专利摘要

一种组合物，其包含从酵母中提取的磷脂型α亚麻酸，包含通式(1)的化合物，在所述磷脂型α亚麻酸组合物中通式(1)的化合物含量为30质量％以上，其中R1选自氢或任意的脂肪酸残基，R2选自氢或任意的脂肪酸残基，在R1或R2中至少1个为脂肪酸残基，X是胆碱残基、乙醇胺残基、肌醇残基或丝氨酸残基中的任一个。

权利要求

1.一种磷脂型α亚麻酸组合物，其包含从酵母中提取的磷脂型α亚麻酸，包含通式(1)的化合物，在所述磷脂型α亚麻酸组合物中通式(1)的化合物含量为30质量％以上，

通式(1)中的R1选自氢或任意的脂肪酸，

R2选自氢或任意的脂肪酸，

在R1或R2中，至少1个为脂肪酸，

X从胆碱残基(PC)、乙醇胺残基(PE)、肌醇残基(PI)或丝氨酸残基(PS)中选择1个。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，通式(1)的所述化合物中具有胆碱残基的磷脂酰胆碱(PC)为50质量％(PC/全部磷脂)以上。

3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，R1及R2分别为独立的α亚麻酸。

4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，R1为α亚麻酸。

5.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，R2为α亚麻酸。

6.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，R1及R2为α亚麻酸。

7.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，作为磷脂型α亚麻酸组合物中的脂肪酸成分的α亚麻酸在总脂肪酸成分中为30％以上。

8.一种功能性食品，其含有根据权利要求1～7中任一项所述的磷脂型α亚麻酸组合物。

9.一种医药品，其含有根据权利要求1～7中任一项所述的磷脂型α亚麻酸组合物。

说明书

技术领域

本发明涉及一种含有α亚麻酸结合磷脂的组合物。特别是，涉及用作功能性食品或医药品的磷脂组合物。更具体地，涉及含有高浓度的、来自含有α亚麻酸的原料的、以脂肪酸残基结合的α亚麻酸的组合物。

背景技术

磷脂具有优异的亲水亲油性和生物亲和性，在从食品到医药品的各种各样的用途中使用。代表性的磷脂有磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)。在食品添加物中用作如卵磷脂那样的乳化剂，在医药品中用作核糖体。

近年来，ω-3脂肪酸(二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)、α亚麻酸)在日本知名度也不断提高。α亚麻酸是作为EPA、DHA的前体的ω-3脂肪酸，报告显示有血液脂质降低作用等心血管疾病的改善或者消炎作用等生理活性(非专利文献1、非专利文献2)。特别是心血管疾病在日本、欧美也成为三大疾病之一，其改善尤为重要。

ω-3脂肪酸的原料有鱼类、藻类、亚麻籽等。在鱼类或藻类中EPA/DHA为主要脂肪酸，在亚麻籽中α亚麻酸为主要脂肪酸。

特别是报告有磷脂型ω-3脂肪酸与通常的甘油三酸酯型相比，肝功能、生殖功能、脑功能的改善效果高，因而受到关注。

磷脂型ω-3的原料有磷虾油或成鲑鱼子等鱼卵、水产废弃物。特别是将南极磷虾作为原料的磷虾油有销售。

来自南极磷虾(磷虾油)的磷脂型ω-3脂肪酸的组合物中，磷脂浓度为约40％(W/W组合物)，包含高浓度的甘油三酸酯(约45％)及游离脂肪酸(约15％)(专利文献1)。另外，报告有来自鱼贝类、特别是来自其加工过程中产生的废弃物的有用磷脂的制造方法(专利文献2)。

但是，在将水产物作为原料时，担心因海洋污染引起的重金属、砷等的问题。而且，担心因季节变化而捕捞量、磷脂含量变得不稳定。因此，要求难以受到季节变化影响、能实现高品质且稳定的生产的替代原料。

而且，来自磷虾油或鱼贝类、废弃物的脂质由于磷脂型EPA、DHA为主成分，因此更优选磷脂型α亚麻酸成为主成分的原料。

亚麻籽油如上所述那样含有α亚麻酸，为甘油三酸酯型，不为磷脂结合型。

存在如下例子：从富含甘油三酸酯型α亚麻酸的亚麻籽油利用酶进行酯交换反应，来制备磷脂型α亚麻酸(非专利文献3)。但是，由于使用酶等，因而需要繁杂的操作，成本也有可能提高。将大豆、蛋黄作为原料，通常有卵磷脂，但亚油酸为主要脂肪酸，α亚麻酸为10％以下，含量不足。

存在如下方法：使用微滤膜从作为奶系的原料的牛奶提高磷脂含量的方法(专利文献3)，但并非着眼于使磷脂型α亚麻酸变为高含量。另外，已知有如下的方法：将酵母作为原料，利用已烷从代表性的面包酵母或者啤酒废酵母中提取亚油酸等油脂(专利文献4)。但是，已知面包酵母无法储存α亚麻酸(非专利文献4)，而且利用已烷难以提取磷脂。因此，至今为止仍未知可含有高含量磷脂型α亚麻酸的组合物。

专利文献

专利文献1：美国专利申请公开第2004/0234587号说明书

专利文献2：日本专利特开2006-311853号公报

专利文献3：日本专利特开2006-158340号公报

专利文献4：日本专利特开平05-03098号公报

非专利文献

非专利文献1：“ジヤ一ナル·才レ才サイエンス”(J.OleoSci)、2007年、第56卷、p361-367

非专利文献2：“ヨ一口ツパ·ハ一ト·ジヤ一ナル(EurHeartJ)”、2011年、第32卷、p2573-2584

非专利文献3：“成城大学理工学部研究報告”、2012年、p95-96

非专利文献4：“イ一スト(Yeast)”、2009年、第26卷、p167--184

发明内容

本发明的课题是为了解决如上所述的磷脂型ω-3原料的问题，着眼于有食用经验并确认安全的产朊假丝酵母，提供品质或原料供应容易、稳定、高纯度的磷脂型α亚麻酸。

本发明人为了解决上述问题而反复努力研究，结果发现，使用在目前食品用途中大量生产的产朊假丝酵母(Candida utilis)等的酵母提取物提取后的酵母残渣，将其作为原料进行醇提取，由此获得磷脂型α亚麻酸的组合物，从而完成了本发明。

本发明是：

(1)一种功能性食品，其含有从酵母提取物提取后的酵母残渣中提取的磷脂型α亚麻酸；

(2)一种医药品，其含有从酵母提取物提取后的酵母残渣中提取的磷脂型α亚麻酸；

(3)一种制造方法，其对从酵母提取物提取后的酵母残渣中提取的磷脂型α亚麻酸进行提取，

该有用磷脂组合物包含含量为30质量％以上的磷脂。根据上述构成，可获得富含磷脂酰胆碱PC的组合物。

具体来说，本发明提供：

(1)一种磷脂型α亚麻酸组合物，其包含从酵母中提取的磷脂型α亚麻酸，包含通式(1)的化合物，在所述磷脂型α亚麻酸组合物中通式(1)的化合物含量为30质量％以上，

通式(1)中的R1选自氢或任意的脂肪酸，

R2选自氢或任意的脂肪酸，

在R1或R2中，至少1个为脂肪酸，

X从胆碱残基(PC)、乙醇胺残基(PE)、肌醇残基(PI)或丝氨酸残基(PS)中选择1个。

(2)根据(1)所述的组合物，通式(1)的所述化合物中具有胆碱残基的磷脂酰胆碱(PC)为50质量％(PC/全部磷脂)以上。

(3)根据(1)所述的组合物，R1以及R2分别为独立的α亚麻酸。

(4)根据(1)所述的组合物，R1为α亚麻酸。

(5)根据(1)所述的组合物，R2为α亚麻酸。

(6)根据(1)所述的组合物，R1及R2为α亚麻酸。

(7)根据(1)所述的组合物，作为磷脂型α亚麻酸组合物中的脂肪酸成分的α亚麻酸在总脂肪酸成分中为30％以上。

(8)一种功能性食品，其含有根据(1)～(7)中任一项所述的磷脂型α亚麻酸组合物。

(9)一种医药品，其含有根据(1)～(7)中任一项所述的磷脂型α亚麻酸组合物。

根据本发明，可以由有食用经验并且确认了安全性的产朊假丝酵母等提供含有磷脂型α亚麻酸的组合物。本发明的组合物由于臭味比其他磷脂型ω-3原料弱，因此广泛应用于从饮料食品到化妆品、医药品。

产朊假丝酵母的酵母提取物适合作为调料，因此进行了大量生产，本发明由于可以有效利用其残渣，因此在成本、废弃物削减的方面也是极为有利的方法。

附图说明

图1是产朊假丝酵母油(本发明)M/Z＝840的MS3色谱图。

图2是产朊假丝酵母油(本发明)M/Z＝814的MS3色谱图。

图3是体重的演变(实施例3)。

图4是40天后的体重比较(实施例3)。

图5是血液的生物化学分析结果(GOT)(实施例3)。

图6是血液的生物化学分析结果(GPT)(实施例3)。

图7是肝脏中的甘油三酸酯浓度(实施例3)。

具体实施方式

本发明的磷脂组合物可以用作食品、功能性食品或医药品。本申请的功能性食品是指通过摄取本发明的磷脂型α亚麻酸组合物而期待发挥出生理活性功能的健康食品、补充品、营养功能食品等，但并不限于此。

本说明书中所使用的“脂肪酸”为饱和或不饱和，饱和脂肪酸的例子并不限于以下所述，可以列举：丙酸、丁酸、戊酸、已酸、庚酸、辛酸、壬酸、癸酸、十一烷酸、十二烷酸、十三烷酸、十四烷酸、十五烷酸、十六烷酸、十七烷酸、十八烷酸、十九烷酸、二十烷酸、二十一烷酸、二十二烷酸、二十三烷酸、二十四烷酸、二十五烷酸、二十六烷酸、二十七烷酸、二十八烷酸、二十九烷酸、三十烷酸、三十一烷酸、三十二烷酸、三十三烷酸、三十四烷酸、三十五烷酸、三十六烷酸等。不饱和脂肪是在脂肪酸链中存在1个或多个双键的脂肪或脂肪酸。在包含一个双键时，脂肪分子为一价不饱和，在包含多个双键时，脂肪分子为多价不饱和。不饱和脂肪酸的例子并不限于以下所述，可以列举：肉豆蔻脑酸、棕榈油酸、十六碳-6-烯酸、油酸、亚油酸、α亚麻酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸(EPA)、芥酸、二十二碳六烯酸(DHA)、及二十二碳五烯酸等。

(磷脂组合物的制造方法)

本发明中的优选的原料是被称为产朊假丝酵母的Candida utilis，只要含有目标成分，则并无特别限定，例如真菌类可以列举：假丝酵母属、克鲁维酵母属、接合酵母属的酵母。酵母的培养方法并无特别限定。酵母的培养形式可以使用分批培养或连续培养中的任一种。培养基通常使用葡萄糖、乙酸、乙醇、甘油、糖蜜、亚硫酸浆废液等作为碳源，氮源使用脲、氨、硫酸铵、氯化铵、硝酸盐等。磷酸、钾、镁源也可以为过磷酸石灰、磷酸铵、氯化钾、氢氧化钾、硫酸镁、氯化镁等通常的工业用原料，此外添加锌、锰、铁离子等的无机盐。此外，可以添加维生素、氨基酸、核酸相关物质等。还可以添加酪蛋白、酵母提取物、肉提取物、蛋白胨等有机物。

本发明中所用的原料，最优选为酵母提取物的提取残渣。本申请的酵母提取物的提取残渣是指从所培养的酵母提取酵母提取物等之后的固态成分。酵母提取物的提取法并无特别限制，通常通过自我分解法、热水提取法、酶提取法、酸或碱提取法、或它们的组合进行。本申请中将通过这些提取法提取后的酵母菌体或固体成分称为酵母提取物提取残渣。可以利用转筒干燥机将该残渣干燥后，进行后述的磷脂制造。

来自前述原料的磷脂组合物，可以通过本领域技术人员已知的任意方法进行制作或制造。例如本发明的制造步骤包括：从原料进行提取的步骤；水区分与冷却步骤；过滤、浓缩步骤；或粉末化步骤。从原料的提取步骤以后的步骤并无特别限制，因此可以根据目的进行适当组合。

提取步骤使用有机溶剂提取、经酶处理之后有机溶剂提取、超临界提取的任一种方法。例如为有机溶剂提取时，所使用的溶剂有：甲醇、乙醇、正丙醇、己烷、丙酮、氯系溶剂。优选碳数1～3的低级醇，在食品用途中使用时，更优选乙醇。另外，本发明中也包括混合了蒸馏水等在工业用途中所用的水的含水乙醇。通过改变含水率，可以调整所得的磷脂组合物的磷脂含量。因此，使用与目的相对应的含水乙醇。水/乙醇的体积比通常为0.01/99.99～30/70，优选为0.5/99.5～30/70。该水分含量可考虑进原料中的水分量。乙醇使用量并无特别限定。通常相对于原料为1质量份～20质量份，优选为2质量份～3质量份左右。

提取方法是：在添加乙醇进行充分搅拌后，在适当的温度及时间内进行反应。温度并无特别限定，通常为20℃～小于80℃，优选为50℃～70℃。提取时间并无特别限定，通常为1小时以上，优选为3小时～9小时。提取方法可以列举：搅拌、回流、浸渍、震荡、超声波提取。

如果在提取之前进行酶处理，则可以缩短提取时间。作为酶，包括：作为细胞壁溶解酶的来自链霉菌属的β葡聚糖酶“デナチ一ムGEL”(ナガセケムテツクス社制造)、来自篮状菌(Taloromyces)属的β葡聚糖酶“Filtrase BRX”(DSMジヤパン社制造)、天野エンザイム社制造的“ツ二力一ヴFN”。优选ツ二力一ゼFN。在进行超临界提取时，为如下的方法：在使超临界状态的二氧化碳与酵母悬浊液接触后，进行减压而恢复到大气压，由此从酵母悬浊液分离二氧化碳。

在进行有机溶剂提取后，为了除去中性脂质、麦角固醇、游离脂肪酸，可增加加水的区分步骤或冷却步骤。由此难以氧化，可改善随着时间经过而导致的劣化。加水而制备的乙醇浓度宜为50％～90％，优选为70％。冷却步骤中，冷却温度宜为10℃以下。特别理想为5℃以下。冷却时间为1小时～10小时，因为当长时间进行时磷脂也不溶化而出来，因此优选为1小时左右。

在进行浓缩时，可使用已知的浓缩装置。优选可列举：能够以磷脂不分解的方式尽可能降低温度的减压浓缩机。

而且，为了抑制中链脂肪酸或臭味，作为赋形剂，也可以添加环糊精、团簇糊精等进行干燥。干燥可以使用冷冻干燥、真空干燥等已知的干燥法。

本发明的组合物也可以根据需要的纯度或者来自原料的臭味等，利用硅胶管柱等提高纯度。可以将直到上述为止的各步骤进行适当组合。

本发明的组合物，如上所述那样可以由酵母或酵母提取物的提取残渣获得磷脂型ω-3组合物，通过将本申请的说明书中所记载的步骤进行组合，可以获得磷脂型α亚麻酸组合物，在本发明的磷脂型α亚麻酸组合物中，包含30质量％以上的通式1所示的化合物，而且通式1所示的化合物中具有胆碱残基的磷脂酰胆碱(PC)在磷脂中为50质量％(PC/全部磷脂)以上，α亚麻酸在总脂肪酸中为30质量％以上。

本发明的组合物可以分别单独或者与其他成分组合而制成饮料食品。用作饮料食品时的形态可以制成固态食品、凝胶食品等所有的食品形态。例如可以列举：粉末、胶囊、颗粒、片状等形态，优选加工容易且抗氧化性高的胶囊。此种饮料食品可以根据惯用的方法进行加工。

另外，本发明的组合物可以添加制剂上容许的载体制成医药品。医药品的剂型并无特别限定，例如可以列举：胶囊剂、锭剂、丸剂、片剂、散剂及颗粒剂等，优选制剂化容易的胶囊。

磷脂可以利用已知的方法来进行分析。利用福尔茨(Folch)法将样品提取后，供于二维展开的薄层色谱。条件如下，薄层板使用硅胶，一维展开剂使用四氢呋喃∶丙酮∶甲醇及水(50∶20∶40∶8)，二维展开剂使用氯仿∶丙酮∶甲醇∶乙酸及水(50∶20∶10∶15∶5)。显色方法进行迪特默(Dittmer)试剂喷雾。展开之后，逐个记录相当于各磷脂的部分，进行湿式分解，利用钼蓝吸光光度法进行比色定量。

组合物的脂肪酸组成是将构成脂肪酸在三氟化硼中进行甲酯化利用气相色谱仪(岛津GC-14B型)进行分析。管柱使用熔融石英毛细管柱(Fused Sillica Capillary Column)Omegawax 320(30m×0.32mm i.d.)(Supelco Inc.，Bellefonte，PA，USA)，载气使用氦气，利用氢焰离子化检测FID进行检测。

对组合物的结构进行液相色谱/质谱分析(LC/MS)。管柱使用Inertsil SIL 100A(4.6×100mm、GLサイエンス社制造、3μm)，溶出溶剂使用氯仿与甲醇∶水＝95∶5(体积比)的梯度。管柱温度为35℃、流速为1ml/min、检测使用电子喷雾离子化装置(ESI、amaZon SLTM Bruker Daltonics K.K.制造)。以12L/min的流量流通氮气，为了脱溶剂而以250℃加热，雾化气体以压力45psi流通。以负(negative)模式测定，毛细管电位设定为4.5kV，端板偏移(end plate offset)设定为0.5kV。质谱在200-900m/z的范围内进行。进行直到MS3为止的多段型质谱分析。

实施例

以下，结合实施例对本发明进行具体地说明，但本发明的技术范围并不受这些记载的任何限制。另外，在以下实施例中，只要无特别说明，根据本领域技术人员的已知的通常的方法进行实施。

制造例1

(酵母的培养)

事先在包含YPD培养基(酵母提取物1％、聚蛋白胨2％、葡萄糖2％)的三角烧瓶中，将产朊假丝酵母CS7529株(FERMP-3340)进行酵母培养，将其在30L容积发酵槽中在18L培养基中植菌1％～2％。培养基组成使用：葡萄糖4％、磷酸一铵0.3％、硫酸铵0.161％、氯化钾0.137％、硫酸镁0.08％、硫酸銅1.6ppm、硫酸铁14ppm、硫酸锰16ppm、硫酸锌14ppm。培养条件在pH4.0、培养温度30℃、通气量1vvm、搅拌600rpm下进行。pH的控制用氨来进行。在16小时菌体培养后回收培养液，利用离心分离来收集菌体，获得180g湿润酵母菌体。

(酵母提取物的提取)

通过将菌体培养后的湿润酵母菌体悬浮在蒸馏水中反复离心分离而清洗。清洗后将湿润菌体再次悬浮在蒸馏水中，或将经冷冻干燥或热风干燥的干燥菌体悬浮在蒸馏水中。用2N NaOH调整为pH13后，在70℃搅拌20分钟，将酵母提取物提取。利用转筒干燥机将酵母提取物提取后的菌体残渣干燥，使用干燥物100g作为原料。干燥物中的磷脂酰胆碱含量为2.8％。

实施例1

用95％乙醇在60℃对上述原料100g萃取9小时。在其萃取液中加水使得乙醇浓度变为70％，在温度到达5℃后保持1小时后，利用滤纸(ADVANTEC、No.5C)进行过滤去除不溶物。接着，使用旋转蒸发器将过滤液减压浓缩干燥，获得组合物5.5g。干燥物的残留乙醇浓度为2.5％。组合物的磷脂含量成为71.7％，磷脂酰胆碱含量成为48％。磷脂组合物的脂肪酸组成成为：α亚麻酸38％、亚油酸29％、油酸15％、棕榈油酸4.2％。

实施例2

用95％乙醇在60℃对上述原料100g萃取9小时。在其萃取液(磷脂酰胆碱含量为40％以上)中加水使得乙醇浓度变为70％，在温度到达5℃后保持1小时后，利用滤纸(ADVANTEC、No.5C)进行过滤去除不溶物。接着，使用旋转蒸发器将过滤液浓缩干燥。用乙醇将其干燥物5.5g溶解后，应用到硅胶管柱(容量100ml、FL60BD、富士シリシア化学社)中，将95％乙醇通液。分取包含磷脂酰胆碱的组分再次进行浓缩，获得组合物3g。组合物的磷脂含量成为95％，磷脂酰胆碱含量成为88.3％。磷脂组合物的脂肪酸组成成为：α亚麻酸46％、亚油酸26％、油酸11％、棕榈油酸7.7％。

图中表示根据实施例2制备的磷脂结合型α亚麻酸组合物的LC-MS的多段MS3的片段图案。主要存在2种磷脂，其M/Z分别为840、814。关于M/Z＝840的分子种类，与磷脂结合的脂肪酸为α亚麻酸与亚油酸。关于M/Z＝814的分子种类，与磷脂结合的脂肪酸为α亚麻酸与棕榈油酸。

实施例3

对小白鼠(C57BL/6J小白鼠、将3周龄雄性预饲养2周)，投予在高脂肪食物(脂质20％)中添加2％样品油脂的饲料、及实施例2中所取得的本申请组合物与亚麻籽油(制品名“アマ二油”，和光纯薬社制造)、磷虾油(制品名“コ一ヨ一クリル才イル”，甲陽ケミ力ル社制造)，进行肝功能及脂质代谢改善的动物试验。经过7周后将小白鼠解剖，评价对血浆脂质的效果。也测定经过7周中的体重的演变。体重的演变表示于图3。另外，将40天后的体重比较表示于图4。本申请组合物在40天后的体重中，与其他组合物相比见到体重减少倾向。对于血液的生物化学分析结果、GOT(AST)值、GPT(ALT)值，本申请组合物(5)、亚麻籽油(6)、磷虾油(7)与对照(4)相比，见到同等(图5)的降低。(图5、图6)而且，本申请组合物在肝脏中的甘油三酸酯浓度表现出与磷虾油接近的低值(图7)。

由于本发明的磷脂结合型α亚麻酸组合物由酵母或酵母提取物提取残渣获得，因此臭味弱。因此，可适用于食品，也可用作医药品。与其他的磷脂结合型α亚麻酸组合物相比，吸收性也好。而且，本申请的来自酵母残渣的磷脂结合型α亚麻酸组合物，发挥出中性脂肪、游离脂肪酸减少、血糖值减少等与来自酵母以外的其他物质的磷脂结合型α亚麻酸组合物同等的优异的效果。而且，由于GPT(ALT)值降低，因此也可用作非醇性脂肪疾病等的治疗、预防、改善医药品或食品。

附图标记说明

1：α亚麻酸(C18：3)

2：亚油酸(C18：2)

3：棕榈油酸(C16：1)

4：对照

5：本申请组合物

6：亚麻籽油

7：磷虾油

含有磷脂型α亚麻酸的组合物专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。