专利摘要

本发明提供一种以水为溶剂从脱脂油茶籽饼粕中提取皂素、多糖的方法。包括以下工艺步骤：(1)将油茶籽饼粕研磨成粉末，并用石油醚进行脱脂；(2)用水提取脱脂油茶籽饼粕粉末中的皂素和多糖；(3)提取液浓缩并调节pH，采用大孔树脂吸附皂素，乙醇洗脱纯化皂素；(4)流出液再用大孔树脂吸附杂质得到多糖。本发明用水进行提取，绿色无污染；用乙醇溶液做洗脱剂，沸点低，易回收重复利用，生产本低；生产工艺简单，操作方便，适用于产业化生产，可以得到高纯度的皂素和多糖。

权利要求

1.一种从油茶籽饼粕中提取皂素和多糖的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）向油茶籽饼粕中加入石油醚，使油茶籽饼粕与石油醚的质量体积比为1：（6～12） kg/L，于65～90 ℃下提取，分离石油醚得到脱脂油茶籽饼粕；

（2）向脱脂油茶籽饼粕中加入水，使脱脂油茶籽饼粕与水的质量体积比为1：（8～16） kg/L，在60～90 ℃下浸提，过滤得滤渣和滤液，滤渣干燥得到膳食纤维；

（3）将步骤（2）所得滤液浓缩至原体积的1/3～1/2，调节pH 值为2～6使蛋白沉淀，离心分离得到水相和沉淀，沉淀干燥得到蛋白；

（4）将步骤（3）所得水相用AB-8大孔树脂吸附2～5 h，收集流出液Ⅰ，将AB-8大孔树脂依次用水﹑0.1～0.2% NaOH水溶液﹑10～30 %乙醇溶液洗脱，最后用70～95 %的乙醇溶液进行解析，收集解析液，浓缩﹑干燥得到皂素； 

（5）将步骤（4）中的流出液Ⅰ采用D3520大孔树脂吸附2～4 h，收集流出液Ⅱ，将流出液Ⅱ进行醇沉或干燥，得到油茶多糖。

2.一种从油茶籽饼粕中提取皂素和多糖的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）向油茶籽饼粕中加入石油醚，使油茶籽饼粕与石油醚的质量体积比为1：（6～12） kg/L，于65～90 ℃下提取，分离石油醚得到脱脂油茶籽饼粕；

（2）向脱脂油茶籽饼粕中加入水，使脱脂油茶籽饼粕与水的质量体积比为1：（8～16） kg/L，在60～90 ℃下浸提，过滤得滤渣和滤液，滤渣干燥得到膳食纤维；

（3）将步骤（2）所得滤液浓缩至原体积的1/3～1/2，调节pH 值为2～6使蛋白沉淀，离心分离得到水相和沉淀，沉淀干燥得到蛋白；

（4）将步骤（3）所得水相用D3520大孔树脂吸附2～4 h，收集流出液A，将D3520大孔树脂依次用水﹑10～20 %乙醇溶液洗脱，最后用60～80 %的乙醇溶液进行解析，收集解析液，浓缩﹑干燥得到油茶多酚；

（5）将步骤（4）中的流出液A采用AB-8大孔树脂吸附2～5 h，收集流出液B，将流出液B进行醇沉或干燥，得到油茶多糖；

（6）AB-8大孔树脂依次用水﹑0.1～0.2%NaOH、10～30 %乙醇溶液洗脱，最后用70～95 %的乙醇溶液进行解析，收集解析液，浓缩﹑干燥得到皂素。

3.根据权利要求1或2所述从油茶籽饼粕中提取皂素和多糖的方法，其特征在于：步骤（1）中，在65～90 ℃下提取1～3次，每次1～4 h。

4.根据权利要求1或2所述从油茶籽饼粕中提取皂素和多糖的方法，其特征在于：步骤（2）中，在60～90 ℃下提取2～4 h。

5.根据权利要求1或2所述从油茶籽饼粕中提取皂素和多糖的方法，其特征在于：步骤（3）中调节pH 值使用盐酸或硫酸。

说明书

技术领域

本发明涉及一种从油茶籽饼粕中提取皂素和多糖的方法，属于油茶籽饼粕活性成分的提取技术领域。

背景技术

油茶(Camellia oleifera Abel.)是一种多年生木本油料作物，是与油棕、橄榄、椰子齐名的四大木本食用油源树种之一，在我国拥有得天独厚的资源优势，主要分布于广西、江西、湖南等地。油茶果主要用于榨取茶油，经榨取茶油之后的残渣即为油茶籽饼粕，又称油茶枯、茶麸等。油茶籽饼粕含有大量的膳食纤维，以及皂素、多糖、多酚等多种活性成分。

皂素是从山茶属山茶科植物中提取得到的皂苷类化合物的总称，故又称皂苷，其结构复杂，由配基、糖体、有机酸三部分组成。油茶籽饼粕中皂素的含量达15 %左右，是目前油茶果深加工的主要产品。皂素除了具有乳化、去污、发泡等多种表面活性外，还具有显著的消炎、镇痛、杀菌、杀虫及促进植物生长等作用，广泛应用于日化、医药、食品等领域。目前，关于油茶籽饼粕中的皂素的提取纯化研究较多，如超滤膜分离技术、有机溶剂萃取法、絮凝剂法、重结晶法、硅胶柱层析法等，均存在不同程度的不足。

植物多糖在植物中由单糖脱水形成，非淀粉、非纤维素的一类具有生理活性的高分子聚合物的总称。植物多糖具有抗肿瘤、降血糖、抗凝血、抗血栓、抗氧化、抗衰老、抗病毒等药理作用和多种保健功能，是目前食品、医药领域研究的热点领域之一。目前关于提取油茶饼粕中多糖的技术不够成熟，难于放大。

目前在脱除蛋白的方法上，常用Sevag试剂（氯仿和正丁醇的混合液）、三氟乙酸等有毒化学试剂引起蛋白变性而达到脱除蛋白的目的，且脱除蛋白常需5～6次以上，所用试剂昂贵、消耗量大、有毒、回收困难，很难用于产业化放大且容易引起溶剂残留等问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种生产条件温和，安全无毒，操作简单，以水为溶剂从油茶籽饼粕中提取皂素和多糖的方法。

本发明目的通过下述技术方案实现。

一种从油茶籽饼粕中提取皂素和多糖的方法，可以通过以下两种途径实现。

1、一种从油茶籽饼粕中提取皂素和多糖的方法，包括以下步骤：

（1）向油茶籽饼粕中加入石油醚，使油茶籽饼粕与石油醚的质量体积比为1：（6～12） kg/L，于65～90 ℃下提取，分离石油醚得到脱脂油茶籽饼粕；

（2）向脱脂油茶籽饼粕中加入水，使脱脂油茶籽饼粕与水的质量体积比为1：（8～16） kg/L，在60～90 ℃下浸提，过滤得滤渣和滤液，滤渣干燥得到膳食纤维；

（3）将步骤（2）所得滤液浓缩至原体积的1/3～1/2，调节pH 值为2～6使蛋白沉淀，离心分离得到水相和沉淀，沉淀干燥得到蛋白；

（4）将步骤（3）所得水相用AB-8大孔树脂吸附2～5 h，收集流出液Ⅰ，将AB-8大孔树脂依次用水﹑0.1～0.2% NaOH水溶液﹑10～30 %乙醇溶液洗脱，最后用70～95 %的乙醇溶液进行解析，收集解析液，浓缩﹑干燥得到皂素； 

（5）将步骤（4）中的流出液Ⅰ采用D3520大孔树脂吸附2～4 h，收集流出液Ⅱ，将流出液Ⅱ进行醇沉或干燥，得到油茶多糖。

2、一种从油茶籽饼粕中提取皂素和多糖的方法，包括以下步骤：

（1）向油茶籽饼粕中加入石油醚，使油茶籽饼粕与石油醚的质量体积比为1：（6～12） kg/L，于65～90 ℃下提取，分离石油醚得到脱脂油茶籽饼粕；

（2）向脱脂油茶籽饼粕中加入水，使脱脂油茶籽饼粕与水的质量体积比为1：（8～16） kg/L，在60～90 ℃下浸提，过滤得滤渣和滤液，滤渣干燥得到膳食纤维；

（3）将步骤（2）所得滤液浓缩至原体积的1/3～1/2，调节pH 值为2～6使蛋白沉淀，离心分离得到水相和沉淀，沉淀干燥得到蛋白；

（4）将步骤（3）所得水相用D3520大孔树脂吸附2～4 h，收集流出液A，将D3520大孔树脂依次用水﹑10～20 %乙醇溶液洗脱，最后用60～80 %的乙醇溶液进行解析，收集解析液，浓缩﹑干燥得到油茶多酚；

（5）将步骤（4）中的流出液A采用AB-8大孔树脂吸附2～5 h，收集流出液B，将流出液B进行醇沉或干燥，得到油茶多糖；

（6）AB-8大孔树脂依次用水﹑0.1～0.2%NaOH、10～30 %乙醇溶液洗脱，最后用70～95 %的乙醇溶液进行解析，收集解析液，浓缩﹑干燥得到皂素。

上述步骤（1）中，在65～90 ℃下提取1～3次，每次1～4 h。

上述步骤（2）中，在60～90 ℃下提取2～4 h。

上述步骤（3）中调节pH 值使用盐酸或硫酸。

本发明的优点与积极效果：（1）采用水作为溶剂提取皂素与多糖，避免了有机溶剂法提取所带来的费用高、安全性差等不足。（2）大孔树脂具有处理量大、可重复使用等优点，采用大孔树脂吸附对皂素和多糖进行有效的分离与纯化，提高了生产效率和降低了能耗。（3）本发明先利用等电点沉降除掉部分蛋白，再利用大孔树脂脱除其余蛋白并进行脱色，大孔树脂可以重复利用，不但解决了传统方法放大困难、有毒溶剂残留、影响产品生物活性等瓶颈问题，还简化了工序、降低生产成本。（4）生产条件温和，安全无毒，操作简单，适用于工业化生产。

附图说明

图1为本发明工艺流程图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述。

本发明以水为提取溶剂，采用大孔吸附树脂从油茶籽饼粕中提取分离纯化得到皂素和多糖。实验过程中，选取了LSA-700B、AB-8、D101、D941和D3520大孔树脂考察其对蛋白和多酚的吸附作用。结果表明：D3520大孔树脂对蛋白及多酚有很好的吸附和解析能力，但对皂素与多糖的吸附能力弱，可用于吸附水提液中的蛋白及富集多酚，故采用D3520大孔树脂去除多糖中的蛋白（蛋白是影响多糖纯度的主要因素）并达到富集多酚的目的。AB-8大孔树脂对皂素有很好的选择性吸附，而且吸附量大、解析能力强，因此选用AB-8来纯化皂素。

利用这两种树脂来分离纯化皂素和多糖，可以通过以下两种方法实现：

方法一：先用水把皂素、多糖、蛋白、多酚等成分一并提取出来得到水提液，将水提液浓缩至原体积的1/3～1/2，调节pH =2～6使大部分蛋白沉淀，离心分离得到水相和沉淀。利用AB-8大孔树脂对水相中的皂素进行富集吸附，洗脱时除去色素等杂质后便获得高纯度皂素；再利用D3520大孔树脂来吸附蛋白、多酚等，经过这两种大孔树脂吸附的流出液中主要含油茶多糖，经过醇沉或喷雾干燥便获得油茶多糖。

方法二：先用水把皂素、多糖、蛋白、多酚等成分提取出来得到水提液，将水提液浓缩至原体积的1/3～1/2，调节pH =2～6使大部分蛋白沉淀，离心分离得到水相和沉淀。利用D3520大孔树脂对水相中的蛋白和多酚进行吸附与富集，洗脱时便获得油茶多酚；再利用AB-8大孔树脂对皂素进行富集吸附，洗脱时除去色素等杂质后便获得高纯度皂素，经过这两种大孔树脂吸附的流出液中主要含油茶多糖，经过醇沉或喷雾干燥便获得油茶多糖。

实施例1

油茶仔饼粕粉末50 g加入石油醚，使油茶籽饼粕粉末与石油醚的质量体积比（g/mL）为1：7，在75 ℃下提取两次，每次1 h，过滤，合并提取液，浓缩回收石油醚得到脱脂油茶籽饼粕。向脱脂油茶籽饼粕加入水，使脱脂油茶籽饼粕与水的质量体积比（g/mL）为1：16，在70 ℃下提取2 h，过滤，残渣烘干即可得到膳食纤维，水提液浓缩至原来体积1/3，加入5 % 盐酸调节pH=3.5，离心分离去除沉淀下来的蛋白。取水相部分，用AB-8大孔树脂吸附3 h，收集流出液Ⅰ。将AB-8大孔树脂依次用水﹑0.15 % NaOH﹑20 %乙醇溶液洗脱以除去杂质，再用80 %乙醇溶液进行解析，收集解析液，浓缩、干燥即可得到精制皂素，收率8.6 %，纯度为97 %。经AB-8大孔树脂吸附后的流出液Ⅰ用D3520大孔树脂吸附3 h，收集流出液Ⅱ，向流出液Ⅱ中加入4倍体积的无水乙醇，搅拌，静置，干燥可制得油茶多糖，收率1.04%，其葡萄糖当量为0.3763。水提之后的残渣烘干即可得到膳食纤维。

实施例2：

油茶仔饼粕粉末500 g加入石油醚，使油茶籽饼粕粉末与石油醚的质量体积比（g/mL）为1：9，在85 ℃下提取两次，每次2 h，过滤，合并提取液，浓缩回收石油醚得到脱脂油茶籽饼粕。向脱脂油茶籽饼粕加入水，使脱脂油茶籽饼粕与水的质量体积比（g/mL）为1：12，在85 ℃下提取3 h，过滤，残渣烘干即可得到膳食纤维，水提液浓缩至原来体积一半，加入5 % 盐酸调节pH=4，离心分离去除沉淀下来的蛋白。取水相部分，用AB-8大孔树脂吸附3.5 h，收集流出液Ⅰ。将AB-8大孔树脂依次用水﹑0.15 % NaOH﹑20 %乙醇溶液洗脱以除去杂质，再用80 %乙醇溶液进行解析，收集解析液，浓缩、干燥即可得到精制皂素，收率8.3 %，纯度96.3 %。经AB-8大孔树脂吸附后的流出液Ⅰ用D3520大孔树脂吸附3.5 h，收集流出液Ⅱ，向流出液Ⅱ中加入4倍体积的无水乙醇，搅拌，静置，干燥可制得油茶多糖，收率0.98 %，其葡萄糖当量为0.3321。水提之后的残渣烘干即可得到膳食纤维。

实施例3：

称取油茶仔饼粕粉末10 kg，加入石油醚，油茶籽饼粕与石油醚的质量比(kg/L)为1：6，在80 ℃下提取两次，每次3 h，过滤，合并提取液，浓缩回收石油醚得到脱脂油茶籽饼粕。向脱脂油茶籽饼粕中加入水，使脱脂油茶籽饼粕与水的质量体积比（kg/ L）为1：8，在90 ℃下提取4 h，过滤，残渣烘干即可得到膳食纤维，把水提液浓缩至原来体积一半，加入5 %硫酸调节pH=4.5，离心分离去除沉淀下来的蛋白。取水相部分，用AB-8大孔树脂吸附4 h，收集流出液Ⅰ。将AB-8大孔树脂依次用水﹑0.15 % NaOH﹑20 %乙醇溶液洗脱以除去杂质，再用80 %乙醇溶液进行解析，收集解析液，浓缩、干燥即可得到精制皂素，收率8.1 %，纯度95.1 %。经AB-8大孔树脂吸附后的流出液Ⅰ用D3520大孔树脂吸附3.5 h，收集流出液Ⅱ，向流出液Ⅱ中加入4倍体积的无水乙醇，搅拌，静置，干燥可制得油茶多糖，收率0.7 %，其葡萄糖当量为0.3221。水提之后的残渣烘干即可得到膳食纤维。

实施例4：

与实施例1类似，不同的是先用D3520大孔树脂吸附再用AB-8大孔树脂吸附。

称取油茶仔饼粕粉末50 g，加入石油醚，使油茶籽饼粕粉末与石油醚的质量体积比（g/mL）为1：7，在75 ℃下提取两次，每次1 h，过滤，合并提取液，浓缩回收石油醚得到脱脂油茶籽饼粕。向脱脂油茶籽饼粕加入水，使脱脂油茶籽饼粕与水的质量体积比（g/mL）为1：16，在70 ℃下提取2 h，过滤，烘干残渣即可得到膳食纤维，把水提液浓缩至原来体积1/3，加入5 %盐酸调节pH=3.5，离心分离去除沉淀下来的蛋白。取水相部分，用D3520大孔树脂吸附4 h，收集流出液(A)。将D3520大孔树脂依次用水﹑15 %乙醇溶液洗脱以除去杂质，再用70 %乙醇溶液进行解析，收集解析液，浓缩、干燥即可得到油茶多酚，收率0.64 %，其没食子酸当量为0.08572。经D3520大孔树脂吸附后的流出液(A)用AB-8大孔树脂吸附3 h，收集流出液(B)，将流出液(B)浓缩干燥可制得油茶多糖，收率0.66 %，其葡萄糖当量为0.6651；AB-8大孔树脂依次用水﹑0.15 % NaOH﹑20 %乙醇溶液洗脱以除去杂质，再用80 %乙醇溶液进行解析，收集解析液，浓缩、干燥即可得到精制皂素，收率7.6 %，纯度为98.5 %。水提之后的残渣烘干即可得到膳食纤维。

与实施例1相比，实施例4获得的皂素色泽更白，纯度更高。

多酚是造成皂素色泽加深的主要原因，在纯化皂素过程中如何去除多酚是要考虑的主要因素。采用实施例4所述方法可在洗脱D3520的同时获得油茶多酚。

本发明方法1先使用AB-8大孔树脂，再使用D-3520大孔树脂纯化，由于 AB-8大孔树脂对皂素有强的选择性吸附作用，但其同时也吸附多酚，在纯化皂素的过程中，可用0.15%NaOH将AB-8大孔树脂上的多酚去除，由于用到的是碱洗脱，故此时多酚无法回收。0.15%NaOH洗脱后，AB-8大孔树脂上尚有少量多酚残留，故用80%乙醇解析皂素时，树脂上残留的少量多酚也一起洗脱下来而造成皂素的色泽相对较差、纯度相对要小。

而方法2先使用D3520大孔树脂，再用AB-8大孔树脂的纯化。由于D3520大孔树脂对多酚及蛋白吸附作用很强（其对皂素也有一定吸附作用），把D3520大孔树脂放入水提液后，提取液中的绝大多数多酚被D3520大孔树脂吸附，在洗脱D3520大孔树脂时，由于不使用碱而是使用醇洗脱，故可以收集到多酚。另外由于先使用D3520大孔树脂，其基本上把水提液中的多酚吸附干净，再用AB-8大孔树脂吸附皂素时，已最大程度地减少了多酚对皂素纯化的影响，使得皂素的色泽及纯度都相应得到提高。但此时，皂素经过了两步吸附，使得其中的损失变得无法避免，得率也就相应降低。

一种从油茶籽饼粕中提取皂素和多糖的方法专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。