专利摘要

本发明涉及化学结构式Ⅰ所示的N‑(噻唑‑2‑基)氨基酰胺衍生物或其盐；式中R选自：C1～C2烷基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基；Y1、Y3选自：氢、甲基、乙基、羟基、甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴或碘；Y2、Y4选自：氢、甲基、乙基；n选自：1～5；R1、R2选自：氢、C1～C2烷基、C3～C6直链烷基或C3～C6支链烷基、C3～C6脂环基、烯丙基、苄基、羟乙基；NR1R2选自：哌啶基、吗啉基、哌嗪基或N‑甲基哌嗪基；盐选自：盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、苹果酸盐、乳酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐或富马酸盐。N‑(噻唑‑2‑基)氨基酰胺衍生物或其盐在制备抗癌药物中的应用。

权利要求

1.化学结构式Ⅰ所示的N-(噻唑-2-基)氨基酰胺衍生物或其盐：

其中，R选自：叔丁基；Y1和Y3选自：氯；Y2和Y4选自：氢；n选自：1；NR1R2选自：N-甲基哌嗪基；盐选自：盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、苹果酸盐、乳酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐或富马酸盐。

2.权利要求1所述的N-(噻唑-2-基)氨基酰胺衍生物的制备方法；其特征在于它制备反应如下：

其中，R、Y1～Y4、n和NR1R2的定义如权利要求1所述；X选自：氯、溴或碘。

3.N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基)噻唑-2-基]-2-(N-甲基哌嗪基)乙酰胺或其盐在制备抗宫颈癌药物中的应用。

说明书

技术领域

本发明涉及新化合物的制备方法与应用，具体是N-(噻唑-2-基)氨基酰胺衍生物及其作为制备抗癌药的应用。

背景技术

Holla等[European Medical Chemistry，2003，38：313-318]描述了2-芳氨基-4-(2，4-二氯-5-氟苯基)噻唑的制备与生物活性；中国发明专利(CN1018445026，CN101781269)描述了5-(4-氯苯甲基)-4-叔丁基噻唑衍生物和4-叔丁基-2-(硝基苄亚氨基)噻唑的制备及其作为制备抗肿瘤药物的应用。中国发明专利(CN101277692A，2008.10.01公开)描述了5-苄基-4-甲基/三氟甲基-2-芳氨基噻唑的制备。中国发明专利(CN102070556A，2011.5.25公开；CN102067845A，2011.5.25公开)描述了5-苄基-4-烷基-2-芳氨基噻唑氢溴酸盐的制备。中国发明专利(CN102964312A，2013.3.13公开；CN102924400A，2013.2.13公开；CN102936229A；2013.2.20公开)描述了N-(4-叔丁基-5-苄基噻唑-2-基)酰胺的制备及其生物活性。

发明内容

本发明的目的在于提供N-(噻唑-2-基)氨基酰胺衍生物(I)或其盐；

式中R选自：C1～C2烷基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基；Y1、Y3选自：氢、甲基、乙基、羟基、甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴或碘；Y2、Y4选自：氢、甲基、乙基；n选自：1、2、3、4或5；R1、R2选自：氢、C1～C2烷基、C3～C6直链烷基或C3～C6支链烷基、C3～C6脂环基、烯丙基、苄基、羟乙基；NR1R2选自：哌啶基、吗啉基、哌嗪基或N-甲基哌嗪基；盐选自：盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、苹果酸盐、乳酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐或富马酸盐。

本发明的目的在于提供的N-(噻唑-2-基)氨基酰胺衍生物选自下列化合物：N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基)噻唑-2-基]-2-甲氨基乙酰胺、N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基)噻唑-2-基]-2-乙氨基乙酰胺、N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基)噻唑-2-基]-2-丁氨基乙酰胺、N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基)噻唑-2-基]-2-羟乙氨基乙酰胺、N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基)噻唑-2-基]-2-(N-甲基哌嗪基)乙酰胺、N-[4-叔丁基-5-(4-氯苄基)噻唑-2-基]-2-甲氨基乙酰胺、N-[4-叔丁基-5-(4-氯苄基)噻唑-2-基]-2-乙氨基乙酰胺、N-[4-叔丁基-5-(4-氯苄基)噻唑-2-基]-2-丁氨基乙酰胺、N-[4-叔丁基-5-(4-氯苄基)噻唑-2-基]-2-羟乙氨基乙酰胺、N-[4-叔丁基-5-(4-氯苄基)噻唑-2-基]-2-(N-甲基哌嗪基)乙酰胺、N-[4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄基)噻唑-2-基]-2-甲氨基乙酰胺、N-[4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄基)噻唑-2-基]-2-乙氨基乙酰胺、N-[4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄基)噻唑-2-基]-2-丁氨基乙酰胺、N-[4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄基)噻唑-2-基]-2-羟乙氨基乙酰胺或N-[4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄基)噻唑-2-基]-2-(N-甲基哌嗪基)乙酰胺。

本发明的目的在于提供N-(噻唑-2-基)氨基酰胺衍生物的制备方法；其特征在于它制备反应如下：

式中R选自：C1～C2烷基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基；Y1、Y3选自：氢、甲基、乙基、羟基、甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴或碘；Y2、Y4选自：氢、甲基、乙基；n选自：1、2、3、4或5；R1、R2选自：氢、C1～C2烷基、C3～C6直链烷基或C3～C6支链烷基、C3～C6脂环基、烯丙基、苄基、羟乙基；NR1R2选自：哌啶基、吗啉基、哌嗪基或N-甲基哌嗪基；X选自：氯、溴或碘。

本发明的目的在于提供N-(噻唑-2-基)氨基酰胺衍生物(I)或其盐具有抗癌活性，在制备抗癌药物中应用。

本发明与现有技术相比具有如下优点：

本发明首次制备N-(噻唑-2-基)氨基酰胺衍生物及其盐，并发现N-(噻唑-2-基)氨基酰胺衍生物或其盐具有抗癌活性。

具体实施方式

以下实施例旨在说明本发明而不是对本发明的进一步限定。

实施例1～13的N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基)噻唑-2-基]乙酰胺衍生物的制备反应如下：

其中R1、R2选自：氢、C1～C2烷基、C3～C6直链烷基或C3～C6支链烷基、C3～C6脂环基、烯丙基、苄基、羟乙基；NR1R2选自：哌啶基、吗啉基、哌嗪基或N-甲基哌嗪基。

实施例1

N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基)噻唑-2-基]-2-甲氨基乙酰胺的制备

0.20g N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基噻唑-2-基]氯乙酰胺，5mL四氢呋喃，常温搅拌下加入0.12g吡啶和0.13g 25％甲胺水溶液；反应7h后，脱溶，加石油醚析出固体，抽滤，石油醚洗，干燥得淡黄色固体N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基)噻唑-2-基]-2-甲氨基乙酰胺，收率88.1％，m.p.136～137℃；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：1.33(s，9H，3×CH3)，2.53(s，3H，CH3)，3.47(s，2H，CH2)，4.26(s，2H，ArCH2)，7.02(d，J＝8.4Hz，1H，C6H3 6-H)，7.16(dd，J＝8.4Hz，J＝2.0Hz，1H，C6H3 5-H)，7.39(d，J＝2.0Hz，1H，C6H3 3-H)。

实施例2

N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基)噻唑-2-基]-2-乙氨基乙酰胺的制备

0.20g N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基噻唑-2-基]氯乙酰胺和5mL四氢呋喃，常温搅拌，加入0.12g吡啶和0.07g 70％乙胺水溶液；反应过夜，脱溶，加石油醚析出固体，抽滤，石油醚洗，干燥得淡黄色固体N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基)噻唑-2-基]-2-乙氨基乙酰胺，收率50％，m.p.115～117℃；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：1.18(t，J＝7.2Hz，3H，CH3)，1.34(s，9H，3×CH3)，2.75(q，J＝7.2Hz，2H，CH2CH3)，3.46(s，2H，COCH2)，4.26(s，2H，ArCH2)，7.02(d，J＝8.4Hz，1H，C6H3 6-H)，7.16(dd，J＝8.4Hz，J＝2.0Hz，1H，C6H3 5-H)，7.39(d，J＝2.0Hz，1H，C6H3 3-H)。

实施例3

N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基)噻唑-2-基]-2-丁氨基乙酰胺的制备

0.20g N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基噻唑-2-基]氯乙酰胺和5mL四氢呋喃，常温搅拌，加入0.12g吡啶和0.08g正丁胺；反应过夜，脱溶，石油醚，抽滤，干燥得淡黄色固体N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基)噻唑-2-基]-2-丁氨基乙酰胺，收率46.7％，m.p.95～97℃；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：0.94(t，J＝7.2Hz，3H，CH3)，1.34(s，9H，3×CH3)，1.38～1.41(m，2H，CH2CH3)，1.52～1.59(m，2H，CH2C2H5)，2.72(t，J＝7.2Hz，2H，NHCH2)3.51(s，2H，COCH2)，4.25(s，2H，ArCH2)，7.02(d，J＝8.4Hz，1H，C6H3 6-H)，7.16(dd，J＝8.4Hz，J＝2.0Hz，1H，C6H35-H)，7.39(d，J＝2.0Hz，1H，C6H3 3-H)。

实施例4

N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基)噻唑-2-基]-2-环丙氨基乙酰胺的制备

0.40g N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基噻唑-2-基]氯乙酰胺和5mL四氢呋喃，常温搅拌，加入0.24g吡啶和0.12g环丙胺；反应过夜，脱溶，加石油醚析出固体，抽滤，石油醚洗，干燥得黄色固体N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基)噻唑-2-基]-2-环丙氨基乙酰胺，收率77.7％，m.p.144～146℃；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：0.53(d，J＝6.8Hz，4H，CH2CH2)，1.33(s，9H，3×CH3)，2.30～2.35(m，1H，CH)，3.59(s，2H，COCH2)，4.25(s，2H，ArCH2)，7.01(d，J＝8.4Hz，1H，C6H3 6-H)，7.16(dd，J＝8.4Hz，J＝2.0Hz，1H，C6H3 5-H)，7.39(d，J＝2.0Hz，1H，C6H3 3-H)。

实施例5

N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基)噻唑-2-基]-2-羟乙氨基乙酰胺的制备

0.40g N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基噻唑-2-基]氯乙酰胺和5mL四氢呋喃，常温搅拌，加入0.24g吡啶和0.12g乙醇胺；反应过夜，脱溶，加石油醚析出固体，抽滤，石油醚洗，干燥得白色固体N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基)噻唑-2-基]-2-羟乙氨基乙酰胺，收率81.7％，m.p.111～113℃；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：1.33(s，9H，3×CH3)，2.92(s，2H，NHCH2)，3.59(s，2H，COCH2)，3.81(s，2H，CH2OH)，4.25(s，2H，ArCH2)，7.01(d，J＝8.4Hz，1H，C6H3 6-H)，7.16(dd，J＝8.4Hz，J＝2.0Hz，1H，C6H3 5-H)，7.39(d，J＝2.0Hz，1H，C6H3 3-H)。

实施例6

N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基)噻唑-2-基]-2-苄氨基乙酰胺的制备

0.40g N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基噻唑-2-基]氯乙酰胺和5mL四氢呋喃，常温搅拌，加入0.24g吡啶和0.22g苄胺；反应过夜，脱溶，加石油醚析出固体，抽滤，石油醚洗，干燥得黄色固体N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基)噻唑-2-基]-2-苄氨基乙酰胺，收率84.4％，m.p.118～120℃；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：1.34(s，9H，3×CH3)，3.49(s，2H，COCH2)，3.87(s，2H，NHCH2)，4.26(s，2H，ArCH2)，7.01(d，J＝8.0Hz，1H，C6H3 6-H)，7.16(dd，J＝8.0Hz，J＝2.0Hz，1H，C6H3 5-H)，7.39(d，J＝2.0Hz，1H，C6H3 3-H)。

实施例7

N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基)噻唑-2-基]-2-二丁氨基乙酰胺的制备

0.40g N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基噻唑-2-基]氯乙酰胺和5mL四氢呋喃，常温搅拌，加入0.24g吡啶和0.26g二丁胺；反应过夜，脱溶，加石油醚析出固体，抽滤，收集滤液进行柱层析，脱溶，乙醇重结晶，干燥得淡黄色固体N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基)噻唑-2-基]-2-二丁氨基乙酰胺，收率86.8％，m.p.84～86℃；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：0.93(t，J＝8.0Hz，6H，2×CH3)，1.34(s，9H，3×CH3)，1.38(m，4H，2×CH2CH3)，1.47(m，4H，2×CH2)，2.54(t，J＝7.2Hz，4H，2×NCH2)，3.22(s，2H，COCH2)，4.26(s，2H，ArCH2)，7.03(d，J＝8.4Hz，1H，C6H3 6-H)，7.16(dd，J＝8.4Hz，J＝2.0Hz，1H，C6H3 5-H)，7.39(d，J＝2.0Hz，1H，C6H3 3-H)。

实施例8

N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基)噻唑-2-基]-2-哌啶基乙酰胺的制备

0.40g N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基噻唑-2-基]氯乙酰胺和5mL四氢呋喃，常温搅拌，加入1mL 20％氢氧化钠溶液，0.24g吡啶和0.18g哌啶；反应过夜，脱溶，加石油醚析出固体，抽滤，石油醚洗，干燥得白色固体N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基)噻唑-2-基]-2-哌啶基乙酰胺，收率68.2％，m.p.184～185℃；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：1.34(s，9H，3×CH3)，1.50～2.55(m，10H，哌啶基)，3.16(s，2H，COCH2)，4.26(s，2H，ArCH2)，7.02(d，J＝8.4Hz，1H，C6H3 6-H)，7.16(dd，J＝8.4Hz，J＝2.4Hz，1H，C6H3 5-H)，7.39(d，J＝2.4Hz，1H，C6H3 3-H)。

实施例9

N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基)噻唑-2-基]-2-二乙氨基乙酰胺的制备

0.40g N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基噻唑-2-基]氯乙酰胺和5mL四氢呋喃，常温搅拌，加入0.24g吡啶和0.16g二乙胺；反应过夜，脱溶，残余物进行柱层析，脱溶，乙醇重结晶，干燥得淡黄色固体N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基)噻唑-2-基]-2-二乙氨基乙酰胺，收率76.7％，m.p.109～111℃；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：1.10(t，J＝7.2Hz，6H，2×CH3)，1.34(s，9H，3×CH3)，2.66(q，J＝7.2Hz，4H，2×NCH2)，3.22(s，2H，COCH2)，4.26(s，2H，ArCH2)，7.02(d，J＝8.4Hz，1H，C6H3 6-H)，7.16(dd，J＝8.4Hz，J＝2.0Hz，1H，C6H3 5-H)，7.39(d，J＝2.0Hz，1H，C6H3 3-H)。

实施例10

N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基)噻唑-2-基]-2-叔丁氨基乙酰胺的制备

0.40g N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基噻唑-2-基]氯乙酰胺和5mL四氢呋喃，常温搅拌，加入0.24g吡啶和0.16g叔丁胺；反应过夜，脱溶，残余物进行柱层析，脱溶，乙醇重结晶，干燥得乳白色固体N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基)噻唑-2-基]-2-叔丁氨基乙酰胺，收率7.0％，m.p.170～171℃；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：1.17(s，9H，3×CH3)，1.34(s，9H，3×CH3)，3.44(s，2H，COCH2)，4.25(s，2H，ArCH2)，7.02(d，J＝8.0Hz，1H，C6H3 6-H)，7.16(dd，J＝8.0Hz，J＝2.0Hz，1H，C6H3 5-H)，7.39(d，J＝2.0Hz，1H，C6H3 3-H)。

实施例11

N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基)噻唑-2-基]-2-吗啉基乙酰胺的制备

0.40gN-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基噻唑-2-基]氯乙酰胺和5mL四氢呋喃，常温搅拌，加入1mL 20％氢氧化钠溶液，0.24g吡啶和0.18g吗啉；反应过夜，脱溶，加石油醚析出固体，抽滤，石油醚洗，干燥得灰色固体N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基)噻唑-2-基]-2-吗啉基乙酰胺，收率79.2％，m.p.188～190℃；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：1.35(s，9H，3×CH3)，2.61(t，J＝4.4Hz，4H，CH2NCH2)，3.20(s，2H，COCH2)，3.81(t，J＝4.4Hz，4H，CH2OCH2)，4.26(s，2H，ArCH2)，7.02(d，J＝8.4Hz，1H，C6H3 6-H)，7.16(dd，J＝8.4Hz，J＝1.6Hz，1H，C6H3 5-H)，7.39(d，J＝1.6Hz，1H，C6H3 3-H)，9.97(s，1H，NH)。

实施例12N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基)噻唑-2-基]-2-二烯丙氨基乙酰胺的制备

0.40g N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基噻唑-2-基]氯乙酰胺和5mL四氢呋喃，常温搅拌，加入1mL 20％氢氧化钠溶液，0.24g吡啶和0.20g二烯丙胺；反应过夜，脱溶，残余物进行柱层析，脱溶，乙醇重结晶，干燥得白色固体N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基)噻唑-2-基]-2-二烯丙氨基乙酰胺，收率11.1％，m.p.104～106℃；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：1.34(s，9H，3×CH3)，3.21(d，J＝6.4Hz，4H，2×CH2CH)，3.26(s，2H，COCH2)，4.26(s，2H，ArCH2)，5.24(d，4H，2×CH＝CH2)，5.88(m，2H，2×CH＝CH2)，7.02(d，J＝8.4Hz，1H，C6H3 6-H)，7.16(dd，J＝8.4Hz，J＝2.4Hz，1H，C6H3 5-H)，7.39(d，J＝2.4Hz，1H，C6H3 3-H)，10.06(s，1H，NH)。

实施例13

N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基)噻唑-2-基]-2-(N-甲基哌嗪基)乙酰胺的制备

0.40g N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基噻唑-2-基]氯乙酰胺和5mL四氢呋喃，常温搅拌，加入1mL 20％氢氧化钠溶液，0.24g吡啶和0.20g N-甲基哌嗪；反应过夜，脱溶，加石油醚析出固体，抽滤，石油醚洗，干燥得淡黄色固体N-[4-叔丁基-5-(2，4-二氯苄基)噻唑-2-基]-2-(N-甲基哌嗪基)乙酰胺，收率65.9％，m.p.168～170℃；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：1.35(s，9H，3×CH3)，2.35(s，3H，CH3)，2.55(s，4H，CH2NCH2)，2.65(s，4H，CH2NCH2)，3.20(s，2H，COCH2)，4.26(s，2H，ArCH2)，7.02(d，J＝8.4Hz，1H，C6H3 6-H)，7.16(dd，J＝8.4Hz，J＝2.0Hz，1H，C6H3 5-H)，7.39(d，J＝2.0Hz，1H，C6H3 3-H)，9.99(s，1H，NH)。

实施例14

N-[4-叔丁基-5-(4-氯苄基)噻唑-2-基]乙酰胺衍生物的制备

其中R1、R2选自：氢、C1～C2烷基、C3～C6直链烷基或C3～C6支链烷基、C3～C6脂环基、烯丙基、苄基、羟乙基；NR1R2选自：哌啶基、吗啉基、哌嗪基或N-甲基哌嗪基。

按照实施例1～13的操作方法制备N-[4-叔丁基-5-(4-氯苄基)噻唑-2-基]乙酰胺衍生物：N-[4-叔丁基-5-(4-氯苄基)噻唑-2-基]-2-甲氨基乙酰胺、N-[4-叔丁基-5-(4-氯苄基)噻唑-2-基]-2-乙氨基乙酰胺、N-[4-叔丁基-5-(4-氯苄基)噻唑-2-基]-2-丁氨基乙酰胺、N-[4-叔丁基-5-(4-氯苄基)噻唑-2-基]-2-羟乙氨基乙酰胺和N-[4-叔丁基-5-(4-氯苄基)噻唑-2-基]-2-(N-甲基哌嗪基)乙酰胺。

实施例15

N-[4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄基)噻唑-2-基]乙酰胺衍生物的制备

其中R1、R2选自：氢、C1～C2烷基、C3～C6直链烷基或C3～C6支链烷基、C3～C6脂环基、烯丙基、苄基、羟乙基；NR1R2选自：哌啶基、吗啉基、哌嗪基或N-甲基哌嗪基。

按照实施例1～13的操作方法制备N-[4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄基)噻唑-2-基]乙酰胺衍生物：N-[4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄基)噻唑-2-基]-2-甲氨基乙酰胺、N-[4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄基)噻唑-2-基]-2-乙氨基乙酰胺、N-[4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄基)噻唑-2-基]-2-丁氨基乙酰胺、N-[4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄基)噻唑-2-基]-2-羟乙氨基乙酰胺和N-[4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄基)噻唑-2-基]-2-(N-甲基哌嗪基)乙酰胺。

实施例14

N-(噻唑-2-基)氨基酰胺衍生物及其盐的抗肿瘤活性

1.抗肿瘤活性原理

MTT法生物活性测试又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。MTT分析法以活细胞代谢物还原剂噻唑蓝[3-(4，5-二甲基-2-噻唑)-2，5-二苯基溴化四氮唑；3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenyltetrazolium bromide，MTT]为基础。MTT是一种能接受氢原子的染料。活细胞线粒体中与NADP相关的脱氢酶在细胞内可将黄色的MTT转化成不溶性的蓝紫色的甲瓒(formazon)，而死细胞则无此功能。用DMSO溶解formazon后，在一定波长下用酶标仪测定光密度值，既可定量测出细胞的存活率。根据光密度值的变化观察样品对肿瘤细胞的抑制作用。

2.抗肿瘤活性实验

试样：N-(噻唑-2-基)氨基酰胺衍生物(I)或其盐；

式中R选自：C1～C2烷基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基；Y1、Y3选自：氢、甲基、乙基、羟基、甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴或碘；Y2、Y4选自：氢、甲基、乙基；n选自：1、2、3、4或5；R1、R2选自：氢、C1～C2烷基、C3～C6直链烷基或C3～C6支链烷基、C3～C6脂环基、烯丙基、苄基、羟乙基；NR1R2选自：哌啶基、吗啉基、哌嗪基或N-甲基哌嗪基；盐选自：盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、苹果酸盐、乳酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐或富马酸盐。

细胞系：宫颈癌细胞系Hela、肺腺癌细胞系A549和乳腺癌细胞系MCF-7(中南大学湘雅医学院细胞库提供)。

试剂：噻唑蓝(MTT)、RPMI 1640培养液、新生牛血清、抗生素(美国英杰生命技术公司)；胰酶(美国AMRESCO公司)；96孔培养板(美国英杰生命技术公司)；二甲基亚砜(美国Sigma公司)。

仪器：HFsafe-1500型超净工作台、HF151UV型CO2培养箱(上海力申科学仪器有限公司)；XSP-15C型倒置显微镜(上海长方光学仪器有限公司)；Multiskan MK3型酶标仪(美国Thermo公司)；超纯水制备仪(美国Milli-Q公司)。

实验操作：试样对Hela细胞、A549细胞和MCF-7细胞的测试。每种细胞的实验操作过程相同，一次实验过程中，每种试样设置5个浓度梯度(0.010μmol/mL、0.030μmol/mL、0.100μmol/mL、0.300μmol/mL和1.000μmol/mL)，每个浓度四个平行试样，每组实验平行3次，并通过空白组对照得出结论。酶标仪检测各孔OD值，检测波长570nm。

3.抗肿瘤活性评价

1)细胞抑制率计算：

2)IC50值计算

试样浓度对数值与细胞抑制率线性回归，利用软件计算试样对细胞的半数抑制浓度IC50值。优选化合物对MCF-7细胞、Hela细胞和A549细胞的IC50见表1。

表1抗肿瘤活性测试结果

活性测试结果显示，N-(噻唑-2-基)氨基酰胺衍生物或其盐对宫颈癌细胞、人肺腺癌细胞(A549细胞)和人乳腺癌细胞(MCF-7细胞)具有良好的抑制活性，可用于制备抗肿瘤药物。

N-(噻唑-2-基)氨基酰胺衍生物及其制备方法与应用专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。