专利摘要

本发明涉及化学结构式I所示的5‑胡椒基噻唑衍生物或其盐在制备抗癌药物中的应用：其中，R选自：C1～C2烷基；C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基；X1、X5选自：氢、氘、C1～C2烷基、氟、氯、溴或硝基；X2、X4选自：氢、氘、C1～C2烷基、氟、氯、溴、硝基或三氟甲基；X3选自：氢、氘、C1～C2烷基、甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴、硝基、乙氧甲酰基或三氟甲基；所述盐选自：盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、苹果酸盐、乳酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐或富马酸盐。

权利要求

1.化学结构式Ⅰ所示的5-胡椒基噻唑衍生物或其盐在制备抗癌药物中的应用：

其中，R选自：C₁～C₂烷基；C₃～C₄直链烷基或C₃～C₄支链烷基；X¹、X⁵选自：氢、氘、C₁～C₂烷基、氟、氯、溴或硝基；X²、X⁴选自：氢、氘、C₁～C₂烷基、氟、氯、溴、硝基或三氟甲基；X³选自：氢、氘、C₁～C₂烷基、甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴、硝基、乙氧甲酰基或三氟甲基；所述盐选自：盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、苹果酸盐、乳酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐或富马酸盐。

2.权利要求1所述的应用，其中式Ⅰ所示的5-胡椒基噻唑衍生物选自：5-胡椒基-4-叔丁基-2-(3-甲基苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(2-氟苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-氟苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(2-氯苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(3-氯苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-氯苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(3-溴苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-溴苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-[3-(三氟甲基)苯氨基]噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-[4-(三氟甲基)苯氨基]噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-甲氧基苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-硝基苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-乙氧甲酰基苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(3，4-二氯苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(3，5-二氯苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-氟-3-氯苯氨基)噻唑或5-胡椒基-4-叔丁基-2-[3，5-二(三氟甲基)苯氨基]噻唑。

说明书

技术领域

本发明涉及化合物的新用途，具体是5-胡椒基噻唑衍生物在制备抗癌药物中的应用。

背景技术

中国发明专利[CN 104530035A，2015年4月22日公开]描述了5-胡椒基-4-烷基-2-芳氨基噻唑衍生物或其盐在制备抗农用杀菌剂和杀虫剂中的应用。胡艾希等描述了5-苄基-4-烷基-2-芳氨基噻唑衍生物及其盐在制备抗癌药物中的应用[高等学校化学学报，2013，34(7)：1646～1652；中国发明专利CN 102070556B，2013年3月20日授权；中国发明专利CN 102319244A，2012年1月18日公开]。

发明内容

本发明的目的在于提供化学结构式Ⅰ所示的5-胡椒基噻唑衍生物或其盐在制备抗癌药物中的应用：

其中，R选自：C₁～C₂烷基；C₃～C₄直链烷基或C₃～C₄支链烷基；X¹、X⁵选自：氢、氘、C₁～C₂烷基、氟、氯、溴或硝基；X²、X⁴选自：氢、氘、C₁～C₂烷基、氟、氯、溴、硝基或三氟甲基；X³选自：氢、氘、C₁～C₂烷基、甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴、硝基、乙氧甲酰基或三氟甲基；所述盐选自：盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、苹果酸盐、乳酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐或富马酸盐。

本发明的目的在于提供了5-胡椒基噻唑衍生物选自：5-胡椒基-4-叔丁基-2-(3-甲基苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(2-氟苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-氟苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(2-氯苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(3-氯苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-氯苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(3-溴苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-溴苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-[3-(三氟甲基)苯氨基]噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-[4-(三氟甲基)苯氨基]噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-甲氧基苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-硝基苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-乙氧甲酰基苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(3，4-二氯苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(3，5-二氯苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-氟-3-氯苯氨基)噻唑或5-胡椒基-4-叔丁基-2-[3，5-二(三氟甲基)苯氨基]噻唑。

本发明与现有技术相比具有如下优点：

5-胡椒基噻唑衍生物或其盐具有良好的抗癌活性。

具体实施方式

以下实施例旨在说明本发明而不是对本发明的进一步限定。

实施例1

5-胡椒基-4-叔丁基-2-(2-甲基苯氨基)噻唑的制备

2mmol 2，2-二甲基-5-(3，4-亚甲二氧基)-4-溴-3-戊酮、2mmol 2-甲基苯基硫脲，15mL丙酮，回流8h，反应液用氨水调节pH7，柱层析得黄色油状物5-胡椒基-4-叔丁基-2-(2-甲基苯氨基)噻唑，收率60.4％。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：1.45(s，9H，3×CH₃)，2.34(s，3H，CH₃)，4.06(s，2H，CH₂)，5.94(s，2H，OCH₂O)，6.62～6.75(m，3H，C₆H₃)，7.01～7.26(m，4H，C₆H₄)。

实施例2

5-胡椒基-4-叔丁基-2-(3-甲基苯氨基)噻唑的制备

制备方法同实施例1，反应8h，得到黄色油状物5-胡椒基-4-叔丁基-2-(3-甲基苯氨基)噻唑，收率65.4％。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：1.45(s，9H，3×CH₃)，2.33(s，3H，CH₃)，4.08(s，2H，CH₂)，5.96(s，2H，OCH₂O)，6.64～6.77(m，3H，C₆H₃)，6.91(d，J＝7.6Hz，1H，C₆H₄4-H)，7.07(d，J＝7.6Hz，2H，C₆H₄6-H)，7.08(s，1H，C₆H₄2-H)，7.22(t，J＝8Hz，1H，C₆H₄5-H)。

实施例3

5-胡椒基-4-叔丁基-2-(3-溴苯氨基)噻唑的制备

制备方法同实施例1，反应6h，得到黄色油状物5-胡椒基-4-叔丁基-2-(3-溴苯氨基)噻唑，收率48.9％；¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：1.41(s，9H，3×CH₃)，4.11(s，2H，CH₂)，5.95(s，2H，OCH₂O)，6.65～6.76(m，3H，C₆H₃)，7.12～7.23(m，3H，C₆H₄4，5，6-H)，7.60(s，1H，C₆H₄2-H)。

实施例4

5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-溴苯氨基)噻唑的制备

制备方法同实施例1，反应6h，得到黄色固体5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-溴苯氨基)噻唑，收率51.1％，m.p.118～120℃；¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：1.41(s，9H，3×CH₃)，4.10(s，2H，CH₂)，5.95(s，2H，OCH₂O)，6.65～6.76(m，3H，C₆H₃)，7.22(d，J＝8.8Hz，2H，C₆H₄2，6-H)，7.40(d，J＝8.8Hz，2H，C₆H₄3，5-H)。

实施例5

5-胡椒基-4-叔丁基-2-[4-(三氟甲基)苯氨基]噻唑的制备

制备方法同实施例1，反应6h，得到黄色油状物5-胡椒基-4-叔丁基-2-[4-(三氟甲基)苯氨基]噻唑，收率74.5％，；¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：1.43(s，9H，3×CH₃)，4.12(s，2H，CH₂)，5.96(s，2H，OCH₂O)，6.66～6.77(m，3H，C₆H₃)，7.42(d，J＝8.4Hz 2H，C₆H₄2，6-H)，7.56(d，J＝8.4Hz，2H，C₆H₄3，5-H)。

实施例6

5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-甲氧基苯氨基)噻唑的制备

2mmol 2，2-二甲基-5-(3，4-亚甲二氧基)-4-溴-3-戊酮、2mmol 4-甲氧基苯基硫脲，15mL乙醇，回流8h，反应液用氨水调节pH7，蒸去部分溶剂，冷冻析晶，过滤，干燥，得黄色固体5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-甲氧基苯氨基)噻唑，收率27.0％，m.p.147.0～149.0℃；¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：1.34(s，9H，3×CH₃)，3.73(s，3H，OCH₃)，4.05(s，2H，CH₂)，5.98(s，2H，OCH₂O)，6.67(d，J＝8Hz，1H，C₆H₃5-H)，6.75(s，1H，C₆H₃2-H)，6.84(d，J＝8Hz，1H，C₆H₃6-H)，7.22(d，J＝8.4Hz，2H，C₆H₄3，5-H)，7.47(d，J＝8.4Hz，2H，C₆H₄2，6-H)，9.48(s，1H，NH)。

实施例7

5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-乙氧甲酰基苯氨基)噻唑的制备

制备方法同实施例6，反应6h，得米白色固体5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-乙氧甲酰基苯氨基)噻唑，收率75.3％，m.p.177～180℃；¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：1.38(t，J＝7.2Hz，3H，CH₃)，1.44(s，9H，3×CH₃)，4.12(s，2H，CH₂)，4.35(q，J＝7.2Hz，2H，OCH₂)，5.96(s，2H，OCH₂O)，6.67(d，J＝8Hz，1H，C₆H₃5-H)，6.69(s，1H，C₆H₃2-H)，6.76(d，J＝8Hz，1H，C₆H₃6-H)，7.34(d，J＝8.8Hz，2H，C₆H₄2，6-H)，8.01(d，J＝8.8Hz，2H，C₆H₄3，5-H)。

实施例8

5-胡椒基-4-叔丁基-2-(3，4-二氯苯氨基)噻唑的制备

制备方法同实施例1，反应8h，得到黄色固体5-胡椒基-4-叔丁基-2-(3，4-二氯苯氨基)噻唑，收率69.0％，m.p.124～126℃；¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：1.41(s，9H，3×CH₃)，4.11(s，2H，CH₂)，5.95(s，2H，OCH₂O)，6.65～6.76(m，3H，C₆H₃)，1.55(dd，J₁＝8.4Hz，J₂＝2.8Hz，ClC₆H₃6-H)，7.33(d，J＝8.4Hz，1H，ClC₆H₃5-H)，7.63(d，J＝2.8Hz，ClC₆H₃2-H)。

实施例9

5-胡椒基-4-叔丁基-2-(3，5-二氯苯氨基)噻唑的制备

制备方法同实施例1，反应8h，得到黄色固体5-胡椒基-4-叔丁基-2-(3，5-二氯苯氨基)噻唑，收率64.4％，m.p.99～101℃；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ：1.41(s，9H，3×CH₃)，4.12(s，2H，CH₂)，5.95(s，2H，OCH₂O)，6.65～6.76(m，3H，C₆H₃)，6.96(t，J＝1.6Hz，1H，ClC₆H₃4-H)，7.34(d，J＝1.6Hz，2H，ClC₆H₃2，6-H)。

实施例10

5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-氟-3-氯苯氨基)噻唑的制备

制备方法同实施例1，反应8h，得到黄色固体5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-氟-3-氯苯氨基)噻唑，收率77.4％，m.p.100～102℃；¹H NMR(CDCl₃，400MHz)δ：1.51(s，9H，3×CH₃)，4.07(s，2H，CH₂)，5.98(s，2H，OCH₂O)，6.63～6.79(m，3H，C₆H₃)，7.15～7.40(m，3H，FC₆H₃)。

实施例11

5-胡椒基噻唑衍生物(Ⅰ)及其盐的制备

其中R选自：C₁～C₂烷基；C₃～C₄直链烷基或C₃～C₄支链烷基；X¹、X⁵选自：氢、氘、C₁～C₂烷基、氟、氯、溴或硝基；X²、X⁴选自：氢、氘、C₁～C₂烷基、氟、氯、溴、硝基或三氟甲基；X³选自：氢、氘、C₁～C₂烷基、甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴、硝基、乙氧甲酰基或三氟甲基。所述盐选自：盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、苹果酸盐、乳酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐或富马酸盐。

按中国发明专利[CN104530035A，2015.4.22公开]方法制备5-胡椒基噻唑衍生物(Ⅰ)。

其中，5-胡椒基-4-叔丁基-2-(2-氟苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-氟苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(2-氯苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(3-氯苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-氯苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-[3-(三氟甲基)苯氨基]噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(4-硝基苯氨基)噻唑、5-胡椒基-4-叔丁基-2-(3，4-二甲基苯氨基)噻唑和5-胡椒基-4-叔丁基-2-[3，5-二(三氟甲基)苯氨基]噻唑及其盐按中国发明专利[CN104530035A]方法制备。中国发明专利[CN104530035A]公开了这些化合物的物性和谱图数据。

实施例12

5-胡椒基噻唑衍生物及其盐的抗肿瘤活性

1.抗肿瘤活性原理

MTT法生物活性测试又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。MTT分析法以活细胞代谢物还原剂噻唑蓝[3-(4，5-二甲基-2-噻唑)-2，5-二苯基溴化四氮唑；3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide，MTT]为基础。MTT是一种能接受氢原子的染料。活细胞线粒体中与NADP相关的脱氢酶在细胞内可将黄色的MTT转化成不溶性的蓝紫色的甲瓒(formazon)，而死细胞则无此功能。用DMSO溶解formazon后，在一定波长下用酶标仪测定光密度值，既可定量测出细胞的存活率。根据光密度值的变化观察样品对肿瘤细胞的抑制作用。

2.抗肿瘤活性实验

试样：5-胡椒基噻唑衍生物(Ⅰ)及其盐。

其中R选自：C₁～C₂烷基；C₃～C₄直链烷基或C₃～C₄支链烷基；X¹、X⁵选自：氢、氘、C₁～C₂烷基、氟、氯、溴或硝基；X²、X⁴选自：氢、氘、C₁～C₂烷基、氟、氯、溴、硝基或三氟甲基；X³选自：氢、氘、C₁～C₂烷基、甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴、硝基、乙氧甲酰基或三氟甲基。

所述盐选自：盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、苹果酸盐、乳酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐或富马酸盐。

细胞系：宫颈癌细胞系Hela、肺腺癌细胞系A549和乳腺癌细胞系MCF-7(中南大学湘雅医学院细胞库提供)。

试剂：噻唑蓝(MTT)、RPMI 1640培养液、新生牛血清、抗生素(美国英杰生命技术公司)；胰酶(美国AMRESCO公司)；96孔培养板(美国英杰生命技术公司)；二甲基亚砜(美国Sigma公司)。

仪器：HFsafe-1500型超净工作台、HF151UV型CO₂培养箱(上海力申科学仪器有限公司)；XSP-15C型倒置显微镜(上海长方光学仪器有限公司)；Multiskan MK3型酶标仪(美国Thermo公司)；超纯水制备仪(美国Milli-Q公司)。

实验操作：试样对Hela细胞、A549细胞和MCF-7细胞的测试。每种细胞的实验操作过程相同，一次实验过程中，每种试样设置5个浓度梯度(0.010μmol/mL、0.030μmol/mL、0.100μmol/mL、0.300μmol/mL和1.000μmol/mL)，每个浓度四个平行试样，每组实验平行3次，并通过空白组对照得出结论。酶标仪检测各孔OD值，检测波长570nm。

3.抗肿瘤活性评价

(1)细胞抑制率计算：

(2)IC₅₀值计算

试样浓度对数值与细胞抑制率线性回归，利用软件计算试样对细胞的半数抑制浓度IC₅₀值。优选化合物对Hela细胞、A549细胞和MCF-7细胞的IC₅₀见表1～3。

表1 5-胡椒基噻唑衍生物对Hela细胞的抑制活性

表2 5-胡椒基噻唑衍生物对A549细胞的抑制活性

表3 5-胡椒基噻唑衍生物对MCF-7细胞的抑制活性

活性测试结果显示，5-胡椒基噻唑衍生物或其盐对宫颈癌细胞(Hela细胞)、人肺腺癌细胞(A549细胞)和人乳腺癌细胞(MCF-7细胞)具有良好的抑制活性，可用于制备抗肿瘤药物。

5-胡椒基噻唑衍生物作为抗癌药物的应用专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。