专利摘要

本发明提供了一类式Ⅰ所示新化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的用途。实验结果表明，本发明的化合物具有优异的抗癌活性，对肺癌细胞、结肠癌细胞、肝癌细胞均有抑制作用，具有广阔的市场应用前景。

权利要求

1.如下所示化合物：

2.权利要求1所述化合物的制备方法，其特征在于：它包括以下步骤：

(1)取瘤盖拟层孔菌子实体，乙醇提取，即得乙醇提取物；

(2)将步骤(1)所得乙醇提取物用水分散后，再采用乙酸乙酯萃取，取萃取液干燥得乙酸乙酯浸膏，将乙酸乙酯浸膏与不溶于水的浸膏合并成组分FPA；

(3)将组分FPA用硅胶柱色谱分离，依次以体积比石油醚：乙酸乙酯＝40:1,20:1,10:1,1:1,0:1为洗脱剂进行梯度洗脱，根据薄层分析，合并含有相似组分的洗脱液，得FPA1～FPA13 13个组分；

(4)将含有目标化合物的组分FPA10用硅胶柱色谱分离，依次以体积比石油醚：丙酮＝10:1,5:1,1:1为洗脱剂进行梯度洗脱，根据薄层分析，合并含有相似组分的洗脱液，得FPA10A～FPA10J 10个组分；

(5)取含有目标化合物的组分FPA10F，采用反相制备型HPLC分离，以体积比为甲醇：水＝92:8洗脱，得FPA10F1-FPA10F8 8个组分；

(6)取含有目标化合物的组分FPA10F5采用反相制备型HPLC纯化，以体积比为乙腈：水＝78:22分离，即得权利要求1所述化合物。

3.权利要求1所述的化合物在制备抗肿瘤药物中的用途。

4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：所述肿瘤为多发性骨髓瘤、胰腺癌、结肠癌、乳腺癌、肺癌、肝癌、前列腺癌、骨肉瘤、白血病。

5.根据权利要求3或4所述的用途，其特征在于：所述药物是以权利要求1所述化合物为活性成分，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。

6.一种抗肿瘤的药物，其特征在于：它是以权利要求1所述化合物为活性成分，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。

7.根据权利要求6所述的药物，其特征在于：所述制剂为散剂、注射制剂、胶囊剂、颗粒剂。

8.权利要求6或7所述的药物在制备抗肿瘤药物中的用途。

9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于：所述肿瘤为多发性骨髓瘤、胰腺癌、结肠癌、乳腺癌、肺癌、肝癌、前列腺癌、骨肉瘤、白血病。

说明书

技术领域

本发明涉及一种化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的用途。

背景技术

恶性肿瘤已成为目前危害人类身体健康最严重的疾病之一。据世界卫生组织估计，全球每年因恶性肿瘤死亡约500余万人，每年新发现的恶性肿瘤患者1000万人。而抗肿瘤药物的开发在恶性肿瘤治疗过程中举足轻重。

目前，肿瘤的药物治疗主要是化疗药物的联合使用，然而化疗药物的长期使用会诱发耐药和二次突变，且毒副作用大，严重伤害患者身心。临床疗效显著的靶向药物如贝伐单抗、西妥昔单抗及帕尼单抗等药物也局限于血管内皮生长因子(VEGF)和表皮生长因子(EGFR)等相关通路抑制剂，治疗效果极其有限，随之带来的耐药性和毒副作用也成为癌症防治的重要问题。

因此，面对癌症防治的紧迫性和当前药物治疗的局限性，发现结构新颖、活性显著，低毒副作用的小分子药物成为抗肿瘤药物研究的热点。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了式Ⅰ所示化合物：

其中，R1选自酯基；环A为取代的五元或六元杂环。

进一步地，所述式Ⅰ化合物为如下化合物：

本发明还提供了上述化合物的制备方法，它包括以下步骤：

(1)取瘤盖拟层孔菌子实体，乙醇提取，即得乙醇提取物；

(2)将步骤(1)所得乙醇提取物用水分散后，再采用乙酸乙酯萃取，取萃取液干燥得乙酸乙酯浸膏，将乙酸乙酯浸膏与不溶于水的浸膏合并成组分FPA；

(3)将组分FPA用硅胶柱色谱分离，依次以石油醚：乙酸乙酯＝40:1,20:1,10:1,1:1,0:1(v/v)为洗脱剂进行梯度洗脱，根据薄层分析，合并含有相似组分的洗脱液，得FPA1～FPA13 13个组分；

(4)将含有目标化合物的组分FPA10用硅胶柱色谱分离，依次以石油醚：丙酮＝10:1,5:1,1:1(v/v)为洗脱剂进行梯度洗脱，根据薄层分析，合并含有相似组分的洗脱液，得FPA10A～FPA10J 10个组分；

(5)取含有目标化合物的组分FPA10F，采用反相制备型HPLC分离，以体积比为甲醇：水＝92:8洗脱，分离得到FPA10F1-FPA10F8 8个组分；

(6)取含有目标化合物的组分FPA10F5采用反相制备型HPLC纯化，以体积比为乙腈：水＝78:22分离，即得上述化合物。

本发明还提供了上述化合物在制备抗肿瘤药物中的用途。

进一步地，所述肿瘤为多发性骨髓瘤、胰腺癌、结肠癌、乳腺癌、肺癌、肝癌、前列腺癌、骨肉瘤、白血病。

进一步地，所述药物是以上述化合物为活性成分，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。

本发明还提供了一种抗肿瘤的药物，它是以上述化合物为活性成分，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。

进一步地，所述制剂为散剂、注射制剂、胶囊剂、颗粒剂。

本发明还提供了上述药物在制备抗肿瘤药物中的用途。

进一步地，所述肿瘤为多发性骨髓瘤、胰腺癌、结肠癌、乳腺癌、肺癌、肝癌、前列腺癌、骨肉瘤、白血病。

实验结果表明，本发明成功制备得到了上述化合物，并且本发明的化合物具有优异的抗癌活性，对肺癌细胞、结肠癌细胞、肝癌细胞均有抑制作用，具有广阔的市场应用前景。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1为本发明实施例1中化合物的1H-NMR光谱图。

图2为本发明实施例1中化合物的13C-NMR光谱图。

图3为本发明实施例1中化合物的DEPT光谱图。

图4为本发明实施例1中化合物的核磁共振1H-1H COSY光谱图。

图5为本发明实施例1中化合物的核磁共振HSQC光谱图。

图6为本发明实施例1中化合物的核磁共振HMBC光谱图。

具体实施方式

实施例1、本发明化合物的制备

瘤盖拟层孔菌子实体(1.56kg)粉碎后，用8L，95％乙醇在70℃加热浸泡4h，重复提取四次，合并提取液。减压浓缩得总浸膏391.34g。提取浸膏用1L蒸馏水分散后，分别用1L乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液。减压蒸干得到乙酸乙酯总浸膏37.63g。将乙酸乙酯萃取的浸膏和不溶于水的浸膏合并得到FPA 155.67g。组分FPA通过硅胶柱色谱(200-300目，4Kg)进行分离，用石油醚：乙酸乙酯(40:1,20:1,10:1,1:1,0:1,v/v,各1L)为洗脱剂进行梯度洗脱，分瓶收集浓缩液，采用薄层层析，以碘、浓硫酸香草醛为显色剂进行显色比对，合并含有相似组分的洗脱液，得13个组分(FPA1-FPA13)。

取含有目标化合物的组分FPA10(31.640g)通过硅胶柱色谱，用石油醚：丙酮(10:1,5:1,1:1v/v,各1L)为洗脱剂进行梯度洗脱，采用薄层层析，以碘、浓硫酸香草醛为显色剂进行显色比对，合并含有相似组分的洗脱液，得10个组分(FPA10A-FPA10J)。

取含有目标化合物的组分FPA10F(8.944g)采用反相制备型HPLC分离，条件为甲醇：水(92:8,v/v,10mL/min)洗脱，分离得到8个组分(FPA10F1-FPA10F8)，组分FPA10F5(289mg)采用反相制备型HPLC纯化，用乙腈：水(78:22,v/v,4mL/min)分离，得到该化合物(3mg)。

该化合物名称为：(3R,23R)-3-[(3S)-3-hydroxy-3-methyl-butyryloxy]-24-methyl-7-oxo-lanost-8,10,24-trien-26,23-lactone。白色粉末。

(c 0.05,MeOH)；

UV(MeOH)λmax(logε)201(4.23),209(3.60),214(3.68),217(4.03),223(3.75),314(2.93),329(6.00),and 334(2.44)nm；

IR(KBr)νmax3445,2962,2933,1733,1716,1657,1369,1149,and 571cm-1。

1H and 13C NMR数据如下表。

以下通过试验例的方式来说明本发明的有益效果。

试验例1、本发明化合物对肿瘤增殖活性的影响

1实验材料

1.1实验试剂

高糖DMEM、胎牛血清购自Gbico公司，MTT、胰蛋白酶、EDTA、DMSO购自Sigma公司，其余试剂均为国产分析纯。

1.2实验细胞

HCT116、A549、HepG2肿瘤细胞株均购自中科院细胞保存库。以含有10％胎牛血清的高糖DMEM培养基(含青霉素100U/ml，链霉素100μg/ml)培养于37℃、5％CO2、饱和湿度细胞培养箱内。每隔2-3d，以0.05％胰蛋白酶-0.53mM EDTA消化传代。

1.3实验药物

本发明实施例1制备的化合物，以DMSO溶解配制成100mg/ml溶液/混悬液，-20℃保藏备用。

2实验方法

分别取对数生长期的HCT-116、A549、HepG2细胞，按5×103个细胞加入96孔板，每孔180μl，培养过夜。在96孔板中分别加入5、8、12.5、20、32μg/ml浓度的样品，培养48h。培养结束前4h，吸去培养液，加入PBS 100μl。加入MTT溶液(5mg/ml)10μl，孵育4-6h后，每孔加入10％SDS溶液(0.01M HCl配制)100μl，置细胞培养箱中孵育过夜，采用酶标仪570nm处测定OD值。计算各样品浓度的抑制率，采用Curve Expert计算IC50值。

3实验结果

表1 化合物对HCT-116、A549、HepG2细胞增殖抑制作用

上述实验结果表明，本发明的化合物具有优异的抗癌活性，对肺癌细胞、结肠癌细胞、肝癌细胞均有抑制作用。

综上，本发明成功制备得到了上述化合物，并且本发明的化合物具有优异的抗癌活性，对肺癌细胞、结肠癌细胞、肝癌细胞均有抑制作用，具有广阔的市场应用前景。

一种化合物及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的用途专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。