专利摘要

本发明属于药物化学技术领域，涉及一种含1,2,3‑三氮唑的甾体嘌呤核苷类似物及其制备方法和应用。该甾体嘌呤核苷类似物具有以下通式：本发明以3β‑羟基‑5α‑雄甾‑17‑酮或4‑氮杂‑5α‑雄甾‑3,17‑二酮为原料，经溴化、氧化、叠氮化、环加成反应制得，制备方法简单，条件温和，目标物总收率达75%以上。该类化合物对前列腺癌、胃癌等细胞株具有明显的抑制作用，为进一步研究抗癌药物提供了先导化合物结构，并丰富了甾体核苷类似物的种类。

权利要求

1.一种含1,2,3-三氮唑的甾体嘌呤核苷类似物，其特征在于，具有以下通式：

其中，所述R是氯原子、氢原子或氟原子；所述R₂是

2.如权利要求1所述的含1,2,3-三氮唑的甾体嘌呤核苷类似物，其特征在于，选如下化合物：

3.制备权利要求1所述的含1,2,3-三氮唑的甾体嘌呤核苷类似物的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)化合物2a、2b的合成：取化合物1a(3β-羟基-5α-雄甾-17-酮)或1b(4-氮杂-5α-雄甾-3,17-二酮)溶解于甲醇，再加入溴化试剂，回流、搅拌反应，反应结束，后处理得化合物2a或2b；

(2)化合物4a的合成：将化合物2a溶于丙酮中，随后冰水浴条件搅拌滴加琼斯试剂，滴加完毕后继续搅拌反应，反应结束，后处理得化合物4a；

(3)化合物3a、3b、5a的合成：将化合物2a或2b或4a溶于N,N-二甲基甲酰胺，再加入叠氮化钠，随后室温搅拌反应，反应结束，后处理得化合物3a或3b或5a；

(4)化合物7a、7b、7c的合成：将碱基溶于N,N-二甲基甲酰胺，加入3-溴丙炔、碳酸钾，室温搅拌反应过夜，后处理得化合物7a或7b或7c；

(5)化合物含1,2,3-三氮唑的甾体嘌呤核苷类似物的合成：将化合物7a或7b或7c与3a或3b或5a溶于四氢呋喃与水的混合溶液中，再加入催化剂，室温搅拌反应，反应结束，后处理得含1,2,3-三氮唑的甾体嘌呤核苷类似物；

所述步骤(1)中的溴化试剂为溴化铜或液溴；步骤(4)中碱基为2，6-二氯嘌呤、6-氯嘌呤或2-氟-6-氯嘌；步骤(5)中催化剂为CuI、Cu₂O或CuSO₄/NaAsc。

4.权利要求1或2所述的含1,2,3-三氮唑的甾体嘌呤核苷类似物在制备抗肿瘤药物上的应用，其特征在于，将其作为活性成分，用于制备抗肿瘤药物。

5.权利要求4所述的含1,2,3-三氮唑的甾体嘌呤核苷类似物在制备抗肿瘤药物上的应用，其特征在于，所述抗肿瘤药物为治疗、预防前列腺癌、胃癌或食管癌药物。

说明书

技术领域

本发明属于药物化学技术领域，涉及一种核苷类似物，具体涉及一种含1,2,3-三氮唑的甾体嘌呤核苷类似物及其制备方法和应用。

背景技术

近几十年，癌症发病率呈直线上升趋势，癌症目前已经成为严重危害人类生命健康、制约社会经济发展的一大类疾病，因此，各国科研机构和制药公司一直致力于研制治疗效果好、副作用小的抗癌药物。核苷是一类十分重要的生物大分子，由核糖与碱基两部分组成，在细胞生命活动中起着不可忽视的作用，对细胞的结构、代谢、能量和功能的调节等尤其重要。核苷类似物是一类经过修饰与改造的核苷类化合物，如碘苷(IDU)、齐多夫定、阿昔洛韦等，结构虽然与天然核苷类似，参与病毒的代谢，但是这些核苷类似物却不能被病毒识别，从而干扰病毒的DNA、抑制蛋白质的合成，或者影响核酸的转录过程，因此达到治疗肿瘤和抗病毒的效果。现在，人们已经研发出大量的核苷类药物，但由于对人体的副作用和病毒的多样性，耐药性等原因，合成新的核苷类似物和对现有的核苷类药物进行化学修饰仍受到广泛关注。

由于1,2,3-三氮唑在生理条件下具有非常稳定的特性，因此，在药物化学领域得到广泛应用，表现出多种生物活性，如抗癌、抗真菌、抗病毒等。利用1,2,3-三氮唑将不同的药效分子连接在一起，形成新的药物分子，极大地丰富了化合物的种类，是近几年的热点。甾体类衍生物是一类重要的化合物，其具有抗炎、抗过敏、调节代谢、抗肿瘤等功能，近年来，在医药领域中的应用不断扩大。将1,2,3-三氮唑将甾体骨架与碱基相连，形成一类新颖、具有抗癌活性的化合物，目前未见文献报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种含1,2,3-三氮唑的甾体嘌呤核苷类似物及其制备方法和应用。

本发明采用以下技术方案：

所述含1,2,3-三氮唑的甾体嘌呤核苷类似物，其特征在于，具有以下通式：

其中，所述R是氯原子、氢原子或氟原子；所述R₂是

制备含1,2,3-三氮唑的甾体嘌呤核苷类似物的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)化合物2a、2b的合成：取1a(3β-羟基-5α-雄甾-17-酮)或1b(4-氮杂-5α-雄甾-3,17-二酮)溶解于甲醇，再加入溴化试剂，回流、搅拌反应，反应结束，后处理得化合物2a或2b；

(2)化合物4a的合成：将化合物2a溶于丙酮中，随后冰水浴条件搅拌滴加琼斯试剂，滴加完毕后继续搅拌停止反应，后处理得化合物4a；

(3)化合物3a、3b、5a的合成：将化合物2a或2b或4a溶于N,N-二甲基甲酰胺，再加入叠氮化钠，随后室温搅拌反应，反应结束，后处理得化合物3a或3b或5a；

(4)化合物7a、7b、7c的合成：将碱基溶于N,N-二甲基甲酰胺，加入3-溴丙炔、碳酸钾，室温搅拌反应，经后处理得化合物7a或7b或7c；

(5)化合物含1,2,3-三氮唑的甾体嘌呤核苷类似物的合成：将化合物7a或7b或7c与3a或3b或5a溶于四氢呋喃与水的混合溶液中，再加入催化剂，室温搅拌反应，反应结束，后处理得含1,2,3-三氮唑的甾体嘌呤核苷类似物。

步骤(1)中1a(3β-羟基-5α-雄甾-17-酮)或1b(4-氮杂-5α-雄甾-3,17-二酮)与溴化试剂摩尔比为1:2.0-4.0，每克3β-羟基-5α-雄甾-17-酮或4-氮杂-5α-雄甾-3,17-二酮使用甲醇20-30mL；

步骤(2)中每克2a化合物使用琼斯试剂1.5-2.0ml，每克2a化合物使用丙酮20-30mL；

步骤(3)中化合物2a或2b或4a与叠氮化钠的摩尔比为1:2.0-3.0，每克化合物2a或2b或4a使用N,N-二甲基甲酰胺15-25mL；

步骤(4)中6a或6b或6c与3-溴丙炔、碳酸钾的摩尔比为1：1.0-1.5:1.5-2.0，每克化合物6a或6b或6c使用N,N-二甲基甲酰胺20-35mL；

步骤(5)中7a或7b或7c与3a或3b或5a摩尔比为1：1.0-1.5，7a或7b或7c与催化剂的摩尔比为1：0.2-0.4，四氢呋喃/水体积比为1/0.8-1.0，每克化合物7a或7b或7c使用四氢呋喃与水40-60mL。

所述步骤(1)中的溴化试剂为溴化铜或液溴；步骤(4)中碱基为2，6-二氯嘌呤、6-氯嘌呤、2-氟-6-氯嘌；步骤(5)中催化剂为CuI、Cu₂O、CuSO₄/NaAsc(1/3-6)。

所述步骤(1)的后处理过程为减压蒸馏、萃取、有机相干燥，所述步骤(2)的后处理过程为减压蒸馏、萃取、有机相干燥，所述步骤(3)的后处理过程为加水析出、抽滤、干燥，所述步骤(4)的后处理过程为减压蒸馏、萃取、有机相干燥、柱层析，所述步骤(5)的后处理过程为减压蒸馏、萃取、有机相干燥、柱层析。

含1,2,3-三氮唑的甾体嘌呤核苷类似物的合成路线如下：

本发明所述含1,2,3-三氮唑的甾体嘌呤核苷类似物对多种肿瘤细胞株如前列腺癌、胃癌等细胞株具有显著的抑制作用，能够用于制备抗肿瘤药物，具有潜在的药物应用价值，为开发自主知识产权的一类新药奠定了良好的基础。

本发明优点：以3β-羟基-5α-雄甾-17-酮或4-氮杂-5α-雄甾-3,17-二酮为原料，经溴化、氧化、叠氮化、环加成反应制得，制备方法简单，条件温和，目标物总收率达75％以上。所得化合物由1,2,3-三氮唑将甾体骨架与碱基相连，形成一类新颖、具有抗癌活性的化合物，对前列腺癌细胞株(PC-3)、人胃癌细胞(MGC-803)、人食管癌细胞(EC-109)具有较好的活性，丰富了甾体核苷类似物的种类，为进一步研究抗癌药物提供先导化合物。

具体实施方式

为对本发明进行更好地说明，举实施例如下：

实施例1

制备通式所示R是氯原子，R₂是 即化合物8a(16β-(4-((2,6-二氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-5α-雄甾-3,17-二酮)的制备。

步骤一：化合物2a(16α-溴-3β-羟基-5α-雄甾-17-酮)的合成

取化合物1a(5g，17.2mmol)于250mL烧瓶中，加入甲醇(100mL)搅拌溶解，然后加入溴化铜(11.5g，51.6mmol)，搅拌下回流反应12h反应；反应完毕后，首先减压蒸除大部分醇类有机溶剂，然后加入水(150ml)，用二氯甲烷(100mL×3)萃取，合并有机相并用饱和碳酸氢钠溶液洗涤(20mL×3)，然后用饱和食盐水洗涤(20mL×3)，无水Na₂SO₄干燥，最后减压浓缩得白色固体，干燥后得白色固体(6.2g，16.8mmol)，产率97％。

产物的分析数据如下：¹H NMR(600MHz,Chloroform-d)δ4.53(d,1H-16),3.61(m,1H-3),0.90(s,3H),0.83(s,3H).¹³C NMR(151MHz,Chloroform-d)δ213.48,71.07,54.27,47.96,47.82,46.40,44.78,38.02,36.87,35.66,34.33,34.10,32.37,31.41,30.75,28.26,20.41,14.22,12.28.。

步骤二：化合物4a(16α-溴-5α-雄甾-3,17-二酮)的合成

称取化合物2a(6.2g，16.8mmol)于250mL烧瓶中，加入丙酮(120ml)搅拌溶解，冰水浴下滴加琼斯试剂(9.4mL，18.5mmol)，滴加完毕后，冰浴下搅拌1h，反应完后，滴加1ml乙醇中和过量的琼斯试剂，停止反应，首先减压蒸除大部分有机溶剂，然后加入水(150ml)，用二氯甲烷(100mL×3)萃取，合并有机相并用饱和碳酸氢钠溶液洗涤(20mL×3)，然后用饱和食盐水洗涤(20mL×3)，无水Na₂SO₄干燥，最后减压浓缩得白色固体，干燥后得白色固体(6.1g，16.6mmol)，产率98％。

产物的分析数据如下：¹H NMR(600MHz,Chloroform-d)δ4.54(d,1H-16),1.04(s,3H),0.93(s,3H).¹³C NMR(151MHz,Chloroform-d)δ213.12,211.27,53.69,47.79,47.75,46.47,46.22,44.51,38.31,38.01,35.81,34.22,34.09,32.29,30.39,28.47,20.60,14.21,11.44.。

步骤三：化合物5a(16β-叠氮-5α-雄甾-3,17-二酮)的合成

称取化合物4a(6.1g，16.6mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(100mL)中，加入叠氮化钠(3.25g，50mmol)，室温搅拌20min，倒入大量冰水中，过滤，白色滤饼用水洗涤(20mL×3)，干燥，得化合物5a白色固体(5.2g，15.8mmol)，产率95％。

产物的分析数据如下：¹H NMR(600MHz,Chloroform-d)δ3.74(t,1H-16),1.04(s,3H),0.95(s,3H).¹³C NMR(151MHz,Chloroform-d)δ214.98,211.24,63.10,53.95,47.12,46.70,46.52,44.50,38.35,38.00,35.87,34.26,31.61,30.62,28.89,28.47,20.46,14.19,11.45.。

步骤四：化合物7a(2,6-二氯-9-炔丙基-9-氢嘌呤)的合成

在圆底烧瓶中，加入6a(2,6-二氯-9-氢嘌呤)(5g，26.4mmol)，及N,N-二甲基甲酰胺(100mL)，再加入3-溴丙炔(3.77g，31.7mmol)、碳酸钾(5.52g，40mmol)室温搅拌过夜。反应结束后加入水(200mL)，用乙酸乙酯(100mL×4)萃取，饱和碳酸氢钠溶液洗涤(20mL×3)，然后用饱和食盐水洗涤(20mL×3)，无水Na₂SO₄干燥，最后减压浓缩，柱层析得产品7a(4.25g，18.75mmol)，产率71％。

产物的分析数据如下：¹H NMR(600MHz,Chloroform-d)δ8.35(s,1H),5.06(d,2H),2.63(t,1H).¹³C NMR(151MHz,Chloroform-d)δ153.28,152.55,152.04,144.88,130.77,76.39,74.57,33.91.。

步骤五：化合物8a(16β-(4-((2,6-二氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-5α-雄甾-3,17-二酮)的制备

称取化合物5a(1g，3mmol)和7a(0.68g，3mmol)，溶解于四氢呋喃(25ml)和水(25ml)的混合溶液中，然后再加入五水硫酸铜(37.5mg，0.15mmol),抗坏血酸钠(120mg，0.6mmol)室温搅拌5h。反应完毕后，首先减压蒸除大部分有机溶剂，然后加入水(50ml)，用二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤(10mL×3)，无水Na₂SO₄干燥，柱层析得白色固体，乙醇重结晶，得到化合物8a(16β-(4-((2,6-二氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-5α-雄甾-3,17-二酮)(1.38g，2.5mmol)，产率83％。

产物的分析数据如下：¹H NMR(600MHz,Chloroform-d)δ8.37(s,1H),7.86(s,1H),5.61–5.49(m,2H),4.69(dd,1H-16),1.09(d,7H).¹³C NMR(151MHz,Chloroform-d)δ211.19,210.73,153.04,152.83,151.92,145.87,140.64,130.72,124.09,64.94,53.94,47.78,47.05,46.52,44.47,39.03,38.35,38.00,35.90,34.16,31.78,30.69,29.29,28.40,20.49,14.65,11.50.。

实施例2

制备通式所示R是氢原子，R₂是 即化合物8b(16β-(4-((6-氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-5α-雄甾-3,17-二酮)的制备。

步骤一：化合物7b(6-氯-9-炔丙基-9-氢嘌呤)的合成

在圆底烧瓶中，加入6b(6-氯-9-氢嘌呤)(5g，32.5mmol)，及N,N-二甲基甲酰胺(100mL)，再加入3-溴丙炔(4.64g，39mmol)、碳酸钾(6.8g，49.3mmol)室温搅拌过夜。反应结束后加入水(200mL)，用乙酸乙酯(100mL×4)萃取，饱和碳酸氢钠溶液洗涤(20mL×3)，然后用饱和食盐水洗涤(20mL×3)，无水Na₂SO₄干燥，最后减压浓缩，柱层析得产品7b(3.9g，20.3mmol)，产率62.5％。

产物的分析数据如下：¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.79(s,1H),8.36(s,1H),5.09(d,2H),2.61(t,1H).¹³C NMR(100.6MHz,Chloroform-d)δ152.24,151.29,144.29,131.62,75.96,75.00,33.70.。

步骤二：化合物8b(16β-(4-((6-氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-5α-雄甾-3,17-二酮)的制备

称取化合物5a(1g，3mmol)和7b(0.58g，3mmol)，溶解于四氢呋喃(25ml)和水(25ml)的混合溶液中，然后再加入五水硫酸铜(50mg，0.20mmol),抗坏血酸钠(160mg，0.8mmol)室温搅拌4h。反应完毕后，首先减压蒸除大部分有机溶剂，然后加入水(50ml)，用二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤(10mL×3)，无水Na₂SO₄干燥，柱层析得白色固体，乙醇重结晶，得到化合物8b(16β-(4-((6-氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-5α-雄甾-3,17-二酮)(1.28g，2.45mmol)，产率81.7％。

产物的分析数据如下：¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.77(s,1H),8.36(s,1H),7.83(s,1H),5.68–5.49(m,2H),4.66(dd,1H-16),1.08(d,7H).¹³C NMR(100.6MHz,Chloroform-d)δ211.22,210.79,152.05,151.52,151.18,145.17,140.12,131.54,123.98,64.87,53.92,47.77,47.03,46.52,44.46,38.97,38.35,38.00,35.89,34.14,31.76,30.68,29.20,28.39,20.48,14.63,11.49.。

实施例3

制备通式所示R是氟原子，R₂是 即化合物8c(16β-(4-((2-氟-6-氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-5α-雄甾-3,17-二酮)的制备。

步骤一：化合物7c(2-氟-6-氯-9-炔丙基-9-氢嘌呤)的合成

在圆底烧瓶中，加入6c(2-氟-6-氯-9-氢嘌呤)(5g，29mmol)，及N,N-二甲基甲酰胺(100mL)，再加入3-溴丙炔(4.2g，35.3mmol)、碳酸钾(6.0g，43.5mmol)室温搅拌过夜。反应结束后加入水(250mL)，用乙酸乙酯(100mL×4)萃取，饱和碳酸氢钠溶液洗涤(15mL×3)，然后用饱和食盐水洗涤(15mL×3)，无水Na₂SO₄干燥，最后减压浓缩，柱层析得产品7c(3.75g，17.9mmol)，产率62％。

产物的分析数据如下：¹H NMR(600MHz,Chloroform-d)δ8.33(s,1H),5.02(d,2H),2.62(t,1H).¹³C NMR(100.6MHz,Chloroform-d)δ158.50,156.30,153.1,144.89,130.30,76.30,74.54,33.86.。

步骤二：化合物8c(16β-(4-((2-氟-6-氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-5α-雄甾-3,17-二酮)的制备

称取化合物5a(1g，3mmol)和7c(0.63g，3mmol)，溶解于四氢呋喃(25ml)和水(25ml)的混合溶液中，然后再加入五水硫酸铜(37.5mg，0.15mmol)，抗坏血酸钠(160mg，0.8mmol)室温搅拌4h。反应完毕后，首先减压蒸除大部分有机溶剂，然后加入水(50ml)，用二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤(10mL×3)，无水Na₂SO₄干燥，柱层析得白色固体，乙醇重结晶，得到化合物8c(16β-(4-((2-氟-6-氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-5α-雄甾-3,17-二酮)(1.23g，2.28mmol)，产率76％。

产物的分析数据如下：¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.35(s,1H),7.86(s,1H),5.51(m,2H),4.68(dd,1H-16),1.10(s,3H),1.07(s,3H).¹³C NMR(100.6MHz,Chloroform-d)δ211.23,210.76,158.40,156.22,153.08,145.88,140.60,130.23,124.09,64.92,53.92,47.77,47.03,46.51,44.47,39.03,38.34,38.00,35.90,34.14,31.76,30.68,29.27,28.39,20.48,14.63,11.49.。

实施例4

制备通式所示R是氯原子，R₂是 即化合物8d(16β-(4-((2,6-二氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-3β-羟基-5α-雄甾-17-酮)的制备。

步骤一：化合物3a(16β-叠氮-5α-雄甾-3,17-二酮)的合成

称取化合物2a(5g，13.5mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(80mL)中，加入叠氮化钠(2.6g，40mmol)，室温搅拌20min，倒入大量冰水中，过滤，白色滤饼，用水洗涤(15mL×3)，干燥，得化合物5a白色固体(4.2g，12.7mmol)，产率94％。

产物的分析数据如下：¹H NMR(600MHz,Chloroform-d)δ3.72(t,1H-16),3.60(m,1H-3),0.92(s,3H),0.83(s,3H).¹³C NMR(151MHz,Chloroform-d)δ215.32,71.07,63.18,54.52,47.19,46.87,44.80,38.01,36.88,35.71,34.35,31.70,31.39,30.99,28.89,28.26,20.27,14.19,12.29.。

步骤二：化合物8d(16β-(4-((2,6-二氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-3β-羟基-5α-雄甾-17-酮)的制备

称取化合物3a(500mg，1.51mmol)和7a(0.34g，1.51mmol)，溶解于四氢呋喃(15ml)和水(15ml)的混合溶液中，然后再加入五水硫酸铜(25mg，0.10mmol),抗坏血酸钠(80mg，0.4mmol)室温搅拌5h。反应完毕后，首先减压蒸除大部分有机溶剂，然后加入水(30ml)，用二氯甲烷(30mL×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤(6mL×3)，无水Na₂SO₄干燥，柱层析得白色固体，乙醇重结晶，得到化合物8d(16β-(4-((2,6-二氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-3β-羟基-5α-雄甾-17-酮)(0.66g，1.18mmol)，产率78％。

产物的分析数据如下：¹H NMR(600MHz,Chloroform-d)δ8.35(s,1H),7.83(s,1H),5.62–5.45(m,2H),4.67(t,1H-16),3.61(m,1H),2.66(m,1H),2.39(m,1H),1.07(s,3H),0.86(s,3H).¹³C NMR(151MHz,Chloroform-d)δ210.99,153.06,152.80,151.96,145.82,140.59,130.73,123.92,71.06,65.02,54.54,47.87,47.26,44.82,39.04,38.00,36.90,35.76,34.28,31.89,31.40,31.07,29.34,28.21,20.31,14.66,12.33.。

实施例5

制备通式所示R是氢原子，R₂是 即化合物8e(16β-(4-((6-氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-3β-羟基-5α-雄甾-17-酮)的制备。

化合物8e(16β-(4-((6-氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-3β-羟基-5α-雄甾-17-酮)的制备

称取化合物3a(500mg，1.51mmol)和7b(0.29g，1.51mmol)，溶解于四氢呋喃(15ml)和水(15ml)的混合溶液中，然后再加入碘化亚铜(57mg，0.3mmol)室温搅拌5h。反应完毕后，首先减压蒸除大部分有机溶剂，然后加入水(30ml)，用二氯甲烷(30mL×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤(6mL×3)，无水Na₂SO₄干燥，柱层析得白色固体，乙醇重结晶，得到化合物8e(16β-(4-((6-氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-3β-羟基-5α-雄甾-17-酮)(0.59g，1.12mmol)，产率74.5％。

产物的分析数据如下：¹H NMR(600MHz,Chloroform-d)δ8.77(s,1H),8.36(s,1H),7.82(s,1H),5.58(t,2H),4.69–4.61(m,1H-16),3.60(m,1H),2.65(m,1H),2.39(m,1H),1.06(s,3H),0.86(s,3H).¹³C NMR(151MHz,Chloroform-d)δ211.07,152.03,151.52,151.19,145.19,141.09,131.55,123.86,71.02,64.97,54.52,47.85,47.23,44.81,38.97,37.99,36.89,35.75,34.26,31.87,31.39,31.05,29.27,28.20,20.30,14.64,12.32.。

实施例6

制备通式所示R是氟原子，R₂是 即化合物8f(16β-(4-((2-氟-6-氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-3β-羟基-5α-雄甾-17-酮)的制备。

化合物8f(16β-(4-((2-氟-6-氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-3β-羟基-5α-雄甾-17-酮)的制备

称取化合物3a(500mg，1.51mmol)和7c(0.32g，1.51mmol)，溶解于四氢呋喃(15ml)和水(15ml)的混合溶液中，然后再加入氧化亚铜(43mg,0.3mmol)室温搅拌5h。反应完毕后，首先减压蒸除大部分有机溶剂，然后加入水(30ml)，用二氯甲烷(30mL×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤(8mL×3)，无水Na₂SO₄干燥，柱层析得白色固体，乙醇重结晶，得到化合物8f(16β-(4-((2-氟-6-氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-3β-羟基-5α-雄甾-17-酮)(0.65g，1.2mmol)，产率79.5％。

产物的分析数据如下：¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ8.80(s,1H),8.22(s,1H),5.57(s,2H),5.23(t,1H-16),4.43(s,1H),3.34(m,1H),3.32(s,2H),2.06(m,1H),0.99(s,3H),0.79(s,3H).¹³C NMR(151MHz,DMSO-d₆)δ212.53,157.46,156.04,152.55,148.81,141.62,130.36,125.23,69.70,64.81,54.38,47.46,46.26,44.83,39.43,38.56,36.99,35.82,34.09,31.84,31.79,31.12,30.14,28.54,20.42,14.76,12.52.。

实施例7

制备通式所示R是氯原子，R₂是 即化合物8g(4-氮杂-16β-(4-((2,6-二氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-5α-雄甾-3,17-二酮)的制备。

步骤一：化合物2b(4-氮杂-16α-溴-5α-雄甾-3,17-二酮)的合成

取化合物1b(5g，17.3mmol)于250mL烧瓶中，加入甲醇(120mL)搅拌溶解，然后加入溴化铜(11.6g，52mmol)，搅拌下回流反应12h反应；反应完毕后，首先减压蒸除大部分醇类有机溶剂，然后加入水(200ml)，用二氯甲烷(150mL×3)萃取，合并有机相并用饱和碳酸氢钠溶液洗涤(20mL×3)，然后用饱和食盐水洗涤(20mL×3)，无水Na₂SO₄干燥，最后减压浓缩得白色固体，干燥后得白色固体(5.7g，15.5mmol)，产率90％。

产物的分析数据如下：¹H NMR(600MHz,Chloroform-d)δ6.08(s,1H-4NH),4.54(d,1H-16),3.15–3.04(m,1H),0.93(t,7H).¹³C NMR(151MHz,Chloroform-d)δ212.74,172.01,60.48,51.22,47.84,47.52,46.02,35.86,34.02,33.92,33.37,32.14,28.32,26.94,20.34,14.25,11.34.。

步骤二：化合物3b(4-氮杂-16β-叠氮-5α-雄甾-3,17-二酮)的合成

称取化合物2b(5.7g，15.5mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(80mL)中，加入叠氮化钠(3.25g，50mmol)，室温搅拌20min，倒入大量冰水中，过滤，白色滤饼用水洗涤(20mL×3)，干燥，得化合物5a白色固体(4.9g，14.85mmol)，产率96％。

产物的分析数据如下：¹H NMR(600MHz,Chloroform-d)δ6.24(s,1H-4NH),3.74(t,1H-16),3.08(d,1H),0.94(d,6H),¹³C NMR(151MHz,Chloroform-d)δ214.63,172.05,62.98,60.53,51.44,47.23,46.43,35.93,33.97,33.29,31.45,28.83,28.53,28.48,27.01,20.20,14.24,11.36.。

步骤三：化合物8g(4-氮杂-16β-(4-((2,6-二氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-5α-雄甾-3,17-二酮)的制备

称取化合物3b(1g，3mmol)和7a(0.68g，3mmol)，溶解于四氢呋喃(30ml)和水(30ml)的混合溶液中，然后再加入五水硫酸铜(37.5mg，0.15mmol),抗坏血酸钠(120mg，0.6mmol)室温搅拌5h。反应完毕后，首先减压蒸除大部分有机溶剂，然后加入水(50ml)，用二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤(10mL×3)，无水Na₂SO₄干燥，柱层析得白色固体，乙醇重结晶，得到化合物8g(4-氮杂-16β-(4-((2,6-二氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-5α-雄甾-3,17-二酮)(1.4g，2.52mmol)，产率84％。

产物的分析数据如下：¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ8.83(s,1H),8.22(s,1H),7.29(s,1H),5.60(s,2H),5.25(t,1H-16),3.32(s,1H),2.99(d,1H),1.02(s,4H),0.83(s,3H).¹³C NMR(151MHz,DMSO-d₆)δ212.33,170.59,153.74,151.62,150.22,148.87,141.67,130.88,125.21,64.77,60.13,51.17,47.56,45.81,39.47,35.66,33.62,33.29,31.66,30.10,28.91,28.67,26.54,20.34,14.81,11.54.。

实施例8

制备通式所示R是氢原子，R₂是 即化合物8h(4-氮杂-16β-(4-((6-氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-5α-雄甾-3,17-二酮)的制备。

化合物8h(4-氮杂-16β-(4-((6-氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-5α-雄甾-3,17-二酮)的制备

称取化合物3b(1g，3mmol)和7b(0.57g，3mmol)，溶解于四氢呋喃(30ml)和水(30ml)的混合溶液中，然后再加入五水硫酸铜(50mg，0.2mmolmmol),抗坏血酸钠(120mg，0.6mmol)室温搅拌5h。反应完毕后，首先减压蒸除大部分有机溶剂，然后加入水(50ml)，用二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤(10mL×3)，无水Na₂SO₄干燥，柱层析得白色固体，乙醇重结晶，得到化合物8h(4-氮杂-16β-(4-((6-氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-5α-雄甾-3,17-二酮)(1.19g，2.27mmol)，产率75.5％。

产物的分析数据如下：¹H NMR(600MHz,Chloroform-d)δ8.77(s,1H),8.35(s,1H),7.83(s,1H),6.01(s,1H),5.68–5.50(m,2H),4.66(t,1H-16),3.10(d,1H),2.66(m,1H),1.09(s,3H),0.96(s,3H).¹³C NMR(151MHz,Chloroform-d)δ210.36,171.95,152.05,151.53,151.22,145.13,141.20,131.58,123.92,64.75,60.51,51.44,47.88,46.78,38.97,35.97,33.87,33.30,31.63,29.12,28.60,28.47,26.97,20.24,14.68,11.39.

实施例9

制备通式所示R是氟原子，R₂是 即化合物8i(4-氮杂-16β-(4-((2-氟-6-氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-5α-雄甾-3,17-二酮)的制备。

化合物8i(4-氮杂-16β-(4-((2-氟-6-氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-5α-雄甾-3,17-二酮)的制备

称取化合物3b(1g，3mmol)和7c(0.63g，3mmol)，溶解于四氢呋喃(25ml)和水(25ml)的混合溶液中，然后再加入五水硫酸铜(37.5mg，0.15mmol),抗坏血酸钠(120mg，0.6mmol)室温搅拌5h。反应完毕后，首先减压蒸除大部分有机溶剂，然后加入水(50ml)，用二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤(15mL×3)，无水Na₂SO₄干燥，柱层析得白色固体，乙醇重结晶，得到化合物8i(4-氮杂-16β-(4-((2-氟-6-氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-5α-雄甾-3,17-二酮)(1.3g，2.4mmol)，产率80％。

产物的分析数据如下：¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ8.81(s,1H),8.23(s,1H),7.28(s,1H),5.58(d,2H),5.25(q,J＝8.8,8.0Hz,1H),3.32(s,1H),2.99(d,1H),1.02(m,4H),0.83(s,3H).¹³C NMR(151MHz,DMSO-d₆)δ212.32,170.59,157.47,156.05,152.4,148.80,141.61,130.36,125.26,64.76,60.13,51.18,47.55,45.82,39.43,35.66,33.62,33.29,31.67,30.09,28.90,28.66,26.54,20.34,14.80,11.53.。

表1本专利中所涉及到的新化合物的编号和化学结构

目标化合物的肿瘤细胞抑制活性试验：

采用本发明实施例制得的含1,2,3-三氮唑的甾体嘌呤核苷类似物(8a-8i)对前列腺癌细胞株(PC-3)、人胃癌细胞(MGC-803)、人食管癌细胞(EC-109)进行细胞毒性试验。采用MTT法，进行体外细胞毒性测定。在96孔板中培养的对数生长期细胞中加入不同浓度的含1,2,3-三氮唑的甾体嘌呤核苷类似物，37℃、体积百分含量5％CO₂下培养细胞72h，同时进行三个平行实验，与对照组进行比较。加入MTT，继续培养3-4h，活细胞内将形成蓝紫色不溶物甲躜，移除培养液，加入DMSO，室温下振荡15分钟，使甲躜充分溶解，用酶标仪测定其吸光度，分别计算抑制肿瘤细胞生长到50％时化合物的浓度，以IC50值表示，其中部分结果如表2所示。

表2本发明含1,2,3-三氮唑的甾体嘌呤核苷类似物抗肿瘤活性测试结果(IC50，μM)

由表2看出，所测化合物对三种癌细胞都有一定的抑制活性；化合物8d对PC-3的抑制活性最好。

一种含1,2,3-三氮唑的甾体嘌呤核苷类似物及其制备方法和应用专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。