专利摘要

本发明公开了结构式Ⅰ所示的N‑(5‑胡椒基噻唑‑2‑基)酰胺衍生物及其药学上可接受的盐，其制备方法和药物组合物以及其在制备抗癌药物中的应用：式中R选自：C1～C2烷基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基；Z选自：CH2或O；n选自：1、2或3。

权利要求

1.一类化学结构式Ⅰ所示的N-(5-胡椒基噻唑-2-基)酰胺衍生物及其药学上可接受的盐：

式中R选自：C₁～C₂烷基、C₃～C₄直链烷基或C₃～C₄支链烷基；Z选自：CH₂或O；n选自：1、2或3。

2.权利要求1所述的N-(5-胡椒基噻唑-2-基)酰胺衍生物的制备方法，其特征在于它的制备反应如下：

式中，R、Z和n如权利要求1所述。

3.权利要求1所述的N-(5-胡椒基噻唑-2-基)酰胺衍生物在制备抗癌药物中的应用。

4.权利要求1所述的N-(5-胡椒基噻唑-2-基)酰胺衍生物在制备抗宫颈癌药物中的应用。

5.权利要求1所述的N-(5-胡椒基噻唑-2-基)酰胺衍生物在制备抗人肺腺癌药物中的应用。

6.权利要求1所述的N-(5-胡椒基噻唑-2-基)酰胺衍生物在制备抗人乳腺癌药物中的应用。

说明书

技术领域

本发明涉及一类新化合物、其制备方法与应用，具体是N-(5-胡椒基噻唑-2-基)酰胺衍生物、其制备方法及其在制备抗癌药的应用。

背景技术

Abou-Seri等[Eur Med Chem,2016,107,165-179]描述了化合物A对血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)激酶的IC₅₀为0.40±0.04μM，与阳性对照物瓦他拉尼(Vatalanib，IC₅₀＝0.18±0.02μM)接近；细胞活性测试显示，该化合物对多种癌细胞的GI₅₀低于阳性对照物索拉菲尼(Sorafenib)；El-Messery等[Eur Med Chem,2012,54,615-625]描述了化合物B对多种癌细胞具有较好的体外抑制作用；在5μM的浓度下，该化合物对HCT-15和UO-31的抑制率分别为54.6％和51.4％；Gurdal等[J Enzyme Inhibition and Med Chem,2015,30,649-654.]描述了化合物C对HCT-116、MCF-7和HUH-7的GI₅₀分别为7.9μM、9.2μM和3.1μM，其中，对HCT-116和HUH-7的抑制活性优于阳性对照物5-氟尿嘧啶(5-FU，GI₅₀分别为30.66μM和18.67μM)；Biswal等[WO2014145642A2,2014]描述了以核转录因子Nrf2为靶点的抗癌化合物，其中化合物D对A549和H1437细胞的抑制活性好。

发明内容

本发明解决的技术问题是提供一类N-(5-胡椒基噻唑-2-基)酰胺衍生物、其制备方法、药物组合物和医药用途。

为解决本发明的技术问题，本发明提供如下技术方案：

本发明技术方案的第一方面是提供了一类如结构式Ⅰ所示的N-(5-胡椒基噻唑-2-基)酰胺衍生物及其在药学上可接受的盐：

式中R选自：C₁～C₂烷基、C₃～C₄直链烷基或C₃～C₄支链烷基；Z选自：CH₂或O；n选自：1、2或3。

本发明技术方案的第二方面是提供了第一方面所述通式I所示的N-(5-胡椒基噻唑-2-基)酰胺衍生物的制备方法，其特征在于它的制备反应如下：

式中R选自：C₁～C₂烷基、C₃～C₄直链烷基或C₃～C₄支链烷基；Z选自：CH₂或O；n选自：1、2或3。

本发明技术方案的第三方面是提供含有第一方面所述化合物及其药学上可接受的盐的药物组合物，该药物组合物含有治疗有效量的本发明的N-(5-胡椒基噻唑-2-基)酰胺衍生物及其药学上可接受的盐，以及任选的含有药用载体。其中所述的药用载体指药学领域常用的药用载体；该药物组合物可根据本领域公知的方法制备。可通过将本发明化合物及其药学上可接受的盐与一种或多种药学上可接受的固体或液体赋形剂和/或辅剂组合，制成适于人或动物使用的任何剂型。本发明化合物及其药学上可接受的盐在其药物组合物中的含量通常为0.1％～95％重量百分比。

本发明化合物及其药学上可接受的盐或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮肤、阴道、直肠等。

给药剂型可以是液体剂型、固体剂型或半固体剂型。液体剂型可以是溶液剂(包括真溶液和胶体溶液)、乳剂(包括o/w型、w/o型和复乳)、混悬剂、注射剂(包括水针剂、粉针剂和输液)、滴眼剂、滴鼻剂、洗剂和搽剂等；固体剂型可以是片剂(包括普通片、肠溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口腔崩解片)、胶囊剂(包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊)、颗粒剂、散剂、微丸、滴丸、栓剂、膜剂、贴片、气(粉)雾剂、喷雾剂等；半固体剂型可以是软膏剂、凝胶剂、糊剂等。

本发明化合物及其药学上可接受的盐可以制成普通制剂、也制成是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。

为了将本发明化合物及其药学上可接受的盐制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂，包括稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助流剂。稀释剂可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等；湿润剂可以是水、乙醇、异丙醇等；粘合剂可以是淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解剂可以是干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠与枸橼酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠等；润滑剂和助流剂可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸盐、酒石酸、液体石蜡、聚乙二醇等。

还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。

为了将给药单元制成胶囊剂，可以将有效成分本发明化合物及其药学上可接受的盐与稀释剂、助流剂混合，将混合物直接置于硬胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明化合物及其药学上可接受的盐先与稀释剂、黏合剂、崩解剂制成颗粒或微丸，再置于硬胶囊或软胶囊中。用于制备本发明化合物及其药学上可接受的盐片剂的各稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、助流剂品种也可用于制备本发明化合物及其药学上可接受的盐的胶囊剂。

为将本发明化合物及其药学上可接受的盐制成注射剂，可以用水、乙醇、异丙醇、丙二醇或它们的混合物作溶剂并加入适量本领域常用的增溶剂、助溶剂、pH调剂剂、渗透压调节剂。增溶剂或助溶剂可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羟丙基-β-环糊精等；pH调剂剂可以是磷酸盐、醋酸盐、盐酸、氢氧化钠等；渗透压调节剂可以是氯化钠、甘露醇、葡萄糖、磷酸盐、醋酸盐等。如制备冻干粉针剂，还可加入甘露醇、葡萄糖等作为支撑剂。

此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂或其它添加剂。

为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的药物或药物组合物可用任何公知的给药方法给药。

本发明技术方案的第四方面是提供本发明第一方面所述N-(5-胡椒基噻唑-2-基)酰胺衍生物及其药学上可接受的盐以及第三方面所述药物组合物在制备抗癌药物方面的应用。

进一步，本发明第一方面所述N-(5-胡椒基噻唑-2-基)酰胺衍生物及其药学上可接受的盐以及第三方面所述药物组合物在制备抗宫颈癌药物方面的应用。

进一步，本发明第一方面所述N-(5-胡椒基噻唑-2-基)酰胺衍生物及其药学上可接受的盐以及第三方面所述药物组合物在制备抗人肺腺癌药物方面的应用。

进一步，本发明第一方面所述N-(5-胡椒基噻唑-2-基)酰胺衍生物及其药学上可接受的盐以及第三方面所述药物组合物在制备抗人乳腺癌药物方面的应用。

有益技术效果：本发明的N-(5-胡椒基噻唑-2-基)酰胺衍生物是一类新结构类型的具有抗癌活性的化合物。

具体实施方式

以下实施例旨在说明本发明而不是对本发明的进一步限定。

实施例1

N-(5-胡椒基-4-叔丁基噻唑-2-基)氯乙酰胺的制备

1.55mmol5-胡椒基-4-叔丁基-2-氨基噻唑、1.7mmol三乙胺溶于15mL二氯甲烷中，搅拌至固体完全溶解，在冰浴下缓慢滴加1.7mmol氯乙酰氯的5mL二氯甲烷溶液；TLC跟踪反应进程，0.5h反应完毕，反应液水洗3次，无水Na₂SO₄干燥，旋蒸二氯甲烷，加入少量石油醚和乙酸乙酯混合液，缓慢析出白色固体，收集白色固体，干燥，得到白色固体N-(5-胡椒基-4-叔丁基噻唑-2-基)氯乙酰胺0.45g，收率82％，m.p.127～129℃，¹H NMR(400MHz，CDCl₃)，δ：1.38(s，9H，3×CH₃)，4.15(s，2H，CH₂)，4.22(s，2H，ClCH₂)，5.94(s，2H，OCH₂O)，6.64(d，J＝8.0Hz，1H，C₆H₃ 6-H)，6.66(s，1H，C₆H₃ 2-H)，6.74(d，J＝8.0Hz，1H，C₆H₃ 5-H)。¹³C NMR(101MHz，CDCl₃)δ：30.80，32.54，35.65，41.91，100.89，108.18，108.75，121.20，125.27，134.03，146.17，147.74，151.86，153.48，163.58。

实施例2

N-(5-胡椒基-4-叔丁基噻唑-2-基)-3-氯丙酰胺的制备

1.55mmol 5-胡椒基-4-叔丁基-2-氨基噻唑、1.7mmol三乙胺溶于15mL二氯甲烷中，搅拌至固体完全溶解，在冰浴下缓慢滴加1.7mmol3-氯丙酰氯的5mL二氯甲烷溶液；TLC跟踪反应进程，0.5h反应完毕，反应液水洗3次，无水Na₂SO₄干燥，旋蒸二氯甲烷，加入少量石油醚和乙酸乙酯混合液，缓慢析出白色固体，收集白色固体，干燥，得到白色固体N-(5-胡椒基-4-叔丁基噻唑-2-基)-3-氯丙酰胺0.50g，收率85％，m.p.143～145℃，¹H NMR(400MHz，CDCl₃)，δ:1.38(s，9H，3×CH₃)，1.93(d，J＝7.0Hz，3H，CH₃)，4.15(s，2H，CH₂)，4.54(q，J＝7.0Hz，1H，CH)，5.94(s，2H，OCH₂O)，6.65(d，J＝8.0Hz，1H，C₆H₃ 6-H)，6.66(s，1H，C₆H₃ 2-H)，6.73(d，J＝8.0Hz，1H，C₆H₃5-H)。¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ：22.14，30.77，32.59，35.62，42.59，100.92，108.21，108.78，121.25，125.09，133.89，146.20，147.75，152.63，153.23，167.05。

实施例3

N-(5-胡椒基-4-叔丁基噻唑-2-基)-3-(哌啶基)丙酰胺的合成

0.55mmol N-(5-胡椒基-4-叔丁基噻唑-2-基)-3-氯丙酰胺，0.83mmol哌啶，0.8mmol三乙胺，溶于10mL四氢呋喃中，室温搅拌24h，反应液用50mL乙酸乙酯稀释，水洗一次，饱和食盐水洗一次，无水Na₂SO₄干燥，减压蒸馏脱溶，加入数滴石油醚，析出固体，抽滤，干燥，得到白色固体N-(5-胡椒基-4-叔丁基噻唑-2-基)-3-(哌啶基)丙酰胺0.18g，收率84％，m.p.124～126℃，¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ1.35(s，9H，3×CH₃)，1.55(s，2H，哌啶环4-H)，1.70～1.78(m，4H，哌啶环3,5-H)，2.51(t，J＝5.6Hz，2H，CH₂)，2.56(s，4H，哌啶环2,6-H)，2.67(t，J＝5.6Hz，2H，COCH₂)，4.14(s，2H，CH₂)，5.92(s，2H，OCH₂O)，6.63～6.69(m，2H，C₆H₃)，6.71(d，J＝8.0Hz，1H，C₆H₃)，12.90(bs，1H，NH)。

实施例4

N-(5-胡椒基-4-叔丁基噻唑-2-基)-2-(吗啉基)乙酰胺的合成

0.55mmol N-(5-胡椒基-4-叔丁基噻唑-2-基)氯乙酰胺，0.83mmol1-甲基哌嗪，0.8mmol三乙胺，溶于10mL四氢呋喃中，室温搅拌12h，反应液用50mL乙酸乙酯稀释，水洗一次，饱和食盐水洗一次，无水Na₂SO₄干燥，减压蒸馏脱溶，加入数滴石油醚，析出固体，抽滤，干燥，得到白色固体N-(5-胡椒基-4-叔丁基噻唑-2-基)-2-(吗啉基)乙酰胺0.21g，收率90％，m.p.160～162℃，¹H NMR(400MHz，CDCl₃)δ1.40(s，9H，3×CH₃)，2.59～2.63(m，4H，吗啉环3,5-H)，3.21(s，2H，COCH₂)，3.83(s，4H，吗啉环2,6-H)，4.15(s，2H，CH₂)，5.94(s，2H，OCH₂O)，6.64～6.66(m，2H，C₆H₃)，6.73(d，J＝8.0Hz，1H，C₆H₃)，9.91(s，1H，NH)。¹³C NMR(101MHz，CDCl₃)δ30.89，32.55，35.65，53.83，61.60，66.70，100.95，108.24，108.81，121.26，124.45，134.08，146.21，147.79，152.95，167.89。

实施例5

N-(5-胡椒基噻唑-2-基)酰胺衍生物及其盐的抗肿瘤活性

1.抗肿瘤活性原理

MTT法生物活性测试又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。MTT分析法以活细胞代谢物还原剂噻唑蓝[3-(4，5-二甲基-2-噻唑)-2，5-二苯基溴化四氮唑；3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenyltetrazolium bromide，MTT]为基础。MTT是一种能接受氢原子的染料。活细胞线粒体中与NADP相关的脱氢酶在细胞内可将黄色的MTT转化成不溶性的蓝紫色的甲瓒(formazon)，而死细胞则无此功能。用DMSO溶解formazon后，在一定波长下用酶标仪测定光密度值，既可定量测出细胞的存活率。根据光密度值的变化观察样品对肿瘤细胞的抑制作用。

2.抗肿瘤活性实验

试样：实施例化合物。

细胞系：宫颈癌细胞系Hela、肺腺癌细胞系A549和乳腺癌细胞系MCF-7(中南大学湘雅医学院细胞库提供)。

试剂：噻唑蓝(MTT)、RPMI 1640培养液、新生牛血清、抗生素(美国英杰生命技术公司)；胰酶(美国AMRESCO公司)；96孔培养板(美国英杰生命技术公司)；二甲基亚砜(美国Sigma公司)。

仪器：HFsafe-1500型超净工作台、HF151UV型CO₂培养箱(上海力申科学仪器有限公司)；XSP-15C型倒置显微镜(上海长方光学仪器有限公司)；Multiskan MK3型酶标仪(美国Thermo公司)；超纯水制备仪(美国Milli-Q公司)。

实验操作：试样对Hela细胞、A549细胞和MCF-7细胞的测试。每种细胞的实验操作过程相同，一次实验过程中，每种试样设置5个浓度梯度(10μM、30μM、100μM、300μM和1000μM)，每个浓度四个平行试样，每组实验平行3次，并通过空白组对照得出结论。酶标仪检测各孔OD值，检测波长570nm。

3.抗肿瘤活性评价

1)细胞抑制率计算：

2)IC₅₀值计算

试样浓度对数值与细胞抑制率线性回归，利用软件计算试样对细胞的半数抑制浓度IC₅₀值。优选N-(5-胡椒基-4-叔丁基噻唑-2-基)-3-(哌啶基)丙酰胺对MCF-7细胞、Hela细胞和A549细胞的IC₅₀分别为30.8±5.6μM、13.8±1.6μM和25.7±2.6μM；N-(5-胡椒基-4-叔丁基噻唑-2-基)-2-(吗啉基)乙酰胺对宫颈癌Hela细胞的IC₅₀为6.4±2.2μM。

活性测试结果显示，N-(5-胡椒基噻唑-2-基)酰胺衍生物对宫颈癌细胞(Hela细胞)、人肺腺癌细胞(A549细胞)和人乳腺癌细胞(MCF-7细胞)具有良好的抑制活性，可用于制备抗肿瘤药物。

N-(5-胡椒基噻唑-2-基)酰胺衍生物及其作为抗肿瘤药的应用专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。