专利摘要

本发明涉及一种珊瑚分割繁殖的人工培育方法。方法如下：1）将小段切割珊瑚体捆绑在附着基上进行分阶段人工培育；2）在第7、14、21天分别投喂第1阶段复合液体饵料；3）第24、28、31、35天投喂第2阶段复合液体饵料；4）第39、43、47、51、55、59、63、67、70天投喂第3阶段复合液体饵料和活体饵料轮虫；5）第74、78、82、86、90、94、98、102、106、110天投喂第4阶段复合液体饵料和活体饵料轮虫。采用本发明所述的方法对分割繁殖珊瑚分割体，营养均衡性好，成活率100%，100天养殖平均湿重净增184.12克，适合水族市场珊瑚无性繁殖分割扩增的人工培育方法。

权利要求

1.一种珊瑚分割繁殖的人工培育方法，其特征是所述的方法具有如下的步骤：

步骤一：切割珊瑚体的处理

将经过5ppm磺胺类药物浸泡处理的小段切割珊瑚体捆绑在附着基上,放入珊瑚培育缸进行分阶段人工培育；

步骤二：切割珊瑚体的第1阶段人工培育

切割珊瑚体放入珊瑚培育缸的第7天，进行第一次投喂第1阶段复合液体饵料，在450 L的水体中投喂0.3L第1阶段复合液体饵料；

第14天，进行第二次投喂第1阶段复合液体饵料，在450 L的水体中投喂0.4L第1阶段复合液体饵料；

第21天，第三次投喂第1阶段复合液体饵料，在450 L的水体中投喂0.5L第1阶段复合液体饵料；

步骤三：第2阶段人工培育

第24天时进行第一次投喂第2阶段复合液体饵料，在450 L的水体中投喂0.5～0.7L第2阶段复合液体饵料；

第28天时进行第二次投喂第2阶段复合液体饵料，在450 L的水体中投喂0.7～0.9L第2阶段复合液体饵料；

第31天、第35天时投喂第2阶段复合液体饵料，在450 L的水体中投喂1 L第2阶段复合液体饵料；

步骤四：第3阶段人工培育

第39天时进行第一次投喂第3阶段复合液体饵料和活体饵料轮虫液，即在450 L的水体中投喂0.5～0.7L第3阶段复合液体饵料，同时投喂0.5L活体饵料轮虫液，每升活体饵料轮虫液中含有1×10³～5×10³个轮虫；

第43天时进行第二次投喂第3阶段复合液体饵料和活体饵料轮虫液，在450 L的水体中投喂0.7～0.9L第3阶段复合液体饵料，同时投喂1L活体饵料轮虫液，每升活体饵料轮虫液中含有1×10³～5×10³个轮虫；

第47天、第51天、第55天、第59天、第63天、第67天、第70天时依次同时投喂第3阶段复合液体饵料和活体饵料轮虫液，在450 L的水体中投喂1 L第3阶段复合液体饵料，同时投喂2L活体饵料轮虫液，每升活体饵料轮虫液中含有5×10³～10×10³个轮虫；

步骤五：第4阶段人工培育

第74天、第78天时依次同时投喂第4阶段复合液体饵料和活体饵料轮虫液，在450 L的水体中投喂1.0～1.5L第4阶段复合液体饵料，同时投喂2L活体饵料轮虫液，每升活体饵料轮虫液中含10×10³～15×10³个轮虫；

第82天、第86天、第90天、第94天时依次同时投喂第4阶段复合液体饵料和活体饵料轮虫液，在450 L的水体中投喂量1.0～1.5L第4阶段复合液体饵料，同时投喂3L活体饵料轮虫液，每升活体饵料轮虫液中含10×10³～15×10³个轮虫；

步骤六：第5阶段人工培育

第98天、第102天、第106天、第110天时依次同时投喂第4阶段复合液体饵料和活体饵料轮虫液，在450 L的水体中投喂量1.0～1.5L第4阶段复合液体饵料；同时投喂4L活体饵料轮虫液，每升活体饵料轮虫液中含有15×10³～20×10³个轮虫。

2.根据权利要求1所述的所述的一种珊瑚分割繁殖的人工培育方法，其特征是步骤二、步骤三中所述的投喂，是指在晚上8：00时关闭人工光源，8：30时关闭扬浪设备并在珊瑚体的小枝周围采用点滴方式开始投喂，投喂结束后30分钟，重新开启人工光源和扬浪设备；

所述的点滴方式是指复合液体饵料或活体饵料轮虫液在医疗输液装置中调整一定速率输出复合液体饵料或活体饵料轮虫液。

3.根据权利要求1所述的所述的一种珊瑚分割繁殖的人工培育方法，其特征是步骤四、步骤五、步骤六中所述的投喂，是指在晚上8：00时关闭人工光源，通入冷水下调水温至25℃～25.5℃，8：30时关闭扬浪设备并在珊瑚体的小枝周围采用点滴方式开始投喂，投喂结束后30分钟重新开启人工光源和扬浪设备；

所述的点滴方式是指复合液体饵料或活体饵料轮虫液在医疗输液装置中调整一定速率输出复合液体饵料或活体饵料轮虫液。

4.根据权利要求1所述的所述的一种珊瑚分割繁殖的人工培育方法，其特征是所述的第1阶段复合液体饵料，其制备过程如下：

1、酶解清液与鱼油混合液的制备

（1）重量体积份配比：

虾肉500～520g

贻贝性腺480～500g

鱼油5～7g

海水1000mL

（2）制备：

在虾肉和贻贝性腺中加海水，通过搅碎机搅碎成虾肉和贻贝性腺碎屑液，加虾肉和贻贝性腺碎屑液重量的0.18～0.22 %复合蛋白酶进行酶解得到酶解液，酶解液通过200目尼龙布过滤后酶解清液；酶解清液中加入鱼油，混合制成酶解清液与鱼油混合液，再按照混合液体总重量的5%加入复合维生素，溶解后得到所述的第1阶段复合液体饵料；

所述的海水，是指将海水煮沸5分钟后再冷却至常温的海水；

所述的酶解，其条件为：pH为4.0, 酶解温度为45～55℃, 酶解时间为48～60 h。

5.根据权利要求4所述的所述的一种珊瑚分割繁殖的人工培育方法，其特征是所述的复合蛋白酶由酸性蛋白酶和木瓜蛋白酶按1:1重量比例构成。

6.根据权利要求4所述的所述的一种珊瑚分割繁殖的人工培育方法，其特征是所述的复合维生素配比为：硫胺素26mg、核黄素105 mg、烟酸510 mg、泛酸钙105 mg、维生素B₆ 105 mg、维生素B₁₂ 0.26 mg、生物素1.2 mg、叶酸12 mg。

7.根据权利要求1、4所述的所述的一种珊瑚分割繁殖的人工培育方法，其特征是所述的第2阶段复合液体饵料，其制备过程如下：将第1阶段复合液体饵料中酶解清液与鱼油混合液6L和拟微绿球藻、石莼混合液4L进行均匀混合成第2阶段复合液体饵料。

8.根据权利要求7所述的所述的一种珊瑚分割繁殖的人工培育方法，其特征是所述的拟微绿球藻、石莼混合液，通过如下方式进行制备：将新鲜石莼洗净去杂处理后，放入磨碎机进行研磨处理，研磨后的石莼碎屑悬浮液通过 200 目筛绢网袋过滤，得到石莼液于4℃下保存；拟微绿球藻（Nannnochloropsis gaditana）种子经扩增培养后，离心机沉淀藻体；取拟微绿球藻沉淀藻体和石莼液混合，加入海水，制成拟微绿球藻与石莼混合液，在8～10℃冷藏备用。

9.根据权利要求1、4、8所述的所述的一种珊瑚分割繁殖的人工培育方法，其特征是所述的第3阶段复合液体饵料，其制备过程如下：

将第1阶段复合液体饵料中酶解清液与鱼油混合液5L、复合维生素液1L和拟微绿球藻、石莼混合液4L进行均匀混合成第3阶段复合液体饵料；

所述的复合维生素液制备如下：复合维生素配比组成为：硫胺素26mg、核黄素105 mg、烟酸510 mg、泛酸钙105 mg、维生素B₆ 105 mg、维生素B₁₂ 0.26 mg、生物素1.2 mg、叶酸12 mg；使用时，按上述配方维生素加入1L常温的煮沸海水，随配随用。

10.根据权利要求1、4、8所述的所述的一种珊瑚分割繁殖的人工培育方法，其特征是所述的第4阶段复合液体饵料，其制备过程如下：

将第1阶段复合液体饵料中酶解清液与鱼油混合液4L、复合维生素液1L、拟微绿球藻、石莼混合液3L和混合菌种子液2L进行均匀混合成第4阶段复合液体饵料；

所述的混合菌种子液制备如下：按照比例将酿酒酵母种子液0.5L、产朊假丝酵母种子液0.5L和深红红螺菌种子液2L进行均匀混合成混合菌种子液3L，在10～14℃冷藏备用；

所述酿酒酵母种子液制备：由8°Bx米曲汁和10°Bx麦芽汁按照5:2的体积比例混合，并置于摇床上进行酿酒酵母培养，酿酒酵母培养温度为 28℃～30℃，培养时间72～96 小时；

所述产朊假丝酵母种子液制备：由8°Bx米曲汁和10°Bx麦芽汁按照5:1的体积比例混合，并置于摇床上进行产朊假丝酵母培养，产朊假丝酵母培养，温度为 28℃～30℃，培养时间为72～96小时；

所述深红红螺菌种子液制备：深红红螺菌(Rhodospirillum rubrum）种子液培养液按重量百分比为：氯化铵 0.1～0.2％、碳酸氢钠、0.04～0.8％、磷酸氢二钾 0.05～0.1％、乙酸钠 0.20～0.40％、硫酸镁 0.02～0.04％、余量为水，调节培养液pH7.8后将深红红螺菌接种其中并在自然光照下进行静止培养，静止培养条件为：培养温度为 30℃～32℃，培养时间为96～120小时；

所述的8°Bx米曲汁，其制备过程如下：

（1）蒸饭：糯米清洗后，清水浸泡6h至米粒呈乳白色，将水沥干，倒入蒸饭机连续蒸饭，得到熟透的糯米饭；

（2）淋饭搭窝：糯米饭经过输送带喷水淋饭，让饭粒吸水膨胀，糯米饭温度控制在40℃；每个酒缸倒入50斤糯米的蒸饭量，加入甜酒药和红曲粉，拌匀，压平实，中间挖个井状窝，进行搭窝糖化；

（3）糖化：搭窝糖化48h后，井状窝中出现少量糖化液，冲入清水，停留24小时，可以通过压榨过滤得到浅黄色的浓甜味米曲汁；用时将滤液稀释至所需糖度；

所述的10°Bx麦芽汁，其制备过程如下：

所述的10°Bx麦芽汁制备：称1500g麦芽粉,加水4500ml，置于55℃保温水浴糖化4小时，即可取出过滤；将滤液装瓶灭菌备用；用时将滤液稀释至所需糖度。

说明书

技术领域

本发明属于海洋生物珊瑚的人工培育技术领域。具体涉及到一种珊瑚分割繁殖的人工培育方法。

背景技术

珊瑚礁是地球上生产力和生物多样性最高的生态系统之一，为人类社会提供了巨大的经济、社会文化价值和生态服务功能。近年来，在商业化水族市场，活体珊瑚养殖越来越大受到人们的青睐，但是国产活体珊瑚几乎完全来自于野外捕获，市场的需求与科研的现状存在脱节，针对满足水族市场需求的国产珊瑚繁育研究报道很少，在珊瑚优良观赏性状筛选、良种培育、产业化等方面几乎是空白。

发展珊瑚的人工繁育是解决濒危的野生珊瑚资源与不断壮大的迅速增长商业化水族市场珊瑚需求之间矛盾的主要出路之一。珊瑚的有性繁殖具有繁殖力强、遗传多样性高及不损伤母体珊瑚等优点，但是，实现在人工环境下珊瑚的性成熟和有性繁殖还较为困难，幼体要成长为有观赏价值的珊瑚群落需要相当长时间的持续培养， 因而影响了珊瑚的产量并增加了养成阶段的死亡几率．这些不利因素限制了珊瑚人工有性繁殖的普及与推广。相对珊瑚在有性繁殖方面的滞后，珊瑚的无性繁殖技术已经得到广泛的应用．珊瑚动物具有多种多样的无性繁殖方式，涉及出芽、 裂开、组织碎片的脱落、水螅体释放以及包囊的形成等，发生在生活史的任何阶段，最终都能发育成独立的功能个体。水族市场的珊瑚无性繁殖一般采用分割扩增方式。

在水族市场的珊瑚无性繁殖的各个阶段，人工模拟海洋生态系统条件下的光照、温度、盐度、pH 值以及人工饵料和饵料投喂方式等理化因素，对无性繁殖分割扩增方式的生长影响及其重要。尤其是珊瑚的人工饵料和饵料投喂方法，对珊瑚无性繁殖分割扩增方式生长的成功与否关系极大。一些研究表明，多数商业人工饵料和错误的投喂方法，并不能提高珊瑚的生长率，反而可能引起水体富营养化及珊瑚白化。

福建师范大学黄镇等人，以虾肉、贻贝性腺、鱼油为原料，加入复合蛋白酶进行酶解制成酶解清液与鱼油混合液备用；以石莼液和微绿球藻为原料制成拟微绿球藻与石莼混合液备用；将酿酒酵母种子液、产朊假丝酵母种子液和深红红螺菌种子液制成混合菌种子液备用；将上述备用液加入复合维生素，得到珊瑚人工养殖复合液体饵料。采用黄祖新等人制备的珊瑚人工养殖复合液体饵料，对珊瑚进行50天的人工养殖（试验组），与相同水环境无添加饵料自然生长的同品种人工养殖的珊瑚（对照组1）以及市场购买的人工饵料同品种人工养殖的珊瑚（对照组2）进行试验对照表明，采用本发明所述的复合液体饵料对珊瑚进行人工养殖的肉质软珊瑚，经过50天的养殖后，从起始湿重223.28增加到341.43克，净增118.15克，天均生长率达到2.36。该方法已经以“珊瑚人工养殖的复合液体饵料的制备方法”与本发明同日申请了发明专利。

本发明参考上述技术方案，针对珊瑚分割繁殖以不同阶段复合液体饵料和投喂方式进行人工培育。以虾肉、贻贝性腺、鱼油为原料，制成酶解清液与鱼油混合液加入复合维生素可制成珊瑚分割繁殖第1阶段复合液体饵料及投喂方式；将酶解清液与鱼油混合液和拟微绿球藻、石莼混合液进行均匀混合成第2阶段复合液体饵料及投喂方式；将酶解清液与鱼油混合液、复合维生素液和拟微绿球藻、石莼混合液进行均匀混合成第3阶段复合液体饵料及投喂方式；将酶解清液与鱼油混合液、复合维生素液、拟微绿球藻、石莼混合液和混合菌种子液进行均匀混合成第4阶段复合液体饵料及投喂方式。由于各阶段的复合液体饵料各具营养特点，结合不同阶段复合液体饵料和个别阶段的活体饵料，以不同的投喂方式进行珊瑚分割繁殖人工培育，能有效提高珊瑚分割繁殖的珊瑚体成活率和生长速度，并且降低投喂人工饵料对水体的富营养化，具有良好的应用前景。

发明内容

本发明的目的是提供一种适合水族市场珊瑚无性繁殖分割扩增的人工培育方法，该方法以各阶段复合液体饵料以及独特的投喂方式，解决分割珊瑚体在人工模拟海洋生态系统条件下，珊瑚无性繁殖分割扩增过程死亡率高、生长慢的问题。利用该人工培育方法可以节约养殖成本，提高人工养殖分割珊瑚体的成活率和分割珊瑚个体的生长速率。

为实现本发明的目的采用的技术方案是：

一、人工培育设施及水体条件

珊瑚培育缸：为1500mm（长）×650mm（宽）×500mm（高），容水450L。

附属设备：人工光源；蛋白质分离器；水流扬浪循环和水处理系统。

培育水体条件：人工光照控制在22500Lm；培育水体水温在25．5℃～26．5℃之间、pH 8．1～8．3、碱度KH 2．5meq／L～4meq／L、水中的硝酸根离子<0．2ppm、磷酸盐<O．03ppm、各种钙离子380ppm～450ppm、镁离子1250ppm～1350ppm的控制范围。

二、珊瑚分割繁殖的分阶段人工培育

1、切割珊瑚体的处理

将经过5ppm磺胺类药物浸泡处理的小段切割珊瑚体捆绑在附着基上,放入珊瑚培育缸进行分阶段人工培育。

2、切割珊瑚体的第1阶段人工培育

切割珊瑚体放入珊瑚培育缸的第7天，进行第一次投喂第1阶段复合液体饵料，在450 L的水体中投喂0.3L第1阶段复合液体饵料；

第14天，进行第二次投喂第1阶段复合液体饵料，在450 L的水体中投喂0.4L第1阶段复合液体饵料；

第21天，第三次投喂第1阶段复合液体饵料，在450 L的水体中投喂0.5L第1阶段复合液体饵料。

第1阶段人工培育中所述的投喂，是指在晚上8：00时关闭人工光源，8：30时关闭扬浪设备并在珊瑚体的小枝周围采用点滴方式开始投喂，投喂结束后30分钟，重新开启人工光源和扬浪设备。

3、第2阶段人工培育

第24天时进行第一次投喂第2阶段复合液体饵料，在450 L的水体中投喂0.5～0.7L第2阶段复合液体饵料；

第28天时进行第二次投喂第2阶段复合液体饵料，在450 L的水体中投喂0.7～0.9L第2阶段复合液体饵料。

第31天、第35天时投喂第2阶段复合液体饵料，在450 L的水体中投喂1 L第2阶段复合液体饵料。

第2阶段人工培育中所述的投喂：是指在晚上8：00时关闭人工光源，8：30时关闭扬浪设备并在珊瑚体的小枝周围采用点滴方式开始投喂，投喂结束后30分钟重新开启人工光源和扬浪设备。

4、第3阶段人工培育

经过第2阶段人工培育后，珊瑚体的切割伤口逐渐完全愈合，并开始投喂第3阶段复合液体饵料。

第39天时进行第一次投喂第3阶段复合液体饵料和活体饵料轮虫液，即在450 L的水体中投喂0.5～0.7L第3阶段复合液体饵料，同时投喂0.5L每升中含有1×10³～5×10³个轮虫的活体饵料轮虫液。

第43天时进行第二次投喂第3阶段复合液体饵料和活体饵料轮虫液，在450 L的水体中投喂0.7～0.9L第3阶段复合液体饵料，同时投喂1L每升中含有1×10³～5×10³个轮虫的活体饵料轮虫液。

第47天、第51天、第55天、第59天、第63天、第67天、第70天时依次同时投喂第3阶段复合液体饵料和活体饵料轮虫液，在450 L的水体中投喂1 L第3阶段复合液体饵料，同时投喂2L每升中含有5×10³～10×10³个轮虫的活体饵料轮虫液。

第3阶段人工培育中所述的投喂，是指在晚上8：00时关闭人工光源，通入冷水下调水温至25℃～25.5℃，8：30时关闭扬浪设备并在珊瑚体的小枝周围采用点滴方式开始投喂，投喂结束后30分钟重新开启人工光源和扬浪设备。

5、第4阶段人工培育

经过第3阶段人工培育后，珊瑚体开始切片伤口完全愈合，开始快速生长，投喂第4阶段复合液体饵料。

第74天、第78天时依次同时投喂第4阶段复合液体饵料和活体饵料轮虫液，在450 L的水体中投喂1.0～1.5L第4阶段复合液体饵料，同时投喂2L每升中含10×10³～15×10³个轮虫的活体饵料轮虫液。

第82天、第86天、第90天、第94天时依次同时投喂第4阶段复合液体饵料和活体饵料轮虫液，在450 L的水体中投喂量1.0～1.5L第4阶段复合液体饵料，同时投喂3L每升中含10×10³～15×10³个轮虫活体饵料轮虫液。

第4阶段人工培育中所述的投喂：是指在晚上8：00时关闭人工光源，通入冷水下调水温至25℃～25.5℃，8：30时关闭扬浪设备并在珊瑚体的小枝周围采用点滴方式开始投喂，投喂结束后30分钟重新开启人工光源和扬浪设备。

6、第5阶段人工培育

经过第4阶段人工培育后，珊瑚体切割处分裂出了新的珊瑚虫。

第98天、第102天、第106天、第110天时依次同时投喂第4阶段复合液体饵料和活体饵料轮虫液，在450 L的水体中投喂量1.0～1.5L第4阶段复合液体饵料；同时投喂4L每升中含15×10³～20×10³个活体饵料轮虫的活体饵料轮虫液。

第5阶段人工培育中所述的投喂：是指在晚上8：00时关闭人工光源，通入冷水下调水温至25℃～25.5℃，8：30时关闭扬浪设备并在珊瑚体的小枝周围采用点滴方式开始投喂，投喂结束后30分钟重新开启人工光源和扬浪设备。

本发明所述的点滴方式是指复合液体饵料或活体饵料轮虫液在医疗输液装置中调整一定速率输出复合液体饵料或活体饵料轮虫液。

采用本发明所述的人工培育方法对分割繁殖的鹿角珊瑚分割体，成活率100%，经过100天的养殖后，从起始平均湿重303.34增加到487.46克，净增184.12克，天均生长率达到1.84。珊瑚体切割处分裂出了新的珊瑚虫的天数比对照组提早20天。本发明适合水族市场珊瑚无性繁殖分割扩增的人工培育方法，以各阶段复合液体饵料以及独特的投喂方式，对珊瑚的营养均衡性好，能提高珊瑚分割体的成活率和生长速度，兼具净化水质的功效。

所述的第1阶段复合液体饵料，其制备过程如下：

1、酶解清液与鱼油混合液的制备

（1）重量体积份配比：

虾肉500～520g

贻贝性腺480～500g

鱼油5～7g

海水1000mL

（2）制备：

在虾肉和贻贝性腺中加海水，通过搅碎机搅碎成虾肉和贻贝性腺碎屑液，加虾肉和贻贝性腺碎屑液重量的0.18～0.22 %复合蛋白酶进行酶解得到酶解液，酶解液通过200目尼龙布过滤后酶解清液；酶解清液中加入鱼油，混合制成酶解清液与鱼油混合液，再按照混合液体总重量的5%加入复合维生素，溶解后得到所述的第1阶段复合液体饵料。

所述的海水，是指将海水煮沸5分钟后再冷却至常温的海水。

所述的鱼油是购自汤臣倍健股份有限公司的深海鱼油。

所述的复合蛋白酶由酸性蛋白酶和木瓜蛋白酶按1:1重量比例构成。

所述的酶解，其条件为：pH为4.0, 酶解温度为45～55℃, 酶解时间为48～60 h。虾肉和贻贝性腺酶解液的蛋白回收率和水解度分别为80～83%和42～46%。

所述的复合维生素配比为：硫胺素26mg、核黄素105 mg、烟酸510 mg、泛酸钙105 mg、维生素B₆ 105 mg、维生素B₁₂ 0.26 mg、生物素1.2 mg、叶酸12 mg。

所述的第2阶段复合液体饵料，其制备过程如下：

将第1阶段复合液体饵料中酶解清液与鱼油混合液6L和拟微绿球藻、石莼混合液4L进行均匀混合成第2阶段复合液体饵料。

所述的拟微绿球藻、石莼混合液的制备

将新鲜石莼洗净去杂处理后，放入磨碎机进行研磨处理，研磨后的石莼碎屑悬浮液通过 200 目筛绢网袋过滤，得到石莼液于4℃下保存。拟微绿球藻（Nannnochloropsis gaditana）种子经扩增培养后，离心机沉淀藻体。取拟微绿球藻沉淀藻体和石莼液混合，加入海水，制成拟微绿球藻与石莼混合液，在8～10℃冷藏备用。

所述的第3阶段复合液体饵料，其制备过程如下：

将第1阶段复合液体饵料中酶解清液与鱼油混合液5L、复合维生素液1L和拟微绿球藻、石莼混合液4L进行均匀混合成第3阶段复合液体饵料。

所述的复合维生素液制备如下：复合维生素配比组成为：硫胺素26mg、核黄素105 mg、烟酸510 mg、泛酸钙105 mg、维生素B₆ 105 mg、维生素B₁₂ 0.26 mg、生物素1.2 mg、叶酸12 mg。使用时，按上述配方维生素加入1L常温的煮沸海水，随配随用。

所述的第4阶段复合液体饵料，其制备过程如下：

将第1阶段复合液体饵料中酶解清液与鱼油混合液4L、复合维生素液1L、拟微绿球藻、石莼混合液3L和混合菌种子液2L进行均匀混合成第4阶段复合液体饵料。

所述的混合菌种子液制备如下：按照比例将酿酒酵母种子液0.5L、产朊假丝酵母种子液0.5L和深红红螺菌种子液2L进行均匀混合成混合菌种子液3L，在10～14℃冷藏备用。

所述酿酒酵母种子液制备：由8°Bx米曲汁和10°Bx麦芽汁按照5:2的体积比例混合，并置于摇床上进行酿酒酵母培养。酿酒酵母培养，温度为 28℃～30℃，培养时间72～96 小时。培养结束时，酿酒酵母种子液中每毫升含酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）菌数≥ 10 个亿。

所述产朊假丝酵母种子液制备：由8°Bx米曲汁和10°Bx麦芽汁按照5:1的体积比例混合，并置于摇床上进行产朊假丝酵母培养。产朊假丝酵母培养，温度为 28℃～30℃，培养时间为72～96 小时。培养结束时，产朊假丝酵母种子液中每毫升含产朊假丝酵母菌数≥ 10 个亿。

所述深红红螺菌种子液制备：深红红螺菌(Rhodospirillum rubrum）种子液培养液按重量百分比为：氯化铵 0.1～0.2％、碳酸氢钠、0.04～0.8％、磷酸氢二钾 0.05～0.1％、乙酸钠 0.20～0.40％、硫酸镁 0.02～0.04％、余量为水。调节培养液pH7.8后将深红红螺菌接种其中并在自然光照下进行静止培养。静止培养，其条件为：培养温度为 30℃～32℃，培养时间为96～120小时。培养结束时，深红红螺菌种子液中每毫升含深红红螺菌菌数≥ 20个亿。

所述的8°Bx米曲汁，其制备过程如下：

（1）蒸饭：糯米清洗后，清水浸泡6h至米粒呈乳白色，将水沥干，倒入蒸饭机连续蒸饭，得到熟透的糯米饭。

（2）淋饭搭窝：糯米饭经过输送带喷水淋饭，让饭粒吸水膨胀，糯米饭温度控制在40℃。每个酒缸倒入50斤糯米的蒸饭量，加入甜酒药和红曲粉，拌匀，压平实，中间挖个井状窝，进行搭窝糖化。

（3）糖化：搭窝糖化48h后，井状窝中出现少量糖化液，冲入清水，停留24小时，可以通过压榨过滤得到浅黄色的浓甜味米曲汁。用时将滤液稀释至所需糖度。

所述的10°Bx麦芽汁，其制备过程如下：

所述的10°Bx麦芽汁制备：称1500g麦芽粉,加水4500ml，置于55℃保温水浴糖化4小时，即可取出过滤。将滤液装瓶灭菌备用。用时将滤液稀释至所需糖度。

所述的菌株产朊假丝酵母Candida utilis编号：2.1495；酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae编号：2.596；深红红螺菌Rhodospirillum rubrum编号：1.3369购自中国普通微生物菌种保藏管理中心。

所述的石莼Ulva lactuca L.、拟微绿球藻Nannnochloropsis gaditana、酸性蛋白酶、木瓜蛋白酶、鱼油、虾肉、贻贝、维生素、轮虫均购自市场。

实施例1

珊瑚分割繁殖的分阶段人工培育

1、切割珊瑚体的处理

将经过5ppm磺胺类药物浸泡处理的小段切割鹿角珊瑚体捆绑在附着基上,放入珊瑚培育缸进行分阶段人工培育。

2、切割珊瑚体的第1阶段人工培育

切割珊瑚体放入珊瑚培育缸的第7天时，第一次投喂第1阶段复合液体饵料，在450 L的水体中投喂量0.3L第1阶段复合液体饵料；

第14天时，第二次投喂第1阶段复合液体饵料，在450 L的水体中投喂量0.4L第1阶段复合液体饵料；

第21天时，第三次投喂第1阶段复合液体饵料，在450 L的水体中投喂量0.5L第1阶段复合液体饵料。

所述的投喂操作：是指在晚上8：00时关闭人工光源，8：30时关闭扬浪设备并开始投喂，在珊瑚体的小枝周围采用点滴方式，投喂结束后30分钟，重新开启人工光源和扬浪设备。

3、第2阶段人工培育

第24天时第一次投喂第2阶段复合液体饵料，在450 L的水体中投喂量0.5L第2阶段复合液体饵料；第28天时第二次投喂第2阶段复合液体饵料，在450 L的水体中投喂量0.7L第2阶段复合液体饵料。

第31天、第35天时投喂均是第2阶段复合液体饵料，在450 L的水体中投喂量1L第2阶段复合液体饵料。

所述的投喂操作：是指在晚上8：00时关闭人工光源，8：30时关闭扬浪设备并开始投喂，在珊瑚体的小枝周围采用点滴方式，投喂结束后30分钟重新开启人工光源和扬浪设备。

4、第3阶段人工培育

经过第2阶段人工培育后，珊瑚体的切割伤口逐渐完全愈合，并开始投喂第3阶段复合液体饵料。

第39天时第一次同时投喂第3阶段复合液体饵料和活体饵料轮虫液，在450 L的水体中投喂量0.5L第3阶段复合液体饵料，同时投喂0.5L活体饵料轮虫液，在每升活体饵料轮虫液含有1×10³～5×10³个轮虫。

第43天时第二次同时投喂第3阶段复合液体饵料和活体饵料轮虫液，在450 L的水体中投喂量0.7L第3阶段复合液体饵料，同时投喂1L活体饵料轮虫液，在每升活体饵料轮虫液含有1×10³～5×10³个轮虫。

接着第47天、第51天、第55天、第59天、第63天、第67天、第70天时依次同时投喂均第3阶段复合液体饵料和活体饵料轮虫液，在450 L的水体中投喂量 1 L第3阶段复合液体饵料，同时投喂2L活体饵料轮虫液，在每升活体饵料轮虫液含有5×10³～10×10³个轮虫。

所述的投喂，是指在晚上8：00时关闭人工光源，通入冷水下调水温至25℃～25.5℃，8：30时关闭扬浪设备并开始投喂，在珊瑚体的小枝周围采用点滴方式，投喂结束后30分钟重新开启人工光源和扬浪设备。

5、第4阶段人工培育

经过第3阶段人工培育后，珊瑚体开始切片伤口完全愈合，开始快速生长，投喂第4阶段复合液体饵料。

第74天、第78天时依次同时投喂第4阶段复合液体饵料和活体饵料轮虫液，在450 L的水体中投喂量1L第4阶段复合液体饵料，同时投喂2L活体饵料轮虫液，在每升活体饵料轮虫液含10×10³～15×10³个轮虫。

第82天、第86天、第90天、第94天时依次同时投喂第4阶段复合液体饵料和活体饵料轮虫液，在450 L的水体中投喂量1.5L第4阶段复合液体饵料，同时投喂3L活体饵料轮虫液，在每升活体饵料轮虫液含10×10³～15×10³个轮虫。

所述的投喂，是指在晚上8：00时关闭人工光源，通入冷水下调水温至25℃～25.5℃，8：30时关闭扬浪设备并在珊瑚体的小枝周围采用点滴方式开始投喂，，投喂后30分钟重新开启人工光源和扬浪设备。

6、第5阶段人工培育

经过第4阶段人工培育后，珊瑚体切割处分裂出了新的珊瑚虫。

第98天、第102天、第106天、第110天时依次同时投喂第4阶段复合液体饵料和活体饵料轮虫液，在450 L的水体中投喂量1.5 L第4阶段复合液体饵料，同时投喂4L活体饵料轮虫液，在每升活体饵料轮虫液含15×10³～20×10³个轮虫。所述的投喂，是指在晚上8：00时关闭人工光源，通入冷水下调水温至25℃～25.5℃，8：30时关闭扬浪设备并在珊瑚体的小枝周围采用点滴方式开始投喂，投喂结束后30分钟重新开启人工光源和扬浪设备。

本次采用人工培育方法对分割繁殖的鹿角珊瑚分割体，成活率100%，经过100天的养殖后，从起始平均湿重316.05增加到506.38克，净增190.33克，天均生长率达到1.90。珊瑚体切割处分裂出了新的珊瑚虫的天数比对照组提早19天。

实施例2

珊瑚分割繁殖的分阶段人工培育

1、切割珊瑚体的处理

将经过5ppm磺胺类药物浸泡处理的小段切割珊瑚体捆绑在附着基上,放入珊瑚培育缸进行分阶段人工培育。

2、切割珊瑚体的第1阶段人工培育

切割珊瑚体放入珊瑚培育缸的第7天时，第一次投喂第1阶段复合液体饵料，在450 L的水体中投喂量为0.3L第1阶段复合液体饵料；

第14天时，第二次投喂第1阶段复合液体饵料，在450 L的水体中投喂量为0.4L第1阶段复合液体饵料；

第21天时，第三次投喂第1阶段复合液体饵料，在450 L的水体中投喂量为0.5L第1阶段复合液体饵料。

所述的投喂：是指在晚上8：00时关闭人工光源，8：30时关闭扬浪设备并在珊瑚体的小枝周围采用点滴方式开始投喂，投喂结束后30分钟，重新开启人工光源和扬浪设备。

3、第2阶段人工培育

第24天时第一次投喂第2阶段复合液体饵料，在450 L的水体中投喂量为0.7L第2阶段复合液体饵料；

第28天时第二次投喂第2阶段复合液体饵料，在450 L的水体中投喂量为0.9L第2阶段复合液体饵料。

第31天、第35天时依次投喂第2阶段复合液体饵料，在450 L的水体中投喂量为1 L第2阶段复合液体饵料。

所述的投喂：是指在晚上8：00时关闭人工光源，8：30时关闭扬浪设备并在珊瑚体的小枝周围采用点滴方式开始投喂，投喂结束后30分钟重新开启人工光源和扬浪设备。

4、第3阶段人工培育

经过第2阶段人工培育后，珊瑚体的切割伤口逐渐完全愈合，并开始投喂第3阶段复合液体饵料。

第39天时进行第一次同时投喂第3阶段复合液体饵料和活体饵料轮虫液，在450 L的水体中投喂量为0.7L第3阶段复合液体饵料，同时投喂0.5L活体饵料轮虫液，在每升活体饵料轮虫液含有1×10³～5×10³个轮虫。

第43天时第二次同时投喂第3阶段复合液体饵料和活体饵料轮虫液，在450 L的水体中投喂量为0.9L第3阶段复合液体饵料；同时投喂1L活体饵料轮虫液，在每升活体饵料轮虫液含有1×10³～5×10³个轮虫。

第47天、第51天、第55天、第59天、第63天、第67天、第70天时依次同时投喂第3阶段复合液体饵料和活体饵料轮虫液，在450 L的水体中投喂量为 1 L第3阶段复合液体饵料，同时投喂2L活体饵料轮虫液，在每升活体饵料轮虫液含有5×10³～10×10³个轮虫。

所述的投喂，是指在晚上8：00时关闭人工光源，通入冷水下调水温至25℃，8：30时关闭扬浪设备并在珊瑚体的小枝周围采用点滴方式开始投喂，投喂结束后30分钟重新开启人工光源和扬浪设备。

5、第4阶段人工培育

经过第3阶段人工培育后，珊瑚体开始切片伤口完全愈合，开始快速生长，投喂第4阶段复合液体饵料。

第74天、第78天时依次同时投喂第4阶段复合液体饵料和活体饵料轮虫液，在450 L的水体中投喂量为1L第4阶段复合液体饵料，同时投喂2L活体饵料轮虫液，在每升活体饵料轮虫液含10×10³～15×10³个轮虫。

第82天、第86天、第90天、第94天时依次同时投喂均是第4阶段复合液体饵料和活体饵料轮虫液，在450 L的水体中投喂量为1.5 L第4阶段复合液体饵料，同时投喂3L活体饵料轮虫液，在每升活体饵料轮虫液含10×10³～15×10³个轮虫。

所述的投喂：是指在晚上8：00时关闭人工光源，通入冷水下调水温至25.5℃，8：30时关闭扬浪设备并在珊瑚体的小枝周围采用点滴方式开始投喂，投喂结束后30分钟重新开启人工光源和扬浪设备。

6、第5阶段人工培育

经过第4阶段人工培育后，珊瑚体切割处分裂出了新的珊瑚虫。

第98天、第102天、第106天、第110天时依次同时投喂第4阶段复合液体饵料和活体饵料轮虫液，在450 L的水体中投喂量为1.5 L第4阶段复合液体饵料；同时投喂4L活体饵料轮虫液，在每升活体饵料轮虫液含15×10³～20×10³个轮虫。

所述的投喂，是指在晚上8：00时关闭人工光源，通入冷水下调水温至25℃，8：30时关闭扬浪设备并在珊瑚体的小枝周围采用点滴方式开始投喂，投喂结束后30分钟重新开启人工光源和扬浪设备。

本发明采用人工培育方法对分割繁殖的鹿角珊瑚分割体，成活率100%，经过100天的养殖后，从起始平均湿重308.75增加到501.32克，净增192.57克，天均生长率达到1.90。珊瑚体切割处分裂出了新的珊瑚虫的天数比对照组提早23天。

一种珊瑚分割繁殖的人工培育方法专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。