级实验室(ABSL3)完成。以下具体实施例对本发明做进一步阐述：

实施例1：

SARS-CoV-2毒株鼠适应株的获得：

将人源样品中分离获得的SARS-CoV-2毒株(wuhan-hu-1，NC_045512.2)滴鼻接种于10月龄雌性BALB/c小鼠，感染剂量为50ul，病毒含量为2.3×105PFU。感染3天后，解剖小鼠收集肺脏组织，匀浆，12000rpm离心5min，收集上清作为鼠适应性传代新冠病毒第1代。第1代肺脏组织匀浆液接种4-6周龄小鼠，3天后收获肺脏并且匀浆，得到第2代病毒液。以此在4-6周龄小鼠连续传代，得到第11代病毒液。在传代过程中，第9代小鼠第一次出现因病毒感染而死亡，连续传至14代，每代都会引起小鼠死亡。

将第11代肺脏组织匀浆上清液稀释103、104倍接种于VERO细胞，37℃孵育1h，弃去病毒液，对细胞进行冲洗后覆盖1％的琼脂糖凝胶无酚红DMEM培养基，培养2d，用无菌枪头挑取细胞空斑获得纯化的病毒，将纯化的毒株再次接种细胞进行空斑纯化，最终获得了对小鼠稳定致死的鼠适应株WBP-1，将第11代鼠适应性稳定毒株进行保藏。该毒株已于2020年8月17日送至中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，分类命名：新型冠状病毒SARS-CoV-2/WBP-1，保藏编号为CCTCC NO：V202031，地址：中国武汉武汉大学。

将纯化获得的SARS-CoV-2/WBP-1鼠适应毒株进行全基因组测序，其序列为SEQ IDNO.1所示。

新型冠状病毒RT-PCR检测鉴定引物如下：

F：5’-CCAGATGATTTTACAGGCTGCGTTA-3’

R：5’-TGTCAAGAATCTCAAGTGTCTGTGGATC-3’

扩增产物片段长度为484bp。

将保藏的鼠适应株WBP-1在VERO细胞上纯化3次，之后在VERO细胞上连续传代3次，每代病毒均会对小鼠致死，经PCR未发生突变，传代稳定，在本发明中，将该病毒简称为鼠适应株WBP-1。

实施例2：

鼠适应株WBP-1与人源野毒株比较突变位点的获得：

利用生物信息学手段，本发明通过对鼠适应株WBP-1全基因组测序及序列比对，得到了WBP-1与人源毒株wuhan-hu-1的序列比对，发现5个基因突变位点(见表1)，结果显示这些突变位点可能是导致鼠适应株的高致病性的原因，可利用这些位点进行其他的鼠适应株的开发或研究。

表1 SARS-CoV-2/WBP-1鼠适应株氨基酸突变位点

实施例3：

SARS-CoV-2鼠适应株WBP-1小鼠模型的构建以及WBP-1的毒力测定：

使用4-6周龄雌性BALB/c小鼠测定鼠适应株WBP-1的半数致死剂量。20只小鼠随机分为4组，每组5只，分别滴鼻感染50ul不同含量的病毒液，4个组中50ul病毒液中WBP-1病毒含量分别为102、103、104、105PFU，感染后每天观察并记录小鼠的体重和症状，连续观察10天，计算半数致死剂量LD50。对所有体重下降超过25％并且伴随有严重呼吸窘迫症状的小鼠进行解剖，取肺部组织进行组织切片观察。

结果如图2所示，感染后5天，感染剂量为102、103PFU时，小鼠全部死亡；104PFU感染组小鼠60％死亡，105PFU感染组小鼠全部存活，根据计算确定WBP-1对小鼠的半数致死剂量(LD50)为103.84PFU。由图3可知，病毒感染后小鼠的体重下降程度和病毒浓度呈正相关，随着病毒含量的的降低，体重下降趋势降低，图3中小鼠体重百分比的计算方式为感染病毒后不同时间各组小鼠体重平均值/感染第0天各组小鼠体重平均值*100％。如图4所示，小鼠感染WBP-1后，肺部组织切片显示肺泡间质增宽，淋巴细胞侵润，肺泡萎缩，有大量纤维素样渗出物。

因此，本发明提供的鼠适应株可以构建小鼠模型，用于疫苗研制、抗病毒药物研发、病毒感染机制和机体免疫反应等研究。

序列表

<110> 华中农业大学

<120> 一种新型冠状病毒鼠适应株SARS-CoV-2/WBP-1及应用

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 29218

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

tgagtgcact aagcatgcag ccgagtgaca gccacacaga ttttaaagtt cgtttagaga 60

acagatctac aagagatcga aagttggttg gtttgttacc tgggaaggta taaaccaacc 120

aactttcgat ctcttgtaga tctgttctct aaacgaactt taaaatctgt gtggctgtca 180

ctcggctgca tgcttagtgc actcacgcag tataattaat aactaattac tgtcgttgac 240

aggacacgag taactcgtct atcttctgca ggctgcttac ggtttcgtcc gtgttgcagc 300

cgatcatcag cacatctagg tttcgtccgg gtgtgaccga aaggtaagat ggagagcctt 360

gtccctggtt tcaacgagaa aacacacgtc caactcagtt tgcctgtttt acaggttcgc 420

gacgtgctcg tacgtggctt tggagactcc gtggaggagg tcttatcaga ggcacgtcaa 480

catcttaaag atggcacttg tggcttagta gaagttgaaa aaggcgtttt gcctcaactt 540

gaacagccct atgtgttcat caaacgttcg gatgctcgaa ctgcacctca tggtcatgtt 600

atggttgagc tggtagcaga actcgaaggc attcagtacg gtcgtagcgg tgagacactt 660

ggtgtccttg tccctcatgt gggcgaaata ccagtggctt accgcaaggt tcttcttcgt 720

aagaacggta ataaaggagc tggtggccat agttacggcg ccgatctaaa gtcatttgac 780

ttaggcgacg agcttggcac tgatccttat gaagattttc aagaaaactg gaacactaaa 840

catagcagtg gtgttacccg tgaactcatg cgtgagctta acggaggggc atacactcgc 900

tatgtcgata acaacttctg tggccctgat ggctaccctc ttgagtgcat taaagacctt 960

ctagcacgtg ctggtaaagc ttcatgcact ttgtccgaac aactggactt tattgacact 1020

aagaggggtg tatactgctg ccgtgaacat gagcatgaaa ttgcttggta cacggaacgt 1080

tctgaaaaga gctatgaatt gcagacacct tttgaaatta aattggcaaa gaaatttgac 1140

accttcaatg gggaatgtcc aaattttgta tttcccttaa attccataat caagactatt 1200

caaccaaggg ttgaaaagaa aaagcttgat ggctttatgg gtagaattcg atctgtctat 1260

ccagttgcgt caccaaatga atgcaaccaa atgtgccttt caactctcat gaagtgtgat 1320

cattgtggtg aaacttcatg gcagacgggc gattttgtta aagccacttg cgaattttgt 1380

ggcactgaga atttgactaa agaaggtgcc actacttgtg gttacttacc ccaaaatgct 1440

gttgttaaaa tttattgtcc agcatgtcac aattcagaag taggacctga gcatagtctt 1500

gccgaatacc ataatgaatc tggcttgaaa accattcttc gtaagggtgg tcgcactatt 1560

gcctttggag gctgtgtgtt ctcttatgtt ggttgccata acaagtgtgc ctattgggtt 1620

ccacgtgcta gcgctaacat aggttgtaac catacaggtg ttgttggaga aggttccgaa 1680

ggtcttaatg acaaccttct tgaaatactc caaaaagaga aagtcaacat caatattgtt 1740

ggtgacttta aacttaatga agagatcgcc attattttgg catctttttc tgcttccaca 1800

agtgcttttg tggaaactgt gaaaggtttg gattataaag cattcaaaca aattgttgaa 1860

tcctgtggta attttaaagt tacaaaagga aaagctaaaa aaggtgcctg gaatattggt 1920

gaacagaaat caatactgag tcctctttat gcatttgcat cagaggctgc tcgtgttgta 1980

cgatcaattt tctctcgcac tcttgaaact gctcaaaatt ctgtgcgtgt tttacagaag 2040

gccgctataa caatactaga tggaatttca cagtattcac tgagactcat tgatgctatg 2100

atgttcacat ctgatttggc tactaacaat ctagttgtaa tggcctacat tacaggtggt 2160

gttgttcagt tgacttcgca gtggctaact aacatctttg gcactgttta tgaaaaactc 2220

aaacccgtcc ttgattggct tgaagagaag tttaaggaag gtgtagagtt tcttagagac 2280

ggttgggaaa ttgttaaatt tatctcaacc tgtgcttgtg aaattgtcgg tggacaaatt 2340

gtcacctgtg caaaggaaat taaggagagt gttcagacat tctttaagct tgtaaataaa 2400

tttttggctt tgtgtgctga ctctatcatt attggtggag ctaaacttaa agccttgaat 2460

ttaggtgaaa catttgtcac gcactcaaag ggattgtaca gaaagtgtgt taaatccaga 2520

gaagaaactg gcctactcat gcctctaaaa gccccaaaag aaattatctt cttagaggga 2580

gaaacacttc ccacagaagt gttaacagag gaagttgtct tgaaaactgg tgatttacaa 2640

ccattagaac aacctactag tgaagctgtt gaagctccat tggttggtac accagtttgt 2700

attaacgggc ttatgttgct cgaaatcaaa gacacagaaa agtactgtgc ccttgcacct 2760

aatatgatgg taacaaacaa taccttcaca ctcaaaggcg gtgcaccaac aaaggttact 2820

tttggtgatg acactgtgat agaagtgcaa ggttacaaga gtgtgaatat cacttttgaa 2880

cttgatgaaa ggattgataa agtacttaat gagaagtgct ctgcctatac agttgaactc 2940

ggtacagaag taaatgagtt cgcctgtgtt gtggcagatg ctgtcataaa aactttgcaa 3000

ccagtatctg aattacttac accactgggc attgatttag atgagtggag tatggctaca 3060

tactacttat ttgatgagtc tggtgagttt aaattggctt cacatatgta ttgttctttc 3120

taccctccag atgaggatga agaagaaggt gattgtgaag aagaagagtt tgagccatca 3180

actcaatatg agtatggtac tgaagatgat taccaaggta aacctttgga atttggtgcc 3240

acttctgctg ctcttcaacc tgaagaagag caagaagaag attggttaga tgatgatagt 3300

caacaaactg ttggtcaaca agacggcagt gaggacaatc agacaactac tattcaaaca 3360

attgttgagg ttcaacctca attagagatg gaacttacac cagttgttca gactattgaa 3420

gtgaatagtt ttagtggtta tttaaaactt actgacaatg tatacattaa aaatgcagac 3480

attgtggaag aagctaaaaa ggtaaaacca acagtggttg ttaatgcagc caatgtttac 3540

cttaaacatg gaggaggtgt tgcaggagcc ttaaataagg ctactaacaa tgccatgcaa 3600

gttgaatctg atgattacat agctactaat ggaccactta aagtgggtgg tagttgtgtt 3660

ttaagcggac acaatcttgc taaacactgt cttcatgttg tcggcccaaa tgttaacaaa 3720

ggtgaagaca ttcaacttct taagagtgct tatgaaaatt ttaatcagca cgaagttcta 3780

cttgcaccat tattatcagc tggtattttt ggtgctgacc ctatacattc tttaagagtt 3840

tgtgtagata ctgttcgcac aaatgtctac ttagctgtct ttgataaaaa tctctatgac 3900

aaacttgttt caagcttttt ggaaatgaag agtgaaaagc aagttgaaca aaagatcgct 3960

gagattccta aagaggaagt taagccattt ataactgaaa gtaaaccttc agttgaacag 4020

agaaaacaag atgataagaa aatcaaagct tgtgttgaag aagttacaac aactctggaa 4080

gaaactaagt tcctcacaga aaacttgtta ctttatattg acattaatgg caatcttcat 4140

ccagattctg ccactcttgt tagtgacatt gacatcactt tcttaaagaa agatgctcca 4200

tatatagtgg gtgatgttgt tcaagagggt gttttaactg ctgtggttat acctactaaa 4260

aaggctggtg gcactactga aatgctagcg aaagctttga gaaaagtgcc aacagacaat 4320

tatataacca cttacccggg tcagggttta aatggttaca ctgtagagga ggcaaagaca 4380

gtgcttaaaa agtgtaaaag tgccttttac attctaccat ctattatctc taatgagaag 4440

caagaaattc ttggaactgt ttcttggaat ttgcgagaaa tgcttgcaca tgcagaagaa 4500

acacgcaaat taatgcctgt ctgtgtggaa actaaagcca tagtttcaac tatacagcgt 4560

aaatataagg gtattaaaat acaagagggt gtggttgatt atggtgctag attttacttt 4620

tacaccagta aaacaactgt agcgtcactt atcaacacac ttaacgatct aaatgaaact 4680

cttgttacaa tgccacttgg ctatgtaaca catggcttaa atttggaaga agctgctcgg 4740

tatatgagat ctctcaaagt gccagctaca gtttctgttt cttcacctga tgctgttaca 4800

gcgtataatg gttatcttac ttcttcttct aaaacacctg aagaacattt tattgaaacc 4860

atctcacttg ctggttccta taaagattgg tcctattctg gacaatctac acaactaggt 4920

atagaatttc ttaagagagg tgataaaagt gtatattaca ctagtaatcc taccacattc 4980

cacctagatg gtgaagttat cacctttgac aatcttaaga cacttctttc tttgagagaa 5040

gtgaggacta ttaaggtgtt tacaacagta gacaacatta acctccacac gcaagttgtg 5100

gacatgtcaa tgacatatgg acaacagttt ggtccaactt atttggatgg agctgatgtt 5160

actaaaataa aacctcataa ttcacatgaa ggtaaaacat tttatgtttt acctaatgat 5220

gacactctac gtgttgaggc ttttgagtac taccacacaa ctgatcctag ttttctgggt 5280

aggtacatgt cagcattaaa tcacactaaa aagtggaaat acccacaagt taatggttta 5340

acttctatta aatgggcaga taacaactgt tatcttgcca ctgcattgtt aacactccaa 5400

caaatagagt tgaagtttaa tccacctgct ctacaagatg cttattacag agcaagggct 5460

ggtgaagctg ctaacttttg tgcacttatc ttagcctact gtaataagac agtaggtgag 5520

ttaggtgatg ttagagaaac aatgagttac ttgtttcaac atgccaattt agattcttgc 5580

aaaagagtct tgaacgtggt gtgtaaaact tgtggacaac agcagacaac ccttaagggt 5640

gtagaagctg ttatgtacat gggcacactt tcttatgaac aatttaagaa aggtgttcag 5700

ataccttgta cgtgtggtaa acaagctaca aaatatctag tacaacagga gtcacctttt 5760

gttatgatgt cagcaccacc tgctcagtat gaacttaagc atggtacatt tacttgtgct 5820

agtgagtaca ctggtaatta ccagtgtggt cactataaac atataacttc taaagaaact 5880

ttgtattgca tagacggtgc tttacttaca aagtcctcag aatacaaagg tcctattacg 5940

gatgttttct acaaagaaaa cagttacaca acaaccataa aaccagttac ttataaattg 6000

gatggtgttg tttgtacaga aattgaccct aagttggaca attattataa gaaagacaat 6060

tcttatttca cagagcaacc aattgatctt gtaccaaacc aaccatatcc aaacgcaagc 6120

ttcgataatt ttaagtttgt atgtgataat atcaaatttg ctgatgattt aaaccagtta 6180

actggttata agaaacctgc ttcaagagag cttaaagtta catttttccc tgacttaaat 6240

ggtgatgtgg tggctattga ttataaacac tacacaccct cttttaagaa aggagctaaa 6300

ttgttacata aacctattgt ttggcatgtt aacaatgcaa ctaataaagc cacgtataaa 6360

ccaaatacct ggtgtatacg ttgtctttgg agcacaaaac cagttgaaac atcaaattcg 6420

tttgatgtac tgaagtcaga ggacgcgcag ggaatggata atcttgcctg cgaagatcta 6480

aaaccagtct ctgaagaagt agtggaaaat cctaccatac agaaagacgt tcttgagtgt 6540

aatgtgaaaa ctaccgaagt tgtaggagac attatactta aaccagcaaa taatagttta 6600

aaaattacag aagaggttgg ccacacagat ctaatggctg cttatgtaga caattctagt 6660

cttactatta agaaacctaa tgaattatct agagtattag gtttgaaaac ccttgctact 6720

catggtttag ctgctgttaa tagtgtccct tgggatacta tagctaatta tgctaagcct 6780

tttcttaaca aagttgttag tacaactact aacatagtta cacggtgttt aaaccgtgtt 6840

tgtactaatt atatgcctta tttctttact ttattgctac aattgtgtac ttttactaga 6900

agtacaaatt ctagaattaa agcatctatg ccgactacta tagcaaagaa tactgttaag 6960

agtgtcggta aattttgtct agaggcttca tttaattatt tgaagtcacc taatttttct 7020

aaactgataa atattataat ttggttttta ctattaagtg tttgcctagg ttctttaatc 7080

tactcaaccg ctgctttagg tgttttaatg tctaatttag gcatgccttc ttactgtact 7140

ggttacagag aaggctattt gaactctact aatgtcacta ttgcaaccta ctgtactggt 7200

tctatacctt gtagtgtttg tcttagtggt ttagattctt tagacaccta tccttcttta 7260

gaaactatac aaattaccat ttcatctttt aaatgggatt taactgcttt tggcttagtt 7320

gcagagtggt ttttggcata tattcttttc actaggtttt tctatgtact tggattggct 7380

gcaatcatgc aattgttttt cagctatttt gcagtacatt ttattagtaa ttcttggctt 7440

atgtggttaa taattaatct tgtacaaatg gccccgattt cagctatggt tagaatgtac 7500

atcttctttg catcatttta ttatgtatgg aaaagttatg tgcatgttgt agacggttgt 7560

aattcatcaa cttgtatgat gtgttacaaa cgtaatagag caacaagagt cgaatgtaca 7620

actattgtta atggtgttag aaggtccttt tatgtctatg ctaatggagg taaaggcttt 7680

tgcaaactac acaattggaa ttgtgttaat tgtgatacat tctgtgctgg tagtacattt 7740

attagtgatg aagttgcgag agacttgtca ctacagttta aaagaccaat aaatcctact 7800

gaccagtctt cttacatcgt tgatagtgtt acagtgaaga atggttccat ccatctttac 7860

tttgataaag ctggtcaaaa gacttatgaa agacattctc tctctcattt tgttaactta 7920

gacaacctga gagctaataa cactaaaggt tcattgccta ttaatgttat agtttttgat 7980

ggtaaatcaa aatgtgaaga atcatctgca aaatcagcgt ctgtttacta cagtcagctt 8040

atgtgtcaac ctatactgtt actagatcag gcattagtgt ctgatgttgg tgatagtgcg 8100

gaagttgcag ttaaaatgtt tgatgcttac gttaatacgt tttcatcaac ttttaacgta 8160

ccaatggaaa aactcaaaac actagttgca actgcagaag ctgaacttgc aaagaatgtg 8220

tccttagaca atgtcttatc tacttttatt tcagcagctc ggcaagggtt tgttgattca 8280

gatgtggaaa ctaaagatgt tgttgaatgt cttaaattgt cacatcaatc tgacatagaa 8340

gttactggcg atagttgtaa taactatatg ctcacctata acaaagttga aaacatgaca 8400

ccccgtgacc ttggtgcttg tattgactgt agtgcgcgtc atattaatgc gcaggtagca 8460

aaaagtcaca acattgcttt gatatggaac gttaaagatt tcatgtcatt gtctgaacaa 8520

ctacgaaaac aaatacgtag tgctgctaaa aagaataact taccttttaa gttgacatgt 8580

gcaactacta gacaagttgt taatgttgta acaacaaaga tagcacttaa gggtggtaaa 8640

attgttaata attggttgaa gcagttaatt aaagttacac ttgtgttcct ttttgttgct 8700

gctattttct atttaataac acctgttcat gtcatgtcta aacatactga cttttcaagt 8760

gaaatcatag gatacaaggc tattgatggt ggtgtcactc gtgacatagc atctacagat 8820

acttgttttg ctaacaaaca tgctgatttt gacacatggt ttagccagcg tggtggtagt 8880

tatactaatg acaaagcttg cccattgatt gctgcagtca taacaagaga agtgggtttt 8940

gtcgtgcctg gtttgcctgg cacgatatta cgcacaacta atggtgactt tttgcatttc 9000

ttacctagag tttttagtgc agttggtaac atctgttaca caccatcaaa acttatagag 9060

tacactgact ttgcaacatc agcttgtgtt ttggctgctg aatgtacaat ttttaaagat 9120

gcttctggta agccagtacc atattgttat gataccaatg tactagaagg ttctgttgct 9180

tatgaaagtt tacgccctga cacacgttat gtgctcatgg atggctctat tattcaattt 9240

cctaacacct accttgaagg ttctgttaga gtggtaacaa cttttgattc tgagtactgt 9300

aggcacggca cttgtgaaag atcagaagct ggtgtttgtg tatctactag tggtagatgg 9360

gtacttaaca atgattatta cagatcttta ccaggagttt tctgtggtgt agatgctgta 9420

aatttactta ctaatatgtt tacaccacta attcaaccta ttggtgcttt ggacatatca 9480

gcatctatag tagctggtgg tattgtagct atcgtagtaa catgccttgc ctactatttt 9540

atgaggttta gaagagcttt tggtgaatac agtcatgtag ttgcctttaa tactttacta 9600

ttccttatgt cattcactgt actctgttta acaccagttt actcattctt acctggtgtt 9660

tattctgtta tttacttgta cttgacattt tatcttacta atgatgtttc ttttttagca 9720

catattcagt ggatggttat gttcacacct ttagtacctt tctggataac aattgcttat 9780

atcatttgta tttccacaaa gcatttctat tggttcttta gtaattacct aaagagacgt 9840

gtagtcttta atggtgtttc ctttagtact tttgaagaag ctgcgctgtg cacctttttg 9900

ttaaataaag aaatgtatct aaagttgcgt agtgatgtgc tattacctct tacgcaatat 9960

aatagatact tagctcttta taataagtac aagtatttta gtggagcaat ggatacaact 10020

agctacagag aagctgcttg ttgtcatctc gcaaaggctc tcaatgactt cagtaactca 10080

ggttctgatg ttctttacca accaccacaa acctctatca cctcagctgt tttgcagagt 10140

ggttttagaa aaatggcatt cccatctggt aaagttgagg gttgtatggt acaagtaact 10200

tgtggtacaa ctacacttaa cggtctttgg cttgatgacg tagtttactg tccaagacat 10260

gtgatctgca cctctgaaga catgcttaac cctaattatg aagatttact cattcgtaag 10320

tctaatcata atttcttggt acaggctggt aatgttcaac tcagggttat tggacattct 10380

atgcaaaatt gtgtacttaa gcttaaggtt gatacagcca atcctaagac acctaagtat 10440

aagtttgttc gcattcaacc aggacagact ttttcagtgt tagcttgtta caatggttca 10500

ccatctggtg tttaccaatg tgctatgagg cccaatttca ctattaaggg ttcattcctt 10560

aatggttcat gtggtagtgt tggttttaac atagattatg actgtgtctc tttttgttac 10620

atgcaccata tggaattacc aactggagtt catgctggca cagacttaga aggtaacttt 10680

tatggacctt ttgttgacag gcaaacagca caagcagctg gtacggacac aactattaca 10740

gttaatgttt tagcttggtt gtacgctgct gttataaatg gagacaggtg gtttctcaat 10800

cgatttacca caactcttaa tgactttaac cttgtggcta tgaagtacaa ttatgaacct 10860

ctaacacaag accatgttga catactagga cctctttctg ctcaaactgg aattgccgtt 10920

ttagatatgt gtgcttcatt aaaagaatta ctgcaaaatg gtatgaatgg acgtaccata 10980

ttgggtagtg ctttattaga agatgaattt acacctcttg atgttgttag acaatgctca 11040

ggtgttactt tccaaagtgc agtgaaaaga acaaccaagg gtacacacca ctggttgtta 11100

ctcacaattt tgacttcact tttagtttta gtccagagta ctcaatggtc tttgttcttt 11160

tttttgtatg aaaatgcctt tttacctttt gctatgggta ttattgctat gtctgctttt 11220

gcaatgatgt ttgtcaaaca taagcatgca tttctctgtt tgtttttgtt accttctctt 11280

gccactgtag cttattttaa tatggtctat atgcctgcta gttgggtgat gcgtattatg 11340

acatggttgg atatggttga tactagtttg tctggtttta agctaaaaga ctgtgttatg 11400

tatgcatcag ctgtagtgtt actaatcctt atgacagcaa gaactgtgta tgatgatggt 11460

gctaggagag tgtggacact tatgaatgtc ttgacactcg tttataaagt ttattatggt 11520

aatgctttag atcaagccat ttccatgtgg gctcttataa tctctgttac ttctaactac 11580

tcaggtgtag ttacaactgt catgtttttg gccagaggta ttgtttttat gtgtgttgag 11640

tattgcccta ttttcttcat aactggtaat acacttcagt gtataatgct agtttattgt 11700

ttcttaggct atttttgtac ttgttacttt ggcctctttt gtttactcaa ccgctacttt 11760

agactgactc ttggtgttta tgattactta gtttctacac aggagtttag atatatgaat 11820

tcacagggac tactcccacc caagaatagc atagatgcct tcaaactcaa cattaaattg 11880

ttgggtgttg gtggcaaacc ttgtatcaaa gtagccactg tacagtctaa aatgtcagat 11940

gtaaagtgca catcagtagt cttactctca gttttgcaac aactcagagt agaatcatca 12000

tctaaattgt gggctcaatg tgtccagtta cacaatgaca ttctcttagc taaagatact 12060

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gtagacataa acaagctttg tgaagaaatg ctggacaaca gggcaacctt acaagctata 12180

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gagcaggctg ttgctaatgg tgattctgaa gttgttctta aaaagttgaa gaagtctttg 12300

aatgtggcta aatctgaatt tgaccgtgat gcagccatgc aacgtaagtt ggaaaagatg 12360

gctgatcaag ctatgaccca aatgtataaa caggctagat ctgaggacaa gagggcaaaa 12420

gttactagtg ctatgcagac aatgcttttc actatgctta gaaagttgga taatgatgca 12480

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acaacagcag ccaaactaat ggttgtcata ccagactata acacatataa aaatacgtgt 12600

gatggtacaa catttactta tgcatcagca ttgtgggaaa tccaacaggt tgtagatgca 12660

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atctatacag aactggaacc accttgtagg tttgttatag acacacctaa aggtcctaaa 13020

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caactccgcg aacccatgct tcagtcagct gatgcacaat cgtttttaaa cgggtttgcg 13560

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atgacttcac ggaagagagg ttaaaactct ttgaccgtta ttttaaatat tgggatcaga 14400

cataccaccc aaattgtgtt aactgtttgg atgacagatg cattctgcat tgtgcaaact 14460

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gtaattttaa caaagacttc tatgactttg ctgtgtctaa gggtttcttt aaggaaggaa 14820

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atgactacta tcgttataat ctaccaacaa tgtgtgatat cagacaacta ctatttgtag 14940

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gactttatta tgattcaatg agttatgagg atcaagatgc acttttcgca tatacaaaac 15120

gtaatgtcat ccctactata actcaaatga atcttaagta tgccattagt gcaaagaata 15180

gagctcgcac cgtagctggt gtctctatct gtagtactat gaccaataga cagtttcatc 15240

aaaaattatt gaaatcaata gccgccacta gaggagctac tgtagtaatt ggaacaagca 15300

aattctatgg tggttggcac aacatgttaa aaactgttta tagtgatgta gaaaaccctc 15360

accttatggg ttgggattat cctaaatgtg atagagccat gcctaacatg cttagaatta 15420

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。