专利摘要

本发明提供了一株葡萄汉逊酵母及应用，属于微生物发酵工业技术领域，所述葡萄汉逊酵母的拉丁文为Hanseniasporauvarum，保藏编号为CCTCCNO：M2019304。本发明提供的菌株能够将无机硒转化为有机硒，而且有机硒含量高达2332mg/kg。

权利要求

1.一株葡萄汉逊酵母，所述葡萄汉逊酵母的拉丁文为Hanseniaspora uvarum，保藏编号为CCTCC NO：M2019304。

2.权利要求1所述的葡萄汉逊酵母在无机硒转化为有机硒中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述应用包括：在发酵液体培养基中添加无机硒后接种权利要求1所述的葡萄汉逊酵母，接种后进行发酵培养。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述发酵液体培养基的组分包括葡萄糖、蛋白胨、酵母粉、磷酸盐缓冲液和水；

所述发酵液体培养基中葡萄糖的质量浓度为3～5％；

所述发酵液体培养基中蛋白胨的质量浓度为2～4％；

所述发酵液体培养基中酵母粉的质量浓度为1～2％；

所述发酵液体培养基中磷酸盐缓冲液的摩尔浓度为20～100mM。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述无机硒包括亚硒酸钠。

6.根据权利要求3或5所述的应用，其特征在于，所述无机硒在发酵液体培养基中的浓度为20～160μg/ml。

7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述发酵培养的时间为36～96h，所述发酵培养的温度为24～30℃。

8.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述应用包括：将权利要求1所述的葡萄汉逊酵母接种于5L发酵罐中进行培养56～72h，所述培养使用的培养基中无机硒的初始浓度为70～150μg/ml。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，在培养第24h时，以8～12ml/h补加补充培养基；

所述补充培养基的组分包括葡萄糖、蛋白胨和酵母粉；

所述补充培养基中葡萄糖的质量分数为8～12％；

所述补充培养基中蛋白胨的质量分数为3～8％；

所述补充培养基中酵母粉的质量分数为3～8％。

10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述发酵罐的融氧控制在30％以下。

说明书

技术领域

本发明属于微生物发酵工业技术领域，尤其涉及一株葡萄汉逊酵母及应用。

背景技术

硒元素的首次被瑞士的化学家Berzelius发现的，一直以来被我们认为是有毒的重金属元素。直到1957科学家利用硒成功治愈动物肝坏死的疾病，硒的营养功效才进入到人民的视野中；1973年科学家利用同位素示踪的技术发现，人体内的主要抗氧化活性物质谷胱甘肽氧化酶(GSH-Px)的酶活中心需要硒的参与，硒的功能才逐步被大家深入的研究。现如今，硒作为人体不可或缺的微量元素已被科学家们广泛的证实和接受。近十年，随着对硒的广泛而深入的研究，硒对生命体的重大作用也被逐步认识。硒元素在人体的抗氧化、促进机体免疫和预防肿瘤中起着重要的调节作用。

硒是人体所必需的微量元素，具有重要的生理功能，它能够预防和抑制肿瘤、抗衰老、维持心血管系统正常的结构与功能，预防动脉硬化和冠心病的出现。营养学调查统计显示，中国人的硒日摄入量大约在20-30微克，与中国营养学会推荐60-250微克的参考值相差甚远。硒的补充主要通过无机硒及有机硒2种方式，而无机硒对人体有一定的毒性，故主要采用有机硒的补充方式，以提高居民硒的摄入量，达到防病抗病的目的。因此，开发高效的有机硒产品对中国现代健康产业已是刻不容缓的问题。

有机硒中硒的价态通常是以Se2-价存在，或者与其他物质结合成络合态。有机硒的基本形式为硒蛋氨酸、硒胱氨酸等，以还原态存在,并与氨基酸结合，以主动形式吸收。有机硒产品包含富硒大米、富硒油脂等农产品和富硒酵母。由于硒的来源很不稳定，农产品中硒含量受到土壤中硒含量的限制，仅靠天然存在的农产品无法满足人体对有机硒的正常需求。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一株葡萄汉逊酵母及应用，本发明提供的菌株能够将无机硒转化为有机硒，而且有机硒含量高达2332mg/kg。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一株葡萄汉逊酵母，所述葡萄汉逊酵母的拉丁文为Hanseniasporauvarum，保藏编号为CCTCC NO：M2019304。

本发明还提供了上述技术方案所述的葡萄汉逊酵母在无机硒转化为有机硒中的应用。

优选的，所述应用包括：在发酵液体培养基中添加无机硒后接种上述技术方案所述的葡萄汉逊酵母，接种后进行发酵培养。

优选的，所述发酵液体培养基的组分包括葡萄糖、蛋白胨、酵母粉、磷酸盐缓冲液和水；

所述发酵液体培养基中葡萄糖的质量浓度为3～5％；

所述发酵液体培养基中蛋白胨的质量浓度为2～4％；

所述发酵液体培养基中酵母粉的质量浓度为1～2％；

所述发酵液体培养基中磷酸盐缓冲液的摩尔浓度为20～100mM。

优选的，所述无机硒包括亚硒酸钠。

优选的，所述无机硒在发酵液体培养基中的浓度为20～160μg/ml。

优选的，所述发酵培养的时间为36～96h，所述发酵培养的温度为24～30℃。

优选的，所述应用包括：将上述技术方案所述的葡萄汉逊酵母接种于5L发酵罐中进行培养56～72h，所述培养使用的培养基中无机硒的初始浓度为70～150μg/ml。

优选的，在培养第24h时，以8～12ml/h补加补充培养基；

所述补充培养基的组分包括葡萄糖、蛋白胨和酵母粉；

所述补充培养基中葡萄糖的质量分数为8～12％；

所述补充培养基中蛋白胨的质量分数为3～8％；

所述补充培养基中酵母粉的质量分数为3～8％。

优选的，所述发酵罐的融氧控制在30％以下。

本发明提供了一株葡萄汉逊酵母及应用，本发明提供的菌株能够将无机硒转化为有机硒，而且菌株中的有机硒含量高达2332mg/kg。

生物保藏说明

葡萄汉逊酵母HanAɑ1，拉丁文为Hanseniaspora uvarum，于2019年4月28日保存于中国典型培养物保藏中心，地址为中国.武汉.武汉大学，保藏编号为CCTCC NO：M2019304。

附图说明

图1为葡萄汉逊酵母菌株的电镜扫描图；

图2为5L发酵罐的发酵结果。

具体实施方式

本发明提供了一株葡萄汉逊酵母，所述葡萄汉逊酵母的拉丁文为Hanseniasporauvarum，保藏编号为CCTCC NO：M2019304。本发明提供的菌株能将无机硒转化为有机硒，参照GB1903.21-2016检测方法检测菌株中的有机硒含量，有机硒含量高达2332mg/kg。

本发明还提供了上述技术方案所述的葡萄汉逊酵母在无机硒转化为有机硒中的应用。

在本发明中，所述应用优选包括：在发酵液体培养基中添加无机硒后接种上述技术方案所述的葡萄汉逊酵母，接种后进行发酵培养。

在本发明中，所述发酵液体培养基的组分优选包括葡萄糖、蛋白胨、酵母粉、磷酸盐缓冲液和水；所述发酵液体培养基中葡萄糖的质量浓度优选为3～5％，更优选为4％；所述发酵液体培养基中蛋白胨的质量浓度优选为2～4％，更优选为3％；所述发酵液体培养基中酵母粉的质量浓度优选为1～2％，更优选为1.5％；所述发酵液体培养基中磷酸盐缓冲液的摩尔浓度优选为20～100mM。在本发明中，所述发酵液体培养基的pH值优选为6.0。在本发明中，所述发酵液体培养基优选采用常规灭菌后再接种菌株。

本发明对所述葡萄汉逊酵母在发酵液体培养基中的接种量没有特殊限定，采用常规接种量即可。

在本发明中，所述无机硒优选包括亚硒酸钠。在本发明中，所述无机硒在发酵液体培养基中的浓度优选为20～160μg/ml。

在本发明中，所述发酵培养的时间优选为36～96h，更优选为45～80h，最优选为55～65h；所述发酵培养的温度优选为24～30℃。

在本发明中，所述应用还优选包括：将上述技术方案所述的葡萄汉逊酵母接种于5L发酵罐中进行培养56～72h，所述培养使用的培养基中无机硒的初始浓度为70～150μg/ml。

在本发明中，所述培养使用的培养基优选为上述所述的发酵液体培养基，所述发酵液体培养基中无机硒的初始浓度优选为70～150μg/ml，更优选为100μg/ml。在本发明中，所述5L发酵罐中发酵液体培养基的含量优选为3L。在本发明中，所述发酵罐的融氧控制在30％以下。

本发明优选在培养第24h时，以8～12ml/h补加补充培养基，更优选以10ml/h补加。

在本发明中，所述补充培养基的组分优选包括葡萄糖、蛋白胨和酵母粉；所述补充培养基中葡萄糖的质量分数优选为8～12％，更优选为10％；所述补充培养基中蛋白胨的质量分数优选为3～8％，更优选为5％；所述补充培养基中酵母粉的质量分数优选为3～8％，更优选为5％。

下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

以发酵培养基为基础，对葡萄汉逊酵母HanAɑ1(保藏编号为CCTCCNO：M2019304)进行发酵培养。发酵培养基：葡萄糖4.0％，蛋白胨3.0％，酵母粉1.5％，磷酸盐缓冲液(磷酸氢二钾、磷酸二氢钾)100mM，pH6.0。

在发酵培养基中添加亚硒酸钠母液至亚硒酸钠浓度为20μg/mL，500mL摇瓶装液量为150mL。平皿菌株接种到发酵培养基中，发酵12h作为种子培养基，接种量为1mL。于200rpm、30℃培养72h。结果为，菌体浓度OD600为30.5，酵母硒含量为967.5mg/kg。

实施例2

在发酵培养基中添加亚硒酸钠母液至亚硒酸钠浓度为60μg/mL，500mL摇瓶装液量为150mL，接种量为1mL。于200rpm、30℃培养72h。结果为，菌体浓度OD600为27.5，酵母硒含量1356.6mg/kg。

其中发酵培养基同实施例1，种子液的制备和菌浓度同实施例1。

实施例3

在发酵培养基中添加亚硒酸钠母液至亚硒酸钠浓度为100μg/mL，500mL摇瓶装液量为150mL，接种量为1mL。于200rpm、30℃培养72h。结果为，菌体浓度OD600为24.7，酵母硒含量2278.5mg/kg。

其中发酵培养基同实施例1，种子液的制备和菌浓度同实施例1。

实施例4

在发酵培养基中添加亚硒酸钠母液至亚硒酸钠浓度为140μg/mL，500mL摇瓶装液量为150mL，接种量为1mL。于200rpm、30℃培养72h。结果为，菌体浓度OD600为21，酵母硒含量2287mg/kg。

其中发酵培养基同实施例1，种子液的制备和菌浓度同实施例1。

实施例5

在发酵培养基中添加亚硒酸钠母液至亚硒酸钠浓度为180μg/mL，500mL摇瓶装液量为150mL，接种量为1mL。于200rpm、30℃培养72h。结果为，菌体浓度OD600为17.5，酵母硒含量2149mg/kg。

其中发酵培养基同实施例1，种子液的制备和菌浓度同实施例1。

实施例6

在发酵培养基的基础上500mL摇瓶装液量为150mL、接种量为1mL，在发酵12h时添加亚硒酸钠至终浓度为100μg/mL，于200rpm、30℃培养。继续培养至24h停止培养，收样检测酵母硒含量为1577mg/kg。

其中发酵培养基同实施例1，种子液的制备和菌浓度同实施例1。

实施例7

在发酵培养基的基础上500mL摇瓶装液量为150mL、接种量为1mL，在发酵12h时添加亚硒酸钠至终浓度为100μg/mL，于200rpm、30℃培养。继续培养至36h停止培养，收样检测酵母硒含量为2350mg/kg。

其中发酵培养基同实施例1，种子液的制备和菌浓度同实施例1。

实施例8

在发酵培养基的基础上500mL摇瓶装液量为150mL、接种量为1mL，在发酵12h时添加亚硒酸钠至终浓度为100μg/mL，于200rpm、30℃培养。继续培养至48h停止培养，收样检测酵母硒含量为2701mg/kg。

其中发酵培养基同实施例1，种子液的制备和菌浓度同实施例1。

实施例9

在发酵培养基的基础上500mL摇瓶装液量为150mL、接种量为1mL，在发酵12h时添加亚硒酸钠至终浓度为100μg/mL，于200rpm、30℃培养。继续培养至60h停止培养，收样检测酵母硒含量为3215mg/kg。。

其中发酵培养基同实施例1，种子液的制备和菌浓度同实施例1。

实施例10

在发酵培养基的基础上500mL摇瓶装液量为150mL、接种量为1mL，在发酵12h时添加亚硒酸钠至终浓度为100μg/mL，于200rpm、30℃培养。继续培养至72h停止培养，收样检测酵母硒含量为3356mg/kg。

其中发酵培养基同实施例1，种子液的制备和菌浓度同实施例1。

实施例11

在发酵培养基的基础上500mL摇瓶装液量为150mL、接种量为1mL，在发酵12h时添加亚硒酸钠至终浓度为100μg/mL，于200rpm、30℃培养。继续培养至84h停止培养，收样检测酵母硒含量为3623mg/kg。

其中发酵培养基同实施例1，种子液的制备和菌浓度同实施例1。

实施例12

在发酵培养基的基础上500mL摇瓶装液量为150mL、接种量为1mL，在发酵12h时添加亚硒酸钠至终浓度为100μg/mL，于200rpm、30℃培养。继续培养至96h停止培养，收样检测酵母硒含量为3421mg/kg。

其中发酵培养基同实施例1，种子液的制备和菌浓度同实施例1。

对比例1

在发酵培养基的基础上500mL摇瓶装液量为150mL、接种量为1mL，在发酵12h时，收样检测酵母硒含量为693mg/kg。

其中发酵培养基同实施例1，种子液的制备和菌浓度同实施例1。

实施例13

在发酵培养基的基础上500mL摇瓶装液量为150mL、接种量为1mL，在发酵12h添加亚硒酸钠至终浓度为100μg/mL，于200rpm、培养84h，培养温度为26℃，收样检测酵母硒含量为2350mg/kg。

其中发酵培养基同实施例1，种子液的制备和菌浓度同实施例1。

实施例14

在发酵培养基的基础上500mL摇瓶装液量为150mL、接种量为1mL，在发酵12h添加亚硒酸钠至终浓度为100μg/mL，于200rpm、培养84h，培养温度为28℃，收样检测酵母硒含量为2453mg/kg。

其中发酵培养基同实施例1，种子液的制备和菌浓度同实施例1。

实施例15

在发酵培养基的基础上500mL摇瓶装液量为150mL、接种量为1mL，在发酵12h添加亚硒酸钠至终浓度为100μg/mL，于200rpm、培养84h，培养温度为30℃，收样检测酵母硒含量为3264mg/kg。其中发酵培养基同实施例1，种子液的制备和菌浓度同实施例1。

实施例16

在发酵培养基的基础上500mL摇瓶装液量为150mL、接种量为1mL，在发酵12h添加亚硒酸钠至终浓度为100μg/mL，于200rpm、培养84h，培养温度为32℃，收样检测酵母硒含量为2351mg/kg。

其中发酵培养基同实施例1，种子液的制备和菌浓度同实施例1。

实施例17

在发酵培养基的基础上500mL摇瓶装液量为150mL、接种量为1mL，在发酵12h添加亚硒酸钠至终浓度为100μg/mL，于200rpm、培养84h，培养温度为34℃，收样检测酵母硒含量为1012mg/kg。

其中发酵培养基同实施例1，种子液的制备和菌浓度同实施例1。

实施例18

将葡萄汉逊酵母HanAɑ1在5L发酵罐中进行发酵。3L发酵培养基(同实施例1)装液量，氨水和盐酸控制pH值为6，融氧控制在30％的条件。初始的亚硒酸钠添加浓度为100μg/mL。发酵24h后，以10mL/h连续补加补充培养基(葡萄糖10％，蛋白胨5％，酵母粉5％)连续发酵三天。结果见图2，结果显示发酵56h，富硒酵母菌浓最高，且富硒酵母中的有机硒的含量为2332mg/kg。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

一株葡萄汉逊酵母及应用专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。