IPC分类号 : C07K19/00,C12N15/62,C12N15/70,C12N1/21,G01N33/569,G01N33/543,C12R1/19
专利摘要
一种ALV‑K的ELISA试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括以下组分： 酶标板； 样品稀释液，为去离子水； 包被液，以纯化的重组HIS‑K‑gp85蛋白免疫雌性新西兰大耳兔，静脉采血，离心，经过 硫酸铵沉淀法纯化，得到兔多抗KE7作为包被抗体，采用所述样品稀释液稀释所述包被抗体 至4μg/100μL，得到所述包被液，其中所述重组HIS‑K‑gp85蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示； 洗涤液，为PBST； 封闭液，为5%脱脂乳； TMB底物显色液； 终止液，为2mol/L的硫酸溶液； HRP酶标； 标准阳性样品；以及 标准阴性对照样品； 其中5%脱脂乳的封闭时间为5h；一抗稀释后浓度为0.2μg/100μL孵育2h；HRP酶标二 抗稀释度为1:2000，二抗孵育1h；底物显色20min。 2.根据权利要求1所述的一种ALV‑K的ELISA试剂盒，其特征在于，所述重组HIS‑K‑gp85 蛋白的制备方法包括：通过将如SEQ ID NO:1所示的基因克隆到表达载体上，得到重组表达 载体；将所述重组表达载体转化到宿主细胞中进行表达，纯化，得到所述重组HIS‑K‑gp85蛋 白。 3.根据权利要求2所述的一种ALV‑K的ELISA试剂盒，其特征在于，所述表达载体为 pET28a，所述宿主细胞为E. coli BL21。 4.据权利要求2所述的一种ALV‑K的ELISA试剂盒，其特征在于，所述重组HIS‑K‑gp85蛋 白的制备方法包括以下步骤： （1）HIS‑K‑gp85基因扩增：以如SEQ ID NO:1所示的基因为模板，以gp85‑F和gp85‑R为 引物，对HIS‑K‑gp85基因进行PCR扩增；扩增的片段用琼脂糖凝胶回收试剂盒进行回收，并 进行TOPO克隆，构建克隆载体TOPO‑ALV‑K‑gp85，其中正向引物gp85‑F的序列如SEQ ID NO: 2所示，反向引物gp85‑R的序列如SEQ ID NO: 3所示； （2）重组表达载体构建：将克隆载体TOPO‑ALV‑K‑gp85和pET‑28a质粒分别进行双酶切， 回收gp85片段，与经酶切的pET‑28a片段连接，连接之后的产物转化至DH5α菌细胞内，培养 后挑选阳性菌落，经鉴定，得到重组表达载体pET‑28a‑ALV‑K‑gp85； （3）诱导表达：将所述重组表达载体pET‑28a‑ALV‑K‑gp85转化进E. coli BL21菌株中， 复苏和培养后，挑选阳性并经鉴定正确的菌落进行诱导表达； （4）重组HIS‑K‑gp85蛋白的纯化：诱导后菌体经溶解，超声裂解，裂解液上Ni柱，纯化后 的蛋白进行鉴定，分装保存。 5.如权利要求1所述ALV‑K的ELISA试剂盒的使用方法，其特征在于，包括以下步骤： （1）将所述包被液加入至所述酶标板的每孔中，于4℃包被过夜后，甩板，用所述洗涤液 洗涤； （2）每孔中加入所述封闭液，封闭，用所述洗涤液洗涤； （3）加入待测样品，孵育后用所述洗涤液洗涤； （4）加入所述兔多抗KE7作为一抗，孵育后用所述洗涤液洗涤； （5）加入所述HRP酶标记的所述兔多抗KE7作为二抗，孵育后用所述洗涤液洗涤； （6）每孔中加入所述TMB底物显色液，显色； （7）加入所述终止液终止； （8）用酶标仪测450nm处吸光值，当P/N≥2时，判定样品为阳性；当P/N 阴性。 6.如权利要求1‑4任一项所述的ALV‑K的ELISA试剂盒在制备血清学检测产品中的应 用。
一种ALV-K的ELISA试剂盒及其检测方法专利购买费用说明
Q：办理专利转让的流程及所需资料
A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。
1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。
2：按规定缴纳著录项目变更手续费。
3：同时提交相关证明文件原件。
4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。
Q:专利著录项目变更费用如何缴交
A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式
Q：专利转让变更，多久能出结果
A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。
动态评分
0.0