专利摘要

本发明涉及一种分离自金钱草的异香豆素类化合物及其作为抗氧化剂的应用，所述异香豆素类化合物具有式I、式II所示结构：

权利要求

1.一种同时制备式I、式II化合物的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)将干燥的金钱草全草粉碎，过20目筛，得金钱草粉末，备用；

(2)取步骤(1)得到的金钱草粉末，用体积分数95％乙醇回流提取5-6小时，过滤、滤液经冷冻干燥得醇提物；

(3)取步骤(2)得到的醇提物用水分散后，用乙酸乙酯萃取2-3次，合并有机层浓缩后，经正相硅胶柱层析、凝胶柱层析、高效液相色谱分离得到式I、式II化合物；

步骤(2)中95％乙醇的用量为金钱草粉末质量的6-8倍；

步骤(3)中水的用量为醇提物质量的25-30倍，每次萃取使用乙酸乙酯的体积与水的体积相同；所述正相硅胶柱层析采用的固定相为200～300目硅胶，流动相为体积比3:1的石油醚/乙酸乙酯混合溶剂；所述凝胶柱层析的固定相为sephadex LH-20，流动相为体积比为1:1的二氯甲烷/甲醇混合溶剂；所述高效液相色谱的色谱条件为：色谱柱为Agilent C18,9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH∶H2O＝60∶40；

所述式I、式II化合物结构：

说明书

技术领域

本发明属于药用植物提取领域，具体涉及一种分离自金钱草的异香豆素类化合物及其作为抗氧化剂的应用。

背景技术

金钱草，中药名，为报春花科植物过路黄的干燥全草，有清热利尿、散瘀消肿、祛风止痛等功效。金钱草的主要化学成分有黄酮类、酚类、苷类、内脂类、鞣质、挥发油、氨基酸、胆碱、甾醇等。本发明提供一种从金钱草中分离异香豆素的方法，并测试异香豆素类化合物的抗氧化活性。

发明内容

本发明提供一种分离自金钱草的异香豆素类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于所述异香豆素类化合物具有式I、式II所示结构：

本发明的另一实施方案提供一种同时制备上述式I、式II化合物的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)将干燥的金钱草全草粉碎，过20目筛，得金钱草粉末，备用；

(2)取步骤(1)得到的金钱草粉末，用体积分数95％乙醇回流提取5-6小时，过滤、滤液经冷冻干燥得醇提物；

(3)取步骤(2)得到的醇提物用水分散后，用乙酸乙酯萃取2-3次，合并有机层浓缩后，经正相硅胶柱层析、凝胶柱层析、高效液相色谱分离得到式I、式II化合物。

步骤(2)中95％乙醇的用量为金钱草粉末质量的6-8倍；

步骤(3)中水的用量为醇提物质量的25-30倍，每次萃取使用乙酸乙酯的体积与水的体积相同；所述正相硅胶柱层析采用的固定相为200～300目硅胶，流动相为体积比3:1的石油醚/乙酸乙酯混合溶剂；所述凝胶柱层析的固定相为sephadex LH-20，流动相为体积比为1:1的二氯甲烷/甲醇混合溶剂；所述高效液相色谱的色谱条件为：色谱柱为AgilentC18,9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH∶H2O＝60∶40。

本发明的另一实施方案提供上述式I、式II化合物或其药学上可接受的盐作为抗氧剂的应用。

本发明的另一实施方案提供上述式I、式II化合物或其药学上可接受的盐在清除自由基方面的应用。所述自由基优选DPPH自由基、超氧阴离子自由基。

本发明的另一实施方案提供一种药物组合物，其特征在于该药物组合物以上述式I、式II化合物或其药学上可接受的盐作为有效成分。该药物组合物还可包括适量的药学上可接受的药用辅料。

具体实施方式

为了便于对本发明的进一步理解，下面提供的实施例对其做了更详细的说明。但是这些实施例仅供更好的理解发明而并非用来限定本发明的范围或实施原则，本发明的实施方式不限于以下内容。

实施例1

(1)将干燥的金钱草全草粉碎，过20目筛，得金钱草粉末，备用；

(2)取步骤(1)得到的金钱草粉末(1.0kg)，用体积分数95％乙醇(6.0kg)回流提取6小时，过滤、滤液经冷冻干燥得醇提物(12.23g)；

(3)取醇提物(3.0g)用水(75mL)分散后，用乙酸乙酯萃取3次(75mL×3)，合并有机层浓缩后，依次经正相硅胶柱层析(固定相为200～300目硅胶，流动相为体积比3:1的石油醚/乙酸乙酯混合溶剂)、凝胶柱层析(固定相为sephadex LH-20，流动相为体积比为1:1的二氯甲烷/甲醇混合溶剂)、高效液相色谱(色谱柱为Agilent C18,9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH∶H2O＝60∶40)分离得到式I(12.3mg)、式II化合物(15.2mg)。

式I化合物：1H NMR(500MHz,acetone-d6)δ:11.33(1H,brs,8-OH),6.76(1H,d,J＝2.0Hz,H-5),6.40(1H,d,J＝2.0Hz,H-7),4.61(2H,s,H-10),2.34(3H,s,H-9)；13C NMR(125MHz,acetone-d6,)δ:166.6(C,C-1),166.5(C,C-6),164.8(C,C-8),153.7(C,C-3),140.9(C,C-4a),114.3(C,C-4),102.2(CH,C-5),102.0(CH,C-7),99.9(C,C-8a),57.4(CH2,C-10),16.9(CH3,C-9)；ESI-MS m/z 223.0[M+H]+,467.0[2M+Na]+.

式II化合物：1H NMR(500MHz,acetone-d6)δ:6.55(1H,d,J＝2.0Hz,H-5),6.41(1H,d,J＝2.0Hz,H-7),5.12(2H,s,H-10),2.39(3H,s,H-9),2.00(3H,s,H-12)；13C NMR(125MHz,acetone-d6)δ:170.9(C,C-11),167.6(C,C-6),166.1(C,C-1),164.6(C,C-8),155.7(C,C-3),140.1(C,C-4a),109.9(C,C-4),102.5(CH,C-7),102.0(CH,C-5),98.9(C,C-8a),59.6(CH2,C-10),20.7(CH3,C-12),17.1(CH3,C-9)；ESI-MS m/z 265.0[M+H]+,287.0[M+Na]+.

实施例2

(1)将干燥的金钱草全草粉碎，过20目筛，得金钱草粉末，备用；

(2)取步骤(1)得到的金钱草粉末(1.0kg)，用体积分数95％乙醇(8.0kg)回流提取5小时，过滤、滤液经冷冻干燥得醇提物(13.02g)；

(3)取醇提物(3.0g)用水(90mL)分散后，用乙酸乙酯萃取2次(90mL×2)，合并有机层浓缩后，依次经正相硅胶柱层析(固定相为200～300目硅胶，流动相为体积比3:1的石油醚/乙酸乙酯混合溶剂)、凝胶柱层析(固定相为sephadex LH-20，流动相为体积比为1:1的二氯甲烷/甲醇混合溶剂)、高效液相色谱(色谱柱为Agilent C18,9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH∶H2O＝60∶40)分离得到式I(11.7mg)、式II化合物(14.3mg)。

实施例3抗氧化实验

各取1mg式I、式II化合物，用DMSO溶解，配制成质量浓度为20μg/mL的溶液参照文献“王海松，等，“黄大茶茶汤成分分析及抗氧化活性研究”，《安徽农业大学学报》，2018,45(5)”中记载的方法，测试式I、式II化合物的DPPH自由基清除能力、超氧阴离子清除能力，结果表明，在20μg/mL的浓度下，式I化合物对DPPH自由基、超氧阴离子的清除率分别为61.4％、51.2％；式II化合物对DPPH自由基、超氧阴离子的清除率分别为70.5％、55.6％。

一种分离自金钱草的异香豆素类化合物及其作为抗氧化剂的应用专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。