专利摘要

本发明一种提取玫瑰茄花萼中有效成分的方法，属于玫瑰茄中有效成分提取技术领域，其提取工艺为：干玫瑰茄花萼粉碎，装入亚临界水提取罐的反应釜内胆中，按液固比15:1~25:1加入pH值为1.0~3.0水，提取压力为5~10MPa，提取温度为110~150℃，提取时间20~50min，过滤，所得滤液减压浓缩至干，加水溶解后冷冻干燥，即得玫瑰茄花萼有效成分提取物。其优点在于：采用亚临界水提取玫瑰茄花萼中有效成分的方法与传统水提法和30%醇提法相比，提取时间短、提取物得率高、绿色无污染。

说明书

技术领域

本发明涉及一种提取玫瑰茄花萼中有效成分的新方法和工艺，特指采用亚临界水提取玫瑰茄花萼中有效成分的方法和工艺。

背景技术

玫瑰茄（Hibiscus sabdariffa. L）又名洛神花、洛神葵、山茄等，锦葵科木槿属一年生草本植物或多年生灌木，为传统的药食两用植物。玫瑰茄生长于热带和亚热带地区，原产于西非、印度及马来西亚，至今已有几百年的种植历史，1910年传入台湾种植，如今在我国广东、广西、福建、台湾、云南均已大面积种植。传统医学认为，玫瑰茄花萼具有清热、解渴和降血压的功效，现代医学研究证明，玫瑰茄花萼具有抗氧化、抗肿瘤、抗菌和改善动脉粥样化等药理作用。玫瑰茄花萼中含有氨基酸、有机酸、多糖、维生素、花色苷、酚类等多种活性成分，其中主要有效成分为花色苷及多酚类物质。

亚临界水（Subcritical Water），是指高于100 ℃而低于水的临界压力（Pc=22.1 MPa）和临界温度（Tc=374 ℃）的液态水，因温度较高，亚临界水的极性、表面张力和黏度都急剧下降，对中等极性和弱极性化合物的溶解能力大大增加，其性质更接近于有机溶剂。亚临界水提取技术是利用亚临界水作为提取溶剂的一种新型提取分离技术，该技术具有提取时间短、萃取率高、环境友好等技术优势，是一种易于实现工业化生产的绿色提取技术，因此在天然药物有效成分提取分离应用中发展前景广阔。

目前玫瑰茄中有效成分的提取溶剂大多选择乙醇，提取方法除常规热提取外，有超声辅助提取、微波辅助提取、膜技术提取等（粮食与油脂，2010，（11）：40-43）。李升峰等以40%乙醇为溶剂，温度为75℃，时间为1.5小时提取玫瑰茄花萼中的抗氧化物质多酚和花青素，总多酚提取效率为0.975%，花青素提取效率为0.074%（湖北农业科学，2007,46（1）133-135）。图宗财等报道采用超声波辅助提取玫瑰茄中花青素，在固液比1∶25（g/mL），提取温度50 ℃，提取时间20 min，超声波功率80 W的最佳工艺条件下花青素得率为0.566%，比传统浸提法相比，得率提高了14.3 %，且缩短了提取时间（食品研究与开发，2011，32（10）：1-4）。发明专利（申请号201010507916.8）公开了一种热水提取玫瑰茄花萼中红色素的方法，液固比为20:1，水浴加热至沸腾后保温30-40 min后过滤，提取三次，减压浓缩至固体含量为30~40%的玫瑰茄红色素浸膏。但有关采用亚临界水提取玫瑰茄花萼中有效成分的方法至今未见国内外报道，也未见相应专利公开。

发明内容

本发明的目的是为解决上述背景技术中存在的不足，提供一种提取玫瑰茄花萼中有效成分的新方法和工艺。

针对上述发明目的，本发明采用如下技术方案：干玫瑰茄花萼经粉碎后，取一定质量粉末置于亚临界水提取罐的反应釜内胆中，加适量一定pH值的水，于一定的提取压力和温度下提取一定时间，过滤，滤液减压浓缩至干，加水溶解后冷冻干燥，得到玫瑰茄花萼有效成分提取物。

具体提取工艺为：一种提取玫瑰茄花萼中有效成分的方法，按照下述步骤进行： 

干玫瑰茄花萼粉碎，装入亚临界水提取罐的反应釜内胆中，按液固比15:1~25:1加入pH值为1.0~3.0水，提取压力为5~10 MPa，提取温度为110~150℃，提取时间20~50 min，过滤，所得滤液减压浓缩至干，加水溶解后冷冻干燥，即得玫瑰茄花萼有效成分提取物。

该玫瑰茄花萼有效成分提取物得率为46.4~63.4 %，提取物中花色苷含量为0.13~0.28 mg/g，多酚含量为13.0~13.3 mg/g。

本发明与现有技术相比，其显著优点是提取时间短、提取物得率高、绿色无污染。以玫瑰茄干花萼为原料，采用亚临界水提取法提取其中的有效成分，得率可达63.4%，比传统水提法一次提取得率提高了61.3%，且高于传统水提法两次提取得率；比30%乙醇提取法一次提取得率提高了46.7%，高于两次提取得率。采用亚临界水提取法，当液固比为20:1，pH为1.5，提取压力为7 MPa，提取温度为130℃，提取时间为40 min时，提取物中有效成分含量明显高于传统水提法和30%乙醇提取法。抗氧化活性实验表明，在该条件下亚临界水提取物抗氧化活性和30%乙醇提取物的相近，高于传统水提取物的抗氧化活性。

  附图说明

其中图1为玫瑰茄花萼提取物对DPPH自由基的清除能力，注：SWE：亚临界水提取物；ERE30%：30%乙醇提取物；HWE：传统水提取物。

具体实施方式：

为了更清楚地说明本发明内容，用具体实施例说明如下，具体实施例不限定本发明内容范围。

玫瑰茄花萼有效成分提取物的制备

对比例1：

称取玫瑰茄干花萼粉末2.5000 g，按液固比20:1（v/w，mL/g）加入50.00 mL水，用盐酸调pH至1.5，在75℃的水浴中提取1h，提取两次，两次滤液分别减压浓缩至干，加适量水溶解后冷冻干燥，得到玫瑰茄花萼提取物。第一次提取物重0.9825 g，提取得率为39.3%，其中花色苷含量为0.18 mg/g，多酚含量为9.2 mg/g；第二次提取物重0.1250 g，提取得率为5.0%，其中花色苷含量为0.14 mg/g，多酚含量为9.9 mg/g。两次提取物总重1.1075g，总得率为44.3%，花色苷含量为0.18 mg/g，多酚含量为9.3 mg/g。

对比例2：

   以30%乙醇溶液代替水，按照对比例1同法操作，第一次提取物重1.0800 g，提取得率为43.2%，其中花色苷含量为0.24 mg/g，多酚含量为12.7 mg/g；第二次提取物重0.2050 g，提取得率为8.2%，其中花色苷含量为0.18 mg/g，多酚含量为12.6 mg/g。两次提取物重1.2850 g，总得率为51.4%，花色苷含量为0.23 mg/g，多酚含量为12.7 mg/g。

实施例1：

取玫瑰茄干花萼粉末2.5000 g，置于亚临界水提取罐反应釜的内胆中，按液固比15:1（v/w，mL/g）加入37.50 mL pH值为1.0的水，提取压力为5 MPa，提取温度为110℃，提取时间为20 min，过滤，将滤液减压浓缩至干，加水溶解后冷冻干燥，得到玫瑰茄花萼有效成分提取物1.1600 g，提取得率为46.4%，提取物中花色苷含量为0.21 mg/g，多酚含量为13.0 mg/g。

实施例2：

取玫瑰茄花萼粉末2.5000 g，置于亚临界水提取罐反应釜的内胆中，按液固比20:1（v/w，mL/g）加入50.00 mL pH值为1.5的水，提取压力为7 MPa，提取温度为130℃，提取时间40 min，过滤，滤液减压浓缩至干，加水溶解后冷冻干燥，得到玫瑰茄花萼有效成分提取物1.5850 g，提取得率为63.4%。提取物中花色苷含量为0.28 mg/g，多酚含量为13.3 mg/g。

实施例3：

取玫瑰茄干花萼粉末2.5000 g，置于亚临界水提取罐反应釜的内胆中，按液固比25:1（v/w，mL/g）加入62.50 mL pH值为3.0的水，提取压力为10 MPa，提取温度为150℃，提取时间50 min，过滤，将滤液减压浓缩至干，加水溶解后冷冻干燥，得到玫瑰茄有效成分提取物1.5750 g，提取得率为63.0%。提取物中花色苷含量为0.13 mg/g，多酚含量为13.3 mg/g。

玫瑰茄有效成分提取物抗氧化活性测定

实施例4  玫瑰茄有效成分提取物清除DPPH自由基作用

通过清除DPPH自由基试验考察受试样品的抗氧化活性。

1、  实验材料

1.1药品与试剂

玫瑰茄花萼提取物：实施例2的提取物，配制成生药浓度2 mg/mL的水溶液备用

DPPH·（1,1-二苯基苦基苯肼）购自Sigma公司

1.2仪器：

TU1800紫外-可见分光光度计，北京普析通分析仪器厂

BS124S电子天平：北京赛多利斯仪器系统有限公司；

2、实验方法

2.1 DPPH·乙醇溶液的配制

准确称取7.9 mg DPPH·标准品，用无水乙醇溶液溶解并定容至100 mL棕色容量瓶中，配成0.2 mmol/L的DPPH·乙醇溶液，置于4 ℃冰箱中保存，备用。

2.2测定方法

分别量取2 mL样品溶液于试管中，加入2 mL的DPPH·乙醇溶液，混合均匀后，暗处反应30 min，然后于517 nm处测定其吸光度（A_i），以试样溶剂代替样品溶液测定空白吸光度（A₀），以无水乙醇代替DPPH·溶液测定吸光度（A_j），清除率计算公式如下：

3、  实验结果

附图为玫瑰茄花萼提取物对DPPH自由基的清除能力。由图1可知，玫瑰茄花萼亚临界水提取物对DPPH自由基有很好的清除能力，当提取物浓度为1mg/mL时，对DPPH自由基的清除力可达86.1%，Vc、亚临界水提取物（SWE）、30%乙醇提取物（ERE30%）和传统水提取物(HWE) 对DPPH自由基清除的IC₅₀分别为12、582、528 和798 μg/mL。可见亚临界水提取物对DPPH自由基的清除能力和30%乙醇提取物的相近，高于传统水提取物的抗氧化活性。

4、  结论

玫瑰茄花萼的亚临界水提取物对DPPH自由基的清除能力好，其清除能力和30%乙醇提取物的相近，高于传统水提取物的抗氧化活性。

一种提取玫瑰茄花萼中有效成分的方法专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。