专利摘要

本发明公开一种腐植酸盐复方鱼药及制备方法，属于水产养殖技术领域；该鱼药由以下原料制得，各原料及重量百分比为：腐植酸盐50%-70%、炮姜10%-30%、三叶青5%-20%、诱食剂0.4%-2.5%；用该腐植酸盐复方鱼药能针对性抑制致病菌，有效防治鱼病，毒副作用少、无抗药性、无药物残留；本发明制作成本低廉，方法简单，效果良好，原料来源稳定，在水产养殖领域有良好的应用前景。

权利要求

1.一种腐植酸盐复方鱼药，其特征在于：该鱼药由以下原料制得，各原料及重量百分比为：腐植酸盐50%-70%、炮姜10%-30%、三叶青5%-20%、诱食剂0.4%-2.5%，各组分的重量百分比之和为100%。

2.根据权利要求1所述腐植酸盐复方鱼药，其特征在于：所述的腐植酸盐为腐植酸钾、腐植酸钠、腐植酸铵中的一种。

3.根据权利要求1所述腐植酸盐复方鱼药，其特征在于：所述的诱食剂为三甲基甘氨酸、丙氨酸、香兰素、大蒜素、甜菜碱、果糖中的一种或几种物质按任意比例混合后得到的混合物。

4.权利要求1所述腐植酸盐复方鱼药的制备方法，其特征在于：具体包括如下步骤：

（1）将原料炮姜、三叶青去杂、清洗后于自然条件下干燥，自然干燥后用粉碎机粉碎，过80-100目筛，备用；

（2）按比例称取炮姜、三叶青粉末混合后得到混合粉末，按混合粉末和去离子水质量比为1:5-1:10的比例将混合粉末加入去离子水中浸泡1-2h，煎煮20-40min分钟后趁热过滤，然后按滤渣和去离子水质量比为1:1的比例将滤渣加入去离子水中煎煮10-20min，过滤，合并两次滤液；

（3）在步骤（2）中得到的滤液中加入诱食剂，置于40-60℃水浴中加热并搅拌10-20min；

（4）将步骤（3）得到的中药滤液趁热加入腐植酸盐中，充分搅拌均匀；

（5）将步骤（4）中得到的含有中药的腐植酸盐在60-80℃烘干，用粉碎机粉碎至80-100目即得到腐植酸盐复方鱼药。

说明书

技术领域

本发明涉及一种腐植酸盐复方鱼药及制备方法，属于水产养殖技术领域。 

背景技术

众所周知，在养鱼生产中，如何有效地防治好鱼病，是养鱼成败之关键，正所谓“养鱼不发瘟，富得你发昏”，可见鱼病的防治是十分重要的。 

目前，常见的鱼病主要是：烂鳍病、原虫性鳃病、细菌性腐败病、棉口病等。以上疾病大多由于水体污染滋生病菌而引起，多采用土霉素、青霉素、硫酸铜、硫酸亚铁、漂白粉等杀灭病菌。但这些灭菌方法会对水质造成污染，残留氯、铜、铁等重金属元素，或者残留的抗菌素使病原菌产生耐药性。因此，目前常用的灭菌方法像是一把“双刃剑”，杀菌的同时产生一定隐患。 

中药具有毒副作用少、无抗药性、无药物残留等特点，在疾病预防中具有广阔的应用前景。用于鱼病防治的中药制剂也有报道。赵文等为防治鱼类寄生虫病，开发了相关中药制剂[赵文.刑跃楠.防治鱼类寄生虫病的复方中草药剂.2007,CN 101040936 A]；刘新壮等为防治鱼鳞病，开发了相关中药制剂[刘新壮.一种治疗鱼鳞病的中药.2010, CN 101843722 A]。 

但上述中药制剂使用的药物大多具有广谱抗菌效果，把对鱼类有益的细菌如枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌等也一同杀灭。枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌可以促进有益厌氧菌生长，并产生乳酸等有机酸类，降低肠道PH值，间接抑制其它致病菌生长。而，鱼类的致病菌一般是嗜水气单胞菌、水霉菌、大肠杆菌、软骨球菌等，有效抑制这些致病菌就可以防治鱼病。 

目前人类对食品中的化学药物、抗生素、磺胺、农药、重金属的残留问题非常重视，各国制定了严格法规，我国淡水鱼产量占世界第一位，在渔业水产养殖中使用安全的鱼药具有重要意义。腐植酸是含有较多的羧基、酚羟基的有机高分子聚合物，具有很大的比表面积，可以吸附大量的固体和气体物质，已证明能与金属离子发生很强的络合或吸附作用，可快速络合水中重金属离子、铵氮，农药等有害物质，使水源得到充分净化，增加水中溶氧量，为鱼的生长创造良好的环境，因此在工业、农业生产中都表现了良好的应用前景。更重要的是，腐植酸具有抗菌消炎、抗病毒、促进伤口愈合等作用，已发现其对大肠杆菌、绿脓杆菌、伤寒杆菌等均有抑制作用，但尚无研究表明其对嗜水气单胞菌、水霉菌、大肠杆菌、软骨球菌等鱼病致病菌有抑制作用。 

本发明还以三叶青、炮姜作为辅药，三叶青用于治疗小儿高热惊厥、痢疾、支气管炎、肺炎、咽喉炎、肝炎及病毒性脑膜炎等，上述炎症一般由细菌、病毒、真菌等感染引起，细菌产生的外毒素和内毒素可以直接损伤组织；病毒在被感染的细胞内复制导致细胞坏死，因此，三叶青具有潜在的抗炎杀菌活性；炮姜味微辛、辣，一般的辛辣食物具有消炎杀菌、祛痰止咳、利尿降压、健胃行滞等功效，因此，炮姜对鱼病致病菌也具有潜在的抑制作用。 

以腐植酸盐、三叶青、炮姜为复方的预防和治疗鱼病的鱼药，尚未见文献报道。 

发明内容

本发明的目是针对目前市场上鱼药的不足，提供一种环保的防治和治疗鱼病的腐植酸盐复方鱼药，该腐植酸盐复方鱼药由以下原料制得，各原料及重量百分比为：腐植酸盐50%-70%、炮姜10%-30%、三叶青5%-20%、诱食剂0.4%-2.5%，各组分的重量百分比之和为100%。 

本发明所述腐植酸盐为腐植酸钾、腐植酸钠、腐植酸铵中的一种。 

本发明所述诱食剂为三甲基甘氨酸、丙氨酸、香兰素、大蒜素、甜菜碱、果糖中的一种或几种物质按任意比例混合后得到的混合物。 

本发明的另一目的在于提供所述腐植酸盐复方鱼药的制备方法，具体包括如下步骤： 

（1）将原料炮姜、三叶青去杂、清洗后于自然条件下干燥，自然干燥后用粉碎机粉碎，过80-100目筛，备用；

（2）按比例称取炮姜、三叶青粉末混合后得到混合粉末，按混合粉末和去离子水质量比为1:5-1:10的比例将混合粉末加入去离子水中浸泡1-2h，煎煮20-40min分钟后趁热过滤，然后按滤渣和去离子水质量比为1:1的比例将滤渣加入去离子水中煎煮10-20min，过滤，合并两次滤液；

（3）在步骤（2）中得到的滤液中加入诱食剂，置于40-60℃水浴中加热并搅拌10-20min；

（4）将步骤（3）得到的中药滤液趁热加入腐植酸盐中，充分搅拌均匀；

（5）将步骤（4）中得到的含有中药的腐植酸盐在60-80℃烘干，用粉碎机粉碎至80-100目即得到腐植酸盐复方鱼药。

本发明中所述腐植酸盐参照专利申请200810233669.“褐煤氧化降解生产腐植酸及其盐的方法”方法制得（用无污染的过氧化氢作为氧化剂），市购的一级品腐植酸盐在经重金属检测不超标后，也可以使用；其余组成物均为市售。 

本发明所述腐植酸盐复方鱼药的使用方法为： 

腐植酸盐复方鱼药的用量为100g/m³，即每立方米池水使用腐植酸盐复方鱼药100g，使用前先将腐植酸盐复方鱼药用10倍水稀释，待全部溶解后再用喷洒器均匀喷洒到池水液面，使用频率视季节而定，一般夏天5天一次，其他季节10天一次即可，3次一个疗程，疗程结束后便可看到较明显的治疗效果；

或者每公斤鱼饲料中拌入10g腐植酸盐复方鱼药，连续五次，疗程结束后便可看到较明显的治疗效果。

本发明的有益效果为： 

（1）本发明所述腐植酸盐复方鱼药以腐植酸盐及中药为原料，毒副作用少，具有无抗药性、无药物残留、可降解等特点；

（2）本发明所述腐植酸盐复方鱼药的主药腐植酸盐是一种优良的络合物，能螯合重金属离子、农药，降低水中重金属离子、农药残留量，从而使鱼体健康，食用更安全；

（3）本发明所述腐植酸盐复方鱼药所选原料有良好的针对性，针对性抑制鱼病致病菌，对水环境中的其他病菌抑制作用较弱，不会扰乱菌落生态平衡；

（4）本发明所述腐植酸盐复方鱼药所用原料药价格低廉，制作工艺简便，不涉及重金属或有毒有害试剂，较传统鱼药而言更环保。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明的保护范围不局限于所述内容。 

实施例1 

本实施例所述腐植酸盐复方鱼药由以下原料制得，各原料及重量百分比为：腐植酸钠50%、炮姜30%、三叶青18%、果糖2%。

本实施例所述腐植酸盐复方鱼药的制备方法如下： 

（1）将原料炮姜、三叶青去杂、快速清洗后于自然条件下干燥，自然干燥后用粉碎机粉碎，过80目筛，备用；

（2）称取炮姜0.3 kg、三叶青0.18 kg粉末混合后得到混合粉末，按混合粉末和去离子水质量比为1:5的比例将混合粉末加入去离子水中浸泡1h，煎煮20min分钟后趁热过滤，然后按滤渣和去离子水质量比为1:1的比例将滤渣加入去离子水中煎煮10min，过滤，合并两次滤液；

（3）在步骤（2）中得到的滤液中加入0.02kg果糖，置于40℃水浴中加热并搅拌10min；

（4）将步骤（3）得到的中药滤液趁热加入到0.5kg的腐植酸钠中，搅拌均匀；

（5）将步骤（4）中得到的含有中药的腐植酸盐在60℃烘干，用粉碎机粉碎至80目即得到腐植酸盐复方鱼药。

本实施例制备得到的腐植酸盐复方鱼药药效试验如下： 

（1）采用滤纸片法测定所制腐植酸盐复方鱼药的抑菌能力，选用的菌种为：嗜水气单胞菌、水霉菌、大肠杆菌、软骨球菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌；具体方法如下：将37℃培养24h的菌种与生理盐水混匀，混合菌液含量达到10⁵cfu/ml；取0.1ml菌液均匀涂布在牛肉膏蛋白固体培养基上，分别取5ul经过稀释的不同浓度的腐殖酸盐复方鱼药药液、无菌水浸湿直径为6mm的无菌滤纸片，将滤纸片黏在涂菌培养基上，置37℃培养24h，观察抑菌圈直径，初步判断样品的抑菌能力；“-”表示抑菌圈小于1mm，样品没有抑菌能力，鱼药的浓度分别稀释为40mg/ml、60mg/ml、80mg/ml、100mg/ml、120mg/ml，实验结果见表1：

表1 腐殖酸盐复方鱼药的体外抑菌试验结果

（2）将本实施例制备得到的腐植酸盐复方鱼药用于鱼病的预防，观察使用后情况，试验方法为：随机选取鱼塘水40L于容器中，放养正常斑鱼5条，分别编号为①～⑤，每条约1kg，正常喂养，腐植酸盐复方鱼药的使用方法见发明内容，持续使用3次，20天后观察鱼病情况，统计结果如表2所示： 

表2 腐植酸盐复方鱼药的预防效果

（3）将本实施例制备得到的腐植酸盐复方鱼药鱼病的治疗，观察使用后情况，试验方法为：随机选取鱼塘水40L于容器中，放养烂鳍斑鱼5条，分别编号为①～⑤，每条约1kg，正常喂养，腐植酸盐复方鱼药的使用方法见发明内容，持续使用3次，20天后观察鱼病情况，统计结果如表3所示：

表3 烂鳍病治疗效果

实施例2

本实施例所述腐植酸盐复方鱼药由以下原料制得，各原料及重量百分比为：腐植酸钾62%、炮姜17.6%、三叶青20%、甜菜碱0.2%、香兰素0.2%。

本实施例所述腐植酸盐复方鱼药的制备方法如下： 

（1）将原料药炮姜、三叶青去杂、快速清洗后于自然条件下干燥，自然干燥后用粉碎机粉碎，过90目筛，备用；

（2）称取炮姜0.176kg、三叶青0.2kg粉末混合后得到混合粉末，按混合粉末和去离子水质量比为1:7的比例将混合粉末加入去离子水中浸泡1.5h，煎煮30min分钟后趁热过滤，然后按滤渣和去离子水质量比为1:1的比例将滤渣加入去离子水中煎煮15min，过滤，合并两次滤液；

（3）在步骤（2）中得到的滤液中加入0.002kg甜菜碱和0.002kg香兰素，置于50℃水浴中加热并搅拌15min；

（4）将步骤（3）得到的中药滤液趁热加入到0.62kg的腐植酸钠中，搅拌均匀；

（5）将步骤（4）中得到的含有中药的腐植酸盐在70℃烘干，用粉碎机粉碎至90目即得到腐植酸盐复方鱼药。

本实施例制备得到的腐植酸盐复方鱼药药效试验如下： 

（1）采用滤纸片法测定所制腐植酸盐复方鱼药的抑菌能力，选用的菌种为：嗜水气单胞菌、水霉菌、大肠杆菌、软骨球菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌，具体方法如下：将37℃培养24h的菌种与生理盐水混匀，混合液菌含量达到10⁵cfu/ml；取0.1ml菌液均匀涂布在牛肉膏蛋白固体培养基上，分别取5ul经过稀释的不同浓度的腐殖酸盐复方鱼药药液、无菌水浸湿直径为6mm的无菌滤纸片，将滤纸片黏在涂菌培养基上，置37℃培养24h，观察抑菌圈直径，初步判断样品的抑菌能力；“-”表示抑菌圈小于1mm，样品没有抑菌能力，杀菌液的浓度分别稀释为40mg/ml、60mg/ml、80mg/ml、100mg/ml、120mg/ml，实验结果见表4：

表4 腐殖酸盐复方鱼药的体外抑菌试验结果

（2）将本实施例制备得到的腐植酸盐复方鱼药用于鱼病的预防，观察使用后情况，试验方法为：随机选取鱼塘水40L于容器中，放养斑鱼5条，分别编号为①～⑤，每条约1.2kg，正常喂养，鱼药的使用方法见发明内容，持续使用3次，20天观察鱼病情况，统计结果如表5所示：

    表5 腐植酸盐复方鱼药的预防效果

（3）将本实施例制备得到的腐植酸盐复方鱼药用于鱼病的治疗，观察使用后情况，试验方法为： 随机选取鱼塘水40L于容器中，放养棉口病斑鱼5条，分别编号为①～⑤，每条约1.2kg，正常喂养，鱼药的使用方法见发明内容，持续使用3次，20天后观察鱼病情况，统计结果如表6所示：

     表6 棉口病治疗效果

实施例3

本实施例所述腐植酸盐复方鱼药由以下原料制得，各原料及重量百分比为：腐植酸铵70%、炮姜10%、三叶青7.5%、大蒜素1%、三甲基甘氨酸0.5%、丙氨酸1%。

本实施例所述腐植酸盐复方鱼药的制备方法如下： 

（1）将原料炮姜、三叶青去杂、快速清洗后于自然条件下干燥，自然干燥后用粉碎机粉碎，过100目筛，备用；

（2）称取炮姜0.1 kg、三叶青0.076 kg粉末混合后得到混合粉末，按混合粉末和去离子水质量比为1:10的比例将混合粉末加入去离子水中浸泡2h，煎煮20min分钟后趁热过滤，然后按滤渣和去离子水质量比为1:1的比例将滤渣加入去离子水中煎煮10min，过滤，合并两次滤液；

原料粉末加入原料重量10倍的去离子水浸泡2h，煎煮40min分钟后趁热过滤，滤渣加入等质量的水再煎煮20min，过滤，合并两次滤液；

（3）在滤液中加入0.01kg大蒜素、0.005kg三甲基甘氨酸、0.01kg丙氨酸，置于60℃水浴中加热并搅拌20min；

（4）将上述中药滤液趁热加入到0.7kg的腐植酸钠中，搅拌均匀；

（5）将含有中药的腐植酸铵在80℃烘干，用粉碎机粉碎至100目即得到复方鱼药。

本实施例制备得到的腐植酸盐复方鱼药药效试验如下： 

（1）采用滤纸片法测定所制腐植酸盐复方鱼药的抑菌能力，选用的菌种为：嗜水气单胞菌、水霉菌、大肠杆菌、软骨球菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌，具体方法如下：将37℃培养24h的菌种与生理盐水混匀，混合液菌含量达到10⁵cfu/ml；取0.1ml菌液均匀涂布在牛肉膏蛋白固体培养基上，分别取5ul经过稀释的不同浓度的腐殖酸盐复方鱼药药液、无菌水浸湿直径为6mm的无菌滤纸片，将滤纸片黏在涂菌培养基上，置37℃培养24h，观察抑菌圈直径，初步判断样品的抑菌能力；“-”表示抑菌圈小于1mm，样品没有抑菌能力，杀菌液的浓度分别稀释为40mg/ml、60mg/ml、80mg/ml、100mg/ml、120mg/ml，实验结果见表7；

表7 杀菌液的体外抑菌试验结果

（2）将本实施例制备得到的腐植酸盐复方鱼药用于鱼病的预防，观察使用后情况，试验方法为：随机选取鱼塘水40L于容器中，放养斑鱼5条，分别编号为①～⑤，每条约1.4kg，正常喂养，鱼药的使用方法见发明内容，持续使用3次，20天后观察鱼病情况，统计结果如表8所示：

    表8 腐植酸盐复方鱼药的预防效果

（3）将本实施例制备得到的腐植酸盐复方鱼药鱼病的治疗，观察使用后情况，试验方法为：随机选取鱼塘水40L于容器中，放养细菌性腐败病斑鱼5条，分别编号为①～⑤，每条约1.4kg，正常喂养，鱼药的使用方法见发明内容，持续使用3次，20天后观察鱼病情况，统计结果如表9所示：

     表9 细菌性腐败病治疗效果

实施例4

本实施例所述腐植酸盐复方鱼药由以下原料制得，各原料及重量百分比为：腐植酸铵66%、炮姜27%、三叶青5%、大蒜素2%

本实施例所述腐植酸盐复方鱼药的制备方法如下：

（1）将原料炮姜、三叶青去杂、快速清洗后于自然条件下干燥，自然干燥后用粉碎机粉碎，过100目筛，备用；

（2）称取炮姜0.27kg、三叶青0.05 kg粉末混合后得到混合粉末，按混合粉末和去离子水质量比为1:8的比例将混合粉末加入去离子水中浸泡1.6h，煎煮16min分钟后趁热过滤，然后按滤渣和去离子水质量比为1:1的比例将滤渣加入去离子水中煎煮10min，过滤，合并两次滤液；

原料粉末加入原料重量10倍的去离子水浸泡2h，煎煮40min分钟后趁热过滤，滤渣加入等质量的水再煎煮20min，过滤，合并两次滤液；

（3）在滤液中加入0.02kg大蒜素，置于60℃水浴中加热并搅拌20min；

（4）将上述中药滤液趁热加入到0.66kg的腐植酸钠中，搅拌均匀；

（5）将含有中药的腐植酸铵在80℃烘干，用粉碎机粉碎至100目即得到复方鱼药。

本实施例制备得到的腐植酸盐复方鱼药药效试验如下： 

（1）采用滤纸片法测定所制腐植酸盐复方鱼药的抑菌能力，选用的菌种为：嗜水气单胞菌、水霉菌、大肠杆菌、软骨球菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌，具体方法如下：将37℃培养24h的菌种与生理盐水混匀，混合液菌含量达到10⁵cfu/ml；取0.1ml菌液均匀涂布在牛肉膏蛋白固体培养基上，分别取5ul经过稀释的不同浓度的腐殖酸盐复方鱼药药液、无菌水浸湿直径为6mm的无菌滤纸片，将滤纸片黏在涂菌培养基上，置37℃培养24h，观察抑菌圈直径，初步判断样品的抑菌能力；“-”表示抑菌圈小于1mm，样品没有抑菌能力，杀菌液的浓度分别稀释为40mg/ml、60mg/ml、80mg/ml、100mg/ml、120mg/ml，实验结果见表10；

表10 杀菌液的体外抑菌试验结果

（2）将本实施例制备得到的腐植酸盐复方鱼药用于鱼病的预防，观察使用后情况，试验方法为：随机选取鱼塘水40L于容器中，放养斑鱼5条，分别编号为①～⑤，每条约1.6kg，正常喂养，鱼药的使用方法见发明内容，持续使用3次，20天后观察鱼病情况，统计结果如表11所示：

    表11 腐植酸盐复方鱼药的预防效果

（3）将本实施例制备得到的腐植酸盐复方鱼药鱼病的治疗，观察使用后情况，试验方法为：随机选取鱼塘水40L于容器中，放养原虫性鳃病斑鱼5条，分别编号为①～⑤，每条约1.6kg，正常喂养，腐植酸盐复方鱼药的使用方法见发明内容，持续使用3次，20天后观察鱼病情况，统计结果如表12所示：

     表12 原虫性鳃病治疗效果

上述数据表明，本腐植酸盐复方鱼药对鱼类致病菌的抑制效果较明显，抑菌圈一般大于4mm，属于较强抑制作用，对水中其它菌如枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌抑制作用不强，实际应用也表明，本复方鱼药对烂鳍、棉口、细菌性腐败、原虫性鳃病等常见鱼病的预防和治疗效果良好，具有良好的应用前景。

一种腐植酸盐复方鱼药及制备方法专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。