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天然芸苔素内酯在辣椒上的应用

天然芸苔素内酯在辣椒上的应用

IPC分类号 : A01G1/00,C07J73/00,C07J9/00,C07J75/00,A01N45/00,A01N43/22,A01P21/00

申请号
CN201310063327.9
可选规格
  • 专利类型: 发明专利
  • 法律状态: 有权
  • 申请日: 2013-02-28
  • 公开号: 103141251A
  • 公开日: 2013-06-12
  • 主分类号: A01G1/00
  • 专利权人: 成都新朝阳作物科学股份有限公司

专利摘要

本发明涉及天然芸苔素内酯在辣椒上的应用,具体提供了栽培辣椒的方法,其中在育苗期和在定植后施用芸苔素内酯或其类似物,尤其施用配比稳定的天然芸苔素内酯类似物。另外,本发明还提供了天然芸苔素内酯类似物的应用等。

说明书

技术领域

本发明是中国专利第201210026285.7号的继续申请,属于农用化学技术领域,具体而言,本发明涉及栽培辣椒的方法,其中在育苗期和在定植后施用芸苔素内酯或其类似物,尤其施用本发明的天然芸苔素内酯类似物。

背景技术

芸苔素内酯是国际上公认为活性最高的高效、广谱、无毒的植物生长调节剂,生理效益比已经发现的另外五大类植物激素高,而被称为世界第六大类植物激素。芸苔素内酯广泛存在于被子植物、裸子植物和某些低等植物中,从在植物体内的分布来看,存在于根、茎、叶、花粉、雌蕊、果实和种子中,如油菜花粉中含有较丰富的芸苔素内酯。

化学合成的芸苔素内酯,如中国专利申请CN1217337A、CN1217338A等所述的,虽然产品较为均一,但是活性成分单一,长期施用效果通常不如天然芸苔素内酯好,这在中国国内已经广泛使用的28-表高芸苔素内酯上表现得尤为突出。

从植物(如,花粉)或其他天然来源(如,蜂蜡)中提取的芸苔素内酯,其中通常含有多种芸苔素内酯结构类似物,其作为一种绿色的生产资料,其推广使用更容易为国内外用户所推崇,但是由于提取中工艺的限制,容易产生产品质量不稳定的情况;如果进一步提纯,则制备成本上升较大,不利于产业化实施,因而阻碍了人们进一步大量纯化,并阻碍了人们去研究其中各芸苔素内酯类似物是否具有芸苔素内酯的活性。例如,Zhu,W. M.等(Synthetic Communications,32(9),1385-1391)和Suksamaram,A.等(Tetrahedron,58,6033-6037)合成了一些化合物,但仅仅被当成昆虫的蜕皮激素类似物而只启示其的昆虫激素应用。

本发明人通过长期而艰苦的努力,摸索出了从植物中提取(纯化)芸苔素内酯类似物的稳定流程,精心研究了其中的各种提取溶剂,尽管其中需要一定的提纯过程,但是只需要一次提取过程,最终可以收集到多种分离的高纯度的天然芸苔素内酯类似物,因而摊薄了提纯的成本,有利于产业化推广实施;这些分离的天然芸苔素内酯类似物可以单独施用,也可以配比混和施用,因而产品质量稳定而容易控制。在获得了大量分离的高纯度的天然芸苔素内酯类似物的基础上,本发明人进一步研究,令人意外地发现了,这些天然芸苔素内酯类似物在植物产量增加和抗低温等方面均有效用,尤其适合于辣椒这一作物。

尽管中国专利申请CN1269140A描述了包含芸苔素内酯的抗植物病害的组合物,但其中没有提示其单独的抗低温的效用,也没有提示本发明的天然芸苔素内酯类似物;尽管中国专利申请CN1930966A描述了包含芸苔素的杀菌组合物,但其中没有提示其单独抗低温的效用,也没有提示本发明的天然芸苔素内酯类似物;另外,尽管中国专利申请CN102617236A描述了包含芸苔素内酯的杀菌组合物,但其中没有提示其单独抗低温的效用,也没有提示本发明的天然芸苔素内酯类似物,而且更严重的是其中所用的芸苔素内酯相对于磷等元素的含量极高,造成芸苔素内酯的浪费以及减效。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于提供了新的栽培辣椒的方法,。另外,本发明还提供了配比稳定的农用组合物,其中包含天然芸苔素内酯类似物,其中在育苗期和在定植后施用芸苔素内酯或其类似物,尤其施用本发明的天然芸苔素内酯类似物。

具体而言,在第一方面,本发明提供了栽培辣椒的方法,其包括育苗和定植过程,其特征在于,

(a)在育苗期施用芸苔素内酯或其类似物;并且

(b)在定植后施用芸苔素内酯或其类似物。

栽培(即,种植)辣椒的过程是本领域技术人员所熟知的,通常包括在播种后进行育苗,待长到一定程度后,进行定植。由于辣椒属于不耐低温的作物,因此对越冬或者早春种植的辣椒进行防冻工作是必不可少的。本发明人发现,芸苔素内酯或其类似物对植物的抗低温性的增强有一定效用,尽管不能代替目前的防冻措施(如,温室大棚和防冻剂等),但是在结合现有常规辣椒栽培手段后,能进一步提高辣椒产量并能缩短育苗期和收获期。

本发明发现,大量施用芸苔素内酯或其类似物并不能提高其效用,甚至可能会减效,因此优选控制在中低浓度进行施用,如以0.0001-0.1ppm的浓度进行施用,优选以0.001-0.01ppm的浓度进行施用。

本发明第一方面的方法尤其适合越冬或者早春种植的辣椒。因此优选在本发明第一方面的方法中,育苗是在温室大棚中育苗;和/或,定植是在早春定植。另外也优选在本发明第一方面的方法中,在定植后还施用防冻剂。

本发明第一方面的方法中,可以施用芸苔素内酯,也可以施用芸苔素内酯类似物。经过本发明进行研究,发现了一系列效用确准的芸苔素内酯类似物(在本文中也称天然芸苔素内酯类似物)。因此优选在本发明第一方面的方法中,芸苔素内酯类似物是分离的如式BR6、BR1、BR2、BR3、BR4和/或BR5所示的天然芸苔素内酯类似物或它们的混合物,优选所述混合物是成分配比稳定的农用组合物

在本文中,“天然”指的是从所限定的物质是从天然来源(如花粉、蜂蜡等)中提取的。在本发明的具体实施方式中,所提供的芸苔素内酯类似物是从油菜花粉中。当然,由于已经解析了这些天然芸苔素内酯类似物,因此它们不限于从天然来源(如花粉、蜂蜡等)中提取,也可以是化学合成的。

以上天然芸苔素内酯类似物可以通过本发明的具体实施方式所述的提取方法依次洗脱,其鉴定图谱分别如图2A~图2F所示。在本发明的具体实施方式中,BR1、BR5和/或BR6是更优选的,尤其是BR6是最优选的。

通常,这些天然芸苔素内酯类似物同农学上可接受的辅料混合而成为农用组合物,来施用。在本文中,“农学上可接受的辅料”指的是不干扰、甚至能增强天然芸苔素内酯类似物起效的农用辅料,包括赋形剂、稀释剂、乳化剂、pH调节剂等。在本发明的具体实施方式中,农学上可接受的辅料是水。

在本文中,“分离的”指的是天然芸苔素内酯类似物脱离了或者曾经脱离了天然存在的环境而以高于50%的纯度存在或者存在过。尽管天然芸苔素内酯类似物可以重新混合入混合物中从而降低了它本身的纯度,但是曾经的高纯度,便于使得各批次产品稳定。

另外,在本文中,“配比稳定”指的是不同批次产品中天然芸苔素内酯类似物的组成和含量是相同的。由于本发明第一方面的提取方法能够将天然芸苔素内酯类似物分离,因此可以单独使用或者重新配比使用,完全能够做到配比稳定。在本发明的具体实施方式中,天然芸苔素内酯类似物的含量介于0.0001-0.1ppm,优选介于0.0005-0.05ppm,如为0.005ppm。如式BR6、BR1、BR2、BR3、BR4和BR5所示的天然芸苔素内酯类似物可以单独使用,也可以混合使用,混合使用时,BR1∶BR2∶BR3∶BR4∶BR5和BR6的重量比可以为0.01~100∶0.01~100∶0.01~100∶0.01~100∶0.01~100∶0.01~100,在本发明的具体实施方式中,BR1∶BR2∶BR3∶BR4∶BR5和BR6的重量比为0.4∶0.4∶0.4∶0.4∶0.4∶98。

进一步优选在本发明第一方面的方法中,芸苔素内酯类似物是通过如下提取方法制备的:

(1)用80~100%(V/V)乙醇水溶液提取破碎的油菜花粉,固液分离后保留滤液(任选其中滤液进一步浓缩),获得醇溶性提取液;

(2)将醇溶性提取液与0~60%(V/V)乙醇水溶液混合,然后加入乙酸乙酯萃取,保留乙酸乙酯层并加入酯酶进行不完全反应,然后干燥,获得酯溶性提取物;

(3)酯溶性提取物上样于硅胶色谱柱,用甲醇和乙酸乙酯的混和液洗脱,收集含有天然芸苔素内酯类似物的洗脱液,干燥并溶解于甲醇中,获得硅胶柱纯化液;

(4)将硅胶柱纯化液上样于C18反相色谱柱,用乙腈和水的混和液洗脱,分别收集含有如式BR6、BR1、BR2、BR3、BR4和/或BR5所示的天然芸苔素内酯类似物的洗脱液;和

(5)任选将如式BR6、BR1、BR2、BR3、BR4和/或BR5所示的芸苔素内酯类似物的洗脱液混合。

进一步地在本发明第一方面的方法中,在步骤(1)中,可以使用100%(V/V)乙醇水溶液(即,纯乙醇),但优选乙醇水溶液的浓度为85~98%(V/V),优选为90~97%(V/V),更优选为93~96%(V/V),最优选为95%(V/V)。

进一步地在本发明第一方面的方法中,在步骤(1)中,破碎油菜花粉的方式一般是用物理破碎方式,包括超声破碎、碾磨破碎等。

进一步地在本发明第一方面的方法中,在步骤(1)中,油菜花粉和乙醇水溶液的比例可以优化,比例过低,将使用过量乙醇,需要更高成本的浓缩;比例过高,则提取不充分。经本发明人研究,优选在步骤(1)中,油菜花粉∶乙醇水溶液的重量体积比为50~200克∶200~500mL,优选为80~150克∶250~450mL,更优选为90~120克∶280~350mL,最优选为100克∶300mL。

在步骤(1)中,为了提取完全,可以对提取后的滤渣进一步提取,并如此反复提取滤渣,合并滤液。因此优选在本发明第一方面的提取方法中,步骤(1)进一步包括,固液分离后得到的滤渣用80~100%(V/V)乙醇水溶液提取,然后进行固液分离,保留滤液并与步骤(1)中获得的滤液合并。该步骤可以步骤(1)的其他提取步骤采用相同的条件,而且该步骤固液分离后得到的滤渣可以进一步采用与该步骤相同的步骤提取0~5次,只要最后将所有滤液合并即可。

在步骤(1)中,滤液或者合并的滤液,体积过大,则不利于以后步骤的萃取效率。因此优选在本发明第一方面的提取方法中,在步骤(1)中,滤液进一步浓缩。浓缩是减压干燥浓缩,优选为以65~80℃和0.08~0.09Mpa的真空度干燥浓缩,最优选为以75℃和0.085Mpa的真空度干燥浓缩。浓缩后,优选醇溶性提取液:步骤(2)中的乙醇水溶液的体积比为0.5~2∶1~3,优选为0.8~1.5∶1.5~2.5,最优选为1∶2。

进一步地在本发明第一方面的方法中,在步骤(2)中,可以使用0%(V/V)乙醇水溶液(即,纯水),但优选乙醇水溶液的浓度为30~55%(V/V),优选为40~53%(V/V),更优选为45~52%(V/V),最优选为50%(V/V)。

进一步地在本发明第一方面的方法中,在步骤(2)中,加入的乙酸乙酯的量可以优化。经本发明人研究,优选在步骤(2)中,乙醇水溶液∶乙酸乙酯的体积比为1~3∶3~8,优选为1.5~2.5∶4~6,最优选为2∶5。

为了萃取完全,可以对萃取后的非乙酸乙酯层(即,分离了乙酸乙酯层后剩余的层)进一步提取,并如此反复萃取非乙酸乙酯层,合并乙酸乙酯层。因此优选在本发明第一方面的方法中,步骤(2)进一步包括,萃取后得到的非乙酸乙酯层加入乙酸乙酯萃取,保留乙酸乙酯层并与步骤(2)中获得的乙酸乙酯层合并。萃取可以进行1~8次,优选为2~5次。

进一步地优选在本发明第一方面的方法中,在步骤(2)中,酯酶,也称脂肪酶,能水解甘油三酯或脂肪酸脂产生单或双甘油酯和游离脂肪酸。这样的酶本身已经在食品领域广泛应用。脂肪酶优选是提取自细菌的酯酶,如可以是能够从市场购买获取的脂肪酶,也可以是直接从细菌(如,荧光假单胞菌,优选是CGMCC No.1.867(即AS1.867)菌株)中提取的酯酶(如参见中国专利申请200810046182.0)。

进一步地优选在本发明第一方面的方法中,在步骤(2)中,糖化酶,也称葡萄糖淀粉酶,能将淀粉链转化为葡萄糖。这样的酶本身已经在酿造领域广泛应用。糖化酶优选是提取自真菌的糖化酶,如可以是能够从市场购买获取的糖化酶,也可以是直接从真菌(如黑曲霉)中提取的糖化酶。

在本文中,“不完全反应”指的是使酶反应的底物在全部转化前终止反应,由此保持天然芸苔素内酯类似物的多样性。通常完全反应要进行3小时以上,因此优选在本发明第一方面的方法中,在步骤(2)中,不完全反应是在35~42℃反应0.5~2小时,优选是在37~41℃反应0.75~1.5小时,最优选在40℃反应1小时。

进一步地优选在本发明第一方面的方法中,在步骤(2)中,干燥是减压干燥,优选为以65~80℃和0.08~0.09Mpa的真空度干燥,最优选为以75℃和0.085Mpa的真空度干燥。

进一步地,本发明人发现,初步的提纯以硅胶色谱柱为宜,只需要根据洗脱速度来设置收集的起始和终止时间即可全面收集多种天然芸苔素内酯类似物,简便易行。优选在本发明第一方面的方法中,在步骤(3)中,硅胶色谱柱中的填料是200~300目硅胶,最优选是300目硅胶。

在步骤(3)中,潜在可以选择的洗脱液种类繁多,经本发明人研究,发现用甲醇和乙酸乙酯的混和液洗脱,产物较稳定。优选在本发明第一方面的提取方法中,在步骤(3)中,混和液中甲醇∶乙酸乙酯的体积比为3~8∶0.5~1.5,优选为4~7∶0.8~1.3,最优选为5∶1。

进一步地优选在本发明第一方面的方法中,在步骤(3)中,干燥是减压干燥,优选为以65~80℃和0.08~0.09Mpa的真空度干燥,最优选为以75℃和0.085Mpa的真空度干燥。

在步骤(4)中,潜在可以选择的洗脱液种类繁多,经本发明人研究,发现用乙腈和水的混和液洗脱,可以有效分离各种天然芸苔素内酯类似物。优选在本发明第一方面的方法中,在步骤(4)中,混和液中乙腈∶水的体积比为60~90∶10~40,优选为70~80∶20~30,最优选为75∶25。

用本发明第一方面的方法提取的天然芸苔素内酯类似物是高纯度的。优选在本发明第一方面的方法中,在步骤(4)中,如式BR6、BR1、BR2、BR3、BR4和/或BR5所示的天然芸苔素内酯类似物的纯度大于90%,优选大于95%,更优选大于98%,最优选大于99%。

在第二方面,本发明提供了分离的如式BR6、BR1、BR2、BR3、BR4和/或BR5所示的天然芸苔素内酯类似物在促进辣椒生长中的应用;提供了分离的如式BR6、BR1、BR2、BR3、BR4和/或BR5所示的天然芸苔素内酯类似物在提高辣椒产量(尤其是早期产量)中的应用;提供了分离的如式BR6、BR1、BR2、BR3、BR4和/或BR5所示的天然芸苔素内酯类似物在缩短辣椒育苗期中的应用;或者,提供了分离的如式BR6、BR1、BR2、BR3、BR4和/或BR5所示的天然芸苔素内酯类似物在缩短辣椒收获期中的应用。

另外,本发明也提供了分离的如式BR6、BR1、BR2、BR3、BR4和/或BR5所示的天然芸苔素内酯类似物在栽培育苗期缩短的辣椒中的应用;提供了分离的如式BR6、BR1、BR2、BR3、BR4和/或BR5所示的天然芸苔素内酯类似物在栽培收获期缩短的辣椒中的应用;或者,提供了分离的如式BR6、BR1、BR2、BR3、BR4和/或BR5所示的天然芸苔素内酯类似物在栽培产量(尤其是早期产量)提高的辣椒中的应用。

本发明取得的优异效果在于,提取(纯化)流程稳定;一次提取,最终可以收集到多种分离的高纯度的天然芸苔素内酯类似物,因而摊薄了成本;多种分离的天然芸苔素内酯类似物可以单独施用,也可以配比混和施用,产品质量稳定而容易控制;多种芸苔素内酯类似物在植物产量增加和抗低温等方面均有效用;能够促进辣椒生长、提高辣椒产量(尤其是早期产量)、缩短辣椒育苗期并缩短辣椒收获期。

为了便于理解,以下将通过具体的附图和实施例对本发明进行详细地描述。需要特别指出的是,具体实例和附图仅是为了说明,并不构成对本发明范围的限制。显然本领域的普通技术人员可以根据本文说明,在本发明的范围内对本发明做出各种各样的修正和改变,这些修正和改变也纳入本发明的范围内。另外,本发明引用了公开文献,这些文献也是为了更清楚地描述本发明,它们的全文内容均纳入本发明进行参考,就好像它们的全文已经在本发明说明书中重复叙述过一样。

附图说明

图1显示了天然芸苔素内酯类似物的纯化图谱。

图2显示了各天然芸苔素内酯类似物的质谱鉴定图谱,其中BR1的质谱图谱如图2A所示,BR2的如图2B所示,BR3的如图2C所示,BR4的如图2D所示,BR5的如图2E所示,BR6的如图2F所示。

具体实施方式

实施例1天然芸苔素内酯类似物的提取和鉴定

取油菜花粉100克,加入95%(V/V)乙醇300mL,超声破碎,过滤,保留滤液;滤渣加入95%(V/V)乙醇300mL,超声破碎,过滤,保留滤液。合并滤液,于75℃、0.085Mpa的真空度干燥浓缩至体积为100mL,得花粉醇提液。

将50%(V/V)乙醇200mL加到花粉醇提液中,混合均匀,然后加入500mL乙酸乙酯萃取,保留上层(乙酸乙酯层);下层继续加入500mL乙酸乙酯萃取,保留上层(乙酸乙酯层)。合并乙酸乙酯层,加入300mL酶液(即,脂肪酶与糖化酶的混合酶液,其中脂肪酶(购自济宁和美生物工程有限公司)2500U/L,糖化酶(购自济宁和美生物工程有限公司)2000U/L)于40℃搅拌(45rpm)处理1小时,然后于75℃、0.085Mpa的真空度干燥,得酯溶性提取物。

取酯溶性提取物上样于硅胶色谱柱(2.6cm×40cm,300目硅胶),加流动相(即,甲醇和乙酸乙酯的混和液,甲醇∶乙酸乙酯的体积比为5∶1)洗脱,控制流速为4ml/分钟,收集第40分钟至第150分钟流出的洗脱液,合并后于75℃、0.085Mpa的真空度干燥完全,溶解于10mL甲醇中,得硅胶柱纯化液。

然后,将硅胶柱纯化液上样于C18反相色谱柱(柱参数为50mm×25cm,5μm),加流动相(即,乙腈和水的混和液,乙腈∶水的体积比为75∶25)洗脱,控制流速为10ml/min,洗脱图谱如图1所示,其中标明了各天然芸苔素内酯类似物的峰及其洗脱时间,可以在各洗脱时间分别收集相应的天然芸苔素内酯类似物(BR6、BR1、BR2、BR3、BR4、BR5)。上述提取流程的稳定性好,综合效率高,能够一次获得上述6种天然芸苔素内酯类似物。

收集天然芸苔素内酯类似物BR1、BR2、BR3、BR4、BR5和BR6,用高分辨率质谱验证(BR1的质谱图谱如图2A所示,BR2的如图2B所示,BR3的如图2C所示,BR4的如图2D所示,BR5的如图2E所示,BR6的如图2F所示)正确,各类似物纯度均高于99%,然后委托四川大学分析测试中心根据标准方法(质谱分析(GB/T6041-2002)、红外光谱分析(GB/T6040-2002)、超导脉冲傅里叶变换核磁共振谱(JY/T007-1996)和分子吸收分光光度分析(GB/T9721-2006))进行测试,解析出各天然芸苔素内酯类似物的如下化学结构:

实施例2天然芸苔素内酯类似物赋予植物抗低温胁迫活性的测定

我们通过低温胁迫实验,测量水稻苗低温胁迫后的株高、叶数、叶面积、分蘖数、根数等参数,来全面反映天然芸苔素内酯类似物对植物抗低温活性的作用。

分别取实施例1制备的天然芸苔素内酯类似物BR1、BR2、BR3、BR4、BR5和BR6,分别溶于95%(V/V)乙醇中,然后用大量的纯水梯度稀释至1mg/L、0.1mg/L、0.01mg/L、0.001mg/L和0.0001mg/L;同时用纯水作为对照。

用5%次氯酸钠溶液将水稻种子消毒处理后,用蒸馏水漂洗至碱性,置于培养皿中,放在30℃±2℃的恒温箱中黑暗水培9天。然后,取出该9天龄的水稻黄化苗,分别在1℃、2℃、3℃、4℃和5℃温度下,用上述含不同浓度的天然芸苔素内酯类似物的溶液或纯水浸泡培养24h,测量第3天、6天、9天和12天的株高、叶面积、根重以及第12天的叶数、分蘖数等参数。结果如表2-0~2-6所示,各天然芸苔素内酯类似物均相对于对照,能够在低温情况下,具有明显的增加水稻株高、叶面积和根重的作用,均具有赋予植物抗低温胁迫的活性;而且该作用的增加与天然芸苔素内酯类似物的浓度基本成正相关关系,其中BR1、BR5和BR6的活性略强于BR2、BR3和BR4。

表2-0纯水对照的试验结果

注:表格中斜线划分的数据依次为第3天、6天、9天和12天测量的数据。

表2-1BR1增强水稻抗低温胁迫性的试验结果

注:表格中斜线划分的数据依次为第3天、6天、9天和12天测量的数据。

表2-2BR2增强水稻抗低温胁迫性的试验结果

注:表格中斜线划分的数据依次为第3天、6天、9天和12天测量的数据。

表2-3BR3增强水稻抗低温胁迫性的试验结果

注:表格中斜线划分的数据依次为第3天、6天、9天和12天测量的数据。

表2-4BR4增强水稻抗低温胁迫性的试验结果

注:表格中斜线划分的数据依次为第3天、6天、9天和12天测量的数据。

表2-5BR5增强水稻抗低温胁迫性的试验结果

注:表格中斜线划分的数据依次为第3天、6天、9天和12天测量的数据。

表2-6BR6增强水稻抗低温胁迫性的试验结果

注:表格中斜线划分的数据依次为第3天、6天、9天和12天测量的数据。

实施例3天然芸苔素内酯类似物的辣椒栽培实验

根据实施例2的实验结果的启示,我们通过栽培辣椒,根据产量和成熟期,来全面反映天然芸苔素内酯类似物对辣椒栽培的作用。

将BR1、BR2、BR3、BR4、BR5和BR6混和成混和芸苔素类似物(简称为“BR混”;其中BR1∶BR2∶BR3∶BR4∶BR5和BR6的重量比为0.4∶0.4∶0.4∶0.4∶0.4∶98);同时用纯水作为阴性对照。将BR混稀释至至以下浓度:0.1ppm、0.01ppm、0.001ppm、0.0001ppm,在实验田中对早熟辣椒品种“赣丰5号”进行栽培,其中栽培条件(温度控制、化肥施用等)均参照江西省农科院对所售“赣丰5号”的说明书。简而言之,本次试险于12月15日于温室大棚内播种,当苗的两片真叶展开时进行分苗,在分苗后第3天和第10天,各施用BR混稀释液1kg/亩;当株高达到20cm、叶片为10-12片的时候,育苗期结束,在大田中进行定植,定植后施用防冻剂(8%乙二醇),然后在第10天、第20天和第30天各施用BR混稀释液1kg/亩,待有成熟后开始收获,直至次年7月15日拉茬终止实验。

结果如表3-1所示,相对于阴性对照,本发明的天然来源中提取的芸苔素类似物的混合物,无论何种浓度,对辣椒的生长以及产量都有促进作用,能够缩短育苗期(提前定植日期)并提前开始收获得日期。尤其是在中低浓度下,本发明的BR混对产量以及收获期提前,都有最佳的表现。

表3-1芸苔素内酯生物活性数据(大豆)

天然芸苔素内酯在辣椒上的应用专利购买费用说明

专利买卖交易资料

Q:办理专利转让的流程及所需资料

A:专利权人变更需要办理著录项目变更手续,有代理机构的,变更手续应当由代理机构办理。

1:专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2:按规定缴纳著录项目变更手续费。

3:同时提交相关证明文件原件。

4:专利权转移的,变更后的专利权人委托新专利代理机构的,应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A:(1)直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,(2)通过代办处缴纳,(3)通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q:专利转让变更,多久能出结果

A:著录项目变更请求书递交后,一般1-2个月左右就会收到通知,国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。

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