专利摘要
一种黄鳝醛酮还原酶突变蛋白，其特征在于：该醛酮还原酶突变蛋白为黄鳝Eakr基 因的A81K位点的突变，即黄鳝Eakr基因第81号位氨基酸对应的碱基由GCT突变成了AAG，其 对应氨基酸也由丙氨酸突变成赖氨酸，其突变基因的核苷酸和氨基酸序列如SEQ ID NO:1 和SEQ ID NO:2所示。 2.一种黄鳝醛酮还原酶突变蛋白的制备，其特征在于：包括如下步骤： (1)黄鳝Eakr基因A81K位点的突变 提取黄鳝总RNA，利用M‑MLV反转录酶合成cDNA，根据黄鳝Eakr基因序列设计突变引物， 进行重叠PCR扩增，扩增产物经回收、纯化、连接、转化和测序，黄鳝Eakr基因的第81号位氨 基酸对应的碱基由原来的GCT突变成了AAG，其对应氨基酸也由丙氨酸突变成赖氨酸，其序 列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示； (2)表达载体构建及重组蛋白表达和纯化 步骤A、将步骤(1)所得PCR产物与原核表达载体pET‑28a(+)同时进行EcoRI和Hind III 双酶切，回收、纯化、连接和转化，并在含有卡那霉素的平板上进行抗性筛选，经测序验证 A81K 后，成功构建原核表达载体PET‑Eakr ； A81K 步骤B、将原核表达载体pET‑Eakr 转化E.coli BL21(DE3)，涂布于含卡那霉素平板上 进行抗性筛选，并经菌落PCR验证及SDS‑PAGE电泳检测获得阳性表达菌株；以1％的接种量 将能表达重组蛋白的BL21添加到含有卡那霉素的培养基中，大量培养，诱导表达；将诱导好 的菌液离心，收集菌体超声波破碎，再离心收集沉淀；将沉淀用平衡缓冲液溶解，收集上清， A81K 上样、结合、洗脱、透析，获得纯化的黄鳝Eakr重组蛋白，实现了突变体蛋白Eakr 的纯化。 3.一种如权利要求1所述的黄鳝醛酮还原酶突变蛋白的应用，其特征在于，该突变蛋白 可用于检测醛类物质及中长链酮类物质的还原活性。 4.一种如权利要求1所述的黄鳝醛酮还原酶突变蛋白的应用，其特征在于，该突变蛋白 能够抑制LPS诱导的肝脏组织IL‑1β基因的表达水平，可抑制炎症因子的产生。
一种黄鳝醛酮还原酶突变蛋白的制备及应用专利购买费用说明
Q：办理专利转让的流程及所需资料
A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。
1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。
2：按规定缴纳著录项目变更手续费。
3：同时提交相关证明文件原件。
4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。
Q:专利著录项目变更费用如何缴交
A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式
Q：专利转让变更，多久能出结果
A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。
动态评分
0.0