专利摘要

本发明公开了一种雷公藤缓释微胶囊的制备方法，包括采用超声波协同超临界CO2萃取以及高压液相色谱分离对纯度为95％左右的雷公藤内酯醇提取物进行纯化，使其纯度达到99％以上；然后将纯度为99％以上的雷公藤内酯醇纯化提取物制备成缓释微胶囊。本发明减少了杂质对雷公藤内酯醇提取物在药物治疗中的影响，有助于研究者采取有效措施有针对性的对雷公藤内酯醇提取物的毒性进行处理；且本发明对提纯过的雷公藤内酯醇提取物进行微囊化处理，药物的包埋性高，缓释速度好，能够缓慢释放药物中的有效成分，延长药物在体内的释放、吸收、分布，从而降低雷公藤内酯醇对人体的毒性。

权利要求

1.一种雷公藤缓释微胶囊的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，雷公藤内酯醇提取物的纯化

步骤1.1，原料预处理：取雷公藤内酯醇提取物，往其中加入相当于雷公藤内酯醇提取物重量5-10倍的乙醇，搅拌使雷公藤内酯醇完全溶解，然后往其中加入浓度为0.05mol/L的甘氨酸-盐酸缓冲液，调节体系pH值为4-5，得到预处理雷公藤内酯醇提取物；所述雷公藤内酯醇提取物的纯度为95.2%；

步骤1.2，超声波协同超临界CO2萃取：在采用超声波对预处理雷公藤内酯醇提取物进行处理的同时，以二氯甲烷作为携带剂对预处理雷公藤内酯醇提取物进行超临界CO2萃取，萃取完毕得到萃取液，将萃取液浓缩干燥后得到雷公藤内酯醇初步纯化产物；

其中，预处理雷公藤内酯醇提取物与二氯甲烷的体积比为1：0.1-0.5；

超临界CO2萃取条件为：CO2流量为35-60L/h，萃取压力为15-40MPa，萃取温度为40-60℃，萃取时间为3-5h；

步骤1.3，高压液相色谱分离：将雷公藤内酯醇初步纯化产物与乙醇按照1g：5-8mL的比例混合溶解，得到雷公藤内酯醇初步纯化产物的乙醇溶液；将雷公藤内酯醇初步纯化产物的乙醇溶液进行高压液相色谱分离纯化，紫外检测器检测波长为218nm，收集12.3min的馏分，收集完毕后将馏分浓缩、干燥，即得到纯度大于99%的雷公藤内酯醇纯化提取物；

步骤2，雷公藤缓释微胶囊的制备

步骤2.1，制备有机相：将羧甲基纤维素钠、改性壳聚糖、聚乙二醇按照5：1：0.05的质量比混合，然后加入到相当于羧甲基纤维素钠、改性壳聚糖以及聚乙二醇总质量10倍的二氯甲烷中，搅拌溶解至溶液澄清透明，得到混合有机相；

步骤2.2，制备水相：将聚乙烯醇、透明质酸、聚甘油脂肪酸酯按照1：4：0.05的质量比混合，然后加入到相当于聚乙烯醇、透明质酸以及聚甘油脂肪酸酯总质量20倍的蒸馏水中，于80-90℃下搅拌，待溶液变澄清透明后停止加热，冷却至室温，得到混合水相；

所述改性壳聚糖的制备方法如下：将壳聚糖溶解到醋酸溶液中，配制成质量浓度为2%的壳聚糖溶液；

将壳聚糖溶液转移到质量浓度为1%的吐温-80的蓖麻油溶液中，搅拌均匀，然后往其中逐滴加入戊二醛交联剂，滴加完毕后搅拌反应3h，得到反应液，将反应液过滤除去溶剂后用无水乙醇洗涤、干燥，即得到所述改性壳聚糖；

其中，壳聚糖溶液、吐温-80的蓖麻油溶液及戊二醛的体积比为25：5：1；

步骤2.3，制备初乳相：将步骤1中得到的雷公藤内酯醇纯化提取物加入到步骤 2.1的混合有机相中，然后在1000-1500rmp的搅拌速度下搅拌15-30min，搅拌完毕制得分散有药物的初乳相；

步骤2.4，制备雷公藤缓释微胶囊：在转速为1000-1500rpm的条件下，将步骤2.3的初乳相滴加到步骤2.2的混合水相中，持续搅拌1-2h，待胶囊表面固化后，升温至60℃，同时将搅拌速度降低为500rpm，搅拌3-4h，搅拌完毕后洗涤、过滤、干燥，即得到所述雷公藤缓释微胶囊。

2.根据权利要求1所述的雷公藤缓释微胶囊的制备方法，其特征在于，所述步骤1.2中超声波功率为900-1200W，且超声波工作模式为12s，即超声8s，间歇4s。

3.根据权利要求1所述的雷公藤缓释微胶囊的制备方法，其特征在于，所述步骤1.3中高压液相色谱分离条件为：21.2mm×250mm，5μm的C18色谱柱，流速为20mL/min，流动相为甲醇，每次进样500μL。

说明书

技术领域

本发明属于药物制备技术领域，具体涉及一种雷公藤缓释微胶囊的制备方法。

背景技术

雷公藤为卫茅科植物雷公藤的根、叶及花，又名黄藤、断肠草，其性味辛凉，有大毒，入肝经，兼入脾肾经。现代药理研究表明，雷公藤具有抗炎、镇痛、抗肿瘤及免疫调节等作用，常用于皮肤炎症、免疫调节、肾脏疾病及呼吸系统疾病的治疗，但由于其存在着较大的毒性反应而限制了其临床应用。

雷公藤中的药效成分主要是雷公藤二萜内酯、雷公藤三萜类、雷公藤生物碱等，其中属于二萜内酯的雷公藤内酯醇(Triptolide)，又称雷公藤甲素，被认为是最主要的生理活性成分，因此从雷公藤中提纯雷公藤内酯醇具有重要的价值。目前现有的提取方法提取出的雷公藤内酯醇的纯度仅能达到95％左右，如授权公告号为CN 101445545 B的中国发明专利提供了一种从雷公藤叶片中分离雷公藤内酯醇的方法，其提取出的雷公藤内酯醇的纯度在94.3％-98.7％之间。由于雷公藤中药效成分基本是有毒的，因此，将雷公藤内酯醇入药时，需要采取多种手段降低雷公藤内酯醇的毒性，但是如果不将雷公藤内酯醇提纯到较高纯度，一方面会影响药效，另一方面杂质混合进配方组分后难以判断其和其他组分之间发生的相互作用，从而难以采取有针对性的措施降低雷公藤内酯醇的毒性。

由于雷公藤内酯醇是有毒的，所以需要采取措施降低其在药品中的毒性。目前，关于雷公藤减毒方法的研究主要包括中药配伍、制剂减毒、寻找高效低毒的雷公藤活性单体或对已有活性单体进行结构修饰、利用针灸降低毒副作用等方式，但总体而言，效果均不理想。因此，要解决雷公藤的毒副作用问题，须要有创新的思路和方法。对此，我国的医药工作者做了广泛的研究，研究发现，将雷公藤提取物制备成缓释胶囊，通过控制有效成分在体内的释放速度来控制其释放量，让人体逐步吸收，从而能够减轻对人体的毒害。如朱惠等选择超声波法制备雷公藤内酯醇β-环糊精包合物，包合率为70％；王淑娟以雷公藤甲素脂质体的包封率为指标，考察薄膜超声分散法、机械匀浆法与乙醇注入法等脂质体制备方法。由此表明，通过制备雷公藤微胶囊的方法降低雷公藤的毒性具有一定的可行性。因此，只要寻找到合适的包覆微胶囊的材料，就能够为降低雷公藤的毒性的毒性提供有效途径。

常用来包覆微胶囊的材料主要有天然高分子材料、半合成高分子材料、合成高分子材料三大类。天然高分子材料为可胶凝的胶体材料，如明胶、阿拉伯胶及淀粉等，这类材料无毒，成膜性好，但是机械强度差，原料质量不稳定。半合成高分子材料以纤维素衍生物为主，如羧甲基纤维素钠、邻苯二甲酸醋酸纤维素、羧甲基纤维素钠，纤维素衍生物具有毒性小、粘度大、成盐后溶解度增加等优点，但同时又存在易水解，不耐高温，耐酸性差等缺点。合成高分子材料聚乙烯醇缩醛、聚乙二醇、聚丙烯酰胺、聚氨酯、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、柠檬酸三乙酯、假性多聚氨基酸合成橡胶等的特点是成膜性好，可生物降解，化学性能好，稳定性好，但是存在成本高的问题。因此，很有必要寻找出一种新的包覆微胶囊的材料或包覆方法，以控制雷公藤的释放速度及浓度，使其浓度在有效剂量以上，同时处于中毒剂量以下，以期能通过改变雷公藤的剂型及给药方式，进一步降低毒性，为其在临床上的应用提供一定的数据支持。

发明内容

本发明提供了一种雷公藤缓释微胶囊的制备方法，解决了现有技术中雷公藤因存在较大的毒性反应而限制了其临床应用的问题。

本发明提供了一种雷公藤缓释微胶囊的制备方法，包括以下步骤：

步骤1，雷公藤内酯醇提取物的纯化

步骤1.1，原料预处理：取雷公藤内酯醇提取物，往其中加入相当于雷公藤内酯醇提取物重量5-10倍的乙醇，搅拌使雷公藤内酯醇完全溶解，然后往其中加入浓度为0.05mol/L的甘氨酸-盐酸缓冲液，调节体系pH值为4-5，得到预处理雷公藤内酯醇提取物；

步骤1.2，超声波协同超临界CO2萃取：在采用超声波对预处理雷公藤内酯醇提取物进行处理的同时，以二氯甲烷作为携带剂对预处理雷公藤内酯醇提取物进行超临界CO2萃取，萃取完毕得到萃取液，将萃取液浓缩干燥后得到雷公藤内酯醇初步纯化产物；

其中，预处理雷公藤内酯醇提取物与二氯甲烷的体积比为1：0.1-0.5；

超临界CO2萃取条件为：CO2流量为35-60L/h，萃取压力为15-40MPa，萃取温度为40-60℃，萃取时间为3-5h；

步骤1.3，高压液相色谱分离：将雷公藤内酯醇初步纯化产物与乙醇按照1g：5-8mL的比例混合溶解，得到雷公藤内酯醇初步纯化产物的乙醇溶液；将雷公藤内酯醇初步纯化产物的乙醇溶液进行高压液相色谱分离纯化，紫外检测器检测波长为280nm，收集12.3min的馏分，收集完毕后将馏分浓缩、干燥，即得到纯度大于99％的雷公藤内酯醇纯化提取物；

步骤2，雷公藤缓释微胶囊的制备

步骤2.1，制备有机相：将羧甲基纤维素钠、改性壳聚糖、聚乙二醇按照5：1：0.05的质量比混合，然后加入到相当于羧甲基纤维素钠、改性壳聚糖以及聚乙二醇总质量10倍的二氯甲烷中，搅拌溶解至溶液澄清透明，得到混合有机相；

步骤2.2，制备水相：将聚乙烯醇、透明质酸、聚甘油脂肪酸酯按照1：4：0.05的质量比混合，然后加入到相当于聚乙烯醇、透明质酸以及聚甘油脂肪酸酯总质量20倍的蒸馏水中，于80-90℃下搅拌，待溶液变澄清透明后停止加热，冷却至室温，得到混合水相；

步骤2.3，制备初乳相：将步骤1中得到的雷公藤内酯醇纯化提取物加入到步骤2.1的混合有机相中，然后在1000-1500rmp的搅拌速度下搅拌15-30min，搅拌完毕制得分散有药物的初乳相；

步骤2.4，制备雷公藤缓释微胶囊：在转速为1000-1500rpm的条件下，将步骤2.3的初乳相滴加到步骤2.2的混合水相中，持续搅拌1-2h，待胶囊表面固化后，升温至60℃，同时将搅拌速度降低为500rpm，搅拌3-4h，搅拌完毕后洗涤、过滤、干燥，即得到所述雷公藤缓释微胶囊。

优选的，所述步骤1.1中所用雷公藤内酯醇提取物的纯度为95.2％。

优选的，所述步骤1.2中超声波功率为900-1200W，且超声波工作模式为12s，即超声8s，间歇4s。

优选的，所述步骤1.3中高压液相色谱分离条件为：21.2mm×250mm，5μm的C18色谱柱，流速为20mL/min，流动相为甲醇，每次进样500μL。

优选的，所述改性壳聚糖的制备方法如下：将壳聚糖溶解到醋酸溶液中，配制成质量浓度为2％的壳聚糖溶液；

将壳聚糖溶液转移到质量浓度为1％的吐温-80的蓖麻油溶液中，搅拌均匀，然后往其中逐滴加入戊二醛交联剂，滴加完毕后搅拌反应3h，得到反应液，将反应液过滤除去溶剂后用无水乙醇洗涤、干燥，即得到所述改性壳聚糖；

其中，壳聚糖溶液、吐温-80的蓖麻油溶液及戊二醛的体积比为25：5：1。

本发明首先采用甘氨酸-盐酸缓冲液对雷公藤内酯醇提取物进行处理，增加了其在萃取溶剂中的溶解度，超声波协同超临界CO2萃取能够高效、快速的对雷公藤内酯醇进行提取；萃取液浓缩后采用高压液相色谱分离，高压液相色谱分离可以加快层析速度，缩短洗脱时间，同时在完成一个溶剂梯度展开，抽干后还可用另一梯度溶液再次对其展开，有效的防止了各馏分之间的相互交叉和影响，极大的提高了分离效率。此外，相比于常规的常压柱色谱和快速柱色谱分离而言，高压液相色谱设备简单、操作简便、分离速度快、分辨率高、分离容量大、溶剂消耗少。经过上述处理后，雷公藤内酯醇的纯度达到99％以上。

本发明将上述纯度大于99％的雷公藤内酯醇用来制备缓释微胶囊，并采用羧甲基纤维素钠、改性壳聚糖、聚乙二醇、聚乙烯醇、透明质酸、聚甘油脂肪酸酯作为包覆微胶囊的材料，该包覆材料采用半合成高分子材料和合成高分子材料相结合的方式来制备缓释微胶囊，既具有毒性小、粘度大、成盐后溶解度增加的优点，还具有成膜性好、稳定性好、成本低的优点，此外，包覆材料中用到了改性壳聚糖，经过改性后的壳聚糖中存在一定量的微孔，该微孔能够促进微胶囊缓慢释放药物中的有效成分，延长药物在体内的释放、吸收、分布。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

本发明首先采用纯化工艺对纯度为95％的雷公藤内酯醇提取物进行纯化，使其纯度达到99％以上，减少了杂质对雷公藤内酯醇提取物在药物治疗中的影响，有助于研究者采取有效措施有针对性的对雷公藤内酯醇提取物的毒性进行处理；

本发明对提纯过的雷公藤内酯醇提取物进行微囊化处理，药物的包埋性高，缓释速度好，能够缓慢释放药物中的有效成分，延长药物在体内的释放、吸收、分布，从而降低雷公藤内酯醇对人体的毒性。

具体实施方式

为了使本领域技术人员更好地理解本发明的技术方案能予以实施，下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但所举实施例不作为对本发明的限定。

本发明各实施例中所述试验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所用原料如无特殊说明，均为常规试剂。

实施例1

一种雷公藤缓释微胶囊的制备方法，包括以下步骤：

步骤1，雷公藤内酯醇提取物的纯化

步骤1.1，原料预处理：取纯度为95.2％的雷公藤内酯醇提取物，往其中加入相当于雷公藤内酯醇提取物重量5倍的乙醇，搅拌使雷公藤内酯醇完全溶解，然后往其中加入浓度为0.05mol/L的甘氨酸-盐酸缓冲液，调节体系pH值为4-5，得到预处理雷公藤内酯醇提取物；

步骤1.2，超声波协同超临界CO2萃取：在采用功率为900W的超声波对预处理雷公藤内酯醇提取物进行处理的同时，以二氯甲烷作为携带剂对预处理雷公藤内酯醇提取物进行超临界CO2萃取，萃取完毕得到萃取液，将萃取液浓缩干燥后得到雷公藤内酯醇初步纯化产物；

其中，预处理雷公藤内酯醇提取物与二氯甲烷的体积比为1：0.1；

超临界CO2萃取条件为：CO2流量为35L/h，萃取压力为40MPa，萃取温度为40℃，萃取时间为5h；

步骤1.3，高压液相色谱分离：将雷公藤内酯醇初步纯化产物与乙醇按照1g：8mL的比例混合溶解，得到雷公藤内酯醇初步纯化产物的乙醇溶液；将雷公藤内酯醇初步纯化产物的乙醇溶液进行高压液相色谱分离纯化，紫外检测器检测波长为280nm，收集12.3min的馏分，收集完毕后将馏分浓缩、干燥，即得到纯度为99.3％的雷公藤内酯醇纯化提取物；

其中，高压液相色谱分离条件为：21.2mm×250mm，5μm的C18色谱柱，流速为20mL/min，流动相为甲醇，每次进样500μL。

步骤2，雷公藤缓释微胶囊的制备

步骤2.1，制备有机相：将羧甲基纤维素钠、改性壳聚糖、聚乙二醇按照5：1：0.05的质量比混合，然后加入到相当于羧甲基纤维素钠、改性壳聚糖以及聚乙二醇总质量10倍的二氯甲烷中，搅拌溶解至溶液澄清透明，得到混合有机相；

步骤2.2，制备水相：将聚乙烯醇、透明质酸、聚甘油脂肪酸酯按照1：4：0.05的质量比混合，然后加入到相当于聚乙烯醇、透明质酸以及聚甘油脂肪酸酯总质量20倍的蒸馏水中，于80-90℃下搅拌，待溶液变澄清透明后停止加热，冷却至室温，得到混合水相；

步骤2.3，制备初乳相：将步骤1中得到的雷公藤内酯醇纯化提取物加入到步骤2.1的混合有机相中，然后在1000rmp的搅拌速度下搅拌30min，搅拌完毕制得分散有药物的初乳相；

步骤2.4，制备雷公藤缓释微胶囊：在转速为1000rpm的条件下，将步骤2.3的初乳相滴加到步骤2.2的混合水相中，持续搅拌2h，待胶囊表面固化后，升温至60℃，同时将搅拌速度降低为500rpm，搅拌3.5h，搅拌完毕后洗涤、过滤、干燥，即得到雷公藤缓释微胶囊。

实施例2

一种雷公藤缓释微胶囊的制备方法，包括以下步骤：

步骤1，雷公藤内酯醇提取物的纯化

步骤1.1，原料预处理：取纯度为95.2％的雷公藤内酯醇提取物，往其中加入相当于雷公藤内酯醇提取物重量8倍的乙醇，搅拌使雷公藤内酯醇完全溶解，然后往其中加入浓度为0.05mol/L的甘氨酸-盐酸缓冲液，调节体系pH值为4-5，得到预处理雷公藤内酯醇提取物；

步骤1.2，超声波协同超临界CO2萃取：在采用功率为1000W的超声波对预处理雷公藤内酯醇提取物进行处理的同时，以二氯甲烷作为携带剂对预处理雷公藤内酯醇提取物进行超临界CO2萃取，萃取完毕得到萃取液，将萃取液浓缩干燥后得到雷公藤内酯醇初步纯化产物；

其中，预处理雷公藤内酯醇提取物与二氯甲烷的体积比为1：0.3；

超临界CO2萃取条件为：CO2流量为45L/h，萃取压力为25MPa，萃取温度为50℃，萃取时间为4h；

步骤1.3，高压液相色谱分离：将雷公藤内酯醇初步纯化产物与乙醇按照1g：6mL的比例混合溶解，得到雷公藤内酯醇初步纯化产物的乙醇溶液；将雷公藤内酯醇初步纯化产物的乙醇溶液进行高压液相色谱分离纯化，紫外检测器检测波长为280nm，收集12.3min的馏分，收集完毕后将馏分浓缩、干燥，即得到纯度为99.5％的雷公藤内酯醇纯化提取物；

其中，高压液相色谱分离条件同实施例1；

步骤2，雷公藤缓释微胶囊的制备

步骤2.1，制备有机相：将羧甲基纤维素钠、改性壳聚糖、聚乙二醇按照5：1：0.05的质量比混合，然后加入到相当于羧甲基纤维素钠、改性壳聚糖以及聚乙二醇总质量10倍的二氯甲烷中，搅拌溶解至溶液澄清透明，得到混合有机相；

步骤2.2，制备水相：将聚乙烯醇、透明质酸、聚甘油脂肪酸酯按照1：4：0.05的质量比混合，然后加入到相当于聚乙烯醇、透明质酸以及聚甘油脂肪酸酯总质量20倍的蒸馏水中，于80-90℃下搅拌，待溶液变澄清透明后停止加热，冷却至室温，得到混合水相；

步骤2.3，制备初乳相：将步骤1中得到的雷公藤内酯醇纯化提取物加入到步骤2.1的混合有机相中，然后在1200rmp的搅拌速度下搅拌20min，搅拌完毕制得分散有药物的初乳相；

步骤2.4，制备雷公藤缓释微胶囊：在转速为1200rpm的条件下，将步骤2.3的初乳相滴加到步骤2.2的混合水相中，持续搅拌1.5h，待胶囊表面固化后，升温至60℃，同时将搅拌速度降低为500rpm，搅拌3h，搅拌完毕后洗涤、过滤、干燥，即得到雷公藤缓释微胶囊。

实施例3

一种雷公藤缓释微胶囊的制备方法，包括以下步骤：

步骤1，雷公藤内酯醇提取物的纯化

步骤1.1，原料预处理：取纯度为95.2％的雷公藤内酯醇提取物，往其中加入相当于雷公藤内酯醇提取物重量10倍的乙醇，搅拌使雷公藤内酯醇完全溶解，然后往其中加入浓度为0.05mol/L的甘氨酸-盐酸缓冲液，调节体系pH值为4-5，得到预处理雷公藤内酯醇提取物；

步骤1.2，超声波协同超临界CO2萃取：在采用功率为1200W的超声波对预处理雷公藤内酯醇提取物进行处理的同时，以二氯甲烷作为携带剂对预处理雷公藤内酯醇提取物进行超临界CO2萃取，萃取完毕得到萃取液，将萃取液浓缩干燥后得到雷公藤内酯醇初步纯化产物；

其中，预处理雷公藤内酯醇提取物与二氯甲烷的体积比为1：0.5；

超临界CO2萃取条件为：CO2流量为60L/h，萃取压力为15MPa，萃取温度为60℃，萃取时间为3h；

步骤1.3，高压液相色谱分离：将雷公藤内酯醇初步纯化产物与乙醇按照1g：5mL的比例混合溶解，得到雷公藤内酯醇初步纯化产物的乙醇溶液；将雷公藤内酯醇初步纯化产物的乙醇溶液进行高压液相色谱分离纯化，紫外检测器检测波长为280nm，收集12.3min的馏分，收集完毕后将馏分浓缩、干燥，即得到纯度为99.1％的雷公藤内酯醇纯化提取物；

其中，高压液相色谱分离条件同实施例1；

步骤2，雷公藤缓释微胶囊的制备

步骤2.1，制备有机相：将羧甲基纤维素钠、改性壳聚糖、聚乙二醇按照5：1：0.05的质量比混合，然后加入到相当于羧甲基纤维素钠、改性壳聚糖以及聚乙二醇总质量10倍的二氯甲烷中，搅拌溶解至溶液澄清透明，得到混合有机相；

步骤2.2，制备水相：将聚乙烯醇、透明质酸、聚甘油脂肪酸酯按照1：4：0.05的质量比混合，然后加入到相当于聚乙烯醇、透明质酸以及聚甘油脂肪酸酯总质量20倍的蒸馏水中，于80-90℃下搅拌，待溶液变澄清透明后停止加热，冷却至室温，得到混合水相；

步骤2.3，制备初乳相：将步骤1中得到的雷公藤内酯醇纯化提取物加入到步骤2.1的混合有机相中，然后在1500rmp的搅拌速度下搅拌15min，搅拌完毕制得分散有药物的初乳相；

步骤2.4，制备雷公藤缓释微胶囊：在转速为1500rpm的条件下，将步骤2.3的初乳相滴加到步骤2.2的混合水相中，持续搅拌1h，待胶囊表面固化后，升温至60℃，同时将搅拌速度降低为500rpm，搅拌4h，搅拌完毕后洗涤、过滤、干燥，即得到雷公藤缓释微胶囊。

需要说明的是，步骤1.2中超声波工作模式为12s，即超声8s，间歇4s。

进一步需要说明的是，改性壳聚糖的制备方法如下：将壳聚糖溶解到醋酸溶液中，配制成质量浓度为2％的壳聚糖溶液；

将壳聚糖溶液转移到质量浓度为1％的吐温-80的蓖麻油溶液中，搅拌均匀，然后往其中逐滴加入戊二醛交联剂，滴加完毕后搅拌反应3h，得到反应液，将反应液过滤除去溶剂后用无水乙醇洗涤、干燥，即得到所述改性壳聚糖；

其中，壳聚糖溶液、吐温-80的蓖麻油溶液及戊二醛的体积比为25：5：1。

实施例1-3均制备出了缓释性能良好的雷公藤缓释微胶囊，对实施例1-3制备出的雷公藤缓释微胶囊性能进行检测，具体结果见表1。

表1缓释效果测量结果

从表1可以看出，实施例1-3制备出的雷公藤缓释微胶囊包埋率高，缓释性能良好，进入人体后，能够缓慢释放药物中的有效成分，延长药物在体内的释放、吸收、分布，从而降低雷公藤内酯醇对人体的毒性。

下面列举动物实验，对本发明的效果加以进一步说明。

1、急性毒性实验

取NIH小鼠60只，SPF级，雌雄各半，体重18-22g，进行急性毒性试验。小鼠随机分为两组，每组30只，即对照组和给药组，实验前禁食12小时；将本发明实施例1制备出的雷公藤缓释微胶囊给小鼠灌胃，灌胃容积为0.2mL/10g，对照组给予等量生理盐水，一次给药灌胃，给药后连续观察7天，并记录小鼠的的毒性反应及死亡数。

实验结果表明：与对照组比较，给药后小鼠未见明显差异，实验连续观察7天，小鼠全身状况、饮食、饮水、体重增长均正常。小鼠口服灌胃本发明的缓释微胶囊LD50＞930mg/kg，因此本发明的缓释微胶囊急性毒性低，临床用药安全。

2、长期毒性实验

将本发明实施例1制备的雷公藤缓释微胶囊对小鼠按0.2mL/10g连续用药16周(每7天1次)及停药4周后对小鼠进行观察、检测。

实验结果表明：本发明制备出的雷公藤缓释微胶囊对大鼠的毛发、行为、大小便、体重、脏器重量、血象、肝肾功能、血糖、血脂等指标均无明显影响，脏器肉眼没有发现异样变化和组织学检查结果表明，用药16周及停药4周后，大鼠各脏器均无明显改变。说明本发明雷公藤缓释微胶囊对大鼠长期用药后毒性小，停药后也没有异样反应，应用安全。

需要说明的是，本发明权利要求书中涉及数值范围时，应理解为每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用，由于采用的步骤方法与实施例1-3相同，为了防止赘述，本发明的描述了优选的实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。

显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

一种雷公藤缓释微胶囊的制备方法专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。