专利摘要

本发明公开了一种一氧化氮供体型二氢杨梅素衍生物或其药学可接受的水合物。本发明的一氧化氮供体型二氢杨梅素衍生物具有调节血糖和血脂、促进血管生成和改善血管内皮功能作用，可用于治疗糖尿病、糖尿病心血管并发症和代谢综合症药物中的用途。本发明公开了其制法。

权利要求

1.一氧化氮供体型二氢杨梅素衍生物，如下式所示：

式中，R为H、CH3CO；A为(CH2)n、CH2CH2XCH2CH2，其中n为2，3，4的整数，X为O，NH。

2.一氧化氮供体型二氢杨梅素衍生物，其特征在于，所述化合物的具体实例为：

。

3.权利要求1所述的一氧化氮供体型二氢杨梅素衍生物的用途，用于制备降低血糖血脂和/或抑制血管生成的药物。

说明书

技术领域

本发明涉及一氧化氮供体型二氢杨梅素的衍生物，及其在制药中的应用，属于医药技术领域。

背景技术

二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY)为葡萄科蛇葡萄属藤茶中的有效成分,具有调节血糖和血脂、抗菌、抗氧化、抗血栓、护肝以及抗癌等药理活性。二氢杨梅素有较小的水溶性，但脂溶性差。国内学者将二氢杨梅素与十二酰氯、月桂酰氯、硬脂酰氯反应生成相应的酯，增加了其亲脂性，满足了其在食品工业中的应用。宁正祥等采用糖苷酶催化合成了一种黄酮葡萄糖苷化合物，二氢杨梅素-7-a-D-葡萄糖苷，可使糖尿病患者血糖代谢基本能回归到正常水平。但目前由于酶的数量有限，价格较贵，制约了其在苷化反应上的应用。为了进一步提高二氢杨梅素功效，扩大其应用范围，对其进行化学结构修饰已成为当前研究的热点。

NO作为重要的信使物质或效应分子，参与体内多种生理和病理反应。关于NO供体型药物研究，主要集中在心血管药物和非甾体抗炎药两个领域，NO供体型心血管药物中，3,4-二苯磺酰基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物是一个重要的呋咱类NO供体，它可与多种已知药物或活性化合物偶联。研究显示，3,4-二苯磺酰基呋咱氮氧化物在硫醇辅因子作用下释放NO，NO可激活水溶性鸟苷酸环化酶，从而产生血管舒张和抗血小板聚集活性。例如：把一氧化氮供体连接到血管紧张素转化酶抑制剂替米沙坦上形成新化合物后，抗高血压作用较替米沙坦增强，可以减缓高糖高脂饮食诱导的胰岛素抵抗大鼠体重的增加，可以改善其葡萄糖耐量，被认为可能成为有效的抗高血压和抗糖尿病心血管并发症的药物。这些研究结果无疑给降糖新药发展指明了方向。

发明内容

本发明的目的在于提供一种一氧化氮供体型二氢杨梅素衍生物，其具有调节血糖、血脂、抑制血管生成功能作用。

本发明的另一目的在于提供上述一氧化氮供体型二氢杨梅素衍生物的制备方法。

本发明的再一目的在于提供上述一氧化氮供体型二氢杨梅素衍生物的用途。

以下对本发明进行详细描述。

本发明提供的一氧化氮供体型二氢杨梅素衍生物或其药学可接受的水合物，包括其立体异构体或互变异构体，结构如下所示：

式中，R各自独立为H,酰基，被卤素、氨基取代的酰基。A各自独立为烃基，含杂原子烃基，含杂环烃基，含芳环烃基。

所述的一氧化氮供体型二氢杨梅素衍生物具体结构实例如下：

本发明还提供了上述化合物的制备方法：

式中，R各自独立为H,酰基，被卤素、氨基取代的酰基。A各自独立为烃基，含杂原子烃基，含杂环烃基，含芳环烃基。

本发明的一氧化氮供体型二氢杨梅素衍生物或其药学可接受的水合物，包括其立体异构体或互变异构体，具有调节血糖、血脂、促进血管生成和抑制血管生成功能作用。

通过以下实施例进一步举例说明本发明，但应注意本发明的范围并不受这些实施例的任何限制。

具体实施方式

实施例1

中间体(I)的制备：

称取1.6g(5mmol)二氢杨梅素(含量98％)置于50mL的三角瓶中，然后依次加入15ml醋酸酐和1.2g硼酸，混匀，避光放置3天，倒入冰水中研磨，有黄色硼酸络合物析出，过滤，将所得黄色固体物加入40mL含有10％的HC1溶液，于60℃反应30min，除去硼酸，有黄白色固体生成，过滤，用水淋洗至中性，收集固体，干燥后即得粗品。用EtOH重结晶，得白色晶体，即二氢杨梅素四乙酰化产物(中间体I)，产率89％。m.p.205-206℃。

实施例2

中间体(IIa-f)的制备：

3,4-二苯磺酰基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物按文献(高等学校化学学报，2010,31(8):1541-1547)制备。

在反应器中加入2.4mL(40mmol)乙二醇、1.46g(4mmol)中间体(I)和20mLTHF，搅拌，滴加0.72mL(12mmol)50％的NaOH溶液，有黄色固体生成，滴加完毕，反应1h，过滤，浓缩至干，在残余物中加水50mL，乙酸乙酯萃取(3×20mL)，饱和氯化钠溶液洗涤，干燥，浓缩，硅胶柱层析纯化(淋洗剂：V乙酸乙酯：V石油醚＝1:1.5)，得到中间体(IIa)白色固体0.8g，收率70％，m.p.111-113℃。

用2.9mL(40mmol)1,3-丙二醇代替2.4mL(40mmol)乙二醇，操作同上，得到中间体(IIb)白色固体，收率80％，m.p.112-113℃。

用3.5mL(40mmol)1,4-丁二醇代替2.4mL(40mmol)乙二醇，操作同上，得到中间体(IIc)白色固体，收率73％，m.p.70-72℃。

用4.24g(40mmol)羟乙氧基乙醇代替2.4mL(40mmol)乙二醇，操作同上，得到中间体(IId)，收率76％。

用4.20g(40mmol)二乙醇胺代替2.4mL(40mmol)乙二醇，操作同上，得到中间体(IIe)，收率56％。

用5.12g(40mmol)2,5-二羟甲基呋喃代替2.4mL(40mmol)乙二醇，操作同上，得到中间体(IIf)，收率66％。

实施例3

化合物(1)的制备：

在反应器中，加入6mL无水DMF、0.39g(1.5mmol)PPh3、0.488g(1.0mmol)中间体(I)和0.287g(1.0mmol)中间体(IIa)，搅拌，滴加0.404g(1.5mmol)偶氮二羧酸二异丙酯与4mLDMF的溶液，室温反应1h，TLC检测(展开剂：V乙酸乙酯：V氯仿：V甲酸＝10:6:2)，反应完毕，用聚酰胺柱层析纯化，得淡黄色固体，收率61％。ESI-MS(m/z):756[M]+,757[M+1]+；[α]D20＝+30.4°；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm)：2.28(s,6H),2.31(s,3H),2.34(s,3H),3.62(t,4H),4.40(d,J＝11Hz,1H),4.89(d,J＝11Hz,1H),5.85(s,1H),5.90(s,1H),6.40(s,2H),7.57-7.87(m,5H),11.88(s,1H)。

实施例4

化合物(2-6)的制备：

按化合物(1)的制备方法，制备了化合物(2-6)。

化合物(2)：收率65％，ESI-MS(m/z):770[M]+；[α]D20＝+31.0°；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm)：1.38(m,2H),2.28(s,6H),2.30(s,3H),2.34(s,3H),3.62(t,4H),4.41(d,J＝11Hz,1H),4.89(d,J＝11Hz,1H),5.85(s,1H),5.90(s,1H),6.40(s,2H),7.58-7.86(m,5H),11.88(s,1H)。

化合物(3)：收率59％，ESI-MS(m/z):784[M]+；[α]D20＝+29.0°；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm)：1.37(m,4H),2.28(s,6H),2.31(s,3H),2.34(s,3H),3.62(t,4H),4.40(d,J＝11Hz,1H),4.88(d,J＝11Hz,1H),5.85(s,1H),5.91(s,1H),6.40(s,2H),7.57-7.87(m,5H),11.87(s,1H)。

化合物(4)：收率65％，ESI-MS(m/z):800[M]+；[α]D20＝+29.2°；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm)：2.28(s,6H),2.31(s,3H),2.34(s,3H),3.62(t,8H),4.40(d,J＝11Hz,1H),4.88(d,J＝11Hz,1H),5.85(s,1H),5.91(s,1H),6.40(s,2H),7.57-7.87(m,5H),11.87(s,1H)。

化合物(5)：收率51％，ESI-MS(m/z):799[M]+；[α]D20＝+31.7°；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm)：2.28(s,6H),2.31(s,3H),2.34(s,3H),2.76(br,1H),2.78(m,4H),3.61(t,4H),4.40(d,J＝11Hz,1H),4.88(d,J＝11Hz,1H),5.85(s,1H),5.91(s,1H),6.40(s,2H),7.57-7.87(m,5H),11.87(s,1H)。

化合物(6)：收率68％，ESI-MS(m/z):822[M]+；[α]D20＝+31.8°；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm)：2.28(s,6H),2.31(s,3H),2.34(s,3H),4.40(d,J＝11Hz,1H),4.61(s,4H),4.88(d,J＝11Hz,1H),5.85(s,1H),5.91(s,1H),6.14(m,2H),6.40(s,2H),7.57-7.87(m,5H),11.87(s,1H)。

实施例5

化合物(7-10)的制备：

N2保护下，将1mmol的化合物(1)(2)(4)(6)分别加入到10mL30％乙二胺的DMF溶液中，加热至40℃，反应12h，减压浓缩，硅胶层析柱纯化(淋洗剂：V氯仿：V乙醇＝20:1,10:1,6:1,4:1,2:1，1:1梯度淋洗)，分别得到化合物(7-10)。化合物(7)：收率84％，ESI-MS(m/z):603[M]+；[α]D20＝+29.0°；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):3.61(t,4H),4.40(d,J＝11Hz,1H),4.88(d,J＝11Hz,1H),5.57(s,1H),5.85(s,1H),5.91(s,1H),7.57-7.87(m,5H),8.21(s,1H),8.91(s,2H),11.87(s,1H)。

化合物(8)：收率87％，ESI-MS(m/z):617[M]+；[α]D20＝+30.5°；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):1.38(m,2H),3.61(t,4H),4.40(d,J＝11Hz,1H),4.88(d,J＝11Hz,1H),5.57(s,1H),5.85(s,1H),5.91(s,1H),6.40(s,2H),7.57-7.87(m,5H),8.21(s,1H),8.91(s,2H),11.87(s,1H)。

化合物(9)：收率80％，ESI-MS(m/z):647[M]+；[α]D20＝+28.6°；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):3.61(t,8H),4.40(d,J＝11Hz,1H),4.88(d,J＝11Hz,1H),5.57(s,1H),5.85(s,1H),5.91(s,1H),6.40(s,2H),7.57-7.87(m,5H),8.21(s,1H),8.91(s,2H),11.87(s,1H)。

化合物(10)：收率78％，ESI-MS(m/z):654[M]+；[α]D20＝+28.9°；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ(ppm):4.40(d,J＝11Hz,1H),4.61(t,4H),4.88(d,J＝11Hz,1H),5.57(s,1H),5.85(s,1H),5.91(s,1H),6.14(m,2H),6.40(s,2H),7.57-7.87(m,5H),8.21(s,1H),8.91(s,2H),11.87(s,1H)。

实施例6

二氢杨梅素衍生物对大鼠血清葡萄糖和胆固醇的影响

雄性SD大鼠150只，体重200±20g，普通饮食饲养7d后，随机分为正常对照组(10只)和模型组(140只)。正常对照组始终饲以普通饮食。模型组饲以高脂饮食，随意饮水，人工光照明暗各12h。4周后模型组予以腹腔注射35mg/kg链脲佐菌素(STZ)，继续高脂饮食。2周后于眼底静脉丛采血20uL，离心制备血清，采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶终点比色法测血清中的葡萄糖。选取血糖值11.1mmol/L以上的入选高血糖模型。糖尿病模型大鼠130只，随机分成13组，分别为对照组(优降糖)，模型对照组，二氢杨梅素组和二氢杨梅素衍生物组。按20mg/kg剂量灌胃给药(二氢杨梅素组按100mg/kg剂量)，每日1次，模型对照组和正常组给予同体积0.9％的生理盐水，给药15d后，禁食12h，眼底静脉丛采血，制备血清，测血糖，胆固醇用硫酸-磷酸-高铁显色法测定，数据分析用t检验(表1)。结果显示，所述二氢杨梅素衍生物均具有较好的降血糖和降胆固醇作用。

表1二氢杨梅素衍生物对大鼠血清葡萄糖和胆固醇的影响(x±s)

实施例7

二氢杨梅素衍生物鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)实验

鸡胚的处理：用0.1％的新洁尔灭液清洗种蛋。凉干后，气室朝上放人温度37.8℃，相对湿度60％的恒温培养箱内孵育。孵育过程中每天翻蛋两次，每日检查胚胎发育情况；

载体制备：用打孔器将定量滤纸制成直径5mm的圆片高温高压灭菌后备用；

开窗加药：孵育到第5天，将鸡胚随机分成4组：剂量4μg/egg，对照组(1％DMSO)，每组12枚。二氢杨梅素衍生物分别溶于DMSO中配成10mmol/L储液。使用时DMSO终浓度为1％，药液用生理盐水配制。在鸡胚气室一端开一直径1cm左右的窗口，往卵壳膜上滴加2滴生理盐水，5min后，用镊子小心揭去卵壳膜。暴露尿囊膜，将滴加有二氢杨梅素衍生物的滤纸片分别放于血管稀少处，用透明胶带封口，继续孵育48h；

观察拍照：事先配制1：1甲醇与丙酮混合液。每枚种蛋滴加2.5mL.室温固定20min。用体视显微镜观察血管生长状况，并拍照；

数据处理：选取图像清晰者计数观察微孔滤膜载体边缘5mm范围内的血管.凡属趋向性生长的血管，即载体从中心发出、与滤膜半径的夹角小于45°者均予计数，而穿行、绕行的血管则不算在内。计量资料用平均数±标准差(x±s)表示。数据分析用t检验(表2)。结果表明：所述二氢杨梅素衍生物能抑制CAM的血管生成。

表2二氢杨梅素衍生物对鸡胚尿囊膜血管数目的影响(x±s)

一氧化氮供体型二氢杨梅素衍生物及其制备和应用专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。