专利摘要
本发明公开了一种常温保存节菱孢属真菌菌种的培养基，其特征在于，是由以下重量百分比的原料制得的：小麦秸秆5‑10％，稻草秸秆5‑10％，玉米秸秆5‑10％，有机酸0.1‑1％，竹子5‑40％，木屑5‑10％，糖蜜1‑5％，γ‑聚谷氨酸1‑5％，魔芋粉1‑5％，甘油0.5‑2％，吸附剂1‑5％，余量为芋头液汁。本发明还公开了该培养基的制备方法和应用。本发明的培养基具有常温保存3年以上，使用方便，节约能源的优异性能，方便保存节菱孢属真菌菌种、方便挑取孢子和菌丝进行观察或使用，培养基可根据具体需求设置不同的厚薄和形状，可定期补充培养基延长保存期限。
权利要求
1.一种常温保存节菱孢属真菌菌种的培养基，其特征在于，是由以下重量百分比的原料制得的：小麦秸秆5-10％，稻草秸秆5-10％，玉米秸秆5-10％，有机酸0.1-1％，竹子5-40％，木屑5-10％，糖蜜1-5％，γ-聚谷氨酸1-5％，魔芋粉1-5％，甘油0.5-2％，吸附剂1-5％，余量为芋头液汁；
所述有机酸是由柠檬酸和乳酸按照3：1的重量比制得的；
所述吸附剂为硅藻土；
所述芋头液汁是由以下步骤制得的：称取新鲜芋头200g，去皮切成1cm
所述常温保存节菱孢属真菌菌种的培养基的制备方法，是由以下步骤制得的：
1)将小麦秸秆、稻草秸秆、玉米秸秆、竹子和木屑粉碎，过100-800目筛，高压灭菌20-45min，得料A；
2)将有机酸、糖蜜、γ-聚谷氨酸、芋头液汁、魔芋粉和甘油与吸附剂混合均匀，灭菌20-30min，得料B；
3)无菌操作条件下，将料A和料B混合均匀，压制成厚度为0.2-0.5cm的饼状物，得常温保存节菱孢属真菌菌种的培养基。
2.一种权利要求1所述的常温保存节菱孢属真菌菌种的培养基的应用，其特征在于，所述应用为该培养基在节菱孢属真菌菌种常温保存中的应用。
3.根据权利要求2所述常温保存节菱孢属真菌菌种的培养基的应用，其特征在于，所述应用为常温保存节菱孢属真菌菌种的培养基按照盒子的形状切割，将切割后的培养基放入带有过滤和透气功能的有机玻璃盒子内，无菌操作条件下接种节菱孢属真菌菌种，封口，即可实现节菱孢属真菌菌种的常温保存。
说明书
技术领域
本发明属于微生物保存技术领域，具体涉及一种常温保存节菱孢属真菌菌种的培养基及其制备方法和应用。
背景技术
全世界共记载节菱孢属有60个种，该属真菌寄主范围分布较广。国外分布于英伦诸岛、荷兰、德国、波兰、法国、意大利、美国、澳大利亚、新西兰、印度，挪威、斯威士兰等。中国分布于河北、河南、山东、山西、新疆、青海、宁夏、辽宁等13个省。该属真菌既能引起毛竹基腐病、高节竹枯萎病和毛竹材霉变，也能引起人的皮肤病，是一种值得关注的真菌。更为重要的是，该属真菌可以引起甘蔗变质中毒症，自1972年统计报道，在我国已流行危害40多年，造成极大的经济损失和人员伤亡病残。但是，该属真菌还属于有益菌，可以产生多种抗生素和其它活性物质。因此，该菌具有很高的学术研究价值和开发利用价值，因此，该属真菌其种质资源成为研究热点，研究其新的保藏方法具有广阔的前景和重要的现实意义。
目前，真菌的保存方法很多，主要包括以下几种：1)斜面低温保藏法：将菌种接种于合适的斜面培养基上，待生长好后置于4℃冰箱保藏，每隔一定时间进行转接培养后，再将新斜面继续保藏。2)液体石蜡保藏法：在无菌条件下，往生长好的新鲜斜面中倒入已灭菌的液体石蜡，油层要高出斜面上端1cm，使之与空气隔绝，然后垂直放于室温或冰箱内保藏。3)砂土管保藏法：将斜面培养基上长好的霉菌或放线菌孢子刮下，接到灭菌的沙土管中搅匀，置于盛有干燥剂(如CaCl2)的容器中密封，低温保藏。4)冷冻干燥保藏法：在较低温度下使菌液呈冻结状态，同时抽气减压使之干燥。5)液氮超低温冻结法：菌种保藏在液氮冰箱中，温度可低至-196℃，这是目前保藏菌种的新技术。6)硅胶保藏法，等等。以上菌种保存方法的共同点是：创造不良的环境和营养条件，使微生物处于休眠的状态或者孢子状态，使其生命活动处于最低的状态，代谢活动停止。这样的保存方法要求给与营养瘠薄、缺氧、干燥、低温、缺水等。世界各国菌种保藏中心基本都是采取以上的办法去保藏菌种，但是这些保存方法存在许多的缺点：①有些保存法耗费大量的财力、物力和人力，甚至不能实现菌种的大批量保存。譬如：液氮保存法。②有些方法不适合节菱孢属真菌的保藏，譬如液体石蜡保藏法，此方法缺氧气；土管保藏法干燥缺水，菌种容易失活。总之，每种菌种的保藏方法都有自身适合的菌种或者菌种状态，亦即每种方法都有一定的缺陷性。
发明内容
本发明提供了一种使用方便的常温保存节菱孢属(Arthrinium spp.)真菌菌种的培养基。
本发明还提供了该常温保存节菱孢属(Arthrinium spp.)真菌菌种的培养基的制备方法。
本发明还提供了该常温保存节菱孢属(Arthrinium spp.)真菌菌种的培养基的应用。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的：
一种常温保存节菱孢属(Arthrinium spp.)真菌菌种的培养基，是由以下重量百分比的原料制得的：小麦秸秆5-10％，稻草秸秆5-10％，玉米秸秆5-10％，有机酸0.1-1％，竹子5-40％，木屑5-10％，糖蜜1-5％，γ-聚谷氨酸1-5％，魔芋粉1-5％，甘油0.5-2％，吸附剂1-5％，余量为芋头液汁。
所述的，有机酸是由柠檬酸和乳酸按照3：1的重量比制得的。
所述的，芋头液汁是由以下步骤制得的：称取新鲜芋头200g，去皮切成1cm
所述的，吸附剂为硅藻土。
一种常温保存节菱孢属真菌菌种的培养基的制备方法，是由以下步骤制得的：
1)将小麦秸秆、稻草秸秆、玉米秸秆、竹子和木屑粉碎，过100-800目筛，高压灭菌20-45min，得料A；
2)将有机酸、糖蜜、γ-聚谷氨酸、芋头液汁、魔芋粉和甘油与吸附剂混合均匀，灭菌20-30min，得料B；
3)无菌操作条件下，将料A和料B混合均匀，压制成厚度为0.2-0.5cm的饼状物，得常温保存节菱孢属真菌菌种的培养基。
一种常温保存节菱孢属真菌菌种的培养基的应用，所述应用为该培养基在节菱孢属真菌菌种常温保存中的应用。
所述应用为常温保存节菱孢属真菌菌种的培养基按照盒子的形状切割，将切割后的培养基放入带有过滤和透气功能的有机玻璃盒子内，无菌操作条件下接种节菱孢属真菌菌种，封口，即可实现节菱孢属真菌菌种的常温保存。
本发明所用的节菱孢属真菌菌种购自中国普通微生物菌种保藏管理中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所)，保藏编号分别为：CGMCC No51218、CGMCC No313755和CGMCC No38582。
本发明的有益效果：
1.本发明常温保存节菱孢属真菌菌种的培养基具有常温保存3年以上，使用方便，节约能源的优异性能，方便保存节菱孢属真菌菌种、方便挑取孢子和菌丝进行观察或使用，培养基可根据具体需求设置不同的厚薄和形状，可定期补充培养基延长保存期限。
2.本发明常温保存节菱孢属真菌菌种的培养基原料来源广泛，价廉易得，成本低，保存时间长，稳定性好，同时具有一定的观赏性，显著提高节菱孢属真菌菌种的生存率和繁殖率。
3.本发明的制备方法简单，操作方便，不占用大面积培养，节省人力物力。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步说明。
实施例1
一种常温保存节菱孢属真菌菌种的培养基，是由以下重量百分比的原料制得的：小麦秸秆10％，稻草秸秆10％，玉米秸秆10％，有机酸1％，竹子5％，木屑10％，糖蜜5％，γ-聚谷氨酸5％，魔芋粉5％，甘油0.5％，吸附剂5％，余量为芋头液汁。
所述的，有机酸是由柠檬酸和乳酸按照3：1的重量比制得的。
所述的，芋头液汁是由以下步骤制得的：称取新鲜芋头200g，去皮切成1cm
所述的，吸附剂为硅藻土。
一种常温保存节菱孢属真菌菌种的培养基的制备方法，是由以下步骤制得的：
1)将小麦秸秆、稻草秸秆、玉米秸秆、竹子和木屑粉碎，过100-800目筛，高压灭菌20min，得料A；
2)将有机酸、糖蜜、γ-聚谷氨酸、芋头液汁、魔芋粉和甘油与吸附剂混合均匀，灭菌30min，得料B；
3)无菌操作条件下，将料A和料B混合均匀，压制成厚度为0.2-0.5cm的饼状物，得常温保存节菱孢属真菌菌种的培养基。
一种常温保存节菱孢属真菌菌种的培养基的应用，所述应用为该培养基在节菱孢属真菌菌种常温保存中的应用。
所述应用为常温保存节菱孢属真菌菌种的培养基按照盒子的形状切割，将切割后的培养基放入带有过滤和透气功能的有机玻璃盒子内，无菌操作条件下接种节菱孢属真菌菌种，封口，即可实现节菱孢属真菌菌种的常温保存。
实施例2
一种常温保存节菱孢属真菌菌种的培养基，是由以下重量百分比的原料制得的：小麦秸秆8％，稻草秸秆7％，玉米秸秆8％，有机酸0.5％，竹子20％，木屑8％，糖蜜3％，γ-聚谷氨酸3％，魔芋粉3％，甘油1％，吸附剂3％，余量为芋头液汁。
所述的，有机酸是由柠檬酸和乳酸按照3：1的重量比制得的。
所述的，芋头液汁是由以下步骤制得的：称取新鲜芋头200g，去皮切成1cm
所述的，吸附剂为硅藻土。
一种常温保存节菱孢属真菌菌种的培养基的制备方法，是由以下步骤制得的：
1)将小麦秸秆、稻草秸秆、玉米秸秆、竹子和木屑粉碎，过100-800目筛，高压灭菌30min，得料A；
2)将有机酸、糖蜜、γ-聚谷氨酸、芋头液汁、魔芋粉和甘油与吸附剂混合均匀，灭菌25min，得料B；
3)无菌操作条件下，将料A和料B混合均匀，压制成厚度为0.2-0.5cm的饼状物，得常温保存节菱孢属真菌菌种的培养基。
一种常温保存节菱孢属真菌菌种的培养基的应用，所述应用为该培养基在节菱孢属真菌菌种常温保存中的应用。
所述应用为常温保存节菱孢属真菌菌种的培养基按照盒子的形状切割，将切割后的培养基放入带有过滤和透气功能的有机玻璃盒子内，无菌操作条件下接种节菱孢属真菌菌种，封口，即可实现节菱孢属真菌菌种的常温保存。
实施例3
一种常温保存节菱孢属真菌菌种的培养基，是由以下重量百分比的原料制得的：小麦秸秆5％，稻草秸秆5％，玉米秸秆5％，有机酸0.1％，竹子40％，木屑5％，糖蜜1％，γ-聚谷氨酸1％，魔芋粉1％，甘油2％，吸附剂1％，余量为芋头液汁。
所述的，有机酸是由柠檬酸和乳酸按照3：1的重量比制得的。
所述的，芋头液汁是由以下步骤制得的：称取新鲜芋头200g，去皮切成1cm
所述的，吸附剂为硅藻土。
一种常温保存节菱孢属真菌菌种的培养基的制备方法，是由以下步骤制得的：
1)将小麦秸秆、稻草秸秆、玉米秸秆、竹子和木屑粉碎，过100-800目筛，高压灭菌45min，得料A；
2)将有机酸、糖蜜、γ-聚谷氨酸、芋头液汁、魔芋粉和甘油与吸附剂混合均匀，灭菌20min，得料B；
3)无菌操作条件下，将料A和料B混合均匀，压制成厚度为0.2-0.5cm的饼状物，得常温保存节菱孢属真菌菌种的培养基。
一种常温保存节菱孢属真菌菌种的培养基的应用，所述应用为该培养基在节菱孢属真菌菌种常温保存中的应用。
所述应用为常温保存节菱孢属真菌菌种的培养基按照盒子的形状切割，将切割后的培养基放入带有过滤和透气功能的有机玻璃盒子内，无菌操作条件下接种节菱孢属真菌菌种，封口，即可实现节菱孢属真菌菌种的常温保存。
成活率试验
将本发明所用节菱孢属真菌：CGMCC No 51218、CGMCC No313755和CGMCC No38582进行成活率试验，分别进行本发明培养基保存、斜面低温保存、液氮超低温保存、冷冻干燥保存、甘油保存和甘油水保存。每种保存方法中，每个菌株设置4个试验组，每个试验组设置3个重复。连续观察3年，统计每种保存方法的转接成活率，结果如表1所示。
表1转接成活率试验结果(100％)
由表1看出，本发明培养基保存的3个菌株转接成活率均优于其它方法。由此可知，本发明的培养基可用于常温保存节菱孢属真菌菌种。
污染情况试验
将本发明所用节菱孢属真菌：CGMCC No 51218、CGMCC No313755和CGMCC No38582进行污染情况试验，分别进行本发明培养基保存、斜面低温保存、液氮超低温保存、冷冻干燥保存、甘油保存和甘油水保存。每种保存方法中，每个菌株设置4个试验组，每个试验组设置3个重复。连续观察3年，统计每种保存方法的转接污染率，结果如表2所示。
表2转接污染率试验结果
由表2看出，本发明培养基保存的3个菌株转接污染率最大为3.45％，和液氮超低温保存相同，低于其他保存方法。由此可知，本发明的培养基可用于常温保存节菱孢属真菌菌种，保存效果与液氮超低温保存相当，但是本发明的培养基可实现常温保存节菱孢属真菌菌种，便于存放，不消耗能源，转接成活率高，转接污染率低，方便挑取孢子和菌丝进行观察或使用。
一种常温保存节菱孢属真菌菌种的培养基及其制备方法和应用专利购买费用说明
Q：办理专利转让的流程及所需资料
A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。
1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。
2：按规定缴纳著录项目变更手续费。
3：同时提交相关证明文件原件。
4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。
Q:专利著录项目变更费用如何缴交
A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式
Q：专利转让变更，多久能出结果
A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。
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