专利摘要

本发明公开了一种布洛芬与喹啉‑8‑甲醛席夫碱构筑的铜(II)配合物及其合成方法和应用。所述的铜(II)配合物的化学式为：[Cu(L1)(L2)]，其中，L1为布洛芬，带一个单位的负电荷；L2为喹啉‑8‑甲醛缩水杨酰腙席夫碱，带一个单位的负电荷；该配合物属于单斜晶系，C2/c空间群，晶胞参数为α＝90.00°,β＝101.695(6)°,γ＝90.00°。申请人发现该配合物对多种肿瘤细胞珠具有较好的抑制作用，具有潜在的药物价值，有望用于抗肿瘤药物的制备。

权利要求

1.布洛芬与喹啉-8-甲醛席夫碱构筑的铜(II)配合物的合成方法，其特征在于：

该配合物的化学式为：[Cu(L1)(L2)]，其中，L1为布洛芬，带一个单位的负电荷；L2为喹啉-8-甲醛缩水杨酰腙席夫碱，带一个单位的负电荷；

该配合物属于单斜晶系，C2/c空间群，晶胞参数为 α＝90.00°,β＝101.695(6)°,γ＝90.00°；

该配合物的合成方法为：取如下式(I)所示的化合物和如下式(II)所示的化合物，溶解于极性溶剂中，进行配位反应，反应物静置，有晶体析出，即得到目标产物；

2.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于：所述的极性溶剂为甲醇和/或乙醇，或者是甲醇和/或乙醇与选自二氯甲烷和氯仿中的一种或两种的组合。

3.根据权利要求2所述的合成方法，其特征在于：当极性溶剂为甲醇和/或乙醇与选自二氯甲烷和氯仿中的一种或两种的组合时，甲醇和/或乙醇在极性溶剂中所占的比例≥45v/v％。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的合成方法，其特征在于：所述配位反应在加热或不加热的条件下进行。

5.根据权利要求1～3中任一项所述的合成方法，其特征在于：所述配位反应在15～30℃条件下进行。

说明书

技术领域

本发明涉及一种布洛芬与喹啉-8-甲醛席夫碱构筑的铜(II)配合物及其合成方法和应用，属于医药技术领域。

背景技术

铜是人体中必不可少的一种微量元素，在生命体中参与许多生物学通路。大量的实验证明，铜在生命体中的新陈代谢严重影响肿瘤性疾病。近年来，铜配合物作为抗肿瘤药物的研究越来越成为目前药物化学领域热点，并且大量的铜配合物已经在体外和体内进行了抗癌活性的研究和评价。

布洛芬(2-(-4-异丁基苯基)丙酸)是一种有效的非甾体类镇痛抗炎药物，被广泛用于治疗各种炎症疾病。目前，尚未见有布洛芬与喹啉-8-甲醛缩水杨酰腙席夫碱构筑的铜(II)配合物及其合成方法和应用的相关报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种结构新颖的布洛芬与喹啉-8-甲醛席夫碱构筑的铜(II)配合物，以及它的合成方法和应用。

本发明所述的布洛芬与喹啉-8-甲醛席夫碱构筑的铜(II)配合物，其化学式为：[Cu(L1)(L2)]，其中，L1为布洛芬，带一个单位的负电荷；L2为喹啉-8-甲醛缩水杨酰腙席夫碱，带一个单位的负电荷；该配合物属于单斜晶系，C2/c空间群，晶胞参数为 α＝90.00°,β＝101.695(6)°,γ＝90.00°。

本发明所述的铜(II)配合物的分子式：C₃₀H₂₉CuN₃O₄，分子量为：559.11。该铜(II)配合物的晶体结构数据见下述表1，部分键长键角数据见下述表2。

表1[Cu(L1)(L2)]的晶体学参数

表2[Cu(L1)(L2)]的键长 和键角(°)

本发明还提供上述布洛芬与喹啉-8-甲醛席夫碱构筑的铜(II)配合物的合成方法，具体为：取如下(I)所示的化合物(即布洛芬铜(II)配合物)和如下式(II)所示的化合物(即喹啉-8-甲醛缩水杨酰腙席夫碱)，溶解于极性溶剂中，进行配位反应，反应物静置，有晶体析出，即得到目标产物；

上述目标产物的合成方法中涉及的原料之一式(II)所示的化合物可参考现有文献(Journal of Inorganic Biochemistry,2000,81,23-27)进行合成，也可自行设计合成路线进行合成，在本申请中简写为[Cu(L1)₂]，其中L1为布洛芬，带一个单位的负电荷。

上述目标产物的合成方法中涉及的另一种原料式(III)所示的化合物在本申请中简写为配体L2，其可参考现有文献或自行设计合成路线进行合成，优选按以下方法进行合成：取喹啉-8-甲醛和水杨酰肼置于容器中，加入溶剂(具体为选自甲醇、乙醇、二氯甲烷和氯仿等中的一种或两种以上的组合)，加热条件下反应，反应物冷却，有沉淀(黄色)析出，固液分离，即得到式(III)所示化合物。在此合成方法中，反应优选为回流反应，在固液分离之后，优选是将分离得到的固体物质洗涤(如甲醇和/或乙醚)后干燥再用于制备本申请的目标化合物。

上述目标产物的合成方法中，所述配体L2和[Cu(L1)₂]的摩尔比通常为1：1，在实际的操作中，一般布洛芬铜(II)可以稍微过量。加入极性溶剂，所述溶剂的用量可根据需要确定，通常以能溶解参加反应的原料为宜。在具体的溶解步骤中，可以将配体L2和[Cu(L1)₂]分别用极性溶剂溶解后再混合，也可以将配体L2和[Cu(L1)₂]混合后再加入极性溶剂溶解。

上述目标产物的合成方法中，所述的极性溶剂为甲醇和/或乙醇，或者是甲醇和/或乙醇与选自二氯甲烷和氯仿中的一种或两种的组合。当极性溶剂为甲醇和/或乙醇与选自二氯甲烷和氯仿中的一种或两种的组合时，优选甲醇和/或乙醇在极性溶剂中所占的比例≥45v/v％，进一步优选≥50v/v％，更优选≥55v/v％。

上述目标产物的合成方法中，所述配位反应可以在加热或不加热的条件下进行，优选在不加热的条件下的条件下进行，具体可以是在15～30℃条件下进行。在反应过程中，反应是否完全可以通过质谱进行跟踪。当反应在常温或室温条件下进行时，优选控制配位反应的时间为16～24h。

上述目标产物的合成方法中，优选是将所得反应物过滤，收集滤液，再将收集的滤液静置挥发，这样可以获得更好的晶体。

本发明还包括上述布洛芬与喹啉-8-甲醛席夫碱构筑的铜(II)配合物在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明进一步包括以上述布洛芬与喹啉-8-甲醛席夫碱构筑的铜(II)配合物为活性成分制备的抗肿瘤药物。

与现有技术相比，本发明提供了一种结构新颖的布洛芬与喹啉-8-甲醛席夫碱构筑的铜(II)配合物及其合成方法和应用，申请人对该(II)配合物的体外活性试验研究表明，其对人肝癌细胞HepG2、人肺癌细胞NCI-H460、和人胃癌细胞MGC80-3、人宫颈癌细胞HeLa等肿瘤细胞株具有很好的增殖抑制活性，具有潜在的药物价值，有望用于抗肿瘤药物的制备。

附图说明

图1为本发明实施例1制得的最终产物的结构图；

图2为本发明实施例1制得的最终产物的红外光谱图；

图3为本发明实施例1制得的最终产物的高分辨质谱图；

图4为本发明对比例1制得的最终产物的高分辨质谱图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的详述,以更好地理解本发明的内容,但本发明并不限于以下实施例。

以下各实施例中涉及的式(II)所示化合物([Cu(L1)₂])和式(III)所示的化合物(配体L2)分别按下述方法进行合成：

[Cu(L1)₂]的合成：

称取布洛芬0.206g(1.0mmol)于50ml烧杯中，在冰浴下边搅拌边逐滴加入10ml NaOH溶液(0.1mol/L)，待完全溶解后，缓慢向上述溶液中加入0.304g硝酸铜(1.0mmol)，反应5h后，过滤，沉淀用丙酮、乙醇及水各洗涤三次，干燥，即得。高分辨质谱HRMS(ESI)：C₂₆H₃₄O₄Cu，[M+(L1-H)]^-，理论值：678.29817，测量值：678.30000。

配体L2的合成：

取喹啉-8-甲醛157mg和水杨醛酰肼152mg置于圆底烧瓶中，加入50mL甲醇中，回流反应6小时。随后冷却至室温，得到黄色沉淀，过滤，滤渣依次采用甲醇、乙醚各洗涤2次，干燥，得谈黄色固体，产率90％。

对所得产物进行红外、质谱、核磁共振氢谱、碳谱分析，谱图数据如下：

FT-IR(KBr):3254,3050,2843,2707,2566,1633,1544,1305,1217,1155,1084,1033,793,754,638cm^-1.

HRMS(ESI):C₁₇H₁₃N₃O₂[M+H]⁺理论值：292.10860,测量值：292.10674.

¹H NMR(500MHz,DMSO)δ12.17(s,1H),12.08(s,1H),9.77(s,1H),9.05-8.95(m,1H),8.44(dd,J＝19.0,7.1Hz,2H),8.11(d,J＝7.9Hz,1H),8.01(d,J＝7.2Hz,1H),7.73(t,J＝7.7Hz,1H),7.63(dd,J＝8.3,4.1Hz,1H),7.46(t,J＝7.2Hz,1H),6.98(dd,J＝14.6,7.7Hz,2H).

¹³C NMR(125MHz,DMSO)δ165.88,160.21,150.93,146.28,145.89,137.19,134.47,131.43,130.82,128.75,128.53,127.05,126.34,122.42,119.35,117.87,115.83.

实施例1

取相等物质的量(1.0mmol)的配体L2和[Cu(L1)₂]置于50ml圆底烧瓶中，然后加入20ml甲醇，常温搅拌24h，过滤，收集滤液于50ml烧杯中，保鲜膜封口，之后在保鲜膜上扎上小孔，常温下挥发，一周后得到块状墨绿色晶体，产率80％。

对该实施例所得的晶体进行X-射线单晶衍射、红外光谱和高分辨质谱分析，其图谱分别如图1、图2和图3所示，因此，可以确定所得的块状墨绿色晶体为本发明所述的[Cu(L1)(L2)]，其中，L1为布洛芬，带一个单位的负电荷；L2为喹啉-8-甲醛缩水杨酰腙席夫碱，带一个单位的负电荷。

对比例1

取等物质量(0.50mmol)的配体L2和Cu(NO₃)·3H₂O于50ml圆底烧瓶中，然后加入20ml甲醇或乙醇，加热回流6h，溶剂浓缩待有沉淀生成后，冷却至室温，过滤，收集沉淀，分别采用水、冷的甲醇、乙醚洗涤三次。得到配体L2铜配合物晶体。FT-IR(KBr):1592,1514,1478,1380,1293,1251,1062,1010,835,764cm^-1。HRMS(ESI):C₁₇H₁₂N₃O₂Cu[M-NO₃]⁺，理论值：353.02255,测量值：353.02136。推断出化学式为[Cu(L2)(NO₃)]，其中配体L2为喹啉-8-甲醛缩水杨酰腙席夫碱，带一个单位的负电荷；

取相等物质的量(1.0mmol)的配体L2铜配合物和布洛芬置于50ml圆底烧瓶中，然后加入20ml甲醇，常温搅拌24h，过滤，收集滤液于50ml烧杯中，保鲜膜封口，之后在保鲜膜上扎上小孔，常温下挥发，一周后有绿色沉淀生成，产率30％。继续常温下挥发一周，仍旧没有获得晶体。

对本对比例所得的含有绿色沉淀的混合料液进行高分辨质谱分析(如图4所示)，可以确定该混合料液中含有本发明所述的[Cu(L1)(L2)]，但其纯度不高，含有很多杂质峰。

实施例2

重复实施例1，与其不同的是：将溶剂更改为乙醇。十天后得到块状墨绿色晶体，产率78％。

对该实施例所得的晶体进行X-射线单晶衍射、红外光谱和高分辨质谱分析，可以确定所得的块状墨绿色晶体为本发明所述的[Cu(L1)(L2)]，其中，L1为布洛芬，带一个单位的负电荷；L2为喹啉-8-甲醛缩水杨酰腙席夫碱，带一个单位的负电荷。

实施例3

重复实施例1，与其不同的是：将溶剂更改为由甲醇与二氯甲烷组成的混合溶剂(体积比为4：1)，溶剂总用量不变。一周后得到块状墨绿色晶体，产率75％。

对该实施例所得的晶体进行X-射线单晶衍射、红外光谱和高分辨质谱分析，可以确定所得的块状墨绿色晶体为本发明所述的[Cu(L1)(L2)]，其中，L1为布洛芬，带一个单位的负电荷；L2为喹啉-8-甲醛缩水杨酰腙席夫碱，带一个单位的负电荷。

实施例4

重复实施例1，与其不同的是：将溶剂更改为由甲醇、乙醇和二氯甲烷组成的混合溶剂(体积比依次为2：2：1)，溶剂总用量不变。一周后得到块状墨绿色晶体，产率73％。

对该实施例所得的晶体进行X-射线单晶衍射、红外光谱和高分辨质谱分析，可以确定所得的块状墨绿色晶体为本发明所述的[Cu(L1)(L2)]，其中，L1为布洛芬，带一个单位的负电荷；L2为喹啉-8-甲醛缩水杨酰腙席夫碱，带一个单位的负电荷。

实施例5

重复实施例1，与其不同的是：将溶剂更改为由甲醇与氯仿组成的混合溶剂(体积比为4：1)，溶剂总用量不变。一周后得到块状墨绿色晶体，产率72％。

对该实施例所得的晶体X-射线单晶衍射、红外光谱和高分辨质谱分析，可以确定所得的块状墨绿色晶体为本发明所述的[Cu(L1)(L2)]，其中，L1为布洛芬，带一个单位的负电荷；L2为喹啉-8-甲醛缩水杨酰腙席夫碱，带一个单位的负电荷。

实施例6

重复实施例1，与其不同的是：将溶剂更改为由甲醇与乙仿组成的混合溶剂(体积比为1：1)，溶剂总用量不变。一周后得到块状墨绿色晶体，产率70％。

对该实施例所得的晶体进行X-射线单晶衍射、红外光谱和高分辨质谱分析，可以确定所得的块状墨绿色晶体为本发明所述的[Cu(L1)(L2)]，其中，L1为布洛芬，带一个单位的负电荷；L2为喹啉-8-甲醛缩水杨酰腙席夫碱，带一个单位的负电荷。

为了充分说明本发明所述的配合物[Cu(L1)(L2)]在制药中的用途，申请人对其进行了体外抗肿瘤活性实验。

实验例：[Cu(L1)(L2)]对多种人肿瘤细胞株的增殖抑制活性实验

1、待测化合物的配制

称取适量的本发明所述配合物[Cu(L1)(L2)]、Cu(L1)、配体L2、Cisplatin、Cu(NO₃)·3H₂O等化合物，溶解于DMSO作为储备液，储备液用生理盐水稀释成50μmol/L的终溶液，其中助溶剂DMSO的终浓度≤1％，测试该浓度下化合物对各种肿瘤细胞生长的抑制程度。

2、细胞株与细胞培养

本实验选用的细胞株主要为：人肝癌细胞HepG2、人肺癌细胞NCI-H460、和人胃癌细胞MGC80-3、人宫颈癌细胞HeLa和人正常肝细胞Hell-7702。

采用含有10wt％小牛血清、100U/mL青霉素、100U/mL链霉素的RPMI-1640培养液置于孵箱中培养所选用细胞株，培养箱的条件为：37℃含体积浓度5％CO₂。

3、细胞生长抑制实验(MTT法)

(1)取对数生长期的细胞，胰蛋白酶消化，配置成5000个/mL的细胞悬液(含10％小牛血清的培养液)；于96孔培养板中每孔接种190μL的细胞悬液，使待测细胞密度为1000～10000孔(边缘孔用无菌PBS填充)；

(2)将上述细胞于5％CO₂，37℃条件下孵育24h，至细胞单层铺满孔底，每孔加入一定浓度梯度的药物10μL，每个浓度梯度设4个复孔；继续在5％CO₂、37℃条件下孵育48小时，倒置显微镜下观察细胞形态；

(3)每孔加入10μL 5mg/mL的MTT溶液(即0.5％MTT)，继续培养4h；

(4)终止培养，小心的吸去孔内培养液，每孔加入150μL的DMSO充分溶解甲瓒沉淀，振荡器混匀后，在酶标仪用波长为570nm，参比波长为450nm测定各孔的光密度值；

(5)同时设置调零孔(培养基、MTT、DMSO)，对照孔(细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、DMSO)。

(6)根据测得的光密度值(OD值)，来判断活细胞数量，OD值越大，细胞活性越强。利用公式：

以顺铂为对照，计算受试配合物对肿瘤细胞生长的抑制率，再以Bliss法分别计算化合物对几种肿瘤细胞株的IC₅₀值。其结果如下表3所示：

表3：配合物[Cu(L1)(L2)]对所选用细胞株的IC₅₀值(μM)

从表中数据可以看出，本发明所述配合物对所选用的肿瘤细胞均表现出较强的细胞增殖抑制活性，并且明显高于顺铂。相对于配体、溶剂及金属盐，本发明所述配合物增强了肿瘤细胞的毒性，这主要由于配体与金属盐鳌和作用增强其对肿瘤细胞毒性。

结果表明，本发明所述配合物[Cu(L1)(L2)]表现出广谱抗肿瘤活性，具有良好的潜在药用价值，有望用于各种抗肿瘤药物的制备，同时为其他抗肿瘤药物的合成提供可借鉴的设计思想。

一种布洛芬与喹啉-8-甲醛席夫碱构筑的铜(II)配合物及其合成方法和应用专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。