专利摘要

本发明公开了一种甾体类衍生物和其保存液以及其应用，属于体外诊断试剂技术领域。所述甾体类衍生物含有环戊烷多氢菲母核，且在所述环戊烷多氢菲母核的至少一碳位上取代有亲水基团。所述甾体激素的保存液包括缓冲溶液和溶解于所述缓冲溶液中的表面活性剂。所述甾体类衍生物和所述保存液在制备用于检测甾体激素的检测剂和试剂盒中的应用。本发明甾体类衍生物具有良好的亲水性和溶解性，能够均匀稳定的分散于溶液中，其作为甾体激素抗原，能够实现对甾体激素准确检测。所述甾体激素的保存液能够有效提高所述甾体类衍生物的溶解性和分散的均匀性，避免所述甾体类衍生物被高分子聚合物表面发生吸附。

权利要求

1.一种甾体类衍生物，其特征在于：含有环戊烷多氢菲母核，且在所述环戊烷多氢菲母核的至少一碳位上取代有亲水基团；所述环戊烷多氢菲母核是由包括雄激素、雌激素、孕激素、皮质激素中的至少一种甾体激素提供的环戊烷多氢菲母核；所述甾体类衍生物为下述分子结构式所示中的至少一种：

2.一种甾体类衍生物的应用，其特征在于：将权利要求1所述的甾体类衍生物作为甾体激素抗原，用于甾体激素的检测。

3.一种用于检测甾体激素的检测剂，其特征在于：包括保存液和溶解在所述保存液中的甾体激素抗原，其中，所述甾体激素抗原为权利要求1所述的甾体类衍生物，或所述保存液包括缓冲溶液和溶解于所述缓冲溶液中的表面活性剂。

4.根据权利要求3所述的检测剂，其特征在于：所述检测剂作为甾体激素检测用校准品和质控品。

5.根据权利要求3所述的检测剂，其特征在于：所述表面活性剂的浓度为0.05％～3％w/v。

6.根据权利要求3所述的检测剂，其特征在于：所述表面活性剂包括阴离子表面活性剂和非离子表面活性剂中的至少一种；和/或

所述缓冲溶液包括磷酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、Tris盐酸缓冲液、碳酸盐缓冲液中的至少一种。

7.根据权利要求3所述的检测剂，其特征在于：所述阴离子表面活性剂包括长链烷基羧酸盐、长链烷基磺酸盐、长链烷基硫酸盐、长链烷基磷酸盐中的至少一种；

所述非离子表面活性剂包括聚氧乙烯醚类表面活性剂、聚氧乙烯酯类表面活性剂中的至少一种。

8.一种用于检测甾体激素的试剂盒，其特征在于：包括作为甾体激素抗原的权利要求1所述的甾体类衍生物、或包括权利要求3-7任一项所述的检测剂。

9.权利要求3-7任一项所述的检测剂或权利要求8所述的试剂盒在甾体激素临床检测中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，将所述检测剂作为校准品或质控品，用于对甾体激素进行临床检测的试剂。

说明书

技术领域

本发明属于体外诊断试剂技术领域，具体的是涉及一种甾体类衍生物和其应用、甾体类衍生物的保存液和所述保存液的应用。

背景技术

甾体激素是一类重要的内分泌激素，在保持机体体内平衡和正常生理活动、促进性器官的发育、维持生殖系统功能等方面有着广泛的作用。甾体激素药物按药理作用，可分为肾上腺皮质激素和性激素，后者包括雄激素、雌激素和孕激素及甾体避孕药。按化学结构可分为雄甾烷类、雌甾烷类和孕甾烷类，其中雄激素属于雄甾烷类，雌激素属于雌甾烷类，肾上腺皮质激素、孕激素及甾体避孕药均属于孕甾烷类。甾体激素及化合物在结构上有共同的基本骨架，即基本结构为环戊烷多氢菲母核(即甾烷)，其结构式如Ⅰ₀所示，由A、B、C、D四个环组成。A、B、C环为六元环，D环为五元环。基于环戊烷多氢菲母核，各类型甾体激素分子大致有三类：雄甾烷、雌甾烷和孕甾烷。

现代临床医学研究表明：甾体激素的检测与监控能够辅助诊断内分泌与代谢系统疾病，尤其是性腺和肾上腺疾病发病风险的有效指标之一，通过对健康人血清或血浆中甾体激素的精确定量测定，可以有效地对内分泌与代谢系统疾病做到早期预警；对已有一定临床症状的内分泌与代谢系统疾病的病患，该物质的精确定量测定，可以帮助临床医生进行快速准确的疾病诊断。

例如雄烯二酮(Androstenedione)，其全名为4-雄甾烯-3,17-二酮，是一种19碳的甾体类雄激素(雄激素，母核为雄甾烷)，由肾上腺和性腺产生，因此，雄烯二酮的变化直接涉及到体内雌、雄激素的代谢和内分泌平衡。雄烯二酮的临床意义在于：在高雄激素性疾病中(如多囊卵巢综合征，高雄激素血症)，特别是女性非正常毛发生长(多毛症)和(女子)男性化时，雄烯二酮水平通常升高。

用于检测血清或血浆中甾体激素的甾体激素类血清标志物由于其分子结构是环戊烷并多氢菲(即甾烷)，均具有不溶或难溶于水的物理性质。在实际生产甾体激素类血清标志物的体外诊断试剂的校准品和质控品的过程中，其校准品和质控品的保存液多为去激素血清制品或缓冲盐溶液，由于校准品和质控品中的甾体激素不溶或难溶于水，加之分子运动或扩散作用，甾体激素在体系内易发生相互聚集或团聚，导致整体溶液体系的热力学不稳定，在使用校准品和质控品的过程中可能会存在实际浓度发生变化，继而影响试剂的性能及稳定性。

同时，校准品和质控品的包装材料多为塑料管瓶(含硅胶膜)或玻璃瓶(含胶塞)。由于塑料、硅胶膜和胶塞的材质多为有机合成聚合物，材质为高分子聚合物的塑料、硅胶膜和胶塞在塑造工艺制造过程中，存在肉眼无法观察到的细微间隙或孔洞，同时聚合物表面由于处理工艺的差异，存在大分子聚合物末端基团，容易天然地吸附一些小分子物质(如小分子甾体激素类，其分子量均较小，分子量＜1000)。一旦小分子物质(如甾体激素)被包装材料表面吸附，就会造成校准品和质控品内容物的含量降低，导致小分子血清标志物试剂产品的校准品和质控品的实际浓度发生变化，继而影响试剂的性能及稳定性。

正因此上述的原因，导致现有甾体类激素检测用标准品不稳定，严重影响定标曲线的正确性，从而导致最终检测的不准确。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种甾体类衍生物及其用途，以解决现有甾体激素检测用甾体激素疏水性强、不溶或难溶于水而导致甾体激素检测不准确的技术问题。

本发明的另一目的在于提供一种甾体激素的保存液，以解决现有用于甾体激素类液态保存过程中甾体激素易发生聚沉和被吸附而导致甾体激素实际浓度不稳定的技术问题。

本发明的又一目的在于提供一种用于检测甾体激素的检测剂和试剂盒，以解决现有用于检测甾体激素的检测试剂存在浓度不稳定和试剂盒检查结果不准确的技术问题。

为了实现上述发明目的，本发明的一方面，提供了一种甾体类衍生物。所述甾体类衍生物含有环戊烷多氢菲母核，且在所述环戊烷多氢菲母核的至少一碳位上取代有亲水基团。

同时，本发明提供了所述甾体类衍生物的应用。所述甾体类衍生物的应用是将本发明所述甾体类衍生物作为甾体激素抗原，用于甾体激素的检测。

本发明的另一方面，提供了一种甾体激素的保存液。所述甾体激素的保存液用于本发明甾体类衍生物的液态保存，包括缓冲溶液和溶解于所述缓冲溶液中的表面活性剂。

本发明的再一方面，提供了一种用于检测甾体激素的检测剂。所述检测剂包括保存液和溶解在所述保存液中的甾体激素抗原，其中，所述甾体激素抗原为本发明甾体类衍生物，或所述保存液为本发明甾体激素的保存液。

本发明的又一方面，提供了一种用于检测甾体激素的试剂盒。所述试剂盒包括作为甾体激素抗原的本发明甾体类衍生物、本发明甾体激素的保存液中的至少一种；或包括本发明用于检测甾体激素的检测剂。

本发明的还一方面，提供了本发明用于检测甾体激素的检测试剂或本发明用于检测甾体激素的试剂盒的应用方法。所述本发明检测试剂或本发明试剂盒在甾体激素临床检测中的应用。

与现有技术相比，本发明甾体类衍生物由于在其所含的环戊烷多氢菲母核上的至少一碳位取代有亲水基团，从赋予所述甾体类衍生物良好的亲水性和溶解性，从而能够使得所述甾体类衍生物能够溶解并均匀稳定地分散于溶液中，有效避免了甾体类衍生物发生如现有甾体类激素的聚沉现象。

正是由于本发明甾体类衍生物保留了甾体激素常规特性，而且具有良好的溶解性，能够均匀稳定的分散于溶液中，有效避免了甾体类衍生物发生如现有甾体激素的聚沉现象，因此，所述甾体类衍生物作为甾体激素抗原，能够实现对甾体激素准确检测。

本发明甾体激素的保存液通过所含的表面活性剂，一方面能够有效提高溶解于所述保存液中的甾体类衍生物的溶解性和分散的均匀性，避免其发生聚沉现象，另一方面表面活性剂能迅速地渗入用于盛装所述保存液容器的高分子聚合物表面缝隙或孔洞的内表面，起到润湿作用，增溶作用和悬浮分散作用，避免溶解在所述保存液中的甾体类衍生物被高分子聚合物表面吸附，从而保证所述甾体类衍生物能够有效溶解并均匀稳定的分散在所述保存液中。

本发明用于检测甾体激素的检测剂由于含有甾体类衍生物，或进一步的采用本发明甾体激素的保存液溶解所述甾体类衍生物，因此，所述用于检测甾体激素的检测剂所含的所述甾体类衍生物分散均匀，其浓度含量稳定，且准确。

本发明用于检测甾体激素的试剂盒由于含有作为甾体激素抗原的甾体类衍生物和/或本发明甾体激素的保存液，或包括本发明用于检测甾体激素的检测剂，因此，采用所述保存液配制的含有检测甾体激素试剂或者所述检测剂中甾体类衍生物溶解性好，其浓度含量稳定，且准确，从而使得所述试剂盒检测样本中的甾体激素准确，而且方便快捷。

附图说明

图1为雄烯二酮与实施例11至实施例13提供的各个雄烯二酮衍生物之间检测亲和力/效价的线性相关示意图；

图2为睾酮、实施例14提供的睾酮衍生物之间检测亲和力/效价的线性相关示意图；

图3为雌二醇、实施例14提供的雌二醇衍生物之间检测亲和力/效价的线性相关示意图；

图4为孕酮、实施例14提供的孕酮衍生物之间检测亲和力/效价的线性相关示意图；

图5为皮质醇、实施例14提供的皮质醇衍生物之间检测亲和力/效价的线性相关示意图。

具体实施方式

为了使本发明要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例与附图，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明实施例名词解释：

甾体激素：又称为类固醇激素，是指一类维持生命、保持正常生活、促进性器官发育、维持生育的重要生物活性物质。具体是指在结构上有环戊烷并多氢菲的人体分泌的一类活性物质，其包括雄甾烷、雌甾烷和孕甾烷三类活性物质。

甾体类衍生物：是基于所述甾体激素，在所述甾体激素的环戊烷多氢菲母核的至少一碳位上取代有亲水基团的一类化合物。

一方面，本发明实施例提供了一种具有亲水性的甾体类衍生物。所述甾体类衍生物为在环戊烷多氢菲母核的至少一碳位上取代有亲水基团。具体的是在环戊烷多氢菲母核碳1-17任一或至少一碳位上取代有亲水基团。这样，由于所述甾体类衍生物所含的环戊烷多氢菲母核的碳位上取代有亲水基团，从而有效赋予所述甾体类衍生物良好的亲水性能，使得其具有良好的水溶解性，能够在水中溶解且均匀分散，避免了其发生如现有甾体激素的聚沉现象，从而赋予甾体类衍生物的水溶液稳定，具有长的保存时间。

其中，在一实施例中，所述亲水基团可以是羟基，酯基，羧基，硫酸基，磺酸基，磷酸基，氨基，醛基和季铵基中的一种或两种以上。具体地，所述甾体类衍生物所含的环戊烷多氢菲母核的一个碳位上取代有一个所述亲水基团，也可以是所述甾体类衍生物所含的环戊烷多氢菲母核的两个以上碳位上取代有同一个所述亲水基团，还可以是所述甾体类衍生物所含的环戊烷多氢菲母核的两个以上碳位上取代有不相同的所述亲水基团。所述环戊烷多氢菲母核被所述亲水基团取代后形成的所述甾体类衍生物，一方面不影响原提供所述环戊烷多氢菲母核的甾体激素原本特性，另一方面赋予所述甾体类衍生物良好的亲水性能，使得所述甾体类衍生物具有良好的水溶解性能，其水溶液不发生聚沉现象，长时间能够保持稳定。

在另一实施例中，所述环戊烷多氢菲母核是由包括雄激素、雌激素、孕激素、皮质激素中的至少一种甾体激素提供的环戊烷多氢菲母核，也即是所述甾体类衍生物是在包括雄激素、雌激素、孕激素、皮质激素中的至少一种甾体化合物衍生获得，具体是在包括雄激素、雌激素、孕激素、皮质激素中的至少一种甾体化合物所含的环戊烷多氢菲母核的碳位上取代亲水基团，或者对包括雄激素、雌激素、孕激素、皮质激素中的至少一种甾体化合物结合在所含的环戊烷多氢菲母核上的功能基团进行改性成亲水基团。

其中，所述雄激素可以是包括雄烯二酮、睾酮、双氢睾酮、脱氢表雄酮、雄酮、雄烯二醇中的至少一种。所述雌激素可以是包括雌酮、雌三醇、雌二醇中的至少一种。所述孕激素可以是包括孕酮、17α-羟基孕酮、孕烯醇酮、17-羟基孕烯酮中的至少一种。所述皮质激素可以是包括皮质醇、醛固酮、脱氧皮质酮、11-脱氧皮质醇、皮质酮中的至少一种。

基于上述各实施例，所述甾体类衍生物具体可以是如下分子结构式所示中的至少一种：

等。

该些分子结构式的甾体类衍生物基于现有的甾体激素进行取代改性，从而具有良好的亲水性和水溶解性。

另外，上文各实施例中所述甾体类衍生物均可以按照现有方法制备获得。

由于上文所述的甾体类衍生物是基于现有甾体激素进行改性的一类化合物，如是基于雄甾烷、雌甾烷和孕甾烷等甾体激素进行改性获得。因此，所述甾体类衍生物含有环戊烷多氢菲母核，并含有取代于所述环戊烷多氢菲母核上的取代基团。基于所述甾体类衍生物分子结构特点，对所述甾体类衍生物的应用进行了开拓性研究。

一方面，本发明实施例提供了所述甾体类衍生物的一种应用方法。所述甾体类衍生物的应用是将所述甾体类衍生物作为甾体激素抗原，用于检测甾体激素。由于所述甾体类衍生物含有环戊烷多氢菲母核，具有甾体激素的特性，当将其作为甾体激素抗原时，能够有效对甾体激素进行检测，如作为检测甾体激素用的校准品或质控品，实现对甾体激素进行定量检测。

另一方面，本发明实施例还提供了一种能够有效提高上文所述甾体衍生物溶解性且提高所述甾体衍生物分散均匀性和稳定性的甾体激素保存液。所述甾体激素的保存液包括缓冲溶液和溶解于所述缓冲溶液中的表面活性剂等组分实际构成。由于所述甾体激素的保存液含有表面活性剂，而由于表面活性剂分子结构特性，其含有亲水基团，赋予所述表面活性剂的亲水极性特性；另一部分其含有疏水基团或者亲油基团，赋予所述表面活性剂的非极性特性或疏水特性。因此，所述表面活性剂能够有效吸附在溶液的界面上、显著降低界面张力，具有优良的润湿、乳化、分散及渗透等特性，一方面，起到增溶作用，提高所述甾体衍生物在所述保存液中溶解度；另一方面，能够有效降低溶解在所述保存液中的所述甾体衍生物与所述保存液的溶剂两种界面张力，降低溶解在所述保存液中所述甾体衍生物之间的相互吸引力，防止所述甾体衍生物在相互碰撞过程中的聚集与团聚，从而提高溶解在所述保存液中的所述甾体衍生物的稳定性；再一方面，能迅速地渗入到盛装所述保存液的容器的高分子聚合物表面缝隙或孔洞的内表面，通过润湿作用和悬浮分散作用，防止溶解于所述保存液中的所述甾体衍生物与所述高分子聚合物表面发生吸附，从而提高溶解在所述保存液中的所述甾体衍生物的稳定性。

在一实施例中，所述保存液中，所述表面活性剂的浓度为0.05％～3％w/v，具体可以是1％w/v。通过调节所述表面活性剂的浓度，提高所述保存液上述的三方面的作用，进一步提高溶解在所述保存液中的甾体衍生物的稳定性。

在所述保存液的各实施例中，一实施例中，所述保存液所含的所述表面活性剂可以包括阴离子表面活性剂和非离子表面活性剂中的至少一种。在具体实施例中，所述阴离子表面活性剂包括长链烷基羧酸盐、长链烷基磺酸盐、长链烷基硫酸盐、长链烷基磷酸盐中的至少一种。在另一具体实施例中，所述非离子表面活性剂包括聚氧乙烯醚类表面活性剂、聚氧乙烯酯类表面活性剂中的至少一种。选用的这些表面活性剂一方面能够有效改善溶解在所述保存液中的所述甾体衍生物的溶解性和稳定性，避免发生聚集与团聚；再一方面，提高渗透作用和润湿作用，防止溶解于所述保存液中的甾体衍生物与所述高分子聚合物表面发生吸附，从而提高溶解在所述保存液中的所述甾体衍生物的稳定性。

另一实施例中，所述保存液所含的所述缓冲溶液包括磷酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、Tris盐酸缓冲液、碳酸盐缓冲液中的至少一种。选用的这些缓冲溶液能够协助表面活性剂有效提高所述甾体衍生物的溶解性和稳定性。

上述所谓的“实际构成”是指不含后述可任意添加成分(如防腐剂、pH调节剂等添加到通常制剂中的成分)以外的成分。

其中，在所述保存液的各实施例中，所述甾体激素的保存液用于甾体类衍生物的液态保存，具体如上文所述甾体类衍生物应用各实施例中所述的所述甾体类衍生物。当然，如果不考虑甾体激素的溶解性，所述甾体激素的保存液也可以用于现有甾体激素的液态保存，以避免分散于所述甾体激素的保存液中的甾体激素与所述高分子聚合物表面发生吸附如储存容器壁和盖表面发生吸附，从而提高所述甾体激素的稳定性。

进一步地，所述甾体激素的保存液除了含有缓冲溶液和溶解于所述缓冲溶液中的表面活性剂之外，还含有可以根据需要适当地添加防腐剂等以及其他常用的辅助成分中的至少一种。当所述甾体激素的保存液还含有防腐剂时，其能够避免所述甾体激素的保存液受到微生物的污染，从而保护所述甾体激素的保存液的稳定性。一实施例中，所述防腐剂可以但不仅仅为叠氮化钠、proclin、硫柳汞等中的至少一种，另外，所述防腐剂可以根据所述甾体激素的保存液的储存时间等因素进行添加。

再一方面，本发明实施例提供了一种用于检测甾体激素的检测剂。所述用于检测甾体激素的检测剂包括保存液和溶解在所述保存液中的甾体激素抗原。

其中，所述用于检测甾体激素的检测剂所含的所述甾体激素抗原为上文各实施例中所述的所述甾体类衍生物，为了节约篇幅，在此不再对所述甾体类衍生物进行赘述。这样，由于所含的所述甾体类衍生物其含有亲水基团，具有良好的水溶解性和稳定性，因此，所述用于检测甾体激素的检测剂所含的所述甾体激素抗原含量稳定，难以出现聚沉现象，有效保证了甾体激素检测的准确性。另外，所述甾体激素抗原在所述保存液中的浓度可以根据实际应用需要进行灵活调整。

所述用于检测甾体激素的检测剂所含的所述保存液可以是常规用于配制甾体激素类血清标志物的体外诊断试剂的校准品和质控品所用的稀释液或者缓冲液，优选的为上文所述的本发明实施例甾体激素的保存液。这样，在配合所述检测剂所含的上文所述甾体类衍生物良好水溶解性和稳定性基础上，所述检测剂所含的上文所述甾体激素的保存液能够进一步提高所述甾体类衍生物的水溶解性，同时避免盛装所述检测剂的容器壁或盖对所述甾体类衍生物的吸附，从而进一步提高所述甾体类衍生物分散的稳定性，从而保证所述检测剂实际浓度的稳定性和准确性。

其次，根据所述检测剂所含的有效成分特点，所述检测剂可以作为甾体激素检测用的校准品和质控品。当所述检测剂作为甾体激素检测用的校准品和质控品时，所述甾体激素抗原在所述检测剂中的浓度是被标明也即是明确的，且其浓度可以根据检测的需要进行调整。这样，所述校准品和质控品中溶解的甾体激素抗原溶解性高，含量稳定，从而保证了甾体激素的检测准确性。

因此，所述用于检测甾体激素的检测剂具体如校准品和质控品由于是采用上文所述甾体类衍生物作为甾体激素抗原，或进一步采用上文所述的甾体激素的保存液作为稀释液。因此，所述检测剂具体如校准品和质控品能够在长时间保存，且有效保证所述甾体激素抗原分散的稳定性，从而提高了所述检测剂具体如校准品和质控品浓度的稳定性，保证甾体激素的检测准确性。

上文所述“稳定的”，是指在4℃环境中处理7天后，RLU相对偏差(偏差1)在±15％范围内；37℃环境中处理7天后，RLU相对偏差(偏差2)在±15％范围内；处理7天后，2℃～8℃和37℃环境中RLU相对偏差(偏差3)在±15％范围内。

又一方面，本发明实施例提供了一种用于检测甾体激素的试剂盒。一实施例，所述用于检测甾体激素的试剂盒包括的试剂有：作为甾体激素抗原的上文所述的本发明实施例甾体类衍生物、上文所述的本发明实施例甾体激素的保存液中的至少一种，或者上文所述的本发明实施例用于检测甾体激素的检测剂。

其中，当所述试剂盒含有上文各实施例中的所述甾体类衍生物时，可以将其作为冻干粉体溶解于用于配制检测试剂如校准品和质控品常规的溶剂中，也可以将其直接溶解于上文所述的本发明实施例甾体激素的保存液中，以配制成用于检测样品中甾体激素的检测试剂如校准品和质控品。

当所述试剂盒含有上文所述的本发明实施例甾体激素的保存液时，溶解在所述保存液中的甾体激素抗原为上文各实施例中的所述甾体类衍生物，并将其直接溶解于所述试剂盒所含的上文所述保存液中，以配制成用于检测样品中甾体激素的检测试剂如校准品和质控品。

当然，所述试剂盒可以同时含有作为甾体激素抗原的上文所述甾体类衍生物和上文所述保存液。在所述试剂盒在使用时将所述甾体类衍生物溶解于所述保存液中，以配制成用于检测样品中甾体激素的检测试剂如校准品和质控品。

当所述试剂盒含有上文所述用于检测甾体激素的检测剂时，所述检测剂可以直接作为用于检测样品中甾体激素的校准品和质控品，且浓度是知晓的。

另外，不管所述用于检测甾体激素的试剂盒包含上述所述的何种试剂，相应试剂的规格如体积可以根据试剂盒的规格灵活设定，其中，如所述检测剂如校准品与质控品中所含的所述甾体类衍生物浓度也可以根据检测的需要进行灵活调整。如在一实施例中，根据所述试剂盒所含的所述甾体类衍生物、上文所述保存液中的至少一种所配制的检测剂时，或者所述试剂盒所含的上文所述检测剂时，所述所述检测剂如作为作为校准品、质控品时，所述校准品设置低浓度校准品和高浓度校准品，质控品也可以按照常规设置成质控品1和质控品2。其中，所述低浓度校准品和高浓度校准品以及质控品1和质控品2各试剂的浓度均匀按照常规校准品、质控品的浓度进行配制。

当然，所述试剂盒还包括用于检测甾体激素的其他必要的试剂，如化学发光免疫分析法相关试剂，具体的如甾体激素抗体包被磁球试剂和用于标记甾体激素抗体的标记试剂标记的标记甾体激素抗体试剂等。其中，甾体激素抗体可以是常规的甾体激素抗体。所述标记试剂可以是ABEI标记试剂。

因此，所述用于检测甾体激素的试剂盒由于包括甾体类衍生物或/和上文所述的本发明实施例甾体激素的保存液，或包括上文所述的本发明实施例用于检测甾体激素的检测剂，因此，其检测甾体激素含量准确，而且方便快捷。

另外，采用所述用于检测甾体激素的试剂盒检测样品中的甾体激素含量可以按照常规化学发光免疫分析法进行操作。

现结合具体实例，对本发明实施例甾体类衍生物及其制备方法和应用、甾体激素的保存液及其应用进行进一步详细说明。

1.甾体类衍生物及其制备方法实施例

实施例11-实施例17

本实施例11-17分别提供了一种甾体类衍生物。本实施例11-17各实施例中甾体类衍生物的结构式分别如下表1所示：

表1

2.甾体激素的保存液实施例

实施例21-实施例24和对比例1

本实施例21-24和对比例1分别提供了一种甾体激素的保存液。本实施例21-24和对比例1的保存液所含的组分分别如下表2所示：

表2

3.用于检测甾体激素的检测剂以及试剂盒实施例

实施例31-实施例310和对比例31-对比例36

本实施例31-310分别提供了一种用于检测甾体激素的试剂盒，其包括如下组分：

(1)甾体激素抗体包被的磁性微球，其中磁性微球的浓度：1mg/mL，抗甾体激素抗体的浓度为10μg/mL；

(2)ABEI标记的甾体激素抗体，其中ABEI浓度：250ng/mL，抗甾体激素抗体的浓度：5000ng/mL；

(3)表3中所示的实施例31-310和对比例31-36中校准品：

低浓度校准品，含有表1中实施例11-17所示的甾体类衍生物抗原，且所述实施例11-17所示的甾体类衍生物抗原是分别溶解在如表2所示的保存液中；

高浓度校准品，含有表1中实施例11-17所示的甾体类衍生物抗原，且所述实施例11-17所示的甾体类衍生物抗原是分别溶解在如表2所示的保存液中；

(4)表3中所示的实施例31-310和对比例31-36质控品：

质控品1，含有表1中实施例11-17所示的甾体类衍生物抗原，且所述实施例11-17所示的甾体类衍生物抗原是分别溶解在如表2所示的保存液中；

质控品2，含有表1中实施例11-17所示的甾体类衍生物抗原，且所述实施例11-17所示的甾体类衍生物抗原是分别溶解在如表2所示的保存液中，浓度

(5)低浓度校准品、高浓度校准品、质控品1和质控品2的保存稀释液为50mM PBS缓冲液(含有0.5％BSA，0.2％NaN₃)，且各校准品和质控品浓度根据具体所含的甾体类衍生物抗原不同和根据需要调整。各校所述准品和质控品保存于塑料瓶或带胶塞玻璃瓶等中的任意一种。

表3

实验方法、数据和结果分析

1.甾体类衍生物的亲和力/效价验证：

1.1甾体类衍生物的亲和力/效价验证的方法如下：

①称取1mg现有甾体类血清标志物分子的纯品或标准品(分析纯)并用DMF溶解，浓度为1mg/mL，将其按一定比例梯度稀释得到5个浓度的样本，分别用对应甾体类血清标志物测定试剂盒(化学发光法)进行检测，测得并记录其RLU；

②称取1mg实施例11-17提供的甾体类衍生物的纯品并用DMF溶解，标称浓度为1mg/mL，将其按①中的特定比例梯度稀释得到5个浓度的样本，分别用对应甾体类血清标志物测定试剂盒(化学发光法)进行检测，测得并记录其RLU；

③将①中测定得到的5个不同浓度的现有甾体类血清标志物样本的RLU与②中测定得到的5个对应浓度的甾体类衍生物样本的RLU，将①中测定RLU与②中测定RLU用最小二乘法进行直线拟合，并计算线性相关系数(r)，当R²≥0.95，即线性相关系数(r)≥0.9900，则说明甾体类血清标志物分子改造物的亲和力/效价符合要求，否则不符合。

1.2甾体类衍生物的亲和力/效价验证的实验数据和结果分析

(1)雄烯二酮衍生物的亲和力验证实验数据如表4：

表4

将表4中测定5例不同稀释比例浓度的雄烯二酮样本的测定RLU与5例对应稀释比例浓度的雄烯二酮衍生物样本的测定RLU用最小二乘法进行直线拟合，直线拟合的曲线如图1所示。其中，雄烯二酮与实施例11雄烯二酮衍生物的线性相关系数为R²＝0.9994，雄烯二酮与实施例12雄烯二酮衍生物的线性相关系数为R²＝0.9985，雄烯二酮与实施例13雄烯二酮衍生物的线性相关系数为R²＝0.9966。因此，R²≥0.95，(r)≥0.9900，说明实施例11-13提供的雄烯二酮的亲和力/效价符合用于试剂盒校准品和质控品的要求。

(2)睾酮衍生物的亲和力验证实验数据如表5：

表5

将表5中测定5例不同稀释比例浓度的睾酮样本的测定RLU与5例对应稀释比例浓度的睾酮衍生物样本的测定RLU用最小二乘法进行直线拟合，直线拟合的曲线如图2所示。其中，睾酮与实施例14睾酮衍生物的线性相关系数为R²＝0.9969。因此，R²≥0.95，(r)≥0.9900，说明实施例14提供的睾酮衍生物的亲和力/效价符合用于试剂盒校准品和质控品的要求。

(3)雌二醇衍生物的亲和力验证实验数据如表6：

表6

将表6中测定5例不同稀释比例浓度的雌二醇样本的测定RLU与5例对应稀释比例浓度的雌二醇衍生物样本的测定RLU用最小二乘法进行直线拟合，直线拟合的曲线如图3所示。其中，雌二醇与实施例15雌二醇衍生物的线性相关系数为R²＝0.9969。因此，R²≥0.95，(r)≥0.9900，说明实施例15提供的雌二醇衍生物的亲和力/效价符合用于试剂盒校准品和质控品的要求。

(4)孕酮衍生物的亲和力验证实验数据如表7：

表7

将表7中测定5例不同稀释比例浓度的孕酮样本的测定RLU与5例对应稀释比例浓度的孕酮衍生物样本的测定RLU用最小二乘法进行直线拟合，直线拟合的曲线如图4所示。其中，孕酮与实施例16孕酮衍生物的线性相关系数为R²＝0.9964。因此，R²≥0.95，(r)≥0.9900，说明实施例16提供的孕酮衍生物的亲和力/效价符合用于试剂盒校准品和质控品的要求。

(5)皮质醇衍生物的亲和力验证实验数据如表8：

表8

将表8中测定5例不同稀释比例浓度的皮质醇样本的测定RLU与5例对应稀释比例浓度的皮质醇衍生物样本的测定RLU用最小二乘法进行直线拟合，直线拟合的曲线如图5所示。其中，皮质醇与实施例16皮质醇衍生物的线性相关系数为R²＝0.9967。因此，R²≥0.95，(r)≥0.9900，说明实施例17提供的皮质醇衍生物的亲和力/效价符合用于试剂盒校准品和质控品的要求。

2.用于甾体类血清标志物(即用于检测甾体激素的校准品和质控品)的校准品和质控品稳定保存方法的效果验证(即校准品和质控品的4℃和37℃模拟运输稳定性的验证)：

2.1用于检测甾体激素的校准品和质控品稳定保存方法的效果验证方法：

测试用试剂盒：实施例31-310(试验组)和对比例31-36(对照组)提供的用于检测甾体激素的试剂盒(化学发光法)；

测试条件：试验组提供的低浓度校准品，高浓度校准品，质控品1和质控品2于37℃180r/min恒温振荡，保存于橡胶瓶或带胶塞玻璃瓶等中的任意一种内；对照组提供的低浓度校准品，高浓度校准品，质控品1和质控品2于4℃180r/min恒温振荡，保存于理想状态下无吸附的，不带胶塞的玻璃瓶内；

测试样本：试验组和对照组所含的低浓度校准品，高浓度校准品，质控品1和质控品2；

其中雄烯二酮及雄烯二酮衍生物的低浓度校准品，高浓度校准品，质控品1和质控品2的浓度分别为：0.3ng/ml，6ng/ml,1.5ng/ml，6ng/ml；

睾酮及睾酮衍生物的低浓度校准品，高浓度校准品，质控品1和质控品2的浓度分别为：0.5ng/ml，11ng/ml,1ng/ml，10ng/ml；

雌二醇及雌二醇衍生物的低浓度校准品，高浓度校准品，质控品1和质控品2的浓度分别为：90pg/ml，2000pg/ml,200pg/ml，3000pg/ml；

孕酮及孕酮衍生物的低浓度校准品，高浓度校准品，质控品1和质控品2的浓度分别为：0.5ng/ml，60ng/ml，2ng/ml，40ng/ml；

皮质醇及皮质醇衍生物的低浓度校准品，高浓度校准品，质控品1和质控品2的浓度分别为：16ng/ml，500ng/ml，20ng/ml，360ng/ml。

测试时间：连续跟踪7天；

其他说明：通过对两组试验条件下的测试样本连续跟踪7天，模拟产品在运输过程中，校准品和质控品中的甾体类血清标志物分子的稳定性，根据下列公式分别计算相对偏差1、偏差2和偏差3，并得出稳定性的效果；

质控品/校准品的接受标准为4℃环境中处理7天后，RLU相对偏差(偏差1)在±15％范围内；37℃环境中处理7天后，RLU相对偏差(偏差2)在±15％范围内；处理7天后，2℃～8℃和37℃环境中RLU相对偏差(偏差3)在±15％范围内。

其中，偏差1至偏差3中的i＝1、2、3、…、6、7

2.2用于检测甾体激素的校准品和质控品稳定保存方法的效果验证数据和结果：

用于检测甾体激素的校准品和质控品稳定保存方法的效果验证数据如表9所示。对比表9中的实验数据可知，

(1)对比例31，实施例31和对比例36证明了雄烯二酮分子在未经改造和未在稀释液中添加表面活性剂会对产品的稳定性造成一定的影响，由于雄烯二酮的检测原理为竞争法，RLU的升高说明校准品和质控品的浓度出现了明显的降低，即校准品和质控品中的雄烯二酮分子发生了聚集或者被吸附至塑料管管壁或者硅胶膜或者胶塞上；

(2)对比例32和实施例38证明睾酮分子在未经改造和未在稀释液中添加表面活性剂会对产品的稳定性造成一定的影响；

(3)对比例33和实施例39证明雌二醇分子在未经改造和未在稀释液中添加表面活性剂会对产品的稳定性造成一定的影响；

(4)对比例34和实施例310证明孕酮分子在未经改造和未在稀释液中添加表面活性剂会对产品的稳定性造成一定的影响；

(5)对比例35和实施例311证明皮质醇分子在未经改造和未在稀释液中添加表面活性剂会对产品的稳定性造成一定的影响；

(6)实施例32在实施例31的改造物基团位点上设置比较，突出优选位点位置为甾体母核第6位碳原子，说明对雄烯二酮分子进行改造，不同改造位点也会影响雄烯二酮分子在体系内聚集或者防止吸附至塑料管管壁或者硅胶膜或者胶塞上的情况；

(7)实施例33在实施例31的改造物基团位点上设置比较，突出优选基团种类为羟基，说明对雄烯二酮分子进行改造，不同改造基团也会影响雄烯二酮分子在体系内聚集或者防止吸附至塑料管管壁或者硅胶膜或者胶塞上的情况；

(8)实施例34在实施例31的基础上优化稀释液的表面活性剂种类和浓度，综合改善亲水性和分散性，说明对亲水性差的分子进行改造同时在稀释液中添加一定浓度的表面活性剂均能在改善雄烯二酮分子在体系内聚集或者防止吸附情况起到了促进协同作用；

(9)实施例34、35、36的表面活性剂浓度条件上设置比较,突出优选浓度为1％，说明不同浓度的表面活性剂也会影响雄烯二酮分子在体系内聚集或者防止吸附至塑料管管壁或者硅胶膜或者胶塞上的情况，当吐温-20的浓度为1％时，效果要优于0.05％或0.3％的浓度；

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

甾体类衍生物和其保存液以及其应用专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。