专利摘要

本发明公开了一种Xanthocillin类化合物的制备方法和应用。如式I中所示的化合物1或化合物2在制备抗菌药物或酪氨酸酶抑制剂中的应用。本发明从PenicilliumchrysogenumY‑S6‑1CCTCCM2020019分离出具有抗菌、酪氨酸酶抑制活性的化合物1和化合物2，因此可以将它们用于抗菌药物、酪氨酸酶抑制剂中应用。

权利要求

1.一种制备化合物1或化合物2的制备方法，其特征在于，化合物1、化合物2是从Penicillium chrysogenum Y-S6-1 CCTCC M 2020019的发酵培养物制备分离得到的；

化合物1或化合物2，其结构如式I所示；

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

制备Penicillium chrysogenum Y-S6-1 CCTCC M 2020019的发酵培养物，分离出上清液和菌丝体，上清液用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取液经浓缩去除乙酸乙酯后得到上清液粗提物；菌丝体经丙酮-水溶液浸提，浸提液经浓缩去除丙酮后，剩余的水液以乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取液蒸去乙酸乙酯后得到菌丝体粗提物，合并上清液粗提物和菌丝体粗提物得到浸膏；

浸膏经中压反相柱层析梯度洗脱，从体积比水：甲醇,100：0～0：100梯度洗脱，收集体积分数70％甲醇-水洗脱而得的流份F1、体积分数75％甲醇-水洗脱而得的流份F2和体积分数80％甲醇-水洗脱而得的流份F3；

流份F2在室温下于体积分数72％甲醇-水溶液中析出化合物1，流份F3为化合物1；

流份F1经纯化得到化合物2。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的纯化是用HPLC纯化。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述的制备Penicilliumchrysogenum Y-S6-1 CCTCC M 2020019的发酵培养物是以察氏液体培养基为发酵培养基进行发酵培养获得发酵培养物。

5.Penicillium chrysogenum Y-S6-1 CCTCC M 2020019在制备化合物1或化合物2中的应用；

所述的化合物1或化合物2，其结构如式I所示；

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及Xanthocillin类化合物的制备方法和应用。

背景技术

革兰氏阴性菌泛指革兰氏染色反应呈红色的细菌，以大肠杆菌为代表。革兰氏阳性菌泛指革兰氏染色反应呈紫色的细菌，以金黄色葡萄球菌为代表。革兰氏阴性菌在细胞膜外有一层由脂多糖、磷脂和脂蛋白等组成的外膜(外壁)，脂多糖能阻拦溶菌酶、抗生素(青霉素等)、去污剂和某些染料等较大分子进入细胞膜，从而使多数抗生素不能有效治疗革兰氏阴性菌感染。2014年中国CHINET对各大医院的数据统计结果显示：导致病人感染的病原菌主要是耐药性革兰氏阴性菌。在临床标本中分离获得的78955株病原菌中，革兰阴性菌有57320株，占总分离菌株的72.6％。临床常见的革兰氏阴性病原菌为大肠埃希菌(Escherichia coli)、鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)等，革兰氏阳性病原菌则为金黄色葡萄球菌(Multi-drugresistant Staphylococcus aureus，MRSA)。在水产养殖方面，革兰氏阴性菌溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)是海水养殖动物的常见致病菌,养殖的贝类、虾类等有壳动物比养殖鱼类更易感染该菌。溶藻弧菌是引起对虾黑鳃、褐斑综合症的病原菌。该菌同时还是文蛤、合浦珠母贝体内的的病原菌，还可引起尖吻鲈、赤点石斑鱼、真鲷等鲷科鱼类的死亡。

发明内容

本发明的第一个目的是提供如式I中所示的化合物1或化合物2，或其药用盐在制备抗菌药物或酪氨酸酶抑制剂中的应用；

本发明人从南极阿德利岛企鹅积粪样品分离到了一株真菌Penicilliumchrysogenum Y-S6-1 CCTCC M 2020019；发现该菌在察氏培养基中产生的粗提物DMSO溶液对鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii，医院感染常见的革兰氏阴性病原菌)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa，医院感染常见的革兰氏阴性病原菌)、溶藻弧菌(Vibrioalginolyticus,海水养殖动物常见的革兰氏阴性病原菌)等有很强抑制活性，同时对多耐药型金黄色葡萄球菌(Multi-drug resistant Staphylococcus aureus,MRSA)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)等革兰氏阳性菌也有很强抑制作用；随后开展的详细化学成分研究发现Penicillium chrysogenum Y-S6-1 CCTCC M 2020019可以高产抗革兰氏阴性菌活性成分Xanthocillin X(化合物1，在察氏液体培养基中产量为417mg/L)和Xanthocillin Y1(化合物2。进一步发现，化合物1和2具有酪氨酸酶抑制活性。

所述的抗菌药物优选是抗鲍曼不动杆菌、大肠杆菌、多耐药型金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、金黄色葡萄球菌、苹果轮纹病菌、小麦纹枯病菌或番茄早疫病菌的药物。

所述的酪氨酸酶抑制剂优选为美白类化妆品。

本发明的第二个目的是提供一种制备化合物1或化合物2的制备方法，化合物1、化合物2是从Penicillium chrysogenum Y-S6-1 CCTCC M 2020019的发酵培养物制备分离得到的。

优选，具体步骤如下：

制备Penicillium chrysogenum Y-S6-1 CCTCC M 2020019的发酵培养物，分离出上清液和菌丝体，上清液用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取液经浓缩去除乙酸乙酯后得到上清液粗提物；菌丝体经丙酮-水溶液浸提，浸提液经浓缩去除丙酮后，剩余的水液以乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取液蒸去乙酸乙酯后得到菌丝体粗提物，合并上清液粗提物和菌丝体粗提物得到浸膏；

浸膏经中压反相柱层析梯度洗脱，从体积比水：甲醇,100：0～0：100梯度洗脱，收集体积分数70％甲醇-水洗脱而得的流份F1、体积分数75％甲醇-水洗脱而得的流份F2和体积分数80％甲醇-水洗脱而得的流份F3；

流份F2在室温下于体积分数72％甲醇-水溶液中析出化合物1，流份F3为化合物1；

流份F1经纯化得到化合物2。

所述的纯化是用HPLC纯化。

所述的制备Penicillium chrysogenum Y-S6-1 CCTCC M 2020019的发酵培养物是以察氏液体培养基为发酵培养基进行发酵培养获得发酵培养物。

本发明的第三个目的是提供Penicillium chrysogenum Y-S6-1 CCTCC M2020019在制备化合物1或化合物2中的应用。

本发明从Penicillium chrysogenum Y-S6-1 CCTCC M 2020019分离出具有抗菌或酪氨酸酶抑制活性的化合物1和化合物2，因此可以将它们用于抗菌药物、酪氨酸酶抑制剂中的应用。

本发明的产黄青霉(Penicillium chrysogenum)Y-S6-1，其于2020年1月7日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址：湖北省武汉武汉大学，邮编：430072，其保藏编号为CCTCC NO：M2020019。

附图说明：

图1是Penicillium chrysogenum Y-S6-1 CCTCC M 2020019的菌株形态图；

图2是Penicillium chrysogenum Y-S6-1 CCTCC M 2020019系统发育树；

图3是化合物1(Xanthocillin X)核磁共振氢谱图(氘代DMSO，700兆赫兹)；

图4是化合物1(Xanthocillin X)核磁共振碳谱(氘代DMSO，175兆赫兹)；

图5是化合物1(Xanthocillin X)LR-ESI-MS分析图(正离子模式,[M+H]+)；

图6是化合物1(Xanthocillin X)X-射线单晶衍射图；

图7是化合物2(Xanthocillin Y1)核磁共振氢谱图(氘代DMSO，700兆赫兹)；

图8是化合物2(Xanthocillin Y1)核磁共振碳谱(氘代DMSO，175兆赫兹)；

图9是化合物2(Xanthocillin Y1)LR-ESI-MS分析图(正离子模式,[M+H]+)；

图10是Penicillium chrysogenum Y-S6-1 CCTCC M 2020019提取物(32号样品)对鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、多耐药型金黄色葡萄球菌(Multi-drug resistantStaphylococcus aureus,MRSA)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)均有很强抑制作用；

图11是化合物1和2对小麦纹枯病菌(Ceratobasidium cornigerum)和苹果轮纹病菌(Physalospora piricola Nose)都有较强抑制活性，图中27号样品(2)对Altemariasolani番茄早疫病菌也有抑制作用(阳性对照：+：氟康唑，P1：制霉菌素，P2：两性霉素)。

具体实施方式：

以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

实施例1：

1、发明人从南极阿德利岛企鹅积粪样品分离到了一株真菌Penicilliumchrysogenum Y-S6-1 CCTCC M 2020019(图1)，提取菌株的基因组DNA,通过聚合酶链反应(PCR)扩增获得28S rDNA序列(其序列如SEQ ID NO.1所示)，经序列比对并建立系统发育树。结果显示：该菌与Penicillium chrysogenum的相似度达到100％(图2)，说明菌株Y-S6-1为青霉菌属,命名为产黄青霉(Penicillium chrysogenum)Y-S6-1，其于2020年1月7日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，地址：湖北省武汉武汉大学，邮编：430072，其保藏编号为CCTCC NO：M 2020019。

2、将产黄青霉(Penicillium chrysogenum)Y-S6-1 CCTCC M 2020019从斜面保藏试管接种于PDA平板活化，之后挑取孢子接种到1升锥形瓶中，每瓶含有200毫升察氏液体培养基(每1升培养基中含有硝酸钠3克、磷酸氢二钾1克、硫酸镁0.5克、氯化钾1克、硫酸亚铁0.01克、蔗糖20克，余量为水，将各成分混合均匀，调pH7.0，115℃灭菌30分钟)，共55瓶(11升)。置于28摄氏度摇床上，以200转/分钟振荡培养20天后获得发酵培养物。以4000转/分钟的转速离心分离发酵培养物中的上清液和菌丝体。上清液以乙酸乙酯萃取三次，蒸去乙酸乙酯得到上清液粗提物。菌丝体用体积分数70％丙酮-水浸提三次，浸提液用旋转蒸发仪回收丙酮。剩余的水液以乙酸乙酯萃取三次，蒸去乙酸乙酯得到菌丝体粗提物。合并上清液粗提物+菌丝体粗提物得到产黄青霉Y-S6-1 CCTCC M 2020019粗提物8.72克。

产黄青霉Y-S6-1 CCTCC M 2020019粗提物(8.72g)经中压反相柱层析梯度洗脱(从体积比水：甲醇,100：0～0：100梯度洗脱)，收集体积分数70％甲醇-水洗脱而得的流份F1、75％甲醇-水洗脱而得的流份F2和体积分数80％甲醇-水洗脱而得的流份F3。

流份F2在室温下放置两天后于体积分数72％甲醇-水溶液中析出浅黄色晶体(化合物1，181毫克)，以DMSO重结晶后收集晶体进行X-射线单晶分析，发现它是具有异腈基团的Xanthocillin X(图6，化合物1)。流份F3重4.1克，经高效液相色谱分析(HPLC)对比分析发现几乎都是化合物1。

流份F1进一步通过半制备HPLC法(乙腈B相-水A相；梯度洗脱(洗脱程序为：0-23min,A:95％-0％,B:5％-100％；23-26min,A:0％；B:100％；26-28min,A:0％-95％；B:100％-5％；28-30min,A:95％；B:5％，流速为2.5ml/min)，Phenomenex TitankC-18柱，250×10mm，流速2.5ml/mim)获得了化合物2(8.7毫克，保留时间为15.5分钟)。

化合物1的核磁共振氢谱图(氘代DMSO，700兆赫兹)如图3所示，核磁共振碳谱(氘代DMSO，175兆赫兹)如图4所示，LR-ESI-MS分析图(正离子模式,[M+H]+)如图5所示。化合物1(Xanthocillin X)的X-射线单晶衍射图如图6所示。化合物1：棕色晶体，1H-NMR、13C-NMR和已报道的XanthocillinX数据比对一致，低分辨率质谱(LR-ESIMS)给出准分子离子峰m/z289.1([M+H]+)，该数据与Xanthocillin X的分子式C18H12N2O2(分子量为288.1)相一致。因此确定为XanthocillinX。

化合物2的核磁共振氢谱图(氘代DMSO，700兆赫兹)如图7所示，核磁共振碳谱(氘代DMSO，175兆赫兹)如图8所示，LR-ESI-MS分析图(正离子模式,[M+H]+)如图9所示。化合物2，深棕色无定型粉末，1H-NMR、13C-NMR和已报道的Xanthocillin Y1数据比对一致，LR-ESIMS给出准分子离子峰m/z 305.1([M+H]+)，该数据与Xanthocillin Y1的分子式C18H12N2O3(分子量为304.1)相一致。因此确定为Xanthocillin Y1。

表1.化合物1和2的NMR数据

Table1.NMR data of compounds 1 and2(1H at 700MHz,13C at 175MHz)

aRecorded in DMSO-d6

鉴定化合物1为Xanthocillin X，其结构式如式I中的1所示；

鉴定化合物2为Xanthocillin Y1，其结构式如式I中的2所示；

实施例2：

纸片扩散法

(1)测试样品溶液制备

精密称重51个南极来源微生物发酵培养物(上清液+菌丝体)的乙酸乙酯提取物2毫克左右(32号为本发明实施例1的产黄青霉(Penicillium chrysogenum)Y-S6-1 CCTCCM2020019粗提物)，加用0.22μm微孔滤膜过滤的DMSO，配置成20mg/ml DMSO溶液。阳性对照为万古霉素，浓度为0.256mg/ml。阴性对照为DMSO溶剂。配制好的样品溶液应贮存于冰箱中保存。

(2)含菌测试平板制备

将鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)、铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)、多耐药型金黄色葡萄球菌(Multi-drug resistant Staphylococcusaureus,MRSA)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)接种于Mueller-Hinton(MH)肉汤培养基中，溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)则接种于LB培养基中，以上指示菌都置于37℃，200rpm恒温摇床上进行过夜培养。Mueller-Hinton培养基配制方法：牛肉浸膏粉2.0克/升，酸水解酪蛋白17.5克/升，可溶性淀粉1.5克/升，琼脂粉(根据需要添加)17.0克/升，溶剂为水，将各成分混合均匀，调pH7.3±0.1(25℃)，121℃高压灭菌20分钟。LB培养基配制方法：胰蛋白胨(Tryptone)10g/L，酵母提取物(Yeast extract)5g/L，氯化钠(NaCl)10g/L，琼脂粉(根据需要添加)17.0克/升，溶剂为水，将各成分混合均匀，调pH7.0±0.1(25℃)，121℃高压灭菌20分钟。将生长好的以上5种指示菌液分别加入到50mL含有琼脂的灭菌MH和LB培养基中(温度55℃，OD值0.04～0.06)混匀，在超净工作台中往直径为90mm的塑料培养皿中倒板。冷却后即为含菌测试平板。

(3)贴纸片及加样

将灭过菌的直径为5mm的滤纸片以小镊子贴在含菌测试平板上，每个纸片按事先标记的序号滴加第(1)步配制的不同样品5微升，每个样品重复三次。将以上加样后的含菌测试平板置于37℃培养箱中培养，12小时后观测。

结果如图10所示，从图10可以看出，产黄青霉Y-S6-1 CCTCC M 2020019粗提物(32号样品)对鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)、铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)、多耐药型金黄色葡萄球菌(Multi-drugresistant Staphylococcus aureus,MRSA)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)均有很强抑制作用。

实施例3：

MIC(最小生长抑制浓度)法

(1)测试样品溶液制备

精密称重化合物1和2纯品各2毫克左右，加用0.22μm微孔滤膜过滤的DMSO，配置成2.56mg/ml溶液。阳性对照为万古霉素，浓度为2.56mg/ml。阴性对照为DMSO溶剂。配制好的样品溶液应贮存于冰箱中保存。

(2)MIC板制备

以下实验需要在超净台中无菌操作。将过夜培养后浓度相当于1.5x108CFU/ml的指示菌(Acinetobacter baumannii、Escherichia coli、Multi-drug resistantStaphylococcus aureus,MRSA、Staphylococcus aureus、Micrococcus luteus)悬液，经MH肉汤1∶1000稀释后(OD值0.04～0.06)作为指示菌液。按以下步骤进行操作：(a)将MH肉汤液体培养基加入到96孔聚苯乙烯板中，每孔加入100μL。第1列每孔需要加入200μL作为培养基对照。(2)第2列每孔加入100μLMH液体培养基，DMSO溶液10μL。(b)第3列每孔加入90μL MH液体培养基，浓度为2.56mg/ml的样品溶液10μL。排枪吹打混匀。(c)第4列每孔加入190μL MH液体培养基，浓度为2.56mg/ml的样品溶液10μL。排枪吹打混匀。(d)从第4列吸取100μL液体至第5列，混匀，同理依次往后2倍稀释至第12列，最后一列取100μL液体弃去。(e)从第2列开始，将100μL指示菌液依次加入到每一孔中。此时，第1列为空白培养基对照，第2列为DMSO阴性对照，第3列至第12列为样品测序列，药物浓度分别为128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25μg·mL-1。(f)每一块板上加同一菌液，每种菌液测3次。将96孔聚苯乙烯板密封后置37℃培养箱中，孵育16－20h。

(3)结果判断

以用肉眼观察，当阴性对照孔(即不含化合物)内细菌明显生长试验才有意义。用酶标仪测定560nm的OD值,判断结果。在小孔内完全抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC。

结果如表2所示：

表2化合物1、2对五种指示菌的最小抑菌浓度测试结果(单位：μg/ml)

从表2可以发现化合物1和化合物2对以上五种指示菌均有很强抑制作用。

实施例4：

致病真菌实验步骤：(1)配制马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)平板。PDA培养基配方：马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂20克，蒸馏水1000毫升，pH7.0±0.1(25℃)。配制步骤：先将马铃薯洗净去皮,再称取200g马铃薯切成小块，加水煮烂(煮沸20～30分钟，能被玻璃棒戳破即可)，用八层纱布过滤，滤渣弃去。加热滤液，再加20g琼脂，继续加热搅拌混匀，待琼脂溶解完后，加入20克葡萄糖，搅拌均匀，稍冷却后再补足水分至1000毫升，分装至锥形瓶，密封包扎，115℃灭菌30分钟。将灭菌后的马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基在超净工作台中往直径为90mm的塑料培养皿中倒板。冷却后备用。(2)将小麦纹枯病菌(Ceratobasidiumcornigerum)、苹果轮纹病菌(Physalospora piricola Nose)、番茄早疫病菌(Altemariasolani)分别以划线法或点种法接种到不同PDA平板上。(3)将滤纸片贴到PDA平板上，之后将5μL样品(溶剂为氯仿-甲醇溶液，体积比1:1，2μg/μl)加入到滤纸片上。每个样品重复两次。(4)挥干氯仿-甲醇溶液后，将加完样品的含菌平板在28℃生化培养箱中孵育48h后观查结果。

结果如图11所示，从图11可以看出，化合物1和2对小麦纹枯病菌(Ceratobasidiumcornigerum)和苹果轮纹病菌(Physalospora piricola Nose)都有较强抑制活性，图中27号样品(化合物2)对Altemaria solani番茄早疫病菌也有抑制作用(阳性对照：+：氟康唑，P1：制霉菌素，P2：两性霉素；以上对照品也是溶剂为氯仿-甲醇溶液，体积比1:1，浓度为2μg/μl)。

实施例5：酪氨酸酶活性研究

酪氨酸酶又称多酚氧化酶，是黑色素合成的限速酶，广泛存在于微生物、动植物及人体中。酪氨酸酶是产生黑色素的决定因素，黑色素合成量与酪氨酸酶的活性呈正相关，所以抑制其活性从而减少黑色素的生成，与人的衰老、昆虫的伤口愈合与发育、蔬果的褐变有密切关系。酪氨酸酶活力测定原理：在酪氨酸酶反应生成黑色素的过程中，酪氨酸酶催化酪氨酸为多巴，多巴转化为多巴醌。多巴醌是一有色物质，在475nm处有特征吸收，可以用分光光度法定量测定。

酶液的配置：酪氨酸酶干粉用0.05mol/l PH6.8的PBS配置成浓度为10000U/ml的母液，-20℃保存，备用。实验时用0.05mol/l PH6.8的PBS稀释成浓度为100U/ml。

底物的配置：精确称取适量的左旋多巴(L-dopa)粉末用0.05mol/l PH6.8的PBS配置成浓度为0.01mol/l。L-dopa溶液不稳定，需现配现用。

样品的配置：精确称取一定量的样品，用DMSO配置成浓度为100mg/ml的母液，备用，实验时用PBS稀释成所需的浓度。

在96孔酶标板中按下表4精确吸取空白对照组、阴性对照组、样品组(以曲酸作为阳性对照)、样品背景组反应液，混匀，30℃恒温反应30min后，于475nm波长测定吸光度A，每个样品做3个重复，并重复做3次实验，取其平均值。初筛时样品的作用浓度为1mg/ml，对初筛时清除率大于50％的样品，设置至少5个作用浓度计算IC50。样品对酪氨酸酶的抑制率根据以下公式计算：

抑制率(％)＝[1-(A样品-A样品背景)/(A阴性对照-A空白对照)]×100％(3-4)

表4反应液的组成

酪氨酸酶(Tyrosinase)是一种含铜的金属酶，广泛分布于微生物、动植物及人体中。酪氨酸酶主要参与两个反应过程：催化L-酪氨酸羟基化转变为L-多巴和氧化L-多巴形成多巴醌,多巴醌经一系列反应后，形成黑色素。酪氨酸酶在生物体中具有重要的生理功能。同时，它也与人体雀斑、褐斑等黑色素过度沉积等疾病的发生有关，并与昆虫的蜕皮和果蔬的褐化有很大关系。发明人发现化合物1和化合物2对酪氨酸酶有很强的抑制活性，抑制率分别为56.26％(化合物1)和54.34％(化合物2)，优于阳性对照曲酸(kojic acid)52.6％的抑制率。化合物1和化合物2有用于开发美白类化妆品的应用前景。

以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本发明的限制，本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

序列表

<110> 中国科学院南海海洋研究所

<120> Xanthocillin类化合物的制备方法和应用

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 561

<212> DNA

<213> 产黄青霉Y-S6-1(Penicillium chrysogenum)

<400> 1

agtaacggcg agtgaagcgg caagagctca aatttgaaag ctggctcctt cggggtccgc 60

attgtaattt gtagaggatg cttcgggagc ggtccccatc taagtgccct ggaacgggac 120

gtcatagagg gtgagaatcc cgtatgggat ggggtgtccg cgcccgtgtg aagctccttc 180

gacgagtcga gttgtttggg aatgcagctc taaatgggtg gtaaatttca tctaaagcta 240

aatattggcc ggagaccgat agcgcacaag tagagtgatc gaaagatgaa aagcactttg 300

aaaagagagt taaaaagcac gtgaaattgt tgaaagggaa gcgcttgcga ccagactcgc 360

tcgcggggtt cagccggcat tcgtgccggt gtacttcccc gcgggcgggc cagcgtcggt 420

ttgggcggtc ggtcaaaggc cctcggaagg taacgcccct aggggcgtct tatagccgag 480

ggtgcaatgc gacctgccta gaccgaggaa cgcgcttcgg ctcggacgct ggcataatgg 540

tcgtaaacga cccgtcttga a 561

Xanthocillin类化合物的制备方法和应用专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。