专利摘要

本发明公开了一种高比活度氚标记扎托布洛芬及其制备方法，属于药物制备技术领域。本发明以2‑(3‑羧甲基‑4‑苯硫基苯基)丙酸甲酯为原料，经溴取代、脱水缩合、水解三步反应生成4‑溴扎托布洛芬，然后使其与氚气在钯碳催化剂和碱接受体作用下发生氚‑卤交换，制得4‑3H‑扎托布洛芬。合成的产物经制备液相纯化后获得高比活度(29.30ci/g)、高放化纯度(≥98％)和高化学纯度(≥99％)的氚标记扎托布洛芬。本发明所制备的4‑3H‑扎托布洛芬为开展扎托布洛芬在动物体内吸收、分布、代谢及排泄研究提供了物质基础。

权利要求

1.一种高比活度氚标记扎托布洛芬的制备方法，其特征在于，包括下列步骤：

(1)取2-(3-甲氧羰基甲基-4-苯硫基苯基)丙酸甲酯，加入100～150mL乙腈中，待其溶解后加入溴，反应，之后蒸除乙腈，加入蒸馏水100mL，用乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯层，蒸除溶剂，得黄色油状物2-(3-甲氧羰基甲基-4-(4-溴苯硫基)苯基)丙酸甲酯，所述2-(3-甲氧羰基甲基-4-(4-溴苯硫基)苯基)丙酸甲酯的结构式如式Ⅱ所示：

(2)取步骤(1)获得的2-(3-甲氧羰基甲基-4-(4-溴苯硫基)苯基)丙酸甲酯4g，加入20g～30g多聚磷酸中，加入无水碳酸钠0.5g，有黑色粘稠物生成时，停止反应，冷却至室温后，加入水100mL、乙酸乙酯200mL搅拌10分钟，静置分层，取上层有机相，蒸除乙酸乙酯，得到棕色固体物质，将其采用乙酸乙酯重结晶后得到浅黄色结晶10,11-二氢-a-甲基-10-氧代-二苯并[b,f]硫卓-2’-溴-2-乙酸甲酯，所述10,11-二氢-a-甲基-10-氧代-二苯并[b,f]硫卓-2’-溴-2-乙酸甲酯的结构式如式Ⅲ所示：

(3)取步骤(2)获得的10,11-二氢-a-甲基-10-氧代-二苯并[b,f]硫卓-2’-溴-2-乙酸甲酯3g，加入甲醇/四氢呋喃/水组成的混合溶剂100mL～150mL，甲醇/四氢呋喃/水的体积比为(1.5：1.5：1)～(2：2：1)，再加入氢氧化钠0.61g，蒸除甲醇，缓慢加入2M稀盐酸调pH至2，有白色沉淀析出，过滤得到白色固体，将此固体采用乙酸乙酯重结晶，得到白色结晶性粉末4-溴扎托布洛芬，所述4-溴扎托布洛芬的结构式如式Ⅳ所示：

(4)取步骤(3)获得4-溴扎托布洛芬35mg，加入3.68mg的氢氧化钠，加入2mL乙醇使其完全溶解，再加入20mg Pd/C混合物，Pd/C混合物中Pd占混合物的10wt％，在氚化装置上通入高纯氚气，调整反应压强为220～262mmHg，反应温度为30℃，搅拌反应30～60分钟后用液氮冷冻回收氚气，离心除去Pd/C，将反应液减压蒸除乙醇，得到氚标记扎托布洛芬粗品；

(5)将步骤(4)所得氚标记扎托布洛芬粗品用高效液相色谱进行分离纯化，得到高比活度、高放化纯度和高化学纯度的4-3H-扎托布洛芬；

所述4-3H-扎托布洛芬化学结构式如式Ⅰ所示：

2.根据权利要求1所述的一种高比活度氚标记扎托布洛芬的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述2-(3-甲氧羰基甲基-4-苯硫基苯基)丙酸甲酯与溴的料液比为5g：0.74mL。

3.根据权利要求1所述的一种高比活度氚标记扎托布洛芬的制备方法，其特征在于，步骤(1)的反应为在25～50℃下反应6～10小时。

4.根据权利要求1所述的一种高比活度氚标记扎托布洛芬的制备方法，其特征在于，步骤(2)中加入无水碳酸钠后，升温至90～98℃，搅拌反应5～10小时。

5.根据权利要求1所述的一种高比活度氚标记扎托布洛芬的制备方法，其特征在于，步骤(3)中加入氢氧化钠后，在30～40℃下反应8～12小时。

6.根据权利要求1所述的一种高比活度氚标记扎托布洛芬的制备方法，其特征在于，步骤(5)所述高效液相色谱按照下列技术参数或步骤分离制备：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，250×20mm，粒径5μm，流动相采用体积比为30：70的乙腈和0.1％磷酸水；流速为10mL/min；紫外检测波长为228nm；检测时间为25min；柱温为30℃，收集保留时间与扎托布洛芬对应的流份，合并后除去溶剂，得到高比活度、高放化纯度和高化学纯度的4-3H-扎托布洛芬。

说明书

技术领域

本发明属于药物制备技术领域，特别是涉及一种高比活度氚标记扎托布洛芬及其制备方法。

背景技术

扎托布洛芬(ZaltoprofenⅠ)，化学名为10，11-二氢-alpha-甲基-10-氧代-二苯并[b，f]硫卓-2-乙酸，是由日本chemiphar公司开发的一种非甾体抗炎药，该药于1993年9月1日在日本首次上市。

扎托布洛芬是一种具有消炎、镇痛、解热作用的非甾体抗炎药，对急性炎症作用较强。扎托布洛芬口服吸收良好，反复给药未见药物积蓄性，在临床上被广泛用于控制感染或非感染性的炎症及疼痛。研究表明扎托布洛芬对大鼠和小鼠的解热镇痛和抗炎作用均等于或强于其他非甾体类抗炎药，具有开发成兽用解热镇痛药的前景。新兽药如果用于食品动物，必须研究清楚其在动物体内的吸收、分布、代谢和排泄以及残留消除规律，明确残留标示物和残留靶组织，从而制定合理的休药期，保证动物性来源的食品安全。

放射性同位素示踪技术用于药物在体内的吸收、分布、代谢和排泄研究，具有特异性好，灵敏度高和适用范围广等优势，是研究新药在体内过程不可替代的工具。目前未见放射性同位素标记的扎托布洛芬在动物体内，特别是食品动物体内过程的研究。如果能提供一种放射性同位素标记的扎托布洛芬，对研究其在动物体内的吸收、分布、代谢和排泄以及残留消除规律，明确残留标示物和残留靶组织，对保证动物性来源的食品安全具有重要意义。

发明内容

本发明目的是提供一种高比活度氚标记扎托布洛芬及其制备方法。本发明从扎托布洛芬的化学结构分析，在苯环上进行氚标记不仅能得到标记位点明确、比活度高的放射性标记药物，还能避免放射性核素在体内代谢过程中丢失，适合于药物在靶动物体内的示踪研究。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供了一种高比活度氚标记扎托布洛芬，化学结构式如式Ⅰ所示：

本发明还提供一种高比活度氚标记扎托布洛芬的制备方法，包括下列步骤：以2-(3-羧甲基-4-苯硫基苯基)丙酸甲酯为原料，经溴取代、脱水缩合、水解三步反应生成4-溴扎托布洛芬，然后使其与氚气在钯碳催化剂和碱接受体作用下发生氚-卤交换，制得4-³H-扎托布洛芬。

本发明所述高比活度氚标记扎托布洛芬的制备方法，具体包括下列步骤：

(1)取2-(3-甲氧羰基甲基-4硫基苯基)丙酸甲酯，加入100～150mL乙腈中，待其溶解后加入溴，反应，之后蒸除乙腈，加入蒸馏水100mL，用乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯层，蒸除溶剂，得黄色油状物中间体1 2-(3-甲氧羰基甲基-4-(4-溴苯硫基)苯基)丙酸甲酯，所述2-(3-甲氧羰基甲基-4-(4-溴苯硫基)苯基)丙酸甲酯的结构式如式Ⅱ所示：

(2)取步骤(1)获得的2-(3-甲氧羰基甲基-4-(4-溴苯硫基)苯基)丙酸甲酯4g，加入20g～30g多聚磷酸中，加入无水碳酸钠0.5g，有黑色粘稠物生成时，停止反应，冷却至室温后，加入水100mL、乙酸乙酯200mL搅拌10分钟，静置分层，取上层有机相，蒸除乙酸乙酯，得到棕色固体物质，将其采用乙酸乙酯重结晶后得到浅黄色结晶中间体2 10,11-二氢-a-甲基-10-氧代-二苯并[b,f]硫卓-2’-溴-2-乙酸甲酯，所述10,11-二氢-a-甲基-10-氧代-二苯并[b,f]硫卓-2’-溴-2-乙酸甲酯的结构式如式Ⅲ所示：

(3)取步骤(2)获得的10,11-二氢-a-甲基-10-氧代-二苯并[b,f]硫卓-2’-溴-2-乙酸甲酯3g，加入甲醇/四氢呋喃/水组成的混合溶剂100mL～150mL，甲醇/四氢呋喃/水的体积比为(1.5：1.5：1)～(2：2：1)的甲醇/四氢呋喃/水，再加入氢氧化钠0.61g，蒸除甲醇，缓慢加入2M稀盐酸调pH至2，有白色沉淀析出，过滤得到白色固体，将此固体采用乙酸乙酯重结晶，得到白色结晶性粉末4-溴扎托布洛芬，所述4-溴扎托布洛芬的结构式如式Ⅳ所示：

(4)取步骤(3)获得4-溴扎托布洛芬35mg，加入3.68mg的氢氧化钠，加入2mL乙醇使其完全溶解，再加入20mg 10％Pd/C混合物，Pd/C混合物中Pd占混合物的10wt％，在氚化装置上通入高纯氚气，调整反应压强为220～262mmHg，反应温度为30℃，搅拌反应30～60分钟后用液氮冷冻回收氚气，离心除去Pd/C，将反应液减压蒸除甲醇，得到氚标记扎托布洛芬粗品；

(5)将步骤(4)所得氚标记扎托布洛芬粗品用高效液相色谱进行分离纯化，得到高比活度、高放化纯度和高化学纯度的4-³H-扎托布洛芬。

作为本发明的进一步改进，步骤(1)中所述2-(3-甲氧羰基甲基-4硫基苯基)丙酸甲酯与溴的料液比为5g：0.74mL。

作为本发明的进一步改进，步骤(1)的反应为在25～50℃下反应6～10小时。

作为本发明的进一步改进，步骤(2)中加入无水碳酸钠后，升温至90～98℃，搅拌反应5～10小时。

作为本发明的进一步改进，步骤(3)中加入氢氧化钠后，在30～40℃下反应8～12小时。

作为本发明的进一步改进，步骤(4)所述高效液相色谱按照下列技术参数或步骤分离制备：色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，250×20mm，粒径5μm，流动相采用体积比为30：70的乙腈和0.1％磷酸水；流速为10mL/min；紫外检测波长为228nm；检测时间为25min；柱温为30℃，收集保留时间与扎托布洛芬对应的流份，合并后除去溶剂，得到高比活度、高放化纯度和高化学纯度的4-³H-扎托布洛芬。

作为本发明的进一步改进，将制备得到的4-³H-扎托布洛芬加入60mL甲醇溶解，再加入20mg非标记扎托布洛芬进行稀释，得到氚标记扎托布洛芬储备液。从氚标记扎托布洛芬储备液中移取10μL，甲醇稀释到10mL，过0.2μm微孔滤膜，高效液相色谱进行分离，每间隔1min收集色谱柱后流份于闪烁瓶中，加闪烁液测定其放射性值。以时间为横坐标、放射性值为纵坐标，绘制时间-放射性值曲线图，计算氚标记扎托布洛芬的放射性纯度。绘制的氚标记扎托布洛芬的放化纯度图见图4，通过计算可知其放化纯度大于98％。

作为本发明的进一步改进，从氚标记扎托布洛芬储备液中移取10μL，甲醇稀释到1mL为稀释液a，从稀释液a中取10μL甲醇稀释到1mL为稀释液b。取稀释液b 10μL静态液闪测定其放射性为30414dpm。准确称取扎托布洛芬原料药5mg于10mL容量瓶中，甲醇定容，为扎托布洛芬标准储备液。从扎托布洛芬标准储备液取10μL用甲醇稀释到1mL为稀释液c。稀释液a与稀释液c分别进行液相检测，外标法计算得到10μL稀释液a中所含氚标扎托布洛芬的化学含量为0.0466μg；氚标记扎托布洛芬放射性的量与其化学含量的比值，计算得出氚标记扎托布洛芬的比活度为29.30Ci/g。

综上可知，氚标记扎托布洛芬粗品经制备高效液相色谱进行分离纯化，得到高比活度(29.30ci/g)、高放化纯度(≥98％)和高化学纯度(≥99％)的4-³H-扎托布洛芬。

本发明的采用氚卤交换法对扎托布洛芬的苯环C-4位进行氚标记。考虑到放射性试验的安全性，同时减少放射性核素的浪费，在设计放射性标记合成路线时考虑尽可能的接近终产物进行氚-卤交换，并且具有较高的收率。因此，发明人从合成扎托布洛芬的起始即引入溴原子，然后参考扎托布洛芬的合成方法得到溴代的扎托布洛芬(周勇,陈文华,2015)最后进行氚-溴交换获得氚标记的扎托布洛芬。

本发明首先以2-(3-甲氧羰基甲基-4-苯硫基苯基)丙酸甲酯为原料与溴于30℃反应，得到2-(3-甲氧羰基甲基-4-(4-溴苯硫基)苯基)丙酸甲酯，但是在接下来的关环反应时，由于溴原子对苯环的影响导致反应很难进行完全而且杂质较多，通过多次变换反应条件如反应时间，反应温度，反应溶剂等，改进关环反应条件如下：在对2-(3-甲氧羰基甲基-4-(4-溴苯硫基)苯基)丙酸甲酯进行关环过程中加入适量无水碳酸钠，并提高反应时间，使其和PPA于98℃进行脱水缩合反应8小时；得到中间体2，反应产率达到90％。

另一方面，在获得溴代的中间体2之后，如果按照扎托布洛芬的合成方法直接进行水解会导致溴原子被取代，导致试验产率低于50％，因此本发明首先分离纯化出中间体2，然后将其在水、四氢呋喃和甲醇混合溶剂中采用物质量2倍的氢氧化钠水解，结果溴代扎托布洛芬的产率达到90％以上，经过一次重结晶后纯度大于98％。

本发明公开了以下技术效果：

本发明采用放射性同位素氚对非甾体抗炎药物扎托布洛芬进行定位标记制备，本发明得到的氚标记扎托布洛芬的放射性核素标记在苯环上，位点明确，化学稳定性和代谢稳定性好，满足体内代谢研究需要，适合于药物在靶动物体内的示踪研究。³H价格相对低廉，半衰期较短，放射性防护和去污相对容易。因此本发明提供了一种采用放射性同位素氚(³H)标记的扎托布洛芬及其制备方法，为研究其在动物体内代谢和残留消除研究提供物质基础。

本发明以2-(3-羧甲基-4-苯硫基苯基)丙酸甲酯为原料，经溴取代、脱水缩合、水解三步反应生成4-溴扎托布洛芬，然后使其与氚气在钯碳催化剂和碱接受体作用下发生氚-卤交换，制得4-³H-扎托布洛芬。本发明所述氚标记扎托布洛芬的制备方法制备得到的氚标记扎托布洛芬化学纯度高，放化纯度高而且比活度高，合成的氚标记扎托布洛芬经液相纯化后比活度可达29.30ci/g，放化纯度≥98％，和化学纯度≥99％。本发明所制备的4-³H-扎托布洛芬为开展扎托布洛芬在动物体内吸收、分布、代谢及排泄研究提供了物质基础。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明氚标记扎托布洛芬的合成路线图；

图2为扎托布洛芬标准品高效液相色谱图；

图3为本发明实施例1制备的4-³H-扎托布洛芬效液相色谱图；

图4为本发明实施例1制备的4-³H-扎托布洛芬放化纯度图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。

实施例1

(1)取2-(3-甲氧羰基甲基-4硫基苯基)丙酸甲酯5g，加入100mL乙腈，待其溶解后加入溴素0.74mL，在50℃下反应10小时，之后蒸除乙腈，加入蒸馏水100mL，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并乙酸乙酯层，蒸除溶剂，得黄色油状物2-(3-甲氧羰基甲基-4-(4-溴苯硫基)苯基)丙酸甲酯，产率95％；

(2)取步骤(1)获得的2-(3-甲氧羰基甲基-4-(4-溴苯硫基)苯基)丙酸甲酯4g，加入30g多聚磷酸(PPA)，加入无水碳酸钠0.5g，升温至98℃，搅拌反应10小时，观察到有黑色粘稠物生成，停止反应，冷却至室温后，加入水100mL、乙酸乙酯200mL搅拌10分钟，静置分层，取上层有机相，蒸除乙酸乙酯，得到棕色固体物质，将其采用乙酸乙酯重结晶后得到浅黄色结晶10,11-二氢-a-甲基-10-氧代-二苯并[b,f]硫卓-2’-溴-2-乙酸甲酯，产率90％；

(3)取步骤(2)获得的10,11-二氢-a-甲基-10-氧代-二苯并[b,f]硫卓-2’-溴-2-乙酸甲酯4g，加入体积比为2：2：1的甲醇/四氢呋喃/水150mL，再加入氢氧化钠0.82g，在40℃下反应10小时后，蒸除甲醇，缓慢加入2M稀盐酸调pH至2，有白色沉淀析出，过滤得到白色固体，将此固体采用乙酸乙酯重结晶，得到白色结晶性粉末4-溴扎托布洛芬，产率95％；

(4)取步骤(3)获得4-溴扎托布洛芬35mg，加入3.68mg的氢氧化钠，加入2mL乙醇使其完全溶解，再加入35mg Pd/C混合物，Pd/C混合物中Pd占混合物的10wt％，在氚化装置上通入高纯氚气，调整反应压强为262mmHg，反应温度为30℃，搅拌反应30分钟后用液氮冷冻回收氚气，离心除去Pd/C，将反应液减压蒸除甲醇，得到氚标记扎托布洛芬粗品，产率95％；

(5)将步骤(4)所得氚标记扎托布洛芬粗品用制备高效液相色谱进行分离纯化，按照下列技术参数或步骤分离制备：色谱柱为大连依利特sinochrom 250×20mm，5μm，流动相采用体积比为30：70的乙腈和0.1％磷酸水；流速为10mL/min；紫外检测波长为228nm；收集保留时间与扎托布洛芬对应的流动相组分，合并后除去溶剂，得到氚标记扎托布洛芬，即4-³H-扎托布洛芬。

将本实施例制备得到的4-³H-扎托布洛芬加入60mL甲醇溶解，再加入20mg非标记扎托布洛芬进行稀释，得到氚标记扎托布洛芬储备液。从氚标记扎托布洛芬储备液中移取10μL，甲醇稀释到10mL，过0.2μm微孔滤膜，高效液相色谱进行分离，每间隔1min收集色谱柱后流份于闪烁瓶中，加闪烁液测定其放射性值。以时间为横坐标、放射性值为纵坐标，绘制时间-放射性值曲线图，计算氚标记扎托布洛芬的放射性纯度。绘制的氚标记扎托布洛芬的放化纯度图见图4，通过计算可知其放化纯度为99.4％。

从氚标记扎托布洛芬储备液中移取10μL，甲醇稀释到1mL为稀释液a，从稀释液a中取10μL甲醇稀释到1mL为稀释液b。取稀释液b 10μL静态液闪测定其放射性为30414dpm。准确称取扎托布洛芬原料药5mg于10mL容量瓶中，甲醇定容，为扎托布洛芬标准储备液。从扎托布洛芬标准储备液取10μL用甲醇稀释到1mL为稀释液c。稀释液a与稀释液c分别进行液相检测，外标法计算得到10μL稀释液a中所含氚标扎托布洛芬的化学含量为0.0466μg；氚标记扎托布洛芬放射性的量与其化学含量的比值，计算得出本实施例氚标记扎托布洛芬的比活度为29.30Ci/g。

实施例2

(1)取2-(3-甲氧羰基甲基-4硫基苯基)丙酸甲酯5g，加入120mL乙腈，待其溶解后加入溴素0.74mL，在35℃下反应10小时，之后蒸除乙腈，加入蒸馏水100mL，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并乙酸乙酯层，蒸除溶剂，得黄色油状物2-(3-甲氧羰基甲基-4-(4-溴苯硫基)苯基)丙酸甲酯，产率94％；

(2)取步骤(1)获得的2-(3-甲氧羰基甲基-4-(4-溴苯硫基)苯基)丙酸甲酯4g，加入25g多聚磷酸(PPA)，加入无水碳酸钠0.5g，升温至95℃，搅拌反应10小时，观察到有黑色粘稠物生成，停止反应，冷却至室温后，加入水100mL、乙酸乙酯200mL搅拌10分钟，静置分层，取上层有机相，蒸除乙酸乙酯，得到棕色固体物质，将其采用乙酸乙酯重结晶后得到浅黄色结晶10,11-二氢-a-甲基-10-氧代-二苯并[b,f]硫卓-2’-溴-2-乙酸甲酯，产率89％；

(3)取步骤(2)获得的10,11-二氢-a-甲基-10-氧代-二苯并[b,f]硫卓-2’-溴-2-乙酸甲酯4g，加入体积比为2：2：1的甲醇/四氢呋喃/水100mL，再加入氢氧化钠0.82g，在40℃下反应10小时后，蒸除甲醇，缓慢加入2M稀盐酸调pH至2，有白色沉淀析出，过滤得到白色固体，将此固体采用乙酸乙酯重结晶，得到白色结晶性粉末4-溴扎托布洛芬，产率93％；

(4)取步骤(3)获得4-溴扎托布洛芬35mg，加入3.68mg的氢氧化钠，加入2mL乙醇使其完全溶解，再加入35mg Pd/C混合物，Pd/C混合物中Pd占混合物的10wt％，在氚化装置上通入高纯氚气，调整反应压强为240mmHg，反应温度为30℃，搅拌反应30分钟后用液氮冷冻回收氚气，离心除去Pd/C，将反应液减压蒸除甲醇，得到氚标记扎托布洛芬粗品，产率91％；

(5)将步骤(4)所得氚标记扎托布洛芬粗品用制备高效液相色谱进行分离纯化，按照下列技术参数或步骤分离制备：色谱柱为大连依利特sinochrom 250×20mm，5μm，流动相采用体积比为30：70的乙腈和0.1％磷酸水；流速为10mL/min；紫外检测波长为228nm；收集保留时间与扎托布洛芬对应的流动相组分，合并后除去溶剂，得到氚标记扎托布洛芬，即4-³H-扎托布洛芬。

将本实施例制备得到的4-³H-扎托布洛芬加入60mL甲醇溶解，再加入20mg非标记扎托布洛芬进行稀释，得到氚标记扎托布洛芬储备液。从氚标记扎托布洛芬储备液中移取10μL，甲醇稀释到10mL，过0.2μm微孔滤膜，高效液相色谱进行分离，每间隔1min收集色谱柱后流份于闪烁瓶中，加闪烁液测定其放射性值。以时间为横坐标、放射性值为纵坐标，绘制时间-放射性值曲线图，计算氚标记扎托布洛芬的放射性纯度。通过计算可知其放化纯度为98.5％。

从本实施例氚标记扎托布洛芬储备液中移取10μL，甲醇稀释到1mL为稀释液a，从稀释液a中取10μL甲醇稀释到1mL为稀释液b。取稀释液b 10μL静态液闪测定其放射性为29550dpm。准确称取扎托布洛芬原料药5mg于10mL容量瓶中，甲醇定容，为扎托布洛芬标准储备液。从扎托布洛芬标准储备液取10μL用甲醇稀释到1mL为稀释液c。稀释液a与稀释液c分别进行液相检测，外标法计算得到10μL稀释液a中所含氚标扎托布洛芬的化学含量为0.0460μg；氚标记扎托布洛芬放射性的量与其化学含量的比值，计算得出本实施例氚标记扎托布洛芬的比活度为28.90Ci/g。

实施例3

(1)取2-(3-甲氧羰基甲基-4硫基苯基)丙酸甲酯5g，加入100mL乙腈，待其溶解后加入溴素0.74mL，在50℃下反应10小时，之后蒸除乙腈，加入蒸馏水100mL，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并乙酸乙酯层，蒸除溶剂，得黄色油状物2-(3-甲氧羰基甲基-4-(4-溴苯硫基)苯基)丙酸甲酯，产率95％；

(2)取步骤(1)获得的2-(3-甲氧羰基甲基-4-(4-溴苯硫基)苯基)丙酸甲酯4g，加入25g多聚磷酸(PPA)，加入无水碳酸钠0.5g，升温至98℃，搅拌反应8小时，观察到有黑色粘稠物生成，停止反应，冷却至室温后，加入水100mL、乙酸乙酯200mL搅拌10分钟，静置分层，取上层有机相，蒸除乙酸乙酯，得到棕色固体物质，将其采用乙酸乙酯重结晶后得到浅黄色结晶10,11-二氢-a-甲基-10-氧代-二苯并[b,f]硫卓-2’-溴-2-乙酸甲酯，产率90％；

(3)取步骤(2)获得的10,11-二氢-a-甲基-10-氧代-二苯并[b,f]硫卓-2’-溴-2-乙酸甲酯4g，加入体积比为2：2：1的甲醇/四氢呋喃/水150mL，再加入氢氧化钠0.82g，在38℃下反应10小时后，蒸除甲醇，缓慢加入2M稀盐酸调pH至2，有白色沉淀析出，过滤得到白色固体，将此固体采用乙酸乙酯重结晶，得到白色结晶性粉末4-溴扎托布洛芬，产率94％；

(4)取步骤(3)获得4-溴扎托布洛芬35mg，加入3.68mg的氢氧化钠，加入2mL乙醇使其完全溶解，再加入35mg Pd/C混合物，Pd/C混合物中Pd占混合物的10wt％，在氚化装置上通入高纯氚气，调整反应压强为230mmHg，反应温度为30℃，搅拌反应40分钟后用液氮冷冻回收氚气，离心除去Pd/C，将反应液减压蒸除甲醇，得到氚标记扎托布洛芬粗品，产率91％；

(5)将步骤(4)所得氚标记扎托布洛芬粗品用制备高效液相色谱进行分离纯化，按照下列技术参数或步骤分离制备：色谱柱为大连依利特sinochrom 250×20mm，5μm，流动相采用体积比为30：70的乙腈和0.1％磷酸水；流速为10mL/min；紫外检测波长为228nm；收集保留时间与扎托布洛芬对应的流动相组分，合并后除去溶剂，得到氚标记扎托布洛芬，即4-³H-扎托布洛芬。

将本实施例制备得到的4-³H-扎托布洛芬加入60mL甲醇溶解，再加入20mg非标记扎托布洛芬进行稀释，得到氚标记扎托布洛芬储备液。从氚标记扎托布洛芬储备液中移取10μL，甲醇稀释到10mL，过0.2μm微孔滤膜，高效液相色谱进行分离，每间隔1min收集色谱柱后流份于闪烁瓶中，加闪烁液测定其放射性值。以时间为横坐标、放射性值为纵坐标，绘制时间-放射性值曲线图，计算氚标记扎托布洛芬的放射性纯度。通过计算可知其放化纯度为99.2％。

从本实施例氚标记扎托布洛芬储备液中移取10μL，甲醇稀释到1mL为稀释液a，从稀释液a中取10μL甲醇稀释到1mL为稀释液b。取稀释液b 10μL静态液闪测定其放射性为29737dpm。准确称取扎托布洛芬原料药5mg于10mL容量瓶中，甲醇定容，为扎托布洛芬标准储备液。从扎托布洛芬标准储备液取10μL用甲醇稀释到1mL为稀释液c。稀释液a与稀释液c分别进行液相检测，外标法计算得到10μL稀释液a中所含氚标扎托布洛芬的化学含量为0.0470μg；氚标记扎托布洛芬放射性的量与其化学含量的比值，计算得出本实施例氚标记扎托布洛芬的比活度为28.50Ci/g。

对比例1

(1)取2-(3-甲氧羰基甲基-4硫基苯基)丙酸甲酯5g，加入120mL乙腈，待其溶解后加入溴素0.74mL，在25℃下反应6小时，之后蒸除乙腈，加入蒸馏水100mL，用100mL乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，蒸除溶剂，得黄色油状物2-(3-甲氧羰基甲基-4-(4-溴苯硫基)苯基)丙酸甲酯，产率92％；

(2)取步骤(1)获得的2-(3-甲氧羰基甲基-4-(4-溴苯硫基)苯基)丙酸甲酯4g，加入20g多聚磷酸(PPA)，升温至90℃，搅拌反应1小时，观察到有黑色粘稠物生成，停止反应，冷却至室温后，加入水100mL、乙酸乙酯200mL搅拌10分钟，静置分层，取上层有机相，蒸除乙酸乙酯，得到棕色固体物质，将其采用乙酸乙酯重结晶后得到浅黄色结晶10,11-二氢-a-甲基-10-氧代-二苯并[b,f]硫卓-2’-溴-2-乙酸甲酯，产率45.5％；

(3)取步骤(2)获得的10,11-二氢-a-甲基-10-氧代-二苯并[b,f]硫卓-2’-溴-2-乙酸甲酯3g，加入体积比为2：1的甲醇/水混合液300mL，再加入氢氧化钠0.61g，在30℃下反应8小时后，蒸除甲醇，缓慢加入2M稀盐酸调pH至2，有白色沉淀析出，过滤得到白色固体，将此固体采用乙酸乙酯重结晶，得到白色结晶性粉末4-溴扎托布洛芬，产率90％；

(4)取步骤(3)获得4-溴扎托布洛芬35mg，加入3.68mg的氢氧化钠，加入2mL乙醇使其完全溶解，再加入10mg Pd/C混合物，混合物中Pd占10wt％，在氢化装置上，通入高纯氢气，调整反应压强为225mmHg，反应温度为30℃，搅拌反应1小时后用液氮冷冻回收氢气，离心除去Pd/C，将反应液减压蒸除甲醇，得到扎托布洛芬，产率70％。

对比例2

(1)取2-(3-甲氧羰基甲基-4硫基苯基)丙酸甲酯5g，加入120mL乙腈，待其溶解后加入溴素0.74mL，在25℃下反应10小时，之后蒸除乙腈，加入蒸馏水100mL，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并乙酸乙酯层，蒸除溶剂，得黄色油状物2-(3-甲氧羰基甲基-4-(4-溴苯硫基)苯基)丙酸甲酯，产率95％；

(2)取步骤(1)获得的2-(3-甲氧羰基甲基-4-(4-溴苯硫基)苯基)丙酸甲酯4g，加入25g多聚磷酸(PPA)，加入无水碳酸钠0.5g，升温至98℃，搅拌反应8小时，观察到有黑色粘稠物生成，停止反应，冷却至室温后，加入水100mL、乙酸乙酯200mL搅拌10分钟，静置分层，取上层有机相，蒸除乙酸乙酯，得到棕色固体物质，将其采用乙酸乙酯重结晶后得到浅黄色结晶10,11-二氢-a-甲基-10-氧代-二苯并[b,f]硫卓-2’-溴-2-乙酸甲酯，产率85％；

(3)取步骤(2)获得的10,11-二氢-a-甲基-10-氧代-二苯并[b,f]硫卓-2’-溴-2-乙酸甲酯3g，加入体积比为1.5：1.5：1的甲醇/四氢呋喃/水100mL，再加入氢氧化钠0.62g，在30℃下反应12小时后，蒸除甲醇，缓慢加入2M稀盐酸调pH至2，有白色沉淀析出，过滤得到白色固体，将此固体采用乙酸乙酯重结晶，得到白色结晶性粉末4-溴扎托布洛芬，产率92％；

(4)取步骤(3)获得4-溴扎托布洛芬35mg，加入3.68mg的氢氧化钠，加入2mL乙醇使其完全溶解，再加入35mg Pd/C混合物，其中Pd占Pd/C混合物的10wt％，在氢化装置上通入高纯氢气，调整反应压强为262mmHg，反应温度为30℃，搅拌反应30分钟后用液氮冷冻回收氢气，离心除去Pd/C，将反应液减压蒸除甲醇，得到扎托布洛芬，产率88％。

由上述内容可知，本申请氚标记扎托布洛芬粗品用高效液相色谱进行分离纯化后，可得到高比活度(29.30ci/g)、高放化纯度(≥98％)和高化学纯度(≥99％)的4-³H-扎托布洛芬。

以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

一种高比活度氚标记扎托布洛芬及其制备方法专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。