专利摘要

本发明涉及产生适于乳糜泻对象消耗的食品或基于麦芽的饮料的方法。特别地，本发明涉及生产具有低水平大麦醇溶蛋白的食品或者基于麦芽的饮料的方法。本发明还提供了产生可用于本发明方法中的谷粒的大麦植物。

说明书

发明领域

本发明涉及生产适于乳糜泻对象消耗的食品或者基于麦芽的饮料的方法。本发明特别涉及生产具有低水平大麦醇溶蛋白的食品或者基于麦芽的饮料的方法。本发明还提供了产生可用于本发明方法中的谷粒的大麦植物。

发明背景

乳糜泻(CD)是小肠的由T细胞介导的自身免疫疾病，其在易感个体中通过摄取来自小麦(由麦谷蛋白和麦醇溶蛋白组成的谷蛋白)、大麦(大麦醇溶蛋白)或者黑麦(裸麦醇溶蛋白)的统称为谷醇溶蛋白的特定贮藏蛋白而触发。燕麦谷醇溶蛋白(燕麦蛋白)看起来被大多数乳糜泻对象耐受(Hogberg etal.，2004；Peraaho et al.，2004a)，但是在少数乳糜泻对象中可诱导阳性反应(Lundin et al.2003；Peraaho et al.2004b)。CD在至少澳洲、北美洲和南美洲、欧洲、非洲和印度的大约0.25-1％人群中发生(Hovell et al.2001；Fasano et al.2003；Treem 2004)，但是这个疾病可能经常未被诊断。随着对于未治疗的CD的症状和后果的了解逐渐增多，使得在澳洲CD的诊断率每年增加15％。大约1/4的高加索人和西亚人携带HLA-DQ8或者-DQ2等位基因，其是CD的必需但非足够的决定簇(Treem 2004)。然而，具有这些等位基因的人只有大约1/20的人发生CD。目前唯一的治疗方法是完全避免小麦、大麦和黑麦，因为每天消耗少如10mg的谷蛋白也可触发复发(Biagi et al.，2004)。

如果未诊断或者未治疗，CD具有严重的健康后果，可以危及生命，特别是在婴幼儿中。CD导致小肠吸收绒毛变形且可以导致绒毛破坏。结果营养物质吸收不良，这与体重减轻、疲乏、矿物质缺乏、皮炎和夜视力丧失以及剧烈的肠道不适相关，所述肠道不适一般包括腹胀、腹泻和腹部绞痛。未治疗的CD对象发生癌症的危险增加，如小肠癌的危险增加10倍，非霍奇金淋巴瘤的危险增加3-6倍，小肠T细胞淋巴瘤的危险增加28倍。CD对象也表现出1型糖尿病危险增加3倍(Peters et al.2003；Peters et al.2003；Verkarre et al.2004)。在乳糜泻患者中已报道精神抑郁的迹象增加5倍(Pynnonen et al.2004)。

乳糜泻的分子机制目前已经充分了解(Sollid 2002；Hadjivassiliou et al.2004)，这是对谷醇溶蛋白中特异性氨基酸序列的反应。消化不良的谷醇溶蛋白肽富含脯氨酸和谷氨酰胺，符合由肠粘膜中人组织反式谷氨酰胺酶(tTG)靶向的底物基序，使得关键的谷氨酰胺残基脱酰胺化。所得负电荷的谷氨酸使得脱酰胺的谷醇溶蛋白结合特殊类别的HLA分子(DQ2或者DQ8)(Kim et al.2004)。靶向肠道内皮的特异性T-细胞克隆即所谓的DQ2(8)/CD4+限制的T细胞被刺激增殖，释放使得绒毛萎缩或者抗体产生的淋巴因子(Hadjivassiliou et al.2004)。在饮食攻击之后大约第6天这些T细胞克隆在乳糜泻对象外周血中达到最大浓度(Anderson et al.2000)。因此纯化的蛋白质的腹腔毒性(coeliac toxicity)可以通过测量其刺激T细胞产生IFN-γ的能力而灵敏且特异地确定，IFN-γ是导致在乳糜泻中所见肠病发病的基础细胞因子。因此这个疾病看起来是由于宿主免疫系统与谷醇溶蛋白反应而引起，就像其是入侵的病原体而发起强免疫应答，而非变态反应。

小麦谷蛋白由几百个不同但相关的蛋白质组成，包括单体麦醇溶蛋白和聚合的麦谷蛋白。麦醇溶蛋白占大约一半的谷蛋白级分，α-麦醇溶蛋白组成50％以上的麦醇溶蛋白(Wieser et al.，1994；Gellrich et al.，2003)。迄今为止大部分腹腔毒性数据集中于α-麦醇溶蛋白，这是第一个被克隆和充分测序的谷醇溶蛋白(Kasarda et al.1984)。小麦α-麦醇溶蛋白的腹腔毒性主要由位于关键的17氨基酸表位中的一个谷氨酰胺残基决定(Arentz-Hansen et al.2000；Anderson et al.2000；Shan et al.2002)。已经鉴别在这个区域具有点突变的天然发生的肽及合成的肽是无毒性的(Vader et al.2003)。因此，看来可能可以鉴别其它非毒性但是具有功能的谷醇溶蛋白分子。目前对于腹腔毒性的可用预测限于小部分谷醇溶蛋白，已经鉴定了其氨基酸序列或者编码其的基因的核苷酸序列。

大麦是二倍体谷物，广泛生长于寒冷气候环境中，用以制作食品和饮料。大麦种子蛋白根据其分别在水、盐溶液、醇水溶液以及碱性或酸性溶液中的溶解度被分为白蛋白、球蛋白、谷醇溶蛋白(大麦醇溶蛋白)和谷蛋白。发现几乎一半的大麦种子贮藏蛋白是谷醇溶蛋白。这些谷醇溶蛋白主要是储备蛋白，作为发芽之后生长和发育所需的碳、氮或硫的来源。大麦醇溶蛋白组成种子蛋白的大约40％，但是依赖于生长期间植物的氮供应。已经鉴定了编码大麦谷醇溶蛋白的基因座，主要是因为其有助于大麦麦芽制造质量及在啤酒生产中的泡沫形成和混浊。在大麦中有四类谷醇溶蛋白，即分别由染色体1H上的Hor2、Hor1、Hor3和Hor5基因座编码的B、C、D和γ-大麦醇溶蛋白(Shewry et al.1999)。这些基因座编码从单个谷醇溶蛋白(例如D大麦醇溶蛋白)至含有20-30个成员的蛋白质家族(例如B和C大麦醇溶蛋白)不等的蛋白质。B和C大麦醇溶蛋白相对更丰富，分别包含大约70％和24％的总大麦醇溶蛋白。D和γ-大麦醇溶蛋白以均为大约2-4％的较少量存在。大麦醇溶蛋白的分子量为大约35kDa-100kDa。没有与小麦α-麦醇溶蛋白密切同源的大麦谷醇溶蛋白，然而普遍认为大麦醇溶蛋白具有腹腔毒性(Williamson & Marsh 2000)。目前还未报道大麦的各个大麦醇溶蛋白诱导CD的程度。

啤酒是由发芽的大麦制成的广泛消耗的产品，因此普遍认为其不适于乳糜泻对象且一般排除于其日常饮食之外。Kanerva et al.(2005)在除了一些之外的所有啤酒中均能鉴别出低水平谷醇溶蛋白。医生和营养学家通常要求其CD患者坚持不懈地避免任何含有小麦、大麦或者黑麦的产品，包括啤酒。在美国，FDA定义“无谷蛋白”要求所述产品由无谷蛋白原材料制成，即不含有任何小麦、大麦或者黑麦。Codex Alimentarius允许具有“无谷蛋白”标记的食品含有不超过200ppm谷蛋白(0.2g/kg或者0.2g/L)，这也是欧洲“无谷蛋白”标准。大多数乳糜泻对象可耐受直至大约10mg谷蛋白/天，而无明显影响(Thompson，2001)。

谷醇溶蛋白对于乳糜泻患者的毒性可以通过使用如ELISA等免疫测定法特异性检测(Ellis et al.，1990；Sorell et al.，1998)。这些测定法依赖于蛋白质与抗体之间的特异性相互作用。也可以使用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和HPLC(Kanerva et al.，2005；Marchylo et al.，1986；Sheehan and Skerritt，1997)。

因此需要这样的大麦，其诱导CD的大麦醇溶蛋白水平明显降低，可以用于CD易感人群的食品和饮料中。

发明概述

在大麦中有四类谷醇溶蛋白，即由Hor2、Hor1、Hor3和Hor5基因座分别编码的B、C、D和γ-大麦醇溶蛋白。本发明人发现至少B、C和D类在乳糜泻对象中诱导不希望的炎症应答。

同时先前已经鉴别了产生降低水平的某些类别大麦醇溶蛋白的各种大麦突变体，也已经观测到这类突变体至少通过其它类别大麦醇溶蛋白的产生增加而补偿。这提示大麦种子具有补偿机制，以保证为种子存活所需的一定水平的大麦醇溶蛋白。令人惊奇地，本发明人已经确定可以消除大多数(如果不是全部)大麦醇溶蛋白产生，且获得在田间能萌发及产生大麦植物的存活种子，尽管种子中大多数贮藏形式的氮丧失。这些种子可特别用于产生供乳糜泻对象消耗的食品和饮料。

因此，本发明一方面提供了生产食品或者基于麦芽的饮料的方法，所述方法包括将大麦谷粒或者从所述谷粒中产生的麦芽、面粉或者全麦面粉(wholemeal)与至少一种其它食品或者饮料成分混合，其中所述谷粒、麦芽、面粉或者全麦面粉与相应野生型大麦植物的谷粒或者以相同方式从相应野生型大麦植物的谷粒中产生的麦芽、面粉或者全麦面粉相比包含大约25％或更低水平的大麦醇溶蛋白，从而生产所述食品或者基于麦芽的饮料。

优选所述谷粒、麦芽、面粉或者全麦面粉与相应野生型大麦植物的谷粒或者以相同方式产生的野生型麦芽、面粉或者全麦面粉相比包含大约15％或更低、大约10％或更低、大约7.5％或更低、大约5％或更低、或者更优选大约2.5％或更低水平的大麦醇溶蛋白。

野生型大麦植物的实例包括但不限于Bomi、Sloop、Carlsberg II、K8或L1。

在另一个实施方案中，所述谷粒与相应野生型大麦植物的谷粒相比包含大约25％或更低、大约20％或更低、大约15％或更低、大约10％或更低、大约7.5％或更低、大约5％或更低或者更优选大约2.5％或更低水平的B、C和/或D大麦醇溶蛋白或者其任意组合。所述麦芽、面粉或者全麦面粉在B、C和/或D大麦醇溶蛋白或者其任意组合的水平中可包含相同程度的降低。

在另一个实施方案中，所述面粉包含低于大约0.4％、低于大约0.3％、低于大约0.2％及更优选低于大约0.1％的大麦醇溶蛋白。从所述谷粒生产的面粉中的大麦醇溶蛋白水平可以通过本领域技术人员已知的任何技术如醇分级分离技术确定。

在一个实施方案中，所述谷粒的平均重量(100个谷粒重量)是至少大约2.4g。优选所述谷粒的平均重量是大约2.4g至大约6g，更优选平均重量是大约3.5g至大约6g。

在另一个实施方案中，所述谷粒的淀粉含量是至少大约50％(w/w)。更优选所述谷粒的淀粉含量是大约50％至大约70％(w/w)。淀粉含量可以通过使用本领域已知的任何技术确定。例如可以使用实施例4中提供的方法。

在再一个实施方案中，从所述谷粒生产的面粉的腹腔毒性低于从相应野生型大麦植物谷粒生产的面粉的相应毒性的大约50％、大约25％、更优选是大约10％或更低。所述腹腔毒性可以通过使用本领域已知的任何技术确定。例如，可以使用实施例1中提供的方法。

在另一个实施方案中，所述谷粒产生的麦芽包含低于大约200ppm大麦醇溶蛋白、低于大约125ppm大麦醇溶蛋白，更优选低于大约75ppm大麦醇溶蛋白。大麦醇溶蛋白含量也可以通过使用本领域已知的任何技术确定。例如，可以使用实施例7中提供的方法。

在另一个实施方案中，大麦谷粒的至少大约50％的基因组与大麦栽培种Sloop的基因组相同。

优选所述谷粒来自这样的植物，其对于导致与相应野生型大麦植物相比B、C和D类别的至少一个、至少两个或者所有三个类别大麦醇溶蛋白水平降低的一或多个遗传变异的至少一个、至少两个、至少三个或者更多个基因座是纯合的。更优选这些遗传变异是缺失在Hor2基因座的大多数或者所有B-大麦醇溶蛋白编码基因的等位基因和/或在大麦Lys3基因座的突变等位基因。

在一个实施方案中，所述谷粒来自非转基因植物。例如所述谷粒可以来自Riso 56与Riso 1508之间的杂交植物或者其分别包含存在于这些亲本品系中的hor2和lys3突变的后代。优选这种后代植物包含与Riso 56或者Riso 1508明显不同的遗传背景，例如包含这些亲本品系的大约25％以下的遗传背景。

在另一个实施方案中，所述谷粒来自转基因植物。

转基因植物的一个实施方案是包含转基因的植物，所述转基因编码下调谷粒中至少一种大麦醇溶蛋白的产生的多核苷酸。优选这个实施方案的多核苷酸是反义多核苷酸、有义多核苷酸、催化性多核苷酸、人工微小RNA或者双链体RNA分子，其下调编码大麦醇溶蛋白的一个或者优选多个基因的表达。

转基因植物的另一实施方案是包含转基因的植物，所述转基因编码对于乳糜泻对象低毒性或者优选无毒性的谷醇溶蛋白。对于乳糜泻对象无毒性的谷醇溶蛋白的实例包括但不限于燕麦蛋白和玉米醇溶蛋白。

在一个实施方案中，所述方法包括从所述谷粒生产面粉或者全麦面粉。

在一个特别优选的实施方案中，所述方法进一步包括从所述谷粒中生产麦芽。在一个实施方案中，所述方法进一步包括将干燥的发芽谷粒分级分离成胚乳级分、内皮层级分、外壳级分、初生叶级分和麦芽小根级分的两或多种；以及组合及混合预定量的两或多种这些级分。

对于生产麦芽和啤酒，大麦种子的重要成分是淀粉。然而，先前已经示出大麦醇溶蛋白水平降低的大麦突变体中淀粉水平也降低，预期该植物种子不适于生产麦芽和啤酒。本发明人令人惊奇地发现在已经除去大部分(如果不是全部)大麦醇溶蛋白产生的大麦种子可用于生产具有适于商业生产特性的麦芽和啤酒。因此在一个特别优选的实施方案中，基于麦芽的饮料是啤酒或者威士忌，所述方法包括使所述谷粒发芽。

在一个实施方案中，所述基于麦芽的饮料是啤酒，其包含至少大约2％、更优选至少大约4％的醇。优选所述醇是乙醇。

在再一个实施方案中，基于麦芽的饮料是啤酒，其包含低于大约1ppm大麦醇溶蛋白。

在再一个实施方案中，至少大约50％的谷粒在用于麦芽制造的典型麦芽条件下在吸涨之后3天内发芽。

使用本发明的方法可以生产的食品的例子包括但不限于面粉、淀粉、发酵或未发酵面包、意大利面(pasta)、面条、动物饲料、早餐谷物、零食、蛋糕、麦芽、点心(pastry)或者含有基于面粉的调味品的食品。

优选所述食品或者基于麦芽的饮料是供人消耗的。在另一个优选的实施方案中，在消耗所述食品或者饮料之后，乳糜泻对象的至少一种乳糜泻症状不发生。

另一方面，本发明提供了生产食品或者基于麦芽的饮料的方法，所述方法包括将包含一或多种大麦谷粒蛋白和低于大约200ppm大麦醇溶蛋白的麦芽和/或包含一或多种大麦谷物蛋白和低于大约0.4％大麦醇溶蛋白的面粉与至少一种其它食品或者饮料成分混合，从而生产所述食品或者基于麦芽的饮料。

在一个实施方案中，所述方法包括获得所述麦芽和/或面粉。

另一方面，本发明提供了生产食品或者基于麦芽的饮料的方法，所述方法包括将大麦谷粒或者从所述谷粒中产生的麦芽、面粉或者全麦面粉与至少一种其它食品或者饮料成分混合，从而生产食品或者基于麦芽的饮料，其中从所述谷粒生产的面粉包含低于大约0.4％大麦醇溶蛋白，和/或从所述谷粒生产的麦芽包含低于大约200ppm大麦醇溶蛋白。

在一个实施方案中，所述方法包括获得所述麦芽和/或面粉。

另一方面，本发明提供了大麦植物，其产生与相应野生型大麦植物谷粒相比包含大约25％或更低水平大麦醇溶蛋白的谷粒。

优选所述谷粒与相应野生型大麦植物谷粒相比包含大约15％或更低、大约10％或更低、大约7.5％或更低、大约5％或更低或者更优选大约2.5％或更低水平的大麦醇溶蛋白。

野生型大麦植物的例子包括但不限于Bomi、Sloop、Carlsberg II、K8或者L1。

在另一个实施方案中，所述谷粒与相应野生型大麦植物谷粒相比包含大约25％或更低、大约20％或更低、大约15％或更低、大约10％或更低、大约7.5％或更低、大约5％或更低或者更优选大约2.5％或更低水平的B、C和/或D大麦醇溶蛋白或者其任意组合。

在另一个实施方案中，从所述谷粒中产生的面粉包含低于大约0.4％、低于大约0.3％、低于大约0.2％及更优选低于大约0.1％大麦醇溶蛋白。

在一个实施方案中，所述谷粒的平均重量(100个谷粒重量)是至少大约2.4g。优选所述谷粒的平均重量是大约2.4g至大约6g，更优选平均重量是大约3.5g至大约6g。

在另一个实施方案中，所述谷粒的淀粉含量是至少大约50％(w/w)。更优选所述谷粒的淀粉含量是大约50％至大约70％(w/w)。

在再一个实施方案中，从所述谷粒生产的面粉的腹腔毒性低于相应野生型大麦植物谷粒生产的面粉的相应毒性的大约50％、大约25％、更优选是大约10％或更低。

在另一个实施方案中，从所述谷粒生产的麦芽包含低于大约200ppm大麦醇溶蛋白、低于大约125ppm大麦醇溶蛋白、更优选低于大约75ppm大麦醇溶蛋白。

在另一个实施方案中，所述大麦谷粒的至少大约50％的基因组与大麦栽培种Sloop的基因组相同。

优选所述谷粒来自这样的植物，其对于导致与相应野生型大麦植物相比B、C和D类别的至少一个、至少两个或者所有三个类别的大麦醇溶蛋白水平降低的一或多个遗传变异的至少一个、至少两个、至少三个或者更多个基因座是纯合的。

在一个实施方案中，所述谷粒来自非转基因植物。例如所述谷粒可以来自Riso 56与Riso 1508之间的杂交植物或者其包含分别存在于这些亲本品系中的hor2和lys3突变的后代。优选这种谷粒包含与Riso 56或者Riso1508明显不同的遗传背景，例如包含大约25％以下的这些亲本品系的遗传背景。

在另一个实施方案中，所述谷粒来自转基因植物。

转基因植物的一个实施方案是包含转基因的植物，所述转基因编码下调谷粒中至少一种大麦醇溶蛋白的产生的多核苷酸。优选这个实施方案的多核苷酸是反义多核苷酸、有义多核苷酸、催化性多核苷酸、人工微小RNA或者双链体RNA分子，其下调编码大麦醇溶蛋白的一个或者优选多个基因的表达。

转基因植物的另一实施方案是包含转基因的植物，所述转基因编码对于乳糜泻对象低毒性、优选无毒性的谷醇溶蛋白。对于乳糜泻对象无毒性的谷醇溶蛋白的实例包括但不限于燕麦蛋白。

在再一个实施方案中，在用于麦芽制造的典型条件下至少大约50％谷粒在吸涨之后3天内发芽。

另一方面，本发明提供了产生谷粒的大麦植物，其中从所述谷粒生产的面粉包含低于大约0.4％大麦醇溶蛋白，和/或从所述谷粒生产的麦芽包含低于大约200ppm大麦醇溶蛋白。

另一方面，本发明提供了本发明大麦植物的谷粒。

再一方面，本发明提供了产生大麦谷粒的方法，所述方法包括：

a)使本发明的大麦植物生长，

b)收获谷粒，

c)任选加工所述谷粒。

优选使所述植物以商业规模在田间生长。例如在一个实施方案中，所述方法包括使至少1,000株、更优选至少5,000株植物在至少1公顷的田间生长。

本发明还提供了生产得自谷粒的面粉、全麦面粉、淀粉或者其它产品的方法，所述方法包括：

a)获得本发明的谷粒，

b)加工所述谷粒，生产所述面粉、全麦面粉、淀粉或者其它产品。

再一方面，本发明提供了从本发明的大麦植物或者本发明的谷粒中生产的产品。

在一个实施方案中，所述产品是食品或者基于麦芽的饮料产品。

优选基于麦芽的饮料产品是啤酒或者威士忌。

在另一个实施方案中，所述产品是非食品产品，优选包含淀粉或者由至少大约50％淀粉组成。例子包括但非限于薄膜、涂料、粘合剂、纸张、建筑材料和包装材料，或者非淀粉产品如乙醇。

另一方面，本发明提供了使用本发明方法生产的食品或者基于麦芽的饮料。

在一个实施方案中，基于麦芽的饮料是啤酒，其包含至少大约2％、更优选至少大约4％的醇。优选所述醇是乙醇。

在再一个实施方案中，基于麦芽的饮料是啤酒，其包含低于大约1ppm大麦醇溶蛋白。

另一方面，本发明提供了啤酒，其包含一或多种大麦谷物蛋白和低于大约1ppm大麦醇溶蛋白。在一个实施方案中，所述啤酒具有低于大约.05ppm的大麦醇溶蛋白。

优选所述啤酒包含至少大约2％、更优选至少大约4％的醇。优选所述醇是乙醇。

举例的大麦谷物蛋白包括但不限于9kDa脂质大麦蛋白1(LTP1)和蛋白Z。

另一方面，本发明提供了包含一或多种大麦谷物蛋白和低于大约0.4％大麦醇溶蛋白的面粉。

在一个实施方案中，所述面粉包含低于大约0.3％、低于大约0.2％及更优选低于大约0.1％的大麦醇溶蛋白。

优选所述面粉包含低于大约7mg、更优选低于大约5mg的醇溶蛋白/g干重面粉。

另一方面，本发明提供了包含一或多种大麦谷物蛋白和低于大约200ppm大麦醇溶蛋白的麦芽。

在一个实施方案中，所述麦芽包含低于大约125ppm大麦醇溶蛋白，更优选低于大约75ppm大麦醇溶蛋白。

再一方面，本发明提供了鉴别大麦谷粒的方法，所述谷粒可用于生产供乳糜泻对象消耗的食品和/或基于麦芽的饮料，所述方法包括：

a)获得一或多种如下材料：

i)能产生所述谷粒的植物样品，

ii)谷粒

iii)从所述谷粒生产的麦芽，和/或

iv)所述谷粒的提取物；

b)分析步骤a)的材料的至少一种大麦醇溶蛋白和/或至少一种编码大麦醇溶蛋白的基因，

其中所述谷粒产生的大麦醇溶蛋白的量越多，则该谷粒越不适于产生供乳糜泻对象消耗的食品和/或基于麦芽的饮料。

在一个实施方案中，所述样品是谷粒且步骤b)包括分析所述材料的B和/或C大麦醇溶蛋白。这可以使用本领域已知的任何技术进行，例如使用免疫学方法如ELISA测定法进行。可以使用实施例1中所述方法。在一个实施方案中，步骤b)包括给乳糜泻对象口服施用步骤a)的材料并确定得自该对象的T细胞对于一或多种大麦醇溶蛋白的免疫反应性。

在另一个实施方案中，步骤a)的样品材料包含基因组DNA且步骤b)包括检测一或多个功能性大麦醇溶蛋白基因的不存在。同样，这可以使用本领域已知的任何技术进行。例如进行如实施例9所述基因扩增步骤。

在一个实施方案中，所述方法包括从多个植物、谷粒或者麦芽中选择本发明的用以繁殖或使用的大麦植物、谷粒或者麦芽的步骤。这种选择直接或者间接基于所述材料的降低的腹腔毒性。

再一方面，本发明提供了防止或者降低乳糜泻对象的发病率或严重性的方法，所述方法包括给所述对象口服施用本发明的食品或者基于麦芽的饮料或者本发明的谷粒。在这种情形中疾病的发生率或者严重性降低应理解为是相对于施用等量的从野生型大麦制备的食品或饮料而降低。所述食品或饮料可用于为乳糜泻对象提供营养物质或者增加量的营养物质，同时减轻触发疾病症状的危险。

另一方面，本发明提供了本发明的食品或者基于麦芽的饮料或者本发明的谷粒在生产药物中的应用，所述药物口服施用给对象同时防止或者降低乳糜泻的发生率或严重性。

显然本发明一个方面的优选特征和特性可应用于本发明的任何其它方面。

在本说明书中，词语“包含”或其变体是指包含指定的元素、整数或步骤，或者元素、整数或步骤组，但不排除任何其它元素、整数或步骤或元素、整数或步骤组。

在下文通过如下非限制性实施例及参考附图描述本发明。

发明详述

一般技术和定义

除非特别指出，本文所用的所有技术和科学术语具有本领域(如植物育种、食品技术、细胞培养、分子遗传学、免疫学、蛋白质化学以及生物化学领域)技术人员通常已知的相同含义。

除非特别指出，本发明中使用的重组蛋白质、细胞培养以及免疫学技术是本领域技术人员熟知的标准程序。这种技术在例如以下文献中描述和解释：J.Perbal，A Practical Guide to Molecular Cloning，John Wiley and Sons(1984)，J.Sambrook et al.，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，ColdSpring Harbour Laboratory Press(1989)，T.A.Brown(editor)，EssentialMolecular Biology：A Practical Approach，Volumes 1and 2，IRL Press(1991)，D.M.Glover and B.D.Hames(editors)，DNA Cloning：A Practical Approach，Volumes 1-4，IRL Press(1995and 1996)，和F.M.Ausubel et al.，(editors)，Current Protocols in Molecular Biology，Greene Pub.Associates andWiley-Interscience(1988，including all updates until present)，Ed Harlow andDavid Lane(editors)Antibodies：A Laboratory Manual，Cold Spring HarbourLaboratory，(1988)，和J.E.Coligan et al.，(editors)Current Protocols inImmunology，John Wiley & Sons(包括迄今为止的所有更新材料)。

如本文所用，术语“大麦”是指大麦属(Hordeum)的任何物种，包括其祖先以及其通过与其它物种植物杂交产生的后代。优选的大麦是Hordeumvulgare种。

乳糜泻是小肠的自身免疫疾病，在早期婴儿期(early infancy)之后的所有年龄组具有遗传倾向个体中发生。其影响大约1％的印欧人群，但是其处于明显诊断不足状态。乳糜泻是与麦醇溶蛋白的反应而引起，这种蛋白质是在小麦发现的一种谷蛋白(以及包括其它栽培种如大麦和黑麦的Triticeae的相似蛋白质)。在暴露于麦醇溶蛋白时，组织转谷氨酰胺酶修饰该蛋白质，且免疫系统与肠组织交叉反应，导致炎症反应。这导致小肠绒毛扁平，干扰营养物质的吸收。唯一有效的治疗是终生无谷蛋白饮食。这个病症有许多其它名称，包括：乳糜泻(结扎(with ligature))，乳糜性口炎性腹泻，非热带口炎性腹泻，地方性口炎性腹泻，谷蛋白肠病或者谷蛋白敏感性肠病，以及谷蛋白不耐受症。乳糜泻的症状每个人各不相同。乳糜泻的症状可包括如下一或多个症状：排气、复发性腹部胃气胀和疼痛、慢性腹泻、便秘、苍白、污秽气味、或脂肪便、体重减轻/体重增加、疲劳、无法解释的贫血(红细胞计数低导致疲劳)、骨或关节痛、骨质疏松症、骨质减少、行为变化、腿麻木(来自神经损害)、肌肉抽筋、发作(seizures)、错过月经周期(通常因为体重过度降低)、不育、反复流产、生长延迟、婴儿发育不正常、称为口疮性溃疡的口腔中苍白疡、牙齿变色或者牙釉质脱失、以及称作疱疹样皮炎的瘙痒性皮疹。一些更常见的症状包括：疲倦，间歇性腹泻，腹痛或痉挛，消化不良，肠胃胀气，腹胀，以及体重降低。乳糜泻可以如WO 01/025793所述进行诊断。

如本文所用，术语“对乳糜泻对象无毒性”是指消耗食品或者饮料后不引起患有所述疾病对象发生乳糜泻的症状。如本文所述，从相应野生型大麦植物生产的食品或者饮料导致出现疾病症状。

术语“种子”和“谷粒(grain)”在本文可互换使用。“谷粒”通常是指成熟的、收获的谷粒，但是也可以是指在如其中大多数谷粒保持完整的研磨或者抛光等加工后的谷粒，或者是指在吸涨或发芽后的谷粒。成熟谷粒通常具有低于大约18-20％的含水量。野生型大麦谷粒(整谷粒)一般含有9-12％蛋白质，其大约30-50％、典型地35％是谷醇溶蛋白，因此野生型大麦谷粒具有大约3-4％重量的谷醇溶蛋白。谷醇溶蛋白几乎只在胚乳中发现，其占大约70％的整谷粒重量。

如本文所用，术语“相应野生型”大麦植物是指包含至少大约50％、更优选至少75％、更优选至少95％、更优选至少97％、更优选至少99％以及更优选99.5％的本发明植物的基因型、但是产生具有未修饰的大麦醇溶蛋白水平的谷粒的植物。在一个实施方案中，“相应野生型”大麦植物是在植物育种试验中使用的栽培种，以导入遗传变异，从而使得所述谷粒中大麦醇溶蛋白产生降低。在另一个实施方案中，“相应野生型”大麦植物是亲本栽培种，在其中已经导入降低谷粒中大麦醇溶蛋白产生的转基因。在再一个实施方案中，“相应野生型”大麦植物是于本申请之时用于商业生产大麦谷粒的栽培种，例如但不限于Bomi、Sloop、Carlsberg II、K8、L1、Vlamingh、Stirling、Hamelin、Schooner、Baudin、Gairdner、Buloke、WI3586-1747、WI3416、Flagship、Cowabbie、Franklin、SloopSA、SloopVic、Quasar、VB9104、Grimmett、Cameo*Arupo 31-04、Prior、Schooner、Unicorn、Harrington、Torrens、Galleon、Morex、Dhow、Capstan、Fleet、Keel、Maritime、Yarra、Dash、Doolup、Fitzgerald、Molloy、Mundah、Onslow、Skiff、Unicorn、Yagan、Chebec、Hindmarsh、Chariot、Diamant、Korál、Rubín、Bonus、Zenit、Akcent、Forum、Amulet、Tolar、Heris、Maresi、Landora、Caruso、Miralix、WikingettBrise、Caruso、Potter、Pasadena、Annabell、Maud、Extract、Saloon、Prestige、Astoria、Elo、Cork、Extract、Laura。在一个实施方案中，“相应野生型”大麦植物产生具有未修饰的大麦醇溶蛋白水平的谷粒，因为其包含编码功能性大麦醇溶蛋白的功能性大麦醇溶蛋白基因的完全互补物，包括由Hor2、Hor1、Hor3和Hor5基因座编码的B、C、D和γ-大麦醇溶蛋白。

如本文所用，术语“一或多种大麦谷物蛋白”是指由大麦谷粒产生的天然发生的蛋白质。这种蛋白质的实例为本领域技术人员已知。具体的实例包括但不限于大麦白蛋白如9kDa脂质转移蛋白1(LTP1)(见Douliez et al.(2000)综述及Swiss-prot Accession No.P07597)和蛋白质Z(见Brandt et al.(1990)和Genbank Accession No.P06293)，包括其加工(成熟)形式以及由于产生本发明的麦芽、面粉、全麦面粉、食品或者具有麦芽的饮料而产生的其变性形式和/或其片段。

如本文所用，术语“麦芽”是指大麦麦芽，“面粉”是指大麦面粉，“全麦面粉”是指大麦全麦面粉，“啤酒”是指大麦啤酒。更特别地，本发明的麦芽、面粉、啤酒、全麦面粉、食品等的来源来自大麦谷粒的加工(例如研磨和/或发酵)。这些术语包括从谷粒混合物中产生的麦芽、面粉、啤酒、全麦面粉、食品等。在优选的实施方案中，用于产生麦芽、面粉、啤酒、全麦面粉、食品等的至少50％的谷粒是大麦谷粒。

如本文所用，术语“植物”作为名词是指完整植物，如用于商业化大麦生产的在田间生长的植物。“植物部分”是指植物营养结构(例如叶，茎)、根、花器官/结构、种子(包括胚、胚乳和种皮)、植物组织(例如维管组织、基本组织等)、细胞、淀粉颗粒或其后代。

“转基因植物”、“遗传修饰的植物”或者其变化用语是指含有在相同物种、品种或者栽培种的野生型植物中未发现的基因构建体(转基因)的植物。“转基因”在本文具有与生物技术领域相同的正常含义，包括已经通过重组DNA或RNA技术产生或者改变且已经导入植物细胞中的遗传序列。所述转基因可包括衍生自植物细胞的遗传序列。典型地，所述转基因已经通过人工操纵例如转化但是也可以使用本领域技术人员公认的任何方法而被导入植物中。

“核酸分子”是指多核苷酸，例如DNA、RNA或者寡核苷酸。其可以是源于基因组或者合成的、双链或单链的、以及组合碳水化合物、脂质、蛋白质或者其它材料以进行本文指定活性的DNA或者RNA。

如本文所用，“可操纵地连接”是指两或多个核酸(如DNA)节段之间的功能联系。典型地，其是指转录调节元件(启动子)与被转录序列之间的功能联系。例如，如果启动子刺激或调节编码序列如本文限定的多核苷酸在适当细胞中的转录，则该启动子与所述编码序列是可操纵地连接的。通常，与被转录序列可操纵地连接的启动子转录调节元件与被转录序列是物理性连续的，即其是顺式作用的。然而，一些转录调节元件如增强子不需要与其转录被所述增强子增强的编码序列物理性连续或者紧密相邻。

如本文所用，术语“基因”取其最广泛的含义，包括脱氧核糖核苷酸序列，所述脱氧核糖核苷酸序列包含结构基因的蛋白质编码区及包括位于5’和3’末端(与每一端距离至少大约2kb)与编码区邻近且参与所述基因的表达的序列。位于编码区5’且呈现于mRNA上的序列被称作5’非翻译序列。位于编码区的3’或下游且呈现于mRNA上的序列被称作3’非翻译序列。术语“基因”包含cDNA以及基因的基因组形式。基因的基因组形式或者克隆含有可以用称作“内含子”或者“间插区”或者“间插序列”的非编码序列中断的编码区。内含子是被转录为核RNA(hnRNA)的基因节段；内含子可含有调节元件如增强子。内含子从核或者初级转录物中被除去或者“剪接掉(spliced out)”，因此在信使RNA(mRNA)转录物中不存在内含子。mRNA在翻译期间发挥指定新生多肽中氨基酸序列或顺序的功能。术语“基因”包括编码本发明所述所有或部分蛋白质的合成或融合分子以及上述任一的互补核苷酸序列。

如本文所用，术语“其它食品或者饮料成分”是指适于动物消耗的任何物质，优选适于人消耗的任何物质。例子包括但不限于水、其它植物谷粒、糖等。

如本文所用，术语“导致至少一种大麦醇溶蛋白水平降低的遗传变异”是指降低大麦醇溶蛋白产生的大麦植物的任何多态性。所述遗传变异可以是例如缺失一或多种大麦醇溶蛋白基因或者其部分，降低大麦基因转录的突变。这种遗传变异的实例存在于Riso 56、Riso 527和Riso 1508中。因此，这种植物可用于本发明方法中。再者，本发明的植物可以是任何这些大麦突变体之间的杂交植物。在优选的实施方案中，本发明的植物是Riso 56与Riso 1508之间的杂交植物或者其包含存在于这些品系中的hor2和lys3突变的后代。在一个实施方案中，所述植物不是Riso 527与Riso 1508之间的杂交植物。

如本文所用，除非相反指出，则短语“大约”是指根据所述数值的任何合理范围。在优选的实施方案中，术语“大约”是指指定数值的±10％，更优选±5％。

谷醇溶蛋白和大麦醇溶蛋白

谷类谷醇溶蛋白(在小麦中称作麦醇溶蛋白，在大麦中称作大麦醇溶蛋白，在黑麦中称作裸麦醇溶蛋白，在燕麦中称作燕麦蛋白，在玉米中称作玉米醇溶蛋白)是在除了燕麦和水稻之外所有谷物谷粒中主要的胚乳贮藏蛋白(Shewry and Halford，2002)。大麦醇溶蛋白在大麦种子种占总蛋白质的35-50％(Jaradat，1991)。它们以迁移率降低的顺序被分为四组：A(也称作γ大麦醇溶蛋白)、B、C和D(Field et al.，1982)。B大麦醇溶蛋白是主要的蛋白质级分，与C大麦醇溶蛋白的硫含量不同(Kreis and Shewry，1989)。B大麦醇溶蛋白占总蛋白质的70-80％，C大麦醇溶蛋白占10-20％(Davies et al.，1993)。 大麦醇溶蛋白通常不被认为是贮藏蛋白，而D大麦醇溶蛋白与高分子量的麦谷蛋白同源。大麦醇溶蛋白以及其余的相关谷类谷醇溶蛋白在合子胚自身中不表达，与其它贮藏蛋白如油菜籽蛋白不同；确信其只在种子发育的中期至后期在淀粉胚乳中表达。

大麦醇溶蛋白氨基酸序列的例子(提供了登记号；在NCBI中的描述；gi详述)包括但不必需限于：

1103203A；大麦醇溶蛋白B；gi|224385|prf||1103203A[224385]；

1103203B；大麦醇溶蛋白B；gi|224386|prf||1103203B[224386]

1103203C；大麦醇溶蛋白C；gi|224387|prf||1103203C[224387]

1210226A；大麦醇溶蛋白B1；gi|225171|prf||1210226A[225171]

1307151A；大麦醇溶蛋白C；gi|225588|prf||1307151A[225588]

1307151B；大麦醇溶蛋白C；gi|225589|prf||1307151B[225589]

1604464A；γ大麦醇溶蛋白；gi|226755|prf||1604464A[226755]

AAA32942；C-大麦醇溶蛋白；gi|167016|gb|AAA32942.1|[167016]

AAA32943；C-大麦醇溶蛋白贮藏蛋白；gi|167018|gb|AAA32943.1|[167018]

AAA32944；C-大麦醇溶蛋白贮藏蛋白；gi|167020|gb|AAA32944.1|[167020]

AAA32955；γ-1大麦醇溶蛋白前体；gi|167042|gb|AAA32955.1|[167042]

AAA32967；大麦醇溶蛋白；gi|530093|gb|AAA32967.1|[530093]

AAA92333；C大麦醇溶蛋白；gi|893242|gb|AAA92333.1|[893242]

AAB28161；C-大麦醇溶蛋白                 [Hordeum  vulgare]；

gi|442524|gb|AAB28161.1||bbm|324752|bbs|139926[442524]

AAB71678；种子贮藏蛋白                   [Hordeum  vulgare]；

gi|2454599|gb|AAB71678.1|[2454599]

AAB71679；种子贮藏蛋白                   [Hordeum  vulgare]；

gi|2454600|gb|AAB71679.1|[2454600]

AAP31050；球蛋白                         [Hordeum  vulgare]；

gi|30421166|gb|AAP31050.1|[30421166]

AAP31051；D-大麦醇溶蛋白                 [Hordeum  vulgare]；

gi|30421167|gb|AAP31051.1|[30421167]

AAQ63842；γ3大麦醇溶蛋白                [Hordeum  chilense]；

gi|34329251|gb|AAQ63842.1|[34329251]

AAQ63843；γ3大麦醇溶蛋白                [Hordeum  chilense]；

gi|34329253|gb|AAQ63843.1|[34329253]

AAQ63844；γ3大麦醇溶蛋白                [Hordeum  chilense]；

gi|34329255|gb|AAQ63844.1|[34329255]

AAQ63845；γ3大麦醇溶蛋白                [Hordeum  chilense]；

gi|34329257|gb|AAQ63845.1|[34329257]

AAQ63846；γ3大麦醇溶蛋白                [Hordeum  chilense]；

gi|34329259|gb|AAQ63846.1|[34329259]

AAQ63847；γ3大麦醇溶蛋白                [Hordeum  chilense]；

gi|34329261|gb|AAQ63847.1|[34329261]

AAQ63848；γ3大麦醇溶蛋白                [Hordeum  chilense]；

gi|34329263|gb|AAQ63848.1|[34329263]AAQ63849；3大麦醇溶蛋白

[Hordeum chilense]；gi|34329265|gb|AAQ63849.1|[34329265]

AAQ63850；γ3大麦醇溶蛋白                [Hordeum  chilense]；

gi|34329267|gb|AAQ63850.1|[34329267]

AAQ63851；γ3大麦醇溶蛋白                [Hordeum  chilense]；

gi|34329269|gb|AAQ63851.1|[34329269]

AAQ63852；γ3大麦醇溶蛋白             [Hordeum  chilense]；

gi|34329271|gb|AAQ63852.1|[34329271]

AAQ63853；γ3大麦醇溶蛋白             [Hordeum  chilense]；

gi|34329273|gb|AAQ63853.1|[34329273]

AAQ63854；γ3大麦醇溶蛋白             [Hordeum  chilense]；

gi|34329275|gb|AAQ63854.1|[34329275]

AAQ63855；γ3大麦醇溶蛋白             [Hordeum  chilense]；

gi|34329277|gb|AAQ63855.1|[34329277]

AAQ63866；γ3大麦醇溶蛋白             [Hordeum  chilense]；

gi|34329299|gb|AAQ63866.1|[34329299]

AAQ63867；γ3大麦醇溶蛋白             [Hordeum  chilense]；

gi|34329301|gb|AAQ63867.1|[34329301]

AAQ63868；γ3大麦醇溶蛋白             [Hordeum  chilense]；

gi|34329303|gb|AAQ63868.1|[34329303]

AAQ63869；γ3大麦醇溶蛋白             [Hordeum  chilense]；

gi|34329305|gb|AAQ63869.1|[34329305]

AAQ63870；γ3大麦醇溶蛋白             [Hordeum  chilense]；

gi|34329307|gb|AAQ63870.1|[34329307]

AAQ63871；γ3大麦醇溶蛋白             [Hordeum  chilense]；

gi|34329309|gb|AAQ63871.1|[34329309]

AAQ63872；γ3大麦醇溶蛋白             [Hordeum  chilense]；

gi|34329311|gb|AAQ63872.1|[34329311]

AAU06227；B大麦醇溶蛋白[Hordeum brevisubulatum subsp.turkestanicum]；

gi|51556914|gb|AAU06227.1|[51556914]

AAU06228；B大麦醇溶蛋白[Hordeum brevisubulatum subsp.turkestanicum]；

gi|51556916|gb|AAU06228.1|[51556916]

AAU06229；B大麦醇溶蛋白[Hordeum  brevisubulatum  subsp.

turkestanicum]；gi|51556918|gb|AAU06229.1|[51556918]

AAZ76368；B大麦醇溶蛋白[Hordeum vulgare subsp.vulgare]；

gi|73427781|gb|AAZ76368.1|[73427781]

ABA06537；B  大麦醇溶蛋白[Hordeum vulgare subsp.vulgare]；

gi|74422695|gb|ABA06537.1|[74422695]

ABB82613；B大麦醇溶蛋白             [Hordeum vulgare subsp.vulgare]；

gi|82548223|gb|ABB82613.1|[82548223]

ABB82614；B大麦醇溶蛋白             [Hordeum vulgare subsp.vulgare]；

gi|82548225|gb|ABB82614.1|[82548225]

ABH01262；B大麦醇溶蛋白             [Hordeum vulgare subsp.vulgare]；

gi|110832715|gb|ABH01262.1|[110832715]

BAA11642；D大麦醇溶蛋白             [Hordeum vulgare subsp.vulgare]；

gi|1167498|dbj|BAA11642.1|[1167498]

CAA25509；未命名的蛋白质产物           [Hordeum  vulgare]；

gi|18907|emb|CAA25509.1|[18907]

CAA25912；未命名的蛋白质产物           [Hordeum  vulgare]；

gi|18914|emb|CAA25912.1|[18914]

CAA25913；未命名的蛋白质产物           [Hordeum  vulgare]；

gi|829269|emb|CAA25913.1|[829269]

CAA25914；未命名的蛋白质产物           [Hordeum  vulgare]；

gi|18949|emb|CAA25914.1|[18949]

CAA26889；未命名的蛋白质产物           [Hordeum  vulgare]；

gi|18910|emb|CAA26889.1|[18910]

CAA31861；未命名的蛋白质产物           [Hordeum vulgare subsp.vulgare]；

gi|18980|emb|CAA31861.1|[18980]

CAA37729；B大麦醇溶蛋白前体            [Hordeum vulgare subsp.vulgare]；

gi|18929|emb|CAA37729.1|[18929]

CAA42642；未命名的蛋白质产物           [Hordeum vulgare subsp.vulgare]；

gi|19001|emb|CAA42642.1|[19001]

CAA48209；D大麦醇溶蛋白                [Hordeum vulgare subsp.vulgare]；

gi|18970|emb|CAA48209.1|[18970]

CAA51204；γ3大麦醇溶蛋白              [Hordeum  vulgare]；

gi|288709|emb|CAA51204.1|[288709]

CAA59104；D-大麦醇溶蛋白               [Hordeum vulgare subsp.vulgare]；

gi|671537|emb|CAA59104.1|[671537]

CAA60681；B1大麦醇溶蛋白           [Hordeum  vulgare]；

gi|809031|emb|CAA60681.1|[809031]

CAE45747；推定的γ2大麦醇溶蛋白    [Hordeum vulgare]；

gi|34365052|emb|CAE45747.1|[34365052]

P06470；B1-大麦醇溶蛋白前体；gi|123458|sp|P06470|HOR1_HORVU[123458]

P06471；B3-大麦醇溶蛋白；gi|123459|sp|P06471|HOR3_HORVU[123459]

P06472；C-大麦醇溶蛋白(PCP387)；

gi|123460|sp|P06472|HOR7_HORVU[123460]

P17990；γ-大麦醇溶蛋白-1前体；

gi|123464|sp|P17990|HOG1_HORVU[123464]

P17991；C-大麦醇溶蛋白(克隆PC HOR1-3)；

gi |123461|sp|P17991|HOR8_HORVU[123461]

P17992；C-大麦醇溶蛋白(克隆PC-919)；

gi|123462|sp|P17992|HOR9_HORVU[123462]

P29835；19kDa球蛋白前体(α-球蛋白)；

gi|115505553|sp|P29835|GL19_ORYSJ[115505553]

P80198；γ-大麦醇溶蛋白-3；gi|1708280|sp|P80198|HOG3_HORVU[1708280]。

编码大麦醇溶蛋白的基因和/或cDNA的例子(提供了登记号；在NCBI中的描述；gi详述)包括但不必需限于：

AF016237；Hordeum vulgare种子贮藏蛋白(HORDB3a)mRNA，部分cds；gi|2454596|gb|AF016237.1|HVHORD1[2454596]

AF016238；Hordeum vulgare种子贮藏蛋白(HORDB3a)mRNA 3′末端序列，部分cds；gi|2454597|gb|AF016238.1|HVHORD2[2454597]

AH005570；Hordeum vulgare subsp.vulgare种子贮藏蛋白基因，部分cds；gi|2454598|gb|AH005570.1|SEG_HVHORD[2454598]

AJ580585；Hordeum vulgareγ-2hor基因编码推定的γ2大麦醇溶蛋白；gi|34365051|emb|AJ580585.1|[34365051]

AY268139；Hordeum vulgare BAC 184G9，完整序列；gi|30421164|gb|AY268139.1|[30421164]

AY338365；Hordeum chilense克隆1栽培种H1γ3大麦醇溶蛋白mRNA，完整cds；gi|34329250|gb|AY338365.1|[34329250]

AY338366；Hordeum chilense克隆2栽培种H1γ3大麦醇溶蛋白mRNA，完整cds；gi|34329252|gb|AY338366.1|[34329252]

AY338367；Hordeum chilense克隆3栽培种H1γ3大麦醇溶蛋白mRNA，完整cds；gi|34329254|gb|AY338367.1|[34329254]

AY338368；Hordeum chilense克隆4栽培种H1γ3大麦醇溶蛋白mRNA，完整cds；gi|34329256|gb|AY338368.1|[34329256]

AY338369；Hordeum chilense克隆5栽培种H1γ3大麦醇溶蛋白mRNA，完整cds；gi|34329258|gb|AY338369.1|[34329258]

AY338370；Hordeum chilense克隆6栽培种H1γ3大麦醇溶蛋白mRNA，完整cds；gi|34329260|gb|AY338370.1|[34329260]

AY338371；Hordeum chilense克隆7栽培种H7γ3大麦醇溶蛋白mRNA，部分cds；gi|34329262|gb|AY338371.1|[34329262]

AY338372；Hordeum chilense克隆8栽培种H7γ3大麦醇溶蛋白mRNA，部分cds；gi|34329264|gb|AY338372.1|[34329264]   AY338373；Hordeum chilense克隆9栽培种H7γ3大麦醇溶蛋白mRNA，部分cds；gi|34329266|gb|AY338373.1|[34329266]

AY338374；Hordeum chilense克隆10栽培种H7γ3大麦醇溶蛋白mRNA，部分cds；gi|34329268|gb|AY338374.1|[34329268]

AY338375；Hordeum chilense克隆11栽培种H7γ3大麦醇溶蛋白mRNA，部分cds；gi|3432920|gb|AY338375.1|[34329270]

AY338376；Hordeum chilense克隆12栽培种H7γ3大麦醇溶蛋白mRNA，部分cds；gi|34329272|gb|AY338376.1|[34329272]

AY338377；Hordeum chilense克隆13栽培种H7γ3大麦醇溶蛋白mRNA，部分cds；gi|34329274|gb|AY338377.1|[34329274]

AY338378；Hordeum chilense克隆14栽培种H7γ3大麦醇溶蛋白mRNA，部分cds；gi|34329276|gb|AY338378.1|[34329276]

AY338379；Hordeum chilense克隆1栽培种H47γ3大麦醇溶蛋白基因，部分cds；gi|34329298|gb|AY338379.1|[34329298]

AY338380；Hordeum chilense克隆2栽培种H47γ3大麦醇溶蛋白基因，部分cds；gi|34329300|gb|AY338380.1|[34329300]

AY338381；Hordeum chilense克隆3栽培种H210γ3大麦醇溶蛋白基因，部分cds；gi|34329302|gb|AY338381.1|[34329302]

AY338382；Hordeum chilense克隆4栽培种H210γ3大麦醇溶蛋白基因，部分cds；gi|34329304|gb|AY338382.1|[34329304]

AY338383；Hordeum chilense克隆5栽培种H210γ3大麦醇溶蛋白基因，部分cds；gi|34329306|gb|AY338383.1|[34329306]

AY338384；Hordeum chilense克隆6栽培种H210γ3大麦醇溶蛋白基因，部分cds；gi|34329308|gb|AY338384.1|[34329308]

AY338385；Hordeum chilense克隆7栽培种H252γ3大麦醇溶蛋白基因，部分cds；gi|34329310|gb|AY338385.1|[34329310]

AY695367；Hordeum brevisubulatum subsp.turkestanicum B大麦醇溶蛋白基因，完整cds；gi|51556913|gb|AY695367.1|[51556913]

AY695368；Hordeum brevisubulatum subsp.turkestanicum B大麦醇溶蛋白基因，完整cds；gi|51556915|gb|AY695368.1|[51556915]

AY695369；Hordeum brevisubulatum subsp.turkestanicum B大麦醇溶蛋白基因，完整cds；gi|51556917|gb|AY695369.1|[51556917]

AY700807；Hordeum chilense栽培种H7克隆pC63-2B3-大麦醇溶蛋白假基因mRNA，完整cds；gi|57118094|gb|AY700807.1|[57118094]

AY998005；Hordeum chilense克隆pC39-1D-大麦醇溶蛋白样mRNA，部分序列；gi|66354246|gb|AY998005.1|[66354246]

AY998008；Hordeum chilense克隆pC36-2(4)D-大麦醇溶蛋白样mRNA，部分序列；gi|66354251|gb|AY998008.1|[66354251]

AY998009；Hordeum chilense D-大麦醇溶蛋白基因，5′UTR和部分cds；gi|66354252|gb|AY998009.1|[66354252]

AY998010；Hordeum chilense B-大麦醇溶蛋白基因，5′UTR和部分cds；gi|66354254|gb|AY998010.1|[66354254]

D82941；Hordeum vulgare Hor3mRNA for D大麦醇溶蛋白，完整cds；gi|1167497|dbj |D82941.1|BLYHOR3[1167497]

DQ148297；Hordeum vulgare subsp.vulgare栽培种XQ053B大麦醇溶蛋白基因，完整cds；gi|73427780|gb|DQ148297.1|[73427780]

DQ 178602；Hordeum vulgare subsp.vulgare栽培种Aba-siqing B大麦醇溶蛋白基因，完整cds；gi|74422694|gb|DQ 178602.1|[74422694]

DQ 189997；Hordeum vulgare subsp.vulgare克隆Hn3B大麦醇溶蛋白假基因，完整序列；gi|75991848|gb|DQ 189997.1|[75991848]

DQ267476；Hordeum vulgare subsp.vulgare克隆Hn4B大麦醇溶蛋白假基因，完整序列；gi|82548218|gb|DQ267476.1|[82548218]

DQ267477；Hordeum vulgare subsp.vulgare克隆Hn5B大麦醇溶蛋白假基因，完整序列；gi|82548220|gb|DQ267477.1|[82548220]

DQ267478；Hordeum vulgare subsp.vulgare克隆Hn6B大麦醇溶蛋白基因，完整cds；gi|82548222|gb|DQ267478.1|[82548222]

DQ267479；Hordeum vulgare subsp.vulgare克隆Hn7B大麦醇溶蛋白基因，完整cds；gi|82548224|gb|DQ267479.1|[82548224]

DQ267480；Hordeum vulgare subsp.vulgare克隆Hn8B大麦醇溶蛋白假基因，完整序列；gi|82548226|gb|DQ267480.1|[82548226]

DQ267481；Hordeum vulgare subsp.vulgare克隆Hn9B大麦醇溶蛋白假基因，完整序列；gi|82548228|gb|DQ267481.1|[82548228]

DQ826387；Hordeum vulgare subsp.vulgare B大麦醇溶蛋白基因，完整cds；gi|110832714|gb|DQ826387.1|[110832714]

J01237；barley b1大麦醇溶蛋白mrna(部分)；gi|167002|gb|J01237.1|BLYB1HOR[167002]

K03147；Barley(Hordeum vulgare L.)C-大麦

具有低水平大麦醇溶蛋白的大麦专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。