专利摘要

本发明涉及一种利用微生物代谢处理石油化工污水生产蛋氨酸的方法，包括如下步骤：(1)菌种活化：从‑80℃冰箱中取出海洋真菌k21‑1菌种，菌种保存液融化至室温后，挑取菌种接种于PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)平板中，于20‑25℃培养基箱中培养3‑5天，备用；(2)制备种子液：用接种环从步骤(1)平板上挑取菌株，转接至种子培养基中，20‑25℃摇床，150‑180转/分钟，培养3‑4天，备用；(3)硫化物的转化：向含硫(S2‑)废水中加入煮沸的土豆汁、葡萄糖、海水素后，将步骤(2)制备的种子液转接其中，于20‑25℃静置培养3‑4周，即可将含硫(S2‑)废水中的硫(S2‑)转化为蛋氨酸。

权利要求

1.一种海洋真菌k21-1将S2-转化为蛋氨酸的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)菌种活化：从-80℃冰箱中取出海洋真菌k21-1菌种，菌种保存液融化至室温后，挑取菌种接种于PDA培养基平板中，于20-25℃培养基箱中培养3-5天，备用；

(2)制备种子液：用接种环从步骤(1)平板上挑取菌株，转接至种子培养基中，20-25℃摇床，150-180转/分钟，培养3-4天，备用；

(3)硫化物的转化：向含S2-废水中加入煮沸的土豆汁、葡萄糖、海水素后，将步骤(2)制备的种子液转接其中，于20-25℃静置培养3-4周，即可将含S2-废水中的S2-转化为蛋氨酸；

步骤(1)中所述PDA培养基的配置方法为每1000mL水中，使用如下成分：200g土豆煮沸取汁、15g葡萄糖、30g海水素、12g琼脂；

步骤(2)所述的种子培养基的配置方法为每1000mL水中，使用如下成分：200g土豆煮沸取汁、15g葡萄糖、30g海水素；

步骤(3)中废水、煮沸的土豆汁、葡萄糖、海水素的用量为每1000mL废水中加入200g煮沸的土豆汁、15g葡萄糖、30g海水素，含S2-废水中S2-的浓度为30-40mg/L。

说明书

技术领域

本发明属于石油化工污水处理领域，具体涉及一种利用微生物代谢处理石油化工污水生产蛋氨酸的方法。

背景技术

石油炼制的主要生产过程包括：常压蒸馏、减压蒸馏、催化裂化、催化加氢、重油重整等，这些工艺是炼油污水形成的主要原因。炼油废水根据其产生来源和组成特点一般可分为：含油污水、含硫污水和含碱污水。

石油开采过程中往往会产生大量的含硫废水，不仅会引起管线与设备的腐蚀，还会导致受纳水体的水质恶化，对正常生产、水生生物以及人类健康造成威胁。因此，在该类废水排放之前，S2-的去除非常重要。废水中的硫化物可以通过物理、化学以及生物三种方法去除。目前石油化工行业普遍采用的是气提法，即通过高温蒸汽将污水中的硫化物吹脱至大气，以缓解其可能带来的腐蚀问题。然而，该方法不仅能耗高，吹脱至大气中的H2S也是重要的污染物，导致二次污染问题，因此，寻找一种高效、环保的除硫方法显得尤为重要。

石化炼油污水污染物成分复杂，主要含有石油类杂质、硫化物、氨氮、金属盐类化合物、氰化物、无机酸以及少量的芳香胺类化合物、多环芳经化合物、杂环化合物等物质，其中石油类、氰化物、硫醇以及重金属未、铅、铬、辐等污染危害严重，且难降解和可生化性差，如污染物中一些物质或本身难于被生物降解，电脱盐工段产生的具有一定温度的高含盐污水也难以被生物降解，一些物质的存在也会影响微生物的生长或抑制生物降解的进行，导致生物系统处理效果变差，或可抑制硝化菌的生长繁殖，从而影响生物处理工艺对氨氮的去除。

发明内容

本发明提供一种海洋真菌k21-1在含硫污水处理中的应用。所述含硫污水优选石油化工污水。

本发明的另一实施方案提供一种海洋真菌k21-1在含硫污水处理中的应用，其特征在于所述海洋真菌k21-1将污水中的硫化物(S2-)转化为蛋氨酸。

本发明的另一实施方案提供一种海洋真菌k21-1将硫化物(S2-)转化为蛋氨酸的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)菌种活化：从-80℃冰箱中取出海洋真菌k21-1菌种，菌种保存液融化至室温后，挑取菌种接种于PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)平板中，于20-25℃培养基箱中培养3-5天，备用；

(2)制备种子液：用接种环从步骤(1)平板上挑取菌株，转接至种子培养基中，20-25℃摇床，150-180转/分钟，培养3-4天，备用；

(3)硫化物的转化：向含硫(S2-)废水中加入煮沸的土豆汁、葡萄糖、海水素后，将步骤(2)制备的种子液转接其中，于20-25℃静置培养3-4周，即可将含硫(S2-)废水中的硫(S2-)转化为蛋氨酸。

步骤(1)中所述PDA培养基的配置方法为每1000mL水中，使用如下成分：200g土豆煮沸取汁、15g葡萄糖、30g海水素、12g琼脂；步骤(2)所述的种子培养基的配置方法为每1000mL水中，使用如下成分：200g土豆煮沸取汁、15g葡萄糖、30g海水素；步骤(3)中废水、煮沸的土豆汁、葡萄糖、海水素的用量为每1000mL废水中加入200g煮沸的土豆汁、15g葡萄糖、30g海水素，含硫废水中S2-的浓度为30-40mg/L。

本发明所述的海洋真菌k21-1的菌种信息已在NCBI中公布GenBank:MF179020.1。

与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明利用海洋真菌k21-1自身代谢摄取外界S2-，并将其转化为蛋氨酸的方法，能有效去除含硫污水(尤其是石油化工污水)中的S2-，本发明的技术方案利用了微生物的体内代谢的特点，不污染环境，具有环保和废物回收再利用等诸多优点。

附图说明

图1a：实施例1静置4周后的培养液的HPLC图；b：实施例1步骤(3)转接种子液后，立即进行HPLC分析图；c：L-蛋氨酸的HPLC图；d：实施例1静置4周后的培养液+L-蛋氨酸的HPLC图

具体实施方式

为了便于对本发明的进一步理解，下面提供的实施例对其做了更详细的说明。但是这些实施例仅供更好的理解发明而并非用来限定本发明的范围或实施原则，本发明的实施方式不限于以下内容。

根据取自中国石化某油田采油厂二级过滤器出口的废水中硫(S2-)的含量(约30mg/L)，本发明实施例中采用蒸馏水和Na2S·9H2O(分析纯)分别配制30、40mg/L的含S2-废水。

实施例1

(1)菌种活化：从-80℃冰箱中取出海洋真菌k21-1菌种，菌种保存液融化至室温后，挑取菌种接种于PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)平板中，于20℃培养基箱中培养5天，备用；所述PDA培养基的配置方法为每1000mL水中，使用如下成分：200g土豆煮沸取汁、15g葡萄糖、30g海水素、12g琼脂。

(2)制备种子液：用接种环从步骤(1)平板上挑取菌株，转接至种子培养基中，20℃摇床，180转/分钟，培养4天，备用；所述的种子培养基的配置方法为每1000mL水中，使用如下成分：200g土豆煮沸取汁、15g葡萄糖、30g海水素。

(3)硫化物的转化：向含硫(S2-)废水(200mL，S2-的浓度为30mg/L)中加入煮沸的土豆汁(40g)、葡萄糖(3g)、海水素(6g)后，将步骤(2)制备的种子液转接其中，于20℃静置培养4周后，检测液体中S2-浓度(采用X射线荧光光谱法)及蛋氨酸(HPLC法)的定性检测，结果表明S2-的浓度<1.0mg/L，确实产生了蛋氨酸(保留时间20.1min，图1)。

HPLC分析条件：流动相A：0.1％磷酸溶液(用三乙胺调至pH6.4)，流动相B：甲醇；.A：60％，B：40％，流速1mL/min；检测波长260nm；柱温30℃；进样量10μL。

实施例2

(1)菌种活化：从-80℃冰箱中取出海洋真菌k21-1菌种，菌种保存液融化至室温后，挑取菌种接种于PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)平板中，于25℃培养基箱中培养3天，备用；所述PDA培养基的配置方法为每1000mL水中，使用如下成分：200g土豆煮沸取汁、15g葡萄糖、30g海水素、12g琼脂。

(2)制备种子液：用接种环从步骤(1)平板上挑取菌株，转接至种子培养基中，25℃摇床，150转/分钟，培养3天，备用；所述的种子培养基的配置方法为每1000mL水中，使用如下成分：200g土豆煮沸取汁、15g葡萄糖、30g海水素。

(3)硫化物的转化：向含硫(S2-)废水(200mL，S2-的浓度为40mg/L)中加入煮沸的土豆汁(40g)、葡萄糖(3g)、海水素(6g)后，将步骤(2)制备的种子液转接其中，于25℃静置培养3周后，检测液体中S2-浓度(采用X射线荧光光谱法)及蛋氨酸(HPLC法)的定性检测，结果表明S2-的浓度<1.0mg/L，确实产生了蛋氨酸。

注：实施例1和实施例2在步骤(3)转接种子液后，立即进行HPLC分析，未检测到蛋氨酸(图1)，足以说明本发明海洋真菌k21-1的确利用了外界环境中的S2-，经代谢产生了蛋氨酸(还可能包括其他含硫物质)。

一种利用微生物代谢处理石油化工污水生产蛋氨酸的方法专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。