专利摘要

本发明涉及一种含有榆黄蘑菌渣提取物的脱色剂，所述脱色剂由如下方法制备得到：1)用柠檬酸缓冲液对榆黄蘑菌渣进行提取，去除提取液后得菌渣剩余物；2)在菌渣剩余物上接种平菇菌种，进行发酵培养，培养完毕后用柠檬酸缓冲液对培养基和菌丝的混合产物进行提取，得脱色剂。本发明发现将平菇置于榆黄菇菌渣上进行培养，所得的提取物具有较高的漆酶活性和较好的脱色效果；而且本发明所述脱色剂的原料是榆黄蘑菌渣，有利于实现废弃物的综合再利用，降低生产成本。

权利要求

1.一种含有榆黄蘑菌渣提取物的脱色剂，其特征在于，所述脱色剂由如下方法制备得到：

1)用柠檬酸缓冲液对榆黄蘑菌渣进行提取，去除提取液后得菌渣剩余物；

2)在所述菌渣剩余物上接种平菇菌种，进行发酵培养，培养完毕后用柠檬酸缓冲液对培养基和菌丝的混合产物进行提取，得脱色剂；

所述榆黄蘑菌渣为榆黄蘑培养22～25天，采收蘑菇后的培养基剩余物；榆黄蘑的培养基组成为，按重量份，包括红麻杆56～60份、杂木屑18～22份、麸皮18～22份、石膏0.5～1.5份、石灰0.5～1.5份。

2.根据权利要求1所述的脱色剂，其特征在于，所述步骤1)中，采用pH为4.8的柠檬酸缓冲液对榆黄蘑菌渣进行提取,提取过程中榆黄蘑菌渣与柠檬酸缓冲液的质量体积比1:3～6。

3.根据权利要求1或2所述的脱色剂，其特征在于，所述步骤1)中，提取的具体操作为,将榆黄蘑菌渣和柠檬酸的混合物在26～30℃的条件下,180～200rpm摇床中震荡3～5个小时,离心后所得下部沉淀为菌渣剩余物。

4.根据权利要求1所述的脱色剂，其特征在于，所述步骤2)中在接种平菇菌种前需对所述菌渣剩余物进行预处理,所述预处理的操作为将所述菌渣剩余物烘干后向其中添加蒸馏水，至其含水量为50～65％。

5.根据权利要求1所述的脱色剂，其特征在于，所述平菇发酵培养的条件为在27～30℃的条件下静置培养18～24d。

6.根据权利要求5所述的脱色剂，其特征在于，所述平菇发酵培养的条件为在27～30℃的条件下静置培养20～22d。

7.根据权利要求5或6所述的脱色剂，其特征在于，所述菌渣剩余物中平菇菌种的接种量为10％-15％；

和/或，所述平菇菌种的活化方法为将冷藏保存的平菇菌种按接种量10％-15％接种到100mL的基础培养基中，在27～29℃的条件下，以140～160rpm的转速活化培养5d；所述基础培养基的组成为：葡萄糖20g/L、酵母浸粉5g/L、KH2PO4 1g/L、MgS04 0.5g/L、维生素B10.010g/L。

8.根据权利要求1所述的脱色剂，其特征在于，所述步骤2)中提取操作为，将培养基和菌丝的混合产物与pH为4.8的柠檬酸缓冲液按质量体积比1:7～9的比例进行混合，在18～22℃的温度条件下120～150rpm振荡提取3～5h，过滤后进行离心，上清液即为脱色剂。

9.根据权利要求1所述的脱色剂，其特征在于，由如下方法制备得到：

1)将榆黄蘑菌渣与pH为4.8的柠檬酸缓按质量体积比1:3～5混合，然后在26～30℃的条件下,180～200rpm摇床中震荡3～5个小时,对榆黄蘑菌渣进行提取，离心后所得下部沉淀为菌渣剩余物；

所述榆黄蘑菌渣为榆黄蘑培养22～25天，采收蘑菇后的培养基剩余物；所述榆黄蘑在如下培养基上进行培养，按重量份，包括红麻杆56～60份、杂木屑18～22份、麸皮18～22份、石膏0.5～1.5份、石灰0.5～1.5份；

2)将所述菌渣剩余物烘干后向其中添加蒸馏水，至其含水量为50～65％，在其中接种平菇菌种，在27～30℃的条件下静置培养20～22d，培养完毕后将培养基和菌丝的混合产物与pH4.8的柠檬酸缓冲液按质量体积比1:7～9的比例进行混合，在18～22℃的温度条件下振荡提取3～5h，过滤后进行离心，上清液即为脱色剂。

说明书

技术领域

本发明涉及榆黄蘑菌渣的再利用领域，具体的涉及一种含有榆黄蘑菌渣提取物的脱色剂。

背景技术

近年来,染料由于价格低廉、对光照、温度和去污剂等稳定性强且颜色多样,已被广泛应用于纺织品与着色剂制造工业等(Asgher et al,2008)。随着纺织工业的迅速发展,染料的品种和数量不断增加,印染行业己经成为我国自然水体最大的水资源消耗者和污染源之一。而染料脱色是染料废水治理的关键问题。处理染料废水的方法主要有物理化学法和生物学法两类。生物学方法具备持续性降解能力强、环境友好、适应性强等特点，因而受到广泛关注。其中白腐真菌可分泌漆酶、木素过氧化物酶、锰过氧化物酶等多种胞外酶系等特点，有望在废水处理方面得到大规模应用。

随着我国食用菌产业的快速发展，大量食用菌菌渣不断产生，但是菌渣的综合利用率较低，大部分菌渣被丢弃，一方面造成了环境污染，另一方面滋生杂菌和病原菌，给食用菌规模化产区带来安全隐患。研究发现，食用菌对染料污染物的生物修复作用源自其具有的两个基本功能：生物降解和生物富集。具有生物降解因为自身具有多种能够降解有机污染物的木质素酶类，此外，食用菌所具有的特殊生理机制使它们能够从生长的环境中富集微量元素。而食用菌菌渣含有大量菌丝，因此，食用菌菌渣在染料污染的生物修复领域具有很大应用潜力。

发明内容

本发明的目的是提供一种含有榆黄蘑菌渣提取物的脱色剂，所述脱色剂由如下方法制备得到：

1)用柠檬酸缓冲液对榆黄蘑菌渣进行提取，去除提取液后得菌渣剩余物；

2)在菌渣剩余物上接种平菇菌种，进行发酵培养，培养完毕后用柠檬酸缓冲液对培养基和菌丝的混合产物进行提取，得脱色剂。

本发明发现，将平菇置于榆黄蘑用柠檬酸缓冲液提取后的剩余菌渣上进行培养，最后再用柠檬酸缓冲液提取培养后的混合物，所得的提取液具有良好的脱色效果，使得榆黄蘑菌渣得到了进一步的有效利用。

优选的，所述榆黄蘑菌渣为榆黄蘑培养22～25天，采收蘑菇后的培养基剩余物；榆黄蘑的培养基组成为，按重量份，包括红麻杆56～60份、杂木屑18～22份、麸皮18～22份、石膏0.5～1.5份、石灰0.5～1.5份。

实际生产中常用的培养基为，按重量份，包括红麻杆58份，杂木屑20份，麸皮20份，石膏1份，石灰1份。

优选的，所述步骤1)中，采用pH为4.8的柠檬酸缓冲液对榆黄蘑菌渣进行提取,提取过程中榆黄蘑菌渣与柠檬酸缓冲液的质量体积比1:3～6。

优选的，所述步骤1)中，提取的具体操作为,将榆黄蘑菌渣和柠檬酸的混合物在26～30℃的条件下,180～200rpm摇床中震荡3～5个小时,离心后所得下部沉淀为菌渣剩余物。

优选的，所述步骤2)中在接种平菇菌种前需对所述菌渣剩余物进行预处理,所述预处理的操作为将所述菌渣剩余物烘干后向其中添加蒸馏水，至其含水量为50～65％。

优选的，所述平菇发酵培养的条件为在27～30℃的条件下静置培养18～24d。

进一步优选的，所述平菇发酵培养的条件为27～30℃的条件下静置培养20～22d。平菇在生长的不同时期会产生不同的代谢产物，在培养18～24d时的代谢产物酶活较强，表现出更好的脱色能力，在培养20～22d时效果更好。

优选的，所述固体培养基中平菇的接种量为10％-15％。上述的百分数计算为质量体积比，即每100g的培养基中添加10～15mL活化后的平菇菌种。

优选的，所述平菇菌种的活化方法为将冷藏保存的平菇菌种按接种量10％-15％接种到100mL的基础培养基中，在27～29℃的条件下，以140～160rpm的转速活化培养5d；所述基础培养基的组成为：葡萄糖20g/L、酵母浸粉5g/L、KH2PO4 1g/L、MgS04 0.5g/L、维生素B10.010g/L。

优选的，所述步骤2)中提取操作为，将培养基和菌丝的混合产物与pH为4.8的柠檬酸缓冲液按质量体积比1:7～9的比例进行混合，在18～22℃的温度条件下120～150rpm振荡提取3～5h，过滤后进行离心，上清液即为脱色剂。

作为优选方案，本申请的方法包括如下步骤：

1)将榆黄蘑菌渣与pH为4.8的柠檬酸缓按质量体积比1:3～5混合，然后在26～30℃的条件下,180～200rpm摇床中震荡3～5个小时,对榆黄蘑菌渣进行提取，离心后所得下部沉淀为菌渣剩余物；

所述榆黄蘑菌渣为榆黄蘑培养22～25天，采收蘑菇后的培养基剩余物；所述榆黄蘑在如下培养基上进行培养，按重量份，包括红麻杆56～60份、杂木屑18～22份、麸皮18～22份、石膏0.5～1.5份、石灰0.5～1.5份；

2)将所述菌渣剩余物烘干后向其中添加蒸馏水，至其含水量为50～65％，在其中接种平菇菌种，在27～30℃的条件下静置培养20～22d，培养完毕后将培养基和菌丝的混合产物与pH4.8的柠檬酸缓冲液按质量体积比1:7～9的比例进行混合，在18～22℃的温度条件下振荡提取3～5h，过滤后进行离心，上清液即为脱色剂。

本发明中所使用的平菇菌种为糙皮侧耳(bio-67015)，通过中国微生物菌种查询网购买得到。

本发明中所使用的pH4.8的缓冲液由柠檬酸和柠檬酸三钠的溶液混合后制备得到。

本发明的方法具有如下有益效果：

1)本发明发现将平菇置于榆黄菇菌渣上进行培养，所得的提取物具有较高的漆酶活性和较好的脱色效果；

3)本发明所述脱色剂的原料是榆黄蘑菌渣，有利于实现废弃物的综合再利用，降低生产成本。

3)本发明操作方法简单、制作原料易得，成本低，适用于工厂化大规模生产。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例中涉及的平菇菌种为糙皮侧耳(bio-67015)，通过中国微生物菌种查询网购买得到。

实施例中所涉及的平菌由如下方法活化得到，将冷藏保存的平菇菌种按接种量10％-15％接种到100mL的基础培养基中，在28℃的条件下，以150rpm的转速活化培养5d，得活化后的培养液。所述基础培养基的组成为：葡萄糖20g/L,酵母浸粉5g/L,KH2PO4 1g/L,MgS04 0.5g/L,维生素B10.010g/L。

实施例1

本实施例涉及一种脱色剂的制备方法，包括如下步骤：

1)将榆黄蘑菌渣与pH为4.8的柠檬酸缓按质量体积比1:4混合，然后在28℃的条件下,190rpm摇床中震荡4个小时,对榆黄蘑菌渣进行提取，离心后所得下部沉淀为菌渣剩余物；

所述榆黄蘑菌渣为榆黄蘑培养22～25天，采收蘑菇后的培养基剩余物；所述榆黄蘑在如下培养基上进行培养，按重量份，包括红麻杆58份、杂木屑20份、麸皮20份、石膏1份、石灰1份；

2)将所述菌渣剩余物烘干后向其中添加蒸馏水，至其含水量为50～65％，在其中接种平菇菌种，在28℃的条件下静置培养21d，培养完毕后将培养基和菌丝的混合产物与pH4.8的柠檬酸缓冲液按质量体积比1:8的比例进行混合，在20℃的温度条件下140rpm振荡提取4h，过滤后5000r/min离心5min，取上清,即为脱色剂。

实施例2

与实施例1相比，其区别在于，所述步骤2)中将所述平菇发酵培养19d。

对比例1

与实施例1相比，其区别在于，不使用榆黄蘑菌渣对平菇进行培养，采用平菇常用的培养基PDA培养基马铃薯(去皮)200g、葡萄糖20g、蒸馏水1000ml,自然pH在相同的条件下对平菇进行培养，然后采用相同的方法对培养后的产物进行提取。

对比例2

与实施例1相比，其区别在于，不进行步骤1)对榆黄蘑菌渣提取后去除提取液的操作，直接采用榆黄蘑菌渣对平菇进行培养。菌渣中添加蒸馏水，至其含水量为50～65％，在其中接种平菇菌种，在28℃的条件下静置培养21d，培养完毕后将培养基和菌丝的混合产物与pH4.8的柠檬酸缓冲液按质量体积比1:8的比例进行混合，在20℃的温度条件下140rpm振荡提取4h，过滤后5000r/min离心5min，取上清液。

对比例3

与实施例1相比，其区别在于，步骤2)中对平菇的培养天数为14d。

对比例4

与实施例1相比，其区别在于，步骤2)中对平菇的培养天数为28d。

实验例

对实施例1～4和对比例1～4的相关性能进行测试。

酶活性的测定：

实验方法：漆酶活力测定方法：准确移取100mmol/L的丙二酸-丙二酸钠缓冲液、0.6mmol/L的ABTS溶液各10ml，混合，摇匀，30℃水浴5min；取混合液200ul于酶标板孔中，420nm处调零；准确加入实施例和对比例中的脱色剂10ul，立即记录吸光值，每隔1min记录一次，共3次，取平均值，折算成每分钟的吸光度变化(OD420变化)。

靛蓝脱色实验：取3份10ml 100mg/L的靛蓝溶液，加入2ml2.5g/L的HBT溶液、以及20ml实施例和对比例的脱色剂,置于30℃、70r/min水浴摇床中，每隔2小时测一次吸光值。

刚果红脱色实验：取3份10ml 100mg/L的刚果红溶液，以及20ml实施例和对比例的脱色剂，置于30℃、70r/min水浴摇床中，每隔2小时测一次吸光值。

所得结果如表1：

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

一种含有榆黄蘑菌渣提取物的脱色剂专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。