5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-苄氨基噻唑衍生物及其作为抗肿瘤药物的应用

IPC分类号 : C07D417/04,A61P35/00

申请号

CN201410442572.5

可选规格: 数量

库存1件

确认取消

￥30000; 库存1件

首页

立即咨询

看了又看

专利摘要

本发明涉及化学结构式Ⅰ所示的5‑(1,2,4‑三唑‑1‑基)‑2‑苄氨基噻唑衍生物或其盐：其中R选自：C1～C2烷基、C3～C4直链或支链烷基；X1选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或支链烷基；X2、X4选自：氢、氘、甲基、乙基、氟、氯、溴、硝基；X3选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或支链烷基；X5选自：羟基、甲氧基、乙氧基；5‑(1,2,4‑三唑‑1‑基)‑2‑苄氨基噻唑衍生物或其盐在制备抗人宫颈癌细胞药物中的应用。

权利要求

1.化学结构式I所示的5-(1,2,4-三唑-1-基)-2-苄氨基噻唑衍生物或其盐：

Ⅰ

式I所示的5-(1,2,4-三唑-1-基)-2-苄氨基噻唑衍生物选自4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-3,5-二溴苄氨基)噻唑或4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-3,5-二碘苄氨基)噻唑；盐选自：盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐或对甲苯磺酸盐。

2.权利要求1所述的5-(1,2,4-三唑-1-基)-2-苄氨基噻唑衍生物的制备方法：其特征在于它的制备反应如下：

式I所示的5-(1,2,4-三唑-1-基)-2-苄氨基噻唑衍生物的定义如权利要求1所述。

3.权利要求1所述的5-(1,2,4-三唑-1-基)-2-苄氨基噻唑衍生物或其盐在制备抗人宫颈癌细胞药物中的应用。

说明书

技术领域

本发明涉及新化合物5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-苄氨基噻唑衍生物及其制备方法与作为抗肿瘤药物的应用。

背景技术

胡艾希等[ZL200910043920.0，2011.3.16授权；ZL 200910226728.5，2011.5.18授权；ZL201010533798.8，2013.4.24授权；ZL201210528020.7，2014.7.23授权]描述了4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-苄亚氨基噻唑、4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-芳氨基噻唑和N-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]苯甲酰胺的制备与生物活性。

发明内容

本发明的目的在于提供了化学结构式Ⅰ所示的5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-苄氨基噻唑衍生物或其盐：

式中R选自：C1～C2烷基、C3～C4直链或支链烷基；X1选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或支链烷基；X2、X4选自：氢、氘、甲基、乙基、氟、氯、溴、硝基；X3选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或支链烷基；X5选自：羟基、甲氧基、乙氧基；盐选自：盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐。

本发明的目的在于提供了式Ⅱ所示的4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-苄氨基噻唑衍生物：

其中X1选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或支链烷基；X2、X4选自：氢、氘、甲基、乙基、氟、氯、溴、硝基；X3选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或支链烷基；X5选自：羟基、甲氧基、乙氧基。

本发明的目的在于提供了式Ⅲ所示的4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基苄氨基)噻唑：

其中X1选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或支链烷基、羟基、甲氧基、乙氧基；X2、X4选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或支链烷基、氟、氯、溴、硝基；X3选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或支链烷基。

本发明的目的在于提供了5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-苄氨基噻唑衍生物优选下列化合物：

本发明的目的在于提供了5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-苄氨基噻唑衍生物的制备方法：其特征在于它的制备反应如下：

式中R选自：C1～C2烷基、C3～C4直链或支链烷基；X1选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或支链烷基；X2、X4选自：氢、氘、甲基、乙基、氟、氯、溴、硝基；X3选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或支链烷基；X5选自：羟基、甲氧基、乙氧基。

本发明的目的在于提供的5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-苄氨基噻唑衍生物或其盐具有抗肿瘤活性，可用于制备抗肿瘤药物。

本发明的目的在于提供了4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-5-硝基-3-碘苄亚氨基)噻唑：

本发明的目的在于提供了4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-5-硝基-3-碘苄亚氨基)噻唑具有抗肿瘤活性，可用于制备抗肿瘤药物。

本发明与现有技术相比具有如下优点：

(1)首次制得5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-苄氨基噻唑新化合物；

(2)5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-苄氨基噻唑衍生物较5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-苄亚氨基噻唑衍生物稳定；

(3)在作为抗肿瘤药物时，5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-苄氨基噻唑衍生物较5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-苄亚氨基噻唑衍生物的活性高。

具体实施方式

以下实施例旨在说明本发明而不是对本发明的进一步限定。

实施例1

4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-5-氯苄亚氨基)噻唑的制备

0.56g(2.5mmol)4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-氨基噻唑、20mL乙醇、0.39g(2.5mmol)5-氯水杨醛和0.5mL冰乙酸，回流2h，冷却，旋蒸，乙醇重结晶，干燥得到黄色固体4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-5-氯苄亚氨基)噻唑0.72g，收率80％，熔点165～167℃；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ：1.24(s，9H，3×CH3)，7.01(d，J＝8.4Hz，1H，C6H33-H)，7.41(dd，J＝2.4，9.2Hz，1H，C6H34-H)，7.52(d，J＝2.4Hz，1H，C6H36-H)，8.14(s，1H，C2N3H23-H)，8.30(s，1H，C2N3H25-H)，9.18(s，1H，N＝CH)，12.06(s，1H，OH)。

实施例2

4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-5-氯-3-溴苄亚氨基)噻唑的制备

0.56g(2.5mmol)4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-氨基噻唑、20mL乙醇、0.58g(2.5mmol)5-氯3-溴水杨醛和0.5mL冰乙酸搅拌回流3h，冷却，旋蒸，乙醇重结晶，干燥得到黄色固体4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-5-氯-3-溴苄亚氨基)噻唑0.99g，收率90％，熔点165～167℃；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ：1.21(s，9H，3×CH3)，7.54(d，J＝2.4Hz，1H，C6H24-H)，7.72(d，J＝2.4Hz，1H，C6H26-H)，8.15(s，1H，C2N3H23-H)，8.32(s，1H，C2N3H25-H)，9.22(s，1H，N＝CH)，13.02(s，1H，OH)。

实施例3

4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-5-硝基-3-溴苄亚氨基)噻唑的制备

0.56g(2.5mmol)4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-氨基噻唑、40mL乙醇、0.62g(3.5mmol)5-硝基-3-溴水杨醛和0.5mL冰乙酸，回流2h，冷却，旋蒸，乙醇重结晶，干燥得到黄色固体4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-5-硝基-3-溴苄亚氨基)噻唑1.05g，收率93％，m.p.164～166℃；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：1.23(s，9H，3×CH3)，8.16(s，1H，C2N3H23-H)，8.33(s，1H，C2N3H25-H)，8.53(d，J＝2.6Hz，1H，C6H24-H)，8.64(d，J＝2.6Hz，1H，C6H26-H)，9.39(s，1H，N＝CH)，13.95(s，1H，OH)。

实施例4

4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-5-硝基-3-碘苄亚氨基)噻唑的制备

0.56g(2.5mmol)4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-氨基噻唑、20mL乙醇、0.73g(2.5mmol)5-硝基-3-碘水杨醛和0.5mL冰乙酸，回流3h，冷却，旋蒸，乙醇重结晶，干燥得到黄色固体4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-5-硝基-3-碘苄亚氨基)噻唑1.11g，收率89％，m.p.186～188℃；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：1.22(s，9H，3×CH3)，8.17(s，1H，C2N3H23-H)，8.34(s，1H，C2N3H25-H)，8.56(d，J＝2.6Hz，1H，C6H24-H)，8.83(d，J＝2.6Hz，1H，C6H26-H)，9.33(s，1H，N＝CH)，14.16(s，1H，OH)。

实施例5

4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-5-硝基苄亚氨基)噻唑的制备

0.56g(2.5mmol)4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-氨基噻唑、20mL乙醇、0.42g(2.5mmol)5-硝基水杨醛和0.5mL冰乙酸，回流3h，冷却，旋蒸，乙醇重结晶，干燥得到黄色固体4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-5-硝基苄亚氨基)噻唑0.86g，收率93％，m.p.183～185℃；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：1.23(s，9H，3×CH3)，7.16(d，J＝9.2Hz，1H，C6H33-H)，8.16(s，1H，C2N3H23-H)，8.35(s，1H，C2N3H25-H)，8.36(dd，J＝2.7，9.2Hz，1H，C6H34-H)，8.55(d，J＝2.7Hz，1H，C6H36-H)，9.37(s，1H，N＝CH)，12.93(s，1H，OH)。

实施例6

4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-3，5-二硝基苄亚氨基)噻唑的制备

0.56g(2.5mmol)4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-氨基噻唑、20mL乙醇、0.53g(2.5mmol)3，5-二硝基水杨醛和0.5mL冰乙酸，回流3h，冷却，旋蒸，乙醇重结晶，干燥得到黄色固体4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-3，5-二硝基苄亚氨基)噻唑0.94g，收率90％，m.p.136～138℃；1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：1.23(s，9H，3×CH3)，8.17(s，1H，C2N3H23-H)，8.34(s，1H，C2N3H25-H)，8.97(d，J＝2.8Hz，1H，C6H24-H)，9.11(d，J＝2.8Hz，1H，C6H26-H)，9.52(s，1H，N＝CH)，10.44(s，1H，OH)。

实施例7

4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基苄氨基)噻唑的制备

0.65g(2mmol)4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基苄亚氨基)噻唑、20mL乙醇，0.7g(2mmol)硼氢化钠，反应15min，盐酸调节pH＝6-7，倒入100mL水中，固体析出，抽滤，干燥得到白色固体4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基苄氨基)噻唑0.61g，收率93％，m.p.176～179℃；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ：1.03(s，9H，3×CH3)，4.36(d，J＝5.6Hz，2H，NCH2)，6.77-7.25(m，4H，C6H4)，8.16(s，1H，C2N3H23-H)，8.22(brs，1H，NH)，8.83(s，1H，C2N3H25-H)，9.66(s，1H，OH)。

实施例8

4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-5-氯苄氨基)噻唑的制备

0.72g(2mmol)4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-5-氯苄亚氨基)噻唑、20mL乙醇，0.7g(2mmol)硼氢化钠，反应15min，盐酸调节pH＝6-7，倒入100mL水中，固体析出，抽滤，干燥得到白色固体4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-5-氯苄氨基)噻唑0.60g，收率83％，m.p.103～105℃；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ：1.18(s，9H，3×CH3)，4.50(s，2H，NCH2)，5.69-6.38(brs，1H，NH)，6.90(d，J＝8.6Hz，1H，C6H33-H)，7.13(d，J＝2.5Hz，1H，C6H36-H)，7.19(dd，J＝2.5，8.6Hz，1H，C6H34-H)，8.07(s，1H，C2N3H23-H)，8.21(s，1H，C2N3H25-H)，10.01(brs，1H，OH)。

实施例9

4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-3，5-二氯苄氨基)噻唑的制备

0.99g(2.5mmol)4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-3，5-二氯苄亚氨基)噻唑、20mL乙醇，0.10g(2.5mmol)硼氢化钠，反应15min，盐酸调节pH＝6-7，倒入100mL水中，固体析出，抽滤，干燥得到白色固体4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-3，5-二氯苄氨基)噻唑0.92g，收率93％，m.p.162～165℃；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ：1.18(s，9H，3×CH3)，4.51(s，2H，NCH2)，5.58-6.47(brs，1H，NH)，7.10(d，J＝2.5Hz，1H，C6H24-H)，7.33(d，J＝2.5Hz，1H，C6H26-H)，8.07(s，1H，C2N3H23-H)，8.21(s，1H，C2N3H25-H)，9.59-10.51(brs，1H，OH)。

实施例10

4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-5-氯-3-溴苄氨基)噻唑的制备

0.88g(2mmol)4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-5-氯-3-溴苄亚氨基)噻唑、20mL乙醇，0.07g(2mmol)硼氢化钠，反应15min，盐酸调节pH＝6-7，倒入100mL水中，固体析出，抽滤，干燥得到白色固体4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-5-氯-3-溴苄氨基)噻唑0.80g，收率90％，m.p.165～167℃；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ：1.19(s，9H，3×CH3)，4.52(s，2H，NCH2)，5.99(brs，1H，NH)，7.14(d，J＝2.3Hz，1H，C6H24-H)，7.49(d，J＝2.3Hz，1H，C6H26-H)，8.08(s，1H，C2N3H23-H)，8.22(s，1H，C2N3H25-H)，10.22(brs，1H，OH)。

实施例11

4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-5-溴苄氨基)噻唑的制备

0.81g(2mmol)4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-5-溴苄亚氨基)噻唑、20mL乙醇，0.07g(2mmol)硼氢化钠，反应15min，盐酸调节pH＝6-7，倒入100mL水中，固体析出，抽滤，干燥得到白色固体4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-5-溴苄氨基)噻唑0.73g，收率90％，m.p.196～198℃；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ：1.04(s，9H，3×CH3)，4.34(s，2H，NCH2)，6.85(d，J＝8.4Hz，1H，C6H33-H)，7.24(dd，J＝2.4，8.4Hz，1H，C6H34-H)，7.44(d，J＝2.4Hz，1H，C6H36-H)，8.17(s，1H，C2N3H23-H)，8.36(brs，1H，NH)，8.86(s，1H，C2N3H25-H)，10.24(brs，1H，OH)。

实施例12

4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-3，5-二溴苄氨基)噻唑的制备

0.97g(2mmol)4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-3，5-二溴苄亚氨基)噻唑、20mL乙醇，0.07g(2mmol)硼氢化钠，反应15min，盐酸调节pH＝6-7，倒入100mL水中，固体析出，抽滤，干燥得到白色固体4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-3，5-二溴苄氨基)噻唑0.86g，收率88％，m.p.172～173℃；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ：1.18(s，9H，3×CH3)，4.51(s，2H，NCH2)，5.51-6.26(brs，1H，NH)，7.27(d，J＝2.4Hz，1H，C6H24-H)，7.62(d，J＝2.4Hz，1H，C6H26-H)，8.07(s，1H，C2N3H23-H)，8.21(s，1H，C2N3H25-H)，9.70-10.72(brs，1H，OH)。

实施例13

4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-5-硝基-3-溴苄氨基)噻唑的制备

0.90g(2mmol)4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-5-硝基-3-溴苄亚氨基)噻唑、20mL乙醇，0.07g(2mmol)硼氢化钠，反应15min，盐酸调节pH＝6-7，倒入100mL水中，固体析出，抽滤，干燥得到浅黄色固体4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-5-硝基-3-溴苄氨基)噻唑0.78g，收率86％，m.p.193～195℃；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ：1.22(s，9H，3×CH3)，4.65(s，2H，NCH2)，5.92(brs，1H，NH)，8.09(s，1H，C2N3H23-H)，8.11(d，J＝2.7Hz，1H，C6H24-H)，8.24(s，1H，C2N3H25-H)，8.45(d，J＝2.7Hz，1H，C6H26-H)，12.39(brs，1H，OH)。

实施例14

4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-3，5-二碘苄氨基)噻唑的制备

1.16g(2mmol)4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-3，5-二碘苄亚氨基)噻唑、20mL乙醇，0.07g(2mmol)硼氢化钠，反应15min，盐酸调节pH＝6-7，倒入100mL水中，固体析出，抽滤，干燥得到白色固体4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-3，5-二碘苄氨基)噻唑1.03g，收率89％，m.p.178～180℃；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ：1.21(d，J＝3.8Hz，9H，3×CH3)，4.48(s，2H，NCH2)，7.46(s，1H，C2N3H23-H)，7.98(s，1H，C2N3H25-H)，8.09(d，J＝6.0Hz，1H，C6H24-H)，8.23(d，J＝6.0Hz， 1H，C6H26-H)。

实施例15

4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-5-硝基-3-碘苄氨基)噻唑的制备

1.00g(2mmol)4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-5-硝基-3-碘苄亚氨基)噻唑、20mL乙醇，0.07g(2mmol)硼氢化钠，反应15min，盐酸调节pH＝6-7，倒入100mL水中，固体析出，抽滤，干燥得到浅黄色固体4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-5-硝基-3-碘苄氨基)噻唑0.90g，收率90％，m.p.200～201℃；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ：1.22(S，9H，3×CH3)，4.63(s，2H，NCH2)，8.11(S，1H，C2N3H23-H)，8.13(d，J＝2.4Hz，1H，C6H24-H)，8.27(s，1H，C2N3H25-H)，8.64(d，J＝2.4Hz，1H，C6H26-H)，12.79(brs，1H，OH)。

实施例16

4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-3-硝基苄氨基)噻唑的制备

0.56g(2.5mmol)4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-氨基噻唑、20mL乙醇、0.42g(2.5mmol)3-硝基水杨醛和0.5mL冰乙酸，回流，反应3h，冷却，旋蒸，0.10g(2.5mmol)硼氢化钠，反应15min，盐酸调节pH＝6-7，倒入100mL水中，固体析出，抽滤，干燥，柱色谱分离得到浅黄色固体4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-3-硝基苄氨基)噻唑0.78g，收率83％，m.p.136～137℃；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ：1.10(s，9H，3×CH3)，4.59(s，2H，NCH2)，5.93(s，1H，NH)，6.99(dd，J＝8.4，7.5Hz，1H C6H35-H)，7.72(dd，J＝7.5，1.5Hz，1H C6H36-H)，8.05(s，1H，C2N3H23-H)，8.08(dd，J＝1.5，8.4Hz，1H，C6H34-H)，8.19(s，1H，C2N3H25-H)，11.03(s，1H，OH)。

实施例17

4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-5-硝基苄氨基)噻唑的制备

0.74g(2mmol)4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-5-硝基苄亚氨基)噻唑、20mL乙醇，0.07g(2mmol)硼氢化钠，反应15min，盐酸调节pH＝6-7，倒入100mL水中，固体析出，抽滤，干燥得到浅黄色固体4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-5-硝基苄氨基)噻唑0.63g，收率84％，m.p.194～196℃；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ：1.20 (s，9H，3×CH3)，4.63(d，J＝5.6Hz，2H，NCH2)，5.76(brs，1H，NH)，7.02(d，J＝5.6Hz，1H，C6H33-H)，8.08(s，1H，C2N3H23-H)，8.14(dd，J＝2.8，5.6Hz，1H，C6H34-H)，8.16(d，J＝2.8Hz，1H，C6H36-H)，8.23(s，1H，C2N3H25-H)，11.59(brs，1H，OH)。

实施例18

4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-3，5-二硝基苄氨基)噻唑的制备

0.84g(2mmol)4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-3，5-二硝基苄亚氨基)噻唑、20mL乙醇，0.07g(2mmol)硼氢化钠，反应15min，盐酸调节pH＝6-7，倒入100mL水中，固体析出，抽滤，干燥得到浅黄色固体4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-3，5-二硝基苄氨基)噻唑0.75g，收率90％，m.p.118～120℃；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ：1.02(s，9H，3×CH3)，4.27(d，J＝7.0Hz，2H，NCH2)，6.57(s，1H，NH)，8.02(s，J＝3.1Hz，1H，C6H24-H)，8.16(s，1H，C2N3H23-H)，8.58(d，J＝3.1Hz，1H，C6H26-H)，8.85(s，1H，C2N3H25-H)。

实施例19

5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-苄氨基噻唑衍生物的抗肿瘤活性

1.抗肿瘤活性原理

MTT法生物活性测试又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。MTT分析法以活细胞代谢物还原剂噻唑蓝[3-(4，5-二甲基-2-噻唑)-2，5-二苯基溴化四氮唑；3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenyl-tetrazolium bromide，MTT]为基础。MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下四氮唑环(tetrazolium)开裂，生成蓝色水不溶性的甲瓒(Formazan)结晶并沉积在细胞中，甲瓒结晶的生成量仅与活细胞数目成正比(死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原)。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。

2.抗肿瘤活性实验

试样：5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-苄亚氨基噻唑衍生物和5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-苄氨基噻唑衍生物(Ⅰ)：

式中R选自：C1～C2烷基、C3～C4直链或支链烷基；X1选自：氢、氘、甲基、乙基、 C3～C4直链烷基或支链烷基；X2、X4选自：氢、氘、甲基、乙基、氟、氯、溴、硝基；X3选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或支链烷基；X5选自：羟基、甲氧基、乙氧基。

细胞系：宫颈癌细胞系Hela(中南大学湘雅医学院细胞库提供)。

试剂：噻唑蓝(MTT)、RPMI 1640培养液、新生牛血清、抗生素(美国英杰生命技术公司)；胰酶(美国AMRESCO公司)；96孔培养板(美国英杰生命技术公司)；二甲基亚砜(美国Sigma公司)。

仪器：HFsafe-1500型超净工作台、HF151UV型CO2培养箱(上海力申科学仪器有限公司)；XSP-15C型倒置显微镜(上海长方光学仪器有限公司)；Multiskan MK3型酶标仪(美国Thermo公司)；超纯水制备仪(美国Milli-Q公司)。

实验操作：试样对于hela细胞的测试。细胞的实验操作过程相同，一次实验过程中，每种试样设置5个浓度梯度，每个浓度四个平行试样，并通过空白组对照得出结论。

1)倒掉长满癌细胞的培养瓶中的培养基，加入5 mL PBS清洗，倒掉PBS，加入1mL胰酶，放入37℃、5％CO2培养箱。

2)取出培养瓶，加入RPMI 1640培养基，用吸管反复吸打吹散细胞。

3)细胞悬液接种于96孔培养板，第1孔不加细胞悬液，其余每板100μL(约10000个细胞)，放入37℃、5％CO2培养箱中培养中48小时。

4)试样配置。用DMSO作为溶剂，配置浓度梯度为1.0μmol/mL、0.3μmol/mL、0.1μmol/mL、0.03μmol/mL、0.01μmol/mL的溶液。

5)吸取每孔内的悬浮液，加入试样，放入37℃、5％CO2培养箱中培养中48小时。每组实验平行3次。

6)取出上药48小时的96孔培养板，吸出每孔培养液，每孔120μL PBS清洗一次，加入每孔20μL 5 mg/mLMTT液，放入37℃、5％CO2培养箱中培养中3～4小时。

7)吸出孔内MTT后，加入每孔150μL DMSO液(包括第1空)，将培养板置于微孔板扳荡器上振荡，使结晶物溶解。

8)酶标仪检测各孔OD值(检测波长570nm)。

3.抗肿瘤活性评价

1)细胞抑制率计算：

细胞抑制率(％)＝(正常OD值－加药OD值)/正常OD值×100％

2)IC50值计算

试样浓度对数值与细胞抑制率线性回归，计算试样对细胞的半数抑制浓度IC50值。试样对于hela细胞的IC50见表1。

表15-(1，2，4-三唑-1-基)-2-苄氨基噻唑衍生物(0.100mmol/L)和5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-苄亚氨基噻唑衍生物(0.100mmol/L)对于hela细胞的抑制率和IC50

测试结果显示，4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-苄氨基噻唑对于人宫颈癌细胞(hela细胞)具有良好的抑制活性，可用于制备抗肿瘤药物。4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-5-硝基-3-碘苄亚氨基)噻唑对于人宫颈癌细胞(hela细胞)具有良好的抑制活性，可用于制备抗肿瘤药物。

5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-苄氨基噻唑衍生物及其作为抗肿瘤药物的应用专利购买费用说明