专利摘要

本发明公开了下式16种(Nα‑3H‑咪唑并[4,5‑c]吡啶‑6‑甲酰‑Nω‑AA)‑Lys‑氨基葡萄糖，公开了它们的制备方法、公开了它们对肿瘤生长的抑制作用，公开了它们的抗炎活性。结果表明,它们具有抗肿瘤和抗炎症活性，具有良好的临床应用前景。

权利要求

1.下式的(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-AA)-Lys-氨基葡萄糖，

式中AA选自L-Ala,L-Val,Gly,L-Phe,L-Trp,L-Ile,L-Leu,L-Pro,L-Met,L-Asn,L-Ser,L-Thr,L-Glu,L-Arg(NO2),L-Asp(OBzl)和L-Tyr残基。

2.权利要求1的(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-AA)-Lys-氨基葡萄糖的制备方法，该方法包括：

(1)L-组氨酸在稀硫酸催化下与甲醛进行Pictet-Spengler缩合生成6S-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-羧酸；

(2)6S-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-羧酸转化为6S-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸甲酯；

(3)6S-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸甲酯用高锰酸钾氧化为3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸甲酯；

(4)3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸甲酯在NaOH溶液(2N)中皂化成3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸；

(5)3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸与Lys(Boc)-OBzl偶联得到Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys(Boc)-OBzl；

(6)3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys(Boc)-OBzl在NaOH溶液(2N)中皂化成Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys(Boc)；

(7)3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys(Boc)与氨基葡萄糖偶联得到Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys(Boc)-氨基葡萄糖；

(8)Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys(Boc)-氨基葡萄糖在4N氯化氢/乙酸乙酯中得到Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys-氨基葡萄糖；

(9)Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys-氨基葡萄糖与Boc-AA偶联得到(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-AA-Boc)-Lys-氨基葡萄糖；

(10)(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-AA-Boc)-Lys-氨基葡萄糖在4N氯化氢/乙酸乙酯中得到(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-AA)-Lys-氨基葡萄糖。

3.权利要求1的(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-AA)-Lys-氨基葡萄糖在制备抗肿瘤药物中的应用。

4.权利要求1的(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-AA)-Lys-氨基葡萄糖在制备抗炎药物中的应用。

说明书

技术领域

本发明涉及(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-AA)-Lys-氨基葡萄糖，涉及它的制备，涉及它对肿瘤生长的抑制作用，进一步涉及它的抗炎活性。结果表明，(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-AA)-Lys-氨基葡萄糖是具有抗肿瘤和抗炎双重活性的化合物。本发明属于生物医药领域。

背景技术

癌症是一组可影响身体任何部位的多种疾病的通称。使用的其它术语为恶性肿瘤和赘生物。据世界卫生组织统计，癌症是世界上的头号死因之一，尤其是在发展中国家。而全世界癌症死亡人数预计将继续上升，到2030年将超过1310万。因此,开发新的高效，低毒,毒副作用小的抗肿瘤药物一直是新药研究的重要课题之一。

随着对肿瘤特性和发病本质的认识，发明人曾经公开下3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-AA-OBzl(其中AA代表L-氨基酸残基)在1μmol/kg剂量下显示抗肿瘤活性；发明人曾经公开下式的3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Met-AA-OBzl(其中AA代表L-氨基酸残基)在0.02μmol/kg剂量下显示抗肿瘤活性和抗炎活性。通过进一步研究发明人认识到，用氨基葡萄糖修饰咪唑并吡啶不仅可提高抗肿瘤活性，而且可以提高抗炎活性。有效剂量为2nmol/kg。这是意想不到的技术效果。根据这些认识，发明人提出了本发明。

发明内容

本发明的第一个内容是提供(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-AA)-Lys-氨基葡萄糖，

式中AA选自L-Ala,L-Val,Gly,L-Phe,L-Trp,L-Ile,L-Leu,L-Pro,L-Met,L-Asn,L-Ser,L-Thr,L-Glu,L-Arg(NO2),L-Asp(OBzl)和L-Tyr残基。

本发明的第二个内容是提供制备(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-AA)-Lys-氨基葡萄糖的合成方法，该方法包括：

(1)L-组氨酸在稀硫酸催化下与甲醛进行Pictet-Spengler缩合生成6S-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-羧酸；

(2)6S-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-羧酸转化为6S-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸甲酯；

(3)6S-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸甲酯用高锰酸钾氧化为3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸甲酯；

(4)3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸甲酯在NaOH溶液(2N)中皂化成3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸；

(5)3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸与Lys(Boc)-OBzl偶联得到Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys(Boc)-OBzl；

(6)3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys(Boc)-OBzl在NaOH溶液(2N)中皂化成Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys(Boc)；

(7)3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys(Boc)与氨基葡萄糖偶联得到Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys(Boc)-氨基葡萄糖；

(8)Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys(Boc)-氨基葡萄糖在4N氯化氢/乙酸乙酯中得到Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys-氨基葡萄糖；

(9)Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys-氨基葡萄糖与Boc-AA(式中AA选自L-Ala,L-Val,Gly,L-Phe,L-Trp,L-Ile,L-Leu,L-Pro,L-Met,L-Asn,L-Ser,L-Thr,L-Glu,L-Arg(NO2),L-Asp(OBzl)和L-Tyr残基)偶联得到(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-AA-Boc)-Lys-氨基葡萄糖；

(10)(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-AA-Boc)-Lys-氨基葡萄糖在4N氯化氢/乙酸乙酯中得到(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-AA)-Lys-氨基葡萄糖。

本发明的第三个内容是评价(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-AA)-Lys-氨基葡萄糖对S180小鼠肿瘤生长的抑制作用。

本发明的第四个内容是评价(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-AA)-Lys-氨基葡萄糖对ICR雄性小鼠耳肿胀模型上的抗炎活性。

附图说明

图1.(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-AA)-Lys-氨基葡萄糖合成路线.i)HCHO,H2O,H2SO4,65℃；ii)MeOH,SOCl2,0℃；iii)N,N-二甲基甲酰胺(DMF),三乙胺,KMnO4；iv)NaOH,H2O,0℃；v)苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU),N-甲基吗啉(NMM),N,N-二甲基甲酰胺(DMF)；vi)NaOH,H2O,0℃；vii)二环己基碳二亚胺(DCC),1-羟基苯并三唑(HOBt),N-甲基吗啉(NMM),N,N-二甲基甲酰胺(DMF)；viii)4N氯化氢/乙酸乙酯,0℃；ix)二环己基碳二亚胺(DCC),1-羟基苯并三唑(HOBt),N-甲基吗啉(NMM),N,N-二甲基甲酰胺(DMF)；x)4N氯化氢/乙酸乙酯,0℃。

具体实施方式

为了进一步阐述本发明，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。

实施例1制备6S-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-羧酸(1)

10.00g(64.5mmol)L-组氨酸,30mL水混合于100mL茄瓶中，冰浴下用恒压漏斗逐滴加入2mL浓硫酸，随浓硫酸的加入，原料逐渐溶解，待其完全溶解后，向反应液中加入10mL40％的甲醛溶液，在微波加速反应仪65℃下反应5小时。反应完毕后，冰浴下缓慢滴加浓氨水调溶液pH 7，有大量无色沉淀析出，减压过滤，得到10.76g(99.2％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z):168[M+H]+。

实施例2制备6S-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸甲酯(2)

冰浴下在100mL茄瓶里加15.6mL甲醇，用恒压漏斗缓慢滴加1.56mL二氯亚砜，30min后加入1.00g(6mmol)6S-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-羧酸，室温反应3天后，TLC(二氯甲烷/甲醇＝5:1)监测反应完全后，反应混合物减压浓缩至干，残留物加10mL甲醇溶解并减压浓缩，该操作重复3次得白色泡状固体，再加入10mL乙醚抽干重复3次得无色粉末，最后用甲醇/乙醚重结晶得0.58g(53％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z):182[M+H]+。

实施例3制备3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸甲酯(3)

冰浴下在100mL茄瓶里加1.1g(6.1mmol)6S-4,5,6,7-四氢-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸甲酯，加N,N-二甲基甲酰胺(DMF)使溶解。向该溶液中逐滴加入三乙胺调pH值到8，分3次加入1.2g(7.6mmol)高锰酸钾。反应6h后，TLC(二氯/甲烷＝3:1)监测反应完毕。反应物减压浓缩至干，得到的黑色固体用1N HCl溶液溶解后过滤除去不溶物，冰浴下滴加2NNaOH溶液调pH值到7，析出大量无色固体。该固体以二氯甲烷/甲醇为洗脱剂用硅胶柱纯化(二氯/甲烷＝5:1)，得0.68g(63％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z):178[M+H]+。

实施例4制备3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-羧酸(4)

冰浴下在100mL茄瓶里加40mL 2N NaOH溶液,10min后加入5.30g(29.9mmol)3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸甲酯，反应3h后TLC显示反应完毕，冰浴下向反应液中滴2N HCl溶液调节pH值到7，析出大量无色固体。该固体以二氯甲烷/甲醇为洗脱剂用硅胶柱纯化(二氯甲烷/甲醇＝3:1)，得1.50g(30％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z):162[M-H]-；1H-NMR(300MHz,CD3OD)：δ/ppm＝8.918(s,1H),8.435(s,1H),8.375(s,1H)。

实施例5制备Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys(Boc)-OBzl(5)

称取163mg(1mmol)3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酸于100mL茄瓶中，加入15mLDMF。在冰浴和搅拌下加入397mg(1mmol)HBTU,活化30min。称取450.5mg(1.2mmol)HCl·Lys(Boc)-OBzl于50mL小三角瓶中，用DMF溶解后，然后将该溶液滴加至茄形瓶的反应液中，最后用NMM调节反应液pH值到8。室温搅拌过夜，TLC显示反应完毕后，将反应混合物减压浓缩至干，残留物加60mL乙酸乙酯溶解，过滤除去不溶物,滤液层依次用饱和NaHCO3溶液(20mL×3)和饱和NaCl溶液(20mL×3)洗涤，有机层用无水Na2SO4干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，得到的黄色油状物经硅胶柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝40:1)，得到145mg(30％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z):482[M+H]+；1H-NMR(300MHz,CD3OD):δ/ppm＝9.002(s,1H),8.496(s,1H),8.368(s,1H),7.357(m,5H),5.219(m,2H),4.745(m,1H),3.021(t,J＝6.3Hz,2H),2.016(m,2H),1.520(m,4H),1.480(s,9H)。

实施例6制备Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys(Boc)(6)

称取3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys(Boc)-OBzl 394mg于100mL茄瓶里加20mL甲醇，冰浴条件下用2N NaOH溶液调节pH值到12，反应3小时后TLC(二氯甲烷/甲醇＝10:1)显示反应完毕，冰浴下向反应液中滴加饱和KHSO4溶液调节pH值到7，有白色沉淀析出，将沉淀减压过滤，减压除去溶剂即得标题化合物280mg(90％)。ESI-MS(m/z):392[M+H]+。

实施例7制备Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys(Boc)-氨基葡萄糖(7)

称取788mg(2mmol)3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys(Boc)-OH于100mL茄瓶中，加入50mL DMF。在冰浴下依次加入270mg(2mmol)HOBt及494mg(2.4mmol)DCC，活化30min。称取860mg(4mmol)HCl·Glucosamine(氨基葡萄糖)于100mL小三角瓶中，用DMF溶解后，于冰浴下用NMM调节溶液pH值到7，然后将该溶液滴加至茄形瓶的反应液中，最后用NMM调节反应液pH值到8。室温反应过夜，TLC(二氯甲烷/甲醇＝3:1)显示反应完毕后，反应混合物减压浓缩至干，残留物加60mL乙醇溶解，过滤除去二环己基脲(DCU)，减压浓缩至干，得到的黄色油状物经C18柱层析纯化(甲醇/水＝60:1)，冷冻干燥得到221mg(20.07％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z):553[M+H]+；1H-NMR(300MHz,CD3OD):δ/ppm＝9.000(s,1H),8.496(s,1H),8.373(s,1H),5.150(d,J＝3.3Hz,0.7H),4.745(d,J＝3.3Hz,0.3H),4.725(m,1H),3.886-3.634(m,4H),3.336-3.315(m,2H),3.040(m,2H),2.087-1.804(m,2H),1.523(m,4H),1.480(s,9H)。

实施例8制备Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys-氨基葡萄糖(8)

将3g Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys(Boc)-氨基葡萄糖置于100mL茄瓶中，于冰浴下搅拌并加入30mL 4N氯化氢/乙酸乙酯，于冰浴下搅拌3.5h，有无色固体析出。TLC(二氯甲烷/甲醇＝3:1)显示反应完毕后，将反应液于37℃温水浴下减压浓缩。将残留物用无水乙醚(10mL×3)减压浓缩，得到1.997g(80％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z):453[M+H]+。

实施例9制备(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Ala-Boc)-Lys-氨基葡萄糖(9a)

称取904mg(2mmol)Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys-氨基葡萄糖于100mL茄瓶中，加入50mL DMF。在冰浴下依次加入270mg(2mmol)HOBt及494mg(2.4mmol)DCC，活化30min。称取860mg(2.4mmol)Boc-Ala于100mL小三角瓶中，用DMF溶解后，于冰浴下用NMM调节溶液pH值到7，然后将该溶液滴加至茄形瓶的反应液中，最后用NMM调节反应液pH值到8。室温反应过夜，TLC(二氯甲烷/甲醇＝3:1)显示反应完毕后，反应混合物减压浓缩至干，残留物加60mL甲醇溶解，过滤除去二环己基脲(DCU)，减压浓缩至干，得到的黄色油状物经C18柱层析纯化(甲醇/水＝60:1)，冷冻干燥得到221mg(20.07％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z):624[M+H]+。

实施例10制备(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Val-Boc)-Lys-氨基葡萄糖(9b)

按照实施例9的方法，从904mg(2mmol)Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys-氨基葡萄糖和520mg(2.4mmol)Boc-Val中得到124mg(9.6％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z):652[M+H]+。

实施例11制备(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Gly-Boc)-Lys-氨基葡萄糖(9c)

按照实施例9的方法，从904mg(2mmol)Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys-氨基葡萄糖和420mg(2.4mmol)Boc-Gly中得到124mg(10％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z):610[M+H]+。

实施例12制备(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Phe-Boc)-Lys-氨基葡萄糖(9d)

按照实施例9的方法，从904mg(2mmol)Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys-氨基葡萄糖和420mg(2.4mmol)Boc-Gly中得到86mg(6.1％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z):700[M+H]+。

实施例13制备(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Trp-Boc)-Lys-氨基葡萄糖(9e)

按照实施例9的方法，从904mg(2mmol)Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys-氨基葡萄糖和730mg(2.4mmol)Boc-Trp中得到108mg(7.3％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z):739[M+H]+。

实施例14制备(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Ile-Boc)-Lys-氨基葡萄糖(9f)

按照实施例9的方法，从904mg(2mmol)Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys-氨基葡萄糖和554mg(2.4mmol)Boc-Ile中得到108mg(8.1％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z):666[M+H]+。

实施例15制备(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Leu-Boc)-Lys-氨基葡萄糖(9g)

按照实施例9的方法，从904mg(2mmol)Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys-氨基葡萄糖和554mg(2.4mmol)Boc-Leu中得到98mg(7.36％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z):666[M+H]+。

实施例16制备(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Pro-Boc)-Lys-氨基葡萄糖(9h)

按照实施例9的方法，从904mg(2mmol)Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys-氨基葡萄糖和516mg(2.4mmol)Boc-Pro中得到66mg(5.08％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z):650[M+H]+。

实施例17制备(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Met-Boc)-Lys-氨基葡萄糖(9i)

按照实施例9的方法，从904mg(2mmol)Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys-氨基葡萄糖和598mg(2.4mmol)Boc-Pro中得到100mg(7.3％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z):684[M+H]+。

实施例18制备(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Asn-Boc)-Lys-氨基葡萄糖(9j)

按照实施例9的方法，从904mg(2mmol)Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys-氨基葡萄糖和557mg(2.4mmol)Boc-Asn中得到90mg(6.8％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z):657[M+H]+。

实施例19制备(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Ser-Boc)-Lys-氨基葡萄糖(9k)

按照实施例9的方法，从904mg(2mmol)Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys-氨基葡萄糖和492mg(2.4mmol)Boc-Ser中得到78mg(6.1％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z):640[M+H]+。

实施例20制备(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Thr-Boc)-Lys-氨基葡萄糖(9l)

按照实施例9的方法，从904mg(2mmol)Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys-氨基葡萄糖和526mg(2.4mmol)Boc-Thr中得到60mg(5.0％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z):654[M+H]+。

实施例21制备(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Gln-Boc)-Lys-氨基葡萄糖(9m)

按照实施例9的方法，从904mg(2mmol)Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys-氨基葡萄糖和590mg(2.4mmol)Boc-Thr中得到50mg(3.7％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z):681[M+H]+。

实施例22制备(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Arg(NO2)-Boc)-Lys-氨基葡萄糖(9n)

按照实施例9的方法，从904mg(2mmol)Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys-氨基葡萄糖和766mg(2.4mmol)Boc-Arg(NO2)中得到50mg(3.3％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z):756[M+H]+。

实施例23制备(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Asp(OBzl)-Boc)-Lys-氨基葡萄糖(9o)

按照实施例9的方法，从904mg(2mmol)Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys-氨基葡萄糖和775mg(2.4mmol)Boc-Asp(OBzl)中得到68mg(4.47％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z):760[M+H]+。

实施例24制备(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Tyr-Boc)-Lys-氨基葡萄糖(9p)

按照实施例9的方法，从904mg(2mmol)Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Lys-氨基葡萄糖和674mg(2.4mmol)Boc-Tyr中得到120mg(8.4％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z):716[M+H]+。

实施例25制备(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Ala)-Lys-氨基葡萄糖(10a)

将60mg(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Ala-Boc)-Lys-氨基葡萄糖置于100mL茄瓶中，于冰浴下搅拌并加入20mL 4N氯化氢/乙酸乙酯，于冰浴下搅拌3.5h，有无色固体析出。TLC(二氯甲烷/甲醇＝3:1)显示反应完毕后，将反应液于37℃温水浴下减压浓缩。将残留物用无水乙醚(10mL×3)减压浓缩，得到40mg(80％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/z):524[M+H]+；Mp:184～186℃；[α]D25＝+50.5(c＝0.1,甲醇)；IR(KBr,cm-1):3260,2930,1642,1523,1460,1375,1299,1252,1032；1H-NMR(300MHz,CD3OD):δ/ppm＝8.990(s,1H),8.486(s,1H),8.378(s,1H),5.150(d,J＝3.6Hz,0.7H),4.788(d,J＝3.6Hz,0.3H),4.718(m,1H),3.888-3.778(m,3H),3.761-3.611(m,2H),3.340-3.485(m,2H),3.240(m,2H),2.034-1.863(m,2H),1.560(m,4H),1.310(d,J＝6.9Hz,3H)。

实施例26制备(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Val)-Lys-氨基葡萄糖(10b)

按照实施例25的方法，从80mg(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Val-Boc)-Lys-氨基葡萄糖得到标题化合物50mg(75％)，为无色固体。ESI-MS(m/z):553[M+H]+；Mp:163～165℃；[α]D25＝+58.2(c＝0.1,甲醇)；IR(KBr,cm-1):3231,2930,2858,1692,1646,1574,1519,1453,1373,1299,1032,1H-NMR(300MHz,CD3OD):δ/ppm＝8.992(s,1H),8.511(s,1H),8.380(s,1H),5.151(d,J＝3.3Hz,0.67H),4.718(d,J＝3.3Hz,0.33H),4.718(m,1H),3.976-3.634(m,4H),3.336-3.315(m,3H),3.240(m,2H),2.087-1.804(m,5H),1.523(m,2H),1.420(m,3H),1.23(m,3H)。

实施例27制备(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Gly)-Lys-氨基葡萄糖(10c)

按照实施例25的方法，从75mg(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Gly-Boc)-Lys-氨基葡萄糖得到标题化合物50mg(79％)，为无色固体。ESI-MS(m/z):524[M+H]+；Mp；184～186℃；[α]D25＝+50.3(c＝0.1,甲醇)；IR(KBr,cm-1):3260,2930,1642,1523,1460,1375,1299,1252,1032；1H-NMR(300MHz,CD3OD):δ/ppm＝9.015(s,1H),8.561(s,1H),8.387(s,1H),5.151(d,J＝3.3Hz,0.5H),4.720(d,J＝3.3Hz,0.5H),4.718(m,1H),4.418(m,1H),3.976-3.634(m,5H),3.336-3.315(m,2H),3.240(m,2H),1.823(m,2H),1.554(m,4H)。

实施例28制备(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Phe)-Lys-氨基葡萄糖(10d)

按照实施例25的方法，从60mg(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Phe-Boc)-Lys-氨基葡萄糖得到标题化合物40mg(78％)，为无色固体。ESI-MS(m/z):600[M+H]+；Mp:150～152℃；[α]D25＝+42.6(c＝0.1,甲醇)；IR(KBr,cm-1):3257,2926,1649,1521,1455,1032；1H-NMR(300MHz,CD3OD):δ/ppm＝0.949(s,1H),8.479(s,1H),8.351(s,1H),7.338-7.195(m,5H),5.153(d,J＝3.3Hz,0.7H),4.725(d,J＝3.3Hz,0.3H),4.715(m,1H),4.005-3.634(m,4H),3.336-3.315(m,3H),3.140(m,2H),3.040(m,2H),2.087-1.804(m,2H),1.523(m,4H)。

实施例29制备制备(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Trp)-Lys-氨基葡萄糖(10e)

按照实施例25的方法，从50mg(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Trp-Boc)-Lys-氨基葡萄糖得到标题化合物30mg(70％)，为无色固体。ESI-MS(m/z):639[M+H]+；Mp:183～185℃；[α]D25＝+60.5(c＝0.1,甲醇)；IR(KBr,cm-1):3258,2925,16469,1523,1458,1299,1249,744,632；1H-NMR(300MHz,CD3OD):δ/ppm＝8.912(s,1H),8.519(s,1H),8.364(s,1H),7.575(d,J＝7.5Hz,1H),7.358(d,J＝8.1Hz,1H),7.135(s,1H),7.056(d,J＝7.2Hz,1H),5.141(d,J＝3.3Hz,0.5H),4.835(d,J＝3.3Hz,0.5H),4.680(m,1H),4.036(m,1H),3.956-3.834(m,2H),3.815(m,2H),3.785-3.671(m,2H),3.584-3.471(m,2H),3.240(m,2H),3.150(m,2H),1.959(m,1H),1.822(m,1H),1.427(m,4H)。

实施例30制备(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Ile)-Lys-氨基葡萄糖(10f)

按照实施例25的方法，从80mg(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Ile-Boc)-Lys-氨基葡萄糖得到标题化合物50mg(75％)，为无色固体。ESI-MS(m/z):566[M+H]+；Mp:166～168℃；[α]D25＝+46.8(c＝0.1,甲醇)；IR(KBr,cm-1):3256,3078,2931,1649,1520,1461,1382,1249,1033；1H-NMR(300MHz,CD3OD):δ/ppm＝8.997(s,1H),8.521(s,1H),8.377(s,1H),5.158(d,J＝3.3Hz,0.5H),4.788(d,J＝3.3Hz,0.5H),4.745(m,1H),3.966-3.604(m,6H),3.415(m,1H),3.240(m,2H),2.066-1.876(m,3H),1.617-1.458(m,5H),1.194(m,1H)0.979-0.892(m,6H)。

实施例31制备(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Leu)-Lys-氨基葡萄糖(10g)

按照实施例25的方法，从80mg(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Leu-Boc)-Lys-氨基葡萄糖得到标题化合物50mg(75％)，为无色固体。ESI-MS(m/z):566[M+H]+；Mp:165～167℃；[α]D25＝+50.3(c＝0.1,甲醇)；IR(KBr,cm-1):3253,2938,1649,1520,1463,1032；1H-NMR(300MHz,CD3OD):δ/ppm＝8.793(s,1H),8.327(s,1H),8.111(s,1H),5.098(d,J＝3.3Hz,0.55H),4.652(d,J＝3.3Hz,0.45H),4.489(m,1H),3.813-3.534(m,5H),3.336-3.315(m,2H),3.040(m,2H),1.815(m,3H),1.450-1.348(m,6H),0.602(m,6H)。

实施例32制备(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Pro)-Lys-氨基葡萄糖(10h)

按照实施例25的方法，从75mg(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Pro-Boc)-Lys-氨基葡萄糖得到标题化合物48mg(78％)，为无色固体。ESI-MS(m/z):550[M+H]+；Mp:186～188℃；[α]D25＝+14.2(c＝0.1,甲醇)；IR(KBr,cm-1):3253,3076,2936,1650,1521,1460,1377,1252,1033；1H-NMR(300MHz,CD3OD):δ/ppm＝8.992(s,1H),8.513(s,1H),8.369(s,1H),5.157(d,J＝3.3Hz,0.5H),4.750(d,J＝3.3Hz,0.5H),4.745(m,1H),4.378(m,1H),3.986-3.634(m,5H),3.336-3.315(m,3H),3.283(m,2H),2.407(m,1H),2.066-1.884(m,5H),1.611(m,2H),1.515(m,2H)。

实施例33制备(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Met)-Lys-氨基葡萄糖(10i)

按照实施例25的方法，从66mg(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Met-Boc)-Lys-氨基葡萄糖得到标题化合物45mg(80％)，为无色固体。ESI-MS(m/z):584[M+H]+；Mp:160～162℃；[α]D25＝+58.1(c＝0.1,甲醇)；IR(KBr,cm-1):3257,3076,2924,1650,1520,1463,1251,1034；1H-NMR(300MHz,CD3OD):δ/ppm＝8.998(s,1H),8.520(s,1H),8.381(s,1H),5.157(d,J＝3.3Hz,0.6H),4.720(d,J＝3.3Hz,0.4H),4.718(m,1H),3.986-3.734(m,4H),3.336-3.315(m,3H),3.340(m,2H),2.541(t,J＝4.5Hz,2H),2.114-2.077(m,2H),2.081(s,3H),2.077-1.808(m,2H),1.621(m,2H),1.539(m,2H)。

实施例34制备(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Asn)-Lys-氨基葡萄糖(10j)

按照实施例25的方法，从60mg(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Asn-Boc)-Lys-氨基葡萄糖得到标题化合物39mg(76％)，为无色固体。ESI-MS(m/z):557[M+H]+；Mp:170～172℃；[α]D25＝+54.6(c＝0.1,甲醇)；IR(KBr,cm-1):3260,2925,1650,1523,1463,1375,1299,1252,1032；1H-NMR(300MHz,CD3OD):δ/ppm＝8.765(s,1H),8.308(s,1H),8.101(s,1H),5.124(d,J＝3.3Hz,0.4H),4.655(d,J＝3.3Hz,0.6H),4.465(m,1H),4.101(m,1H),3.886-3.534(m,4H),3.222(m,2H),3.211(m,1H),3.081(m,1H),2.702(m,2H),1.847(m,2H),1.465(m,2H),1.365(m,2H)。

实施例35制备(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Ser)-Lys-氨基葡萄糖(10k)

按照实施例25的方法，从50mg(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Ser-Boc)-Lys-氨基葡萄糖得到标题化合物30mg(70％)，为无色固体。ESI-MS(m/z):540[M+H]+；Mp:193～195℃；[α]D25＝+30.7(c＝0.1,甲醇)；IR(KBr,cm-1):3282,2925,1649,1537,1467,1336,1250,1032；1H-NMR(300MHz,CD3OD):δ/ppm＝9.000(s,1H),8.509(s,1H),8.377(s,1H),5.159(d,J＝3.3Hz,0.7H),4.755(d,J＝3.3Hz,0.7H),4.745(m,1H),3.941-3.894(m,3H),3.839-3.729(m,4H),3.336-3.315(m,2H),3.240(m,2H),2.087-1.804(m,2H),1.523(m,2H),1.193(m,2H)。

实施例36制备(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Thr)-Lys-氨基葡萄糖(10l)

按照实施例25的方法，从60mg(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Thr-Boc)-Lys-氨基葡萄糖得到标题化合物40mg(80％)，为无色固体。ESI-MS(m/z):554[M+H]+；Mp:166～168℃；[α]D25＝+64.5(c＝0.1,甲醇)；IR(KBr,cm-1):3252,2931,1649,1520,1462,1032；1H-NMR(300MHz,CD3OD):δ/ppm＝8.759(s,1H),8.294(s,1H),8.086(s,1H),5.110(d,J＝3.3Hz,0.5H),4.650(d,J＝3.3Hz,0.5H),4.445(m,1H),3.886-3.634(m,6H),3.336-3.215(m,2H),3.140(m,2H),1.887-1.704(m,2H),1.503(m,2H),1.363(m,2H),1.006(m,3H)。

实施例37制备(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Gln)-Lys-氨基葡萄糖(10m)

按照实施例25的方法，从56mg(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Gln-Boc)-Lys-氨基葡萄糖得到标题化合物38mg(80％)，为无色固体。ESI-MS(m/z):581[M+H]+；Mp:158～160℃；[α]D25＝+12.4(c＝0.1,甲醇)；IR(KBr,cm-1):3258,2938,1656,1520,1461,1254,1050；1H-NMR(300MHz,CD3OD):δ/ppm＝9.033(s,1H),8.626(s,1H),8.426(s,1H),5.154(d,J＝3.3Hz,0.5H),4.715(d,J＝3.3Hz,0.5H),4.700(m,1H),3.929-3.752(m,5H),3.536-3.385(m,2H),3.269(m,2H),2.431(m,2H),2.129-1.834(m,4H),1.623(m,2H),1.527(m,2H)。

实施例38制备(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Arg(NO2))-Lys-氨基葡萄糖(10n)

按照实施例25的方法，从60mg(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Arg(NO2)-Boc)-Lys-氨基葡萄糖得到标题化合物42mg(82％)，为无色固体。ESI-MS(m/z):656[M+H]+；Mp:182～184℃；[α]D25＝+40.8(c＝0.1,甲醇)；IR(KBr,cm-1):3231,2931,1638,1575,1521,1455,1380,1261,1033；1H-NMR(300MHz,CD3OD):δ/ppm＝8.807(s,1H),8.309(s,1H),8.095(s,1H),5.131(d,J＝3.3Hz,0.6H),4.500(d,J＝3.3Hz,0.4H),4.488(m,1H),3.886-3.634(m,5H),3.336-3.315(m,3H),3.040(m,1H),2.835(m,2H),1.804(m,2H),1.825(m,2H),1.480-1.373(m,6H)。

实施例39制备(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Asp(OBzl))-Lys-氨基葡萄糖(10o)

按照实施例25的方法，从80mg(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Asp(OBzl)-Boc)-Lys-氨基葡萄糖得到标题化合物55mg(80％)，为无色固体。ESI-MS(m/z):660[M+H]+；Mp:173～175℃；[α]D25＝+40.9(c＝0.1,甲醇)；IR(KBr,cm-1):3306,2926,1649,1574,1522,1457,1381,1299,1255；1H-NMR(300MHz,CD3OD):δ/ppm＝8.993(s,1H),8.496(s,1H),8.374(s,1H),7.340(m,5H),5.150(d,J＝3.3Hz,0.7H),5.116(s,2H),4.712(d,J＝3.3Hz,0.3H),4.711(m,1H),3.926-3.634(m,5H),3.436-3.375(m,2H),3.198(m,2H),2.792(dd,J＝7.2Hz,J＝12.0Hz,1H),2.692(dd,J＝7.2Hz,J＝12.0Hz,1H),1.923(m,2H),1.545(m,4H)。

实施例40制备(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Tyr)-Lys-氨基葡萄糖(10p)

按照实施例25的方法，从60mg(Nα-3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Nω-Tyr-Boc)-Lys-氨基葡萄糖得到标题化合物39mg(75％)，为无色固体。ESI-MS(m/z):616[M+H]+；Mp:184～186℃；[α]D25＝+50.4(c＝0.1,甲醇)；IR(KBr,cm-1):3260,2930,1642,1523,1460,1375,1299,1252,1032；1H-NMR(300MHz,CD3OD)：δ/ppm＝8.937(s,1H),8.481(s,1H),8.335(s,1H),7.020(d,J＝5.4Hz,2H),6.755(d,J＝5.4Hz,2H),5.158(d,J＝3.6Hz,0.45H),4.723(d,J＝3.6Hz,0.55H),4.713(m,1H),3.966-3.634(m,5H),3.436-3.375(m,2H),3.198(m,2H),2.891(dd,J＝4.5Hz,J＝9.0Hz,1H),2.960(dd,J＝4.5Hz,J＝9.0Hz,1H),1.948(m,2H),1.497(m,4H)。

实验例1测定化合物的细胞毒作用

1)本发明的化合物用含0.1％DMSO的培养基配制成所需浓度。

2)实验用的肿瘤细胞为MCF-7(人乳腺癌细胞)，K562(人白血病慢性粒细胞)，A549(人肺癌细胞系)，HaCa-T(人表皮永生化细胞)。

3)实验方法

MCF-7,HL-60,K562和S180细胞选用RPMI-1640培养基；培养基中含10％经灭活的胎牛血清和1×105U/L青霉素和100mg/L链霉素。

贴壁细胞MCF-7、A549、HaCa-T半贴壁细胞的培养:分别将生长状态良好,处于对数生长期的细胞以3×104个/mL的密度接种于96孔板，每孔100μL，置于37℃和5％CO2的细胞孵育箱中培养4小时，然后按预设的浓度梯度加入经灭菌处理的化合物10a-p与含0.1％DMSO的培养基配制成的溶液，每孔25μL，对照组加入等体积的溶解样品的溶媒。继续培养48小时后，每孔加25μL浓度为5mg/mL的MTT溶液，置于37℃和5％CO2的细胞孵育箱中培养4小时。小心除去上清液后每孔加入100μL的DMSO，振荡约10min溶解紫色残留物(甲瓒)，立即于酶标仪上检测O.D.(吸光度)值，波长为570nm。

悬浮细胞K562的培养:分别将生长状态良好,处于对数生长期的细胞以5×104个/mL的密度接种于96孔板，每孔100μL，然后按预设的浓度梯度加入经灭菌处理的化合物10a-p与含0.1％DMSO的培养基配制成的溶液，每孔25μL，对照组加入等体积的溶解样品的溶媒，置于37℃和5％CO2的细胞孵育箱中培养48小时后，每孔加入25μL浓度为5mg/mL的MTT溶液，继续置于条件为37℃和5％CO2的细胞孵育箱中培养4小时。2500rpm离心10min，小心吸出上清液，每孔加入100μL DMSO，振荡约10min溶解紫色残留物(甲瓒)，立即于酶标仪上检测O.D.(吸光度)值，波长为570nm。

按下式求出各个浓度下化合物抑制肿瘤细胞增殖的活性:

细胞增殖(％)＝(化合物组平均O.D.值/对照组平均O.D.值)×100％，实验重复3次，以细胞增殖对药物浓度作图，按作图法求出IC50(半数有效抑制浓度)值。

4)结果见表1。结果表明，无论对肿瘤细胞还是非肿瘤细胞10a-p都没有毒性。这是意想不到的技术效果。

表1 10a-p的体外抗肿瘤细胞增殖活性(IC50,μM,n＝3)

实验例2评价10a-p抑制肿瘤生长的活性

1)本发明10a-p用生理盐水溶解,阿霉素(ADR)用生理盐水溶解作为阳性对照,生理盐水(NS)作为阴性对照；

2)10a-p，生理盐水和阿霉素均为腹腔给药，10a-p的剂量为2nmol/kg，生理盐水的给药剂量为0.2mL/20g，阿霉素给药剂量为2μmol/kg，连续给药10天，共给药10次。

3)实验动物为ICR雄性小鼠(清洁级)，体重20±2g，每组12只小鼠。

4)瘤源为小鼠S180肉瘤，购自北京大学医学部动物实验中心，自行传代维持。

5)动物模型与治疗

无菌条件下抽取接种生长旺盛的S180腹水瘤瘤液，用生理盐水稀释成(1:2)的液体充分混合，将肿瘤细胞悬液用新鲜配制的0.2％台盼蓝染色，混匀后按白细胞计数方法计数，染蓝色者为死细胞，不染色者为活细胞，并按如下公式计算细胞浓度和细胞存活率。

细胞浓度＝4大方格内活细胞数/4×104×稀释倍数＝细胞数/mL

细胞存活率＝活细胞数/(活细胞数+死细胞数)×100％

将存活率大于90％的瘤液用匀浆法制备成2.0×107个/mL的细胞悬液，于鼠腋皮下接种，0.2mL/只，制造S180荷瘤小鼠。肿瘤接种24h后，治疗组小鼠每日腹腔注射化合物5a,5b，剂量为100nmol/kg和20nmol/kg。空白组小鼠每日腹腔注射0.2mL含吐温80的生理盐水。阳性对照组小鼠每日腹腔注射阿霉素，剂量为2μmol/kg。实验进行至第10天，称小鼠体重，乙醚麻醉，脱颈椎处死小鼠，然后用镊子固定小鼠右腋肿瘤生长部位，剪开皮肤，暴露肿瘤，钝性剥离，称重，按如下公式计算抑瘤率：抑瘤率％＝(阴性对照组平均瘤重–化合物组平均瘤重)/阴性对照组平均瘤重×100％。实验数据采用t检验和方差分析，瘤重以 表示。结果见表2。由表2可以看出，在100nmol/kg的剂量下，化合物5a,5b肿瘤小鼠的瘤重明显小于含吐温80的生理盐水治疗小鼠的瘤重，说明化合物5a,5b的有效剂量低达100nmol/kg。这个有效剂量比发明人曾经公开的3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-AA-OBzl(其中AA代表色氨基酸或其它L-氨基酸残基除脯氨酸)的有效剂量1μmol/kg低10倍。

表2 10a-p对S180荷瘤小鼠肿瘤生长的影响

n＝10；a)与生理盐水比p<0.05；b)与生理盐水比p<0.01。

由表2可以看出，在2nmol/kg的剂量下，10a-p治疗小鼠的瘤重明显小于生理盐水治疗小鼠的瘤重。有效剂量低达2nmol/kg。这个有效剂量比发明人曾经公开的3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-AA-OBzl(其中AA代表L-氨基酸残基)的有效剂量1μmol/kg低500倍；比发明人曾经公开的3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Met-AA-OBzl(其中AA代表L-氨基酸残基)的有效剂量0.02μmol/kg低10倍。这是意想不到的技术效果。

实验例3评价化合物的抗炎活性

1)实验方法

18-22g ICR雄性小鼠随机分为空白对照组，阿司匹林(ASP)阳性药组，化合物10a-p给药组，生理盐水(NS)阴性对照组，小鼠使用前静息1天，操作间保持室内温度22℃，每组小鼠10只。一次性给药30分钟后往小白鼠的左耳外廓涂二甲苯(0.03mL)，2小时后将小鼠用乙醚麻醉之后颈椎脱臼处死。将小鼠的左，右耳剪下，用直径7mm的打孔器在两耳的相同位置，取圆形耳片，分别称重，求出两圆耳片的重量差作为肿胀度。肿胀度＝左耳圆片重量-右耳圆片重量。

2)给药方法和剂量

给药方式为灌胃给药。空白对照：生理盐水(NS)，给药剂量为0.2mL/20g；阳性对照：阿司匹林，给药剂量为1.11mmol/kg；化合物的给药剂量为2nmol/kg.

3)统计方法

本实验数据统计均采用t检验和方差分析，肿胀度以 表示。

4)实验结果列入表3。

由表3可以看出，10a-p在2nmol/kg的剂量下治疗小鼠的耳肿胀度明显低于生理盐水治疗小鼠的耳肿胀度。说明它们有明显的抗炎作用。有效剂量低达2nmol/kg。这个有效剂量比发明人曾经公开的3H-咪唑并[4,5-c]吡啶-6-甲酰-Met-AA-OBzl(其中AA代表L-氨基酸残基)的有效剂量0.02μmol/kg低10倍。显示了意想不到的技术效果。

表3 10a-p的抗炎活性

n＝10；a)与生理盐水比p<0.05p<0.05；b)与生理盐水比p<0.01。

Nα-咪唑并吡啶-6-甲酰-Nω-AA-Lys-氨基葡萄糖,其合成,活性和应用专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。