专利摘要

本发明属于制药领域，涉及具有心肌保护作用的1‑丹参酮酸酯衍生物及其应用。其制备步骤如下：向反应容器Ⅰ中，加入丹参酮类和无水CCl4，加入过氧化苯甲酰和NBS，控温，回流后停止反应，硅胶纯化，得到1‑溴代丹参酮类；向反应容器Ⅱ中，加入苯酸类化合物和溶剂DMF，利用K2CO3调pH，搅匀后，加入1‑溴代丹参酮类，反应结束，冷却后除去DMF，利用硅胶柱或结晶法纯化，得到1‑丹参酮酸酯衍生物。本发明的药理实验表明，具有更好的心肌保护作用，并研究其缓释固体分散体的制备方法，利用低温喷雾干燥技术将其微囊化，进一步制作成丸剂、片剂、胶囊剂、粉针剂等各种剂型，为心血管新药的开发和丹参的利用提供了新的可能。

权利要求

1.具有心肌保护作用的1-丹参酮酸酯衍生物，其特征在于，具有如下结构通式（Ⅰ） 或结构通式（Ⅱ） ，

式中：R₁ = -OH或-OCH₃；

R₂ = -OH；

R₃ = -H、-OH或-OCH₃；

R4 = -3- CH₃ -呋喃基或- 3 - CH₃- 2, 3 - 2H-呋喃基；

R₅= -H或-OH。

2.如权利要求1所述的具有心肌保护作用的1-丹参酮酸酯衍生物，其特征在于：具有如下结构通式（Ⅲ） 或结构通式（Ⅳ）

式中：R_1’= -H或-OH；

R_2’= -OH或-OCH₃；

R_3’=-OH。

3.如权利要求1所述的具有心肌保护作用的1-丹参酮酸酯衍生物，其特征在于：具有如下结构通式（Ⅴ） 或结构通式（Ⅵ） ，

式中：R_4’=-OH或-OCH₃；

R_5’=-OH。

4.如权利要求1所述的具有心肌保护作用的1-丹参酮酸酯衍生物的制备工艺，其特征在于，步骤如下：

（1）向反应容器Ⅰ中，加入丹参酮类化合物和无水CCl₄，加入少量过氧化苯甲酰，分批加入N-溴代丁二酰亚胺，控温约60~80℃，回流1.0~4.0h后停止反应，硅胶纯化，得到1-溴代丹参酮类；

（2）向反应容器Ⅱ中，加入苯酸类化合物和溶剂二甲基甲酰胺，利用K₂CO₃调pH至7.5~9.0，搅匀后，加入步骤（1）制得的1-溴代丹参酮类，保持温度50~70℃，反应1~4h结束，冷却后除去二甲基甲酰胺，利用硅胶柱或结晶法纯化，得到1-丹参酮酸酯衍生物。

5.如权利要求4所述的具有心肌保护作用的1-丹参酮酸酯衍生物的制备工艺，其特征在于：所述步骤（1）中，丹参酮类化合物为1-羟基-丹参酮或1-羟基-隐丹参酮；1-溴代丹参酮类为1-Br-丹参酮ⅡA或1 - Br-隐丹参酮；所述步骤（2）中，苯酸类化合物为阿魏酸或丹参素。

6.如权利要求4所述的具有心肌保护作用的1-丹参酮酸酯衍生物的制备工艺，其特征在于：所述步骤（1）中丹参酮类化合物：过氧化苯甲酰：N-溴代丁二酰亚胺添加摩尔比为1:（0.01~0.1）:（0.8~2）。

7.如权利要求4所述的具有心肌保护作用的1-丹参酮酸酯衍生物的制备工艺，其特征在于：所述步骤（2）中1-溴代丹参酮：苯酸类化合物添加的摩尔比为（0.8~1）:（1~2）。

8.具有心肌保护作用的1-丹参酮酸酯衍生物在制备用于心血管疾病的微囊型缓释固体分散体的应用。

9.如权利要求8所述的具有心肌保护作用的1-丹参酮酸酯衍生物的应用，其特征在于，所述微囊型缓释固体分散体由以下重量份的物质组成：1- 丹参酮酸酯衍生物10~30份，聚乙烯吡咯烷酮20~100份，单硬脂酸甘油酯20~100份，乙基纤维素10~50份。

10.如权利要求8或9所述的具有心肌保护作用的1-丹参酮酸酯衍生物的应用，其特征在于，所述微囊型缓释固体分散体的制备方法如下：按照1- 丹参酮酸酯衍生物：聚乙烯吡咯烷酮：单硬脂酸甘油酯：乙基纤维素的质量比为1:（1.5~2）:（2~4）:（1~1.5）的比例混合，加入总固体3~10倍质量的70%~100%乙醇，待充分溶解后，回收总固体2~5倍质量的乙醇，得到混合体系；混合体系以喷雾干燥法制备成微囊，所述喷雾干燥的参数为：温度50~80℃，进样速率30~45 r/min。

说明书

技术领域

本发明属于制药领域，涉及具有心肌保护作用的1-丹参酮酸酯衍生物及其应用。

背景技术

丹参因其活血化瘀的药效故常被用于治疗冠心病、心肌梗塞、心绞痛等疾病，丹参酮IIA是丹参酮中主要的活性成分，研究表明其具有舒张血管的作用，但是丹参酮IIA的脂溶性较强，水溶性较差，不利于其在体内的吸收，因此疗效较差。考虑到传统中医是以丹参整体入药，在丹参发挥药效过程中，丹参酮IIA可能和其它组分在一起协同发挥作用，而丹参中主要成分除了脂溶性的丹参酮类外，还有水溶性的酚酸类成分。丹参酮IIA和丹参酚酸类化合物在心血管方面有其各自的药理作用，丹参酮IIA脂溶性好，导致其在胃肠水性粘液层中的溶解度小，难以进入细胞膜转运;丹参酚酸类化合物水溶性好，人体吸收快的同时代谢速度也很快。我们在对丹参酮IIA进行结构修饰时，有目的的利用拼合原理将丹参酮IIA与具有羧酸基团的化合物拼接在一起，使新合成的化合物相比丹参酮IIA水溶性增加，脂溶性减少，即使其油水分配系数系数变小，增加其在人体内的吸收利用，在协同作用的基础上增强它们的活性，提高疗效。

丹参酮类化合物为丹参中对心血管疾病有确切疗效的重要的脂溶性活性物质。药理研究表明其主要有抗心律失常、保护心肌、改善心肌缺血缺氧、恢复血液循环等作用。虽然丹参酮类化合物活性确切显著，但因其脂溶性强难溶于水，临床上单体应用并不多，至今只有注射用丹参酮IIA磺酸钠盐制剂。丹参酮IIA磺酸钠盐虽然提高了丹参酮IIA的极性、增加其水溶性从而增强了活性，但半衰期短、代谢快为其显著缺点，而且具有刺激性。所以如何合成出更好的丹参酮类衍生物，以改善其极性、提高生物利用度、提高活性，是当前研究丹参关注的焦点之一，也是难点之一：因为丹参酮类结构独特，其脂溶性强、活性部位对热不稳定、母核上难以引入其它基团等因素导致其衍生物合成的困难。

发明内容

为解决丹参酮的极性差、功效弱、生物利用度低的技术问题，本发明对丹参酮类化合物进行衍生物修饰研究，公开了具有心肌保护作用的1-丹参酮酸酯衍生物及其应用。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

具有心肌保护作用的1-丹参酮酸酯衍生物，具有如下结构通式（Ⅰ） 或结构通式（Ⅱ） ，

式中：R₁ = -OH或-OCH₃；

R₂ = -OH；

R₃ = -H、-OH或-OCH₃；

R4 = -3- CH₃ -呋喃基或- 3 - CH₃- 2, 3 - 2H-呋喃基；

R₅= -H或-OH。

具有如下结构通式（Ⅲ） 或结构通式（Ⅳ）

式中：R_1’= -H或-OH；

R_2’= -OH或-OCH₃；

R_3’=-OH。

具有如下结构通式（Ⅴ） 或结构通式（Ⅵ） ，

式中：R_4’=-OH或-OCH₃；

R_5’=-OH。

具有心肌保护作用的1-丹参酮酸酯衍生物的制备工艺，步骤如下：

（1）向反应容器Ⅰ中，加入丹参酮类化合物和无水CCl₄，加入少量过氧化苯甲酰，分批加入N-溴代丁二酰亚胺，控温约60~80℃，回流1.0~4.0h后停止反应，硅胶纯化，得到1-溴代丹参酮类；

（2）向反应容器Ⅱ中，加入苯酸类化合物和溶剂二甲基甲酰胺，利用K₂CO₃调pH至7.5~9.0，搅匀后，加入步骤（1）制得的1-溴代丹参酮类，保持温度50~70℃，反应1~4h结束，冷却后除去二甲基甲酰胺，利用硅胶柱或结晶法纯化，得到1-丹参酮酸酯衍生物。

所述步骤（1）中，丹参酮类化合物为1-羟基-丹参酮或1-羟基-隐丹参酮；1-溴代丹参酮类为1-Br-丹参酮ⅡA或1 - Br-隐丹参酮；所述步骤（2）中，苯酸类化合物为阿魏酸或丹参素。

所述步骤（1）中丹参酮类化合物：过氧化苯甲酰：N-溴代丁二酰亚胺添加摩尔比为1:（0.01~0.1）:（0.8~2）。

所述步骤（2）中1-溴代丹参酮：苯酸类化合物添加的摩尔比为（0.8~1）: （1~2）。

具有心肌保护作用的1-丹参酮酸酯衍生物在制备用于心血管疾病的微囊型缓释固体分散体的应用。

所述微囊型缓释固体分散体由以下重量份的物质组成：1- 丹参酮酸酯衍生物10~30份，聚乙烯吡咯烷酮20~100份，单硬脂酸甘油酯20~100份，乙基纤维素10~50份。

所述微囊型缓释固体分散体的制备方法如下：按照1- 丹参酮酸酯衍生物：聚乙烯吡咯烷酮：单硬脂酸甘油酯：乙基纤维素的质量比为1:（1.5~2）:（2~4）:（1~1.5）的比例混合，加入总固体3~10倍质量的70%~100%乙醇，待充分溶解后，回收总固体2~5倍质量的乙醇，得到混合体系；混合体系以喷雾干燥法制备成微囊，所述喷雾干燥的参数为：温度50~80℃，进样速率30~45 r/min。

本发明的有益效果在于：

1.本发明制备的丹参酮1位取代的衍生物，均为新化合物，通过薄层层析分析和溶解性能研究，丹参酮1位取代的衍生物的极性均比丹参酮类化合物增强。

2.本发明的药理实验表明，与丹参酮相比，其中有一些具有更好的心肌保护作用，具有一定前药物的潜力，可通过制作成片剂、胶囊剂、粉针剂等各种剂型，进而在临床上进行应用，为心血管新药的开发和丹参的利用提供了新的可能。

3.通过大鼠动脉血管环实验及心肌细胞实验，得出衍生物具有舒张血管和保护心肌细胞的药理活性。在大鼠动脉血管环实验我们选用刚处死的大鼠胸主动脉，剪成4mm左右的血管环，在l×10^-6 mol/L的重酒石酸去甲肾上腺素刺激胸主动脉血管环后，加入化合物，结果显示为衍生物的血管舒张幅度为25.43±2.45，丹参酮IIA的舒张幅度为2.70±0.95，表明与丹参酮IIA相比，衍生物的血管舒张明显提高。

具体实施方式

具有心肌保护作用的1-丹参酮酸酯衍生物，具有如下结构通式（Ⅰ） 或结构通式（Ⅱ） ，

式中：R₁ = -OH或-OCH₃；

R₂ = -OH；

R₃ = -H、-OH或-OCH₃；

R4 = -3- CH₃ -呋喃基或- 3 - CH₃- 2, 3 - 2H-呋喃基；

R₅= -H或-OH。

具有如下结构通式（Ⅲ） 或结构通式（Ⅳ）

式中：R_1’= -H或-OH；

R_2’= -OH或-OCH₃；

R_3’=-OH。

具有如下结构通式（Ⅴ） 或结构通式（Ⅵ） ，

式中：R_4’=-OH或-OCH₃；

R_5’=-OH。

具有心肌保护作用的1-丹参酮酸酯衍生物的制备工艺，步骤如下：

（1）向反应容器Ⅰ中，加入丹参酮类化合物和无水CCl₄，加入少量过氧化苯甲酰，分批加入N-溴代丁二酰亚胺，控温约60~80℃，回流1.0~4.0h后停止反应，硅胶纯化，得到1-溴代丹参酮类；

（2）向反应容器Ⅱ中，加入苯酸类化合物和溶剂二甲基甲酰胺，利用K₂CO₃调pH至7.5~9.0，搅匀后，加入步骤（1）制得的1-溴代丹参酮类，保持温度50~70℃，反应1~4h结束，冷却后除去二甲基甲酰胺，利用硅胶柱或结晶法纯化，得到1-丹参酮酸酯衍生物。

所述步骤（1）中，丹参酮类化合物为1-羟基-丹参酮或1-羟基-隐丹参酮；1-溴代丹参酮类为1-Br-丹参酮ⅡA或1 - Br-隐丹参酮；所述步骤（2）中，苯酸类化合物为阿魏酸或丹参素。

所述步骤（1）中丹参酮类化合物：过氧化苯甲酰：N-溴代丁二酰亚胺添加摩尔比为1:（0.01~0.1）:（0.8~2）。

所述步骤（2）中1-溴代丹参酮：苯酸类化合物添加的摩尔比为（0.8~1）: （1~2）。

具有心肌保护作用的1-丹参酮酸酯衍生物在制备用于心血管疾病的微囊型缓释固体分散体的应用。

所述微囊型缓释固体分散体由以下重量份的物质组成：1- 丹参酮酸酯衍生物10~30份，聚乙烯吡咯烷酮20~100份，单硬脂酸甘油酯20~100份，乙基纤维素10~50份。

所述微囊型缓释固体分散体的制备方法如下：按照1- 丹参酮酸酯衍生物：聚乙烯吡咯烷酮：单硬脂酸甘油酯：乙基纤维素的质量比为1:（1.5~2）:（2~4）:（1~1.5）的比例混合，加入总固体3~10倍质量的70%~100%乙醇，待充分溶解后，回收总固体2~5倍质量的乙醇，得到混合体系；混合体系以喷雾干燥法制备成微囊，所述喷雾干燥的参数为：温度50~80℃，进样速率30~45 r/min。

下面结合具体实施例对本发明做进一步的解释说明：

实施例1

在圆底烧瓶Ⅰ中，加入276mg1-羟基-丹参酮和无水CCl₄（溶剂），加入24.2mg过氧化苯甲酰，分批加入142.4mgN-溴代丁二酰亚胺（NBS），控温约60℃，回流1.0 h后停止反应，硅胶纯化，得到1-Br-丹参酮ⅡA；

在圆底烧瓶Ⅱ中，加入180.15mg阿魏酸，二甲基甲酰胺（DMF）为溶剂，利用K₂CO₃调pH至7.5，搅匀后，加入298.6 mg1-Br-丹参酮ⅡA，保持温度50℃，反应1h结束反应，冷却后除去DMF，利用硅胶柱或结晶法纯化，得到目标衍生物如下所示。

目标衍生物为棕红色针状固体，其核磁数据为：

¹H-NMR(400MHz, CDCl₃, TMS) δ 7.75 (2H, s, H-6, 7), 7.63(1H, d, J=1.6 Hz, H-24), 7.59-7.63 (1H, dd, J=1.6, 8.2 Hz， H-28), 7.52-7.54 (1H, d, J=8.2 Hz，H-27), 7.24 (1H, s, H-15), 6.98-6.99 (1H, m, H-1), 6.85 (1H, d, J=16 Hz, H-22), 6.19 (1H, d, J=16 Hz, H-21), 3.88 (3H, s, - OCH₃), 2.24 (3H, s, H-17), 1.97-2.02 (2H, m, H-2), 1.57-1.64 (2H, m, H-3),1.46 (3H, s, H-18), 1.30 (3H, s, H-19)；

¹³C-NMR(100MHz, CDCl₃, TMS) δ 182.42, 174.88, 168.79, 167.91, 166.01, 150.42, 147.41, 146.42, 144.55, 143.61, 141.30, 140.55, 134.23, 131.11, 130.01, 122.73, 115.63, 114.43, 109.33, 67.15, 55.89, 55.52, 34.72, 29.27, 22.73, 8.78。

ESI-MS m/z: 486.9 [M + 1]⁺, 计算值：C₂₉H₂₆O₇: 486.2。

丹参酮IIA衍生物对大鼠胸主动脉的活性研究方法：实验前样品和药品的调配和K-H液制备，将准备进行检测的丹参酮IIA衍生物样品称量准确，用DMSO将其溶解，调配成实验所需的浓度。同时将NE和硝普钠也调配成实验所需浓度。Krebs-Henseleit(K-H)液依照NaCl: 6.95g/L、KCl: 0.35g/L、NaHCCb: 2.10g/L、MgS04: 0.14g/L、CaCb: 0.28g/L、葡萄糖:2.18g/L、KH₂PO₄: 0.16g/L、EDTA:0.0047g/L的比例进行制备，制备后调至PH=7.4，将K-H置于冰箱中4℃保存，需要注意的是K-H液需要当天制备，当天使用。

大鼠离体胸主动脉血管环的制作和装备：取4℃保存的K-H液少许置于浴槽中，通入95%O₂和5%CO₂进行预氧饱和，然后将200g的SD雄性大鼠颈部脱臼处死，打开胸腔，迅速游离出胸主动脉，置于4℃预氧饱和的K-H液中，小心去除动脉周围的结缔组织，剪成3nm长的血管环4根，操作过程中避免过度牵拉，损伤内皮。选取4根外形较好的血管环分别置于盛有K-H液(37℃恒温保存)的浴槽中，浴槽内持续通入95%O₂和5%CO₂的混和气体，每个血管环用上下两个L型不锈钢小钩小心贯穿入血管环管腔，一端固定于浴槽底部，另一端通过丝线连接于张力换能器。血管张力变化会通过生物信号采集处理系统(预先在电脑中对生物信号采集系统进行参数设定)记录于电脑中。

大鼠离体胸主动脉血管环的稳定：将血管环在1.5g张力下稳定2h，随时观测电脑中张力记录变化并进行微调。每20分钟换新鲜K-H液，K-H液预先置于37℃恒温浴槽中，以防止在换K-H液后血管环周围温度不至于变化过大。最后一次换K-H液后，将浴槽定容至6mL。

血管环内皮功能完整性的检测：以l×10^-6mol/L (加入浴槽后浓度，下同)的重酒石酸去甲肾上腺素(NE)刺激血管环，使血管环收縮，达到最大收縮张力，稳定后给予l×l0^-5mol/L的硝普钠并测定其舒张张力，若加硝普钠后血管环的张力值与最大收缩张力值的48SPF等级SD大鼠雄性，200g，购自河南省医学实验动物中心(合格证: sckx (豫)2005-0001)。

丹参酮IIA衍生物对大鼠胸主动脉的活性研究：差值除于最大收缩张力后的数值(即舒张幅度)>80%，说明操作过程中对血管环内皮的损伤小，内皮比较完整性，可以进行下一步的实验。

衍生物对大鼠胸主动脉的活性研究：检测内皮功能，确认内皮完整可以使用后，用K-H液冲洗并再次稳定30分钟，期间每10分钟换K-H液一次，最后一次冲洗后将浴槽定容至6mL，然后进行衍生物对大鼠胸主动脉环的作用研究：先以1×10^-6mol/L的NE刺激血管环，使血管环收缩达到最大收縮张力，稳定后直接加入l×10^-4mol/L浓度的丹参酮IIA衍生物作用于胸主动脉血管环，观察张力变化，待稳定后计算此衍生物的舒张幅度。

血管舒张率：21.26 ± 2.21 （1×10^-4M）。

该衍生物应用于微囊缓释固体分散体制备方法为：将目标衍生物、聚乙烯吡咯烷酮、单硬脂酸甘油酯、乙基纤维素按照1:2:2:1的质量比例混合，加入8倍固体质量的100%乙醇，待充分溶解后，回收3倍固体质量的乙醇，混合体系以喷雾干燥法制备成微囊（温度60℃，进样速率35 r/min）。

实施例2

在圆底烧瓶Ⅰ中，加入276mg1-羟基-丹参酮和无水CCl₄（溶剂），加入24.2mg过氧化苯甲酰，分批加入355.96mg N-溴代丁二酰亚胺（NBS），控温约80℃，回流4.0h后停止反应，硅胶纯化，得到1-Br-丹参酮ⅡA；

在圆底烧瓶Ⅱ中，加入397.4mg丹参素，二甲基甲酰胺（DMF）为溶剂，利用K₂CO₃调pH至9.0，搅匀后，加入373.23mg 1-Br-丹参酮ⅡA，保持温度70℃，反应4h结束反应，冷却后除去DMF，利用硅胶柱或结晶法纯化，得到的目标衍生物如下所示。

目标衍生物为红色固体，其核磁数据为：

¹H-NMR(400MHz, CDCl₃, TMS) δ 7.70 (1H, s, H-6), 7.68 (1H, s, H-7), 7.62-7.66 (2H, m, H-24, 28),7.48-7.50(1H, d, J=8.38 Hz， H-27),7.26-7.28(1H, m, H-1), 7.18(1H, s, H-15),4.22-4.25(1H, t, H-21), 2.83-2.86 (2H, m, H-22), 2.19 (3H, s, H-17), 2.09-2.10 (1H, m, H-2a),2.01-2.05 (2H, m, H-2b，3a), 1.48-1.50 (1H, m, H-3), 1.34 (3H, s, H-18), 1.22 (3H, s, H-19)。

¹³C-NMR(100MHz, CDCl₃, TMS) δ 182.62, 175.75, 160.12, 153.95, 150.71, 141.76, 130.89, 130.56, 129.67, 128.85, 128.40, 128.12, 127.87, 125.80, 124.51, 121.42, 67.39, 65.56, 35.55, 36.20, 35.04, 31.94, 31.04, 30.59, 29.69 28.77, 19.18 8.72。

ESI-MS m/z: 490.9 [M + 1]⁺, 计算值： C₂₉H₂₆O₇: 490.2。

参照实施例1的实验步骤，计算此衍生物的舒张幅度。

血管舒张率：31.97 ± 1.02 （1×10^-4M）。

该衍生物应用于微囊缓释固体分散体制备方法：将目标衍生物、聚乙烯吡咯烷酮、单硬脂酸甘油酯、乙基纤维素按照1:1.5:3:1.5的质量比例混合，加入6倍质量的80%乙醇，待充分溶解后，回收2倍质量的乙醇，混合体系以喷雾干燥法制备成微囊（温度75℃，进样速率38 r/min）。

实施例3

在圆底烧瓶Ⅰ中，加入278mg1-羟基-隐丹参酮和无水CCl₄（溶剂），加入12.1mg过氧化苯甲酰，分批加入249.2mg N-溴代丁二酰亚胺（NBS），控温约70℃，回流2.5h后停止反应，硅胶纯化，得到1 - Br-隐丹参酮；

在圆底烧瓶Ⅱ中，加入198.7mg阿魏酸，二甲基甲酰胺（DMF）为溶剂，利用K₂CO₃调pH至8.5，搅匀后，加入298.6mg 1 - Br-隐丹参酮，保持温度60℃，反应3h结束反应，冷却后除去DMF，利用硅胶柱或结晶法纯化，得到目标衍生物如下。

目标衍生物为红色固体，其核磁数据为：

¹H-NMR(400MHz, CDCl₃, TMS) δ 7.75 (2H, s, H-6, 7), 7.63(1H, d, J=1.6 Hz, H-24), 7.59-7.63 (1H, dd, J=1.6, 8.2 Hz， H-28), 7.52-7.54 (1H, d, J=8.2 Hz，H-27),6.98-6.99 (1H, m, H-1), 6.85 (1H, d, J=16 Hz, H-22), 6.19 (1H, d, J=16 Hz, H-21), 4 .98(1H, t, J= 9.1Hz, H-15a), 4.43(1H, dd, J= 9.2 Hz, H-15b), 3.88 (3H, s, - OCH₃), 1.32(3H, d, J=6.8Hz, H-17), 1.97-2.02 (2H, m, H-2), 1.57-1.64 (2H, m, H-3),1.29 (3H, s, H-18), 1.30 (3H, s, H-19)；

¹³C-NMR(100MHz, CDCl₃, TMS) δ 183.83, 175.68, 160.87, 167.89, 161.01, 152.52, 147.48, 146.47, 145.15, 143.33, 141.30, 140.55, 134.23, 132.41, 129.01, 125.73, 115.63, 116.43, 109.33, 81.14，67.15, 55.89, 35.04, 34.85，34.74, 32.04, 31.79， 28.77, 19.18。

ESI-MS m/z: 489.0 [M + 1]⁺, 计算值： C₂₉H₂₆O₇: 488.2。

参照实施例1的实验步骤，计算此衍生物的舒张幅度。

血管舒张率：27.68 ± 0.72 （1×10^-4M）。

微囊缓释固体分散体制备方法：将目标衍生物、聚乙烯吡咯烷酮、单硬脂酸甘油酯、乙基纤维素按照1:2:4:1.5比例混合，加入7倍固体质量的85%乙醇，待充分溶解后，回收3倍固体质量的乙醇，混合体系以喷雾干燥法制备成微囊（温度70℃，进样速率40 r/min）。

实施例4

在圆底烧瓶Ⅰ中，加入278mg1-羟基-隐丹参酮和无水CCl₄（溶剂），加入2.42mg过氧化苯甲酰，分批加入142.38mgN-溴代丁二酰亚胺（NBS），控温约60℃，回流1.0h后停止反应，硅胶纯化，得到1 - Br-隐丹参酮；

在圆底烧瓶Ⅱ中，加入397.4mg丹参素，二甲基甲酰胺（DMF）为溶剂，利用K₂CO₃调pH至8.0，搅匀后，加入198.7mg 1 - Br-隐丹参酮，保持温度68℃，反应110min结束反应，冷却后除去DMF，利用硅胶柱，得到目标衍生物。

目标衍生物为橙红色固体，其核磁数据为：

¹H-NMR(400MHz, CDCl₃, TMS) δ 7.75 (2H, s, H-6, 7), 7.63 (1H, d, J=1.6 Hz, H-24), 7.59-7.63 (1H, dd, J=1.6, 8.2 Hz， H-28), 7.52-7.54 (1H, d, J=8.2 Hz，H-27),6.98-6.99 (1H, m, H-1), 6.85 (1H, d, J=16 Hz, H-22), 6.19 (1H, d, J=16 Hz, H-21), 4 .98 (1H, t, J= 9.1Hz, H-15a), 4.43 (1H, dd, J= 9.2 Hz, H-15b), 3.88 (3H, s, - OCH₃), 1.32(3H, d, J=6.8Hz, H-17), 1.97-2.02 (2H, m, H-2), 1.57-1.64 (2H, m, H-3),1.29 (3H, s, H-18), 1.30 (3H, s, H-19)；

¹³C-NMR(100MHz, CDCl₃, TMS) δ 184.12, 175.35, 160.72, 152.02, 150.71, 143.26, 132.19, 130.56, 129.67, 128.35, 128.40, 128.12, 127.87, 122.80, 184.51, 81.64，67.79, 65.56, 35.55, 36.20, 35.04, 34.80，34.54, 31.04, 31.69， 28.77, 19.18。

ESI-MS m/z: 493.1 [M + 1]⁺, 计算值： C₂₉H₂₆O₇: 492.2。

参照实施例1的实验步骤，计算此衍生物的舒张幅度。

血管舒张率：35.58 ± 2.02 （1×10^-4M）。

微囊缓释固体分散体制备方法：将目标衍生物、聚乙烯吡咯烷酮、单硬脂酸甘油酯、乙基纤维素按照1:4:3:2的质量比例混合，加入7倍固体质量的70%乙醇，待充分溶解后，回收4倍固体质量的乙醇，混合体系以喷雾干燥法制备成微囊（温度80℃，进样速率45 r/min）。

具有心肌保护作用的1-丹参酮酸酯衍生物及其应用专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。