专利摘要

本发明涉及式Ⅰ所示阿魏酰胺衍生物及其药学上可接受的盐，及其药物组合物和晶体结构以及其在制备流感病毒神经氨酸酶抑制剂中的应用：其中，R、R1选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基；R2选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基、羧甲基、C1～C4烷氧基羰甲基；R3选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基、硝基、烷氧羰基、烷酰基、1‑咪唑基、1,2,4‑三唑‑1‑基或1‑(甲氧基亚氨基)烷基。

权利要求

1.一类化学结构式Ⅰ所示的阿魏酰胺衍生物及其药学上可接受的盐：

所述的阿魏酰胺衍生物选自：

(E)-N-(4-叔丁基-5-硝基噻唑-2-基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺、(E)-N-(4-叔丁基-5-(咪唑-1-基)噻唑-2-基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺、(E)-N-(4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺、(E)-N-(5-乙氧羰基-4-甲基噻唑-2-基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺、(E)-N-(5-乙酰基-4-甲基噻唑-2-基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺、(E)-2-[2-(3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰氨基)噻唑-4-基]乙酸乙酯、(2E)-N-[5-(1-(甲氧基亚氨基)乙基)-4-甲基噻唑-2-基]-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺或(E)-2-[2-(3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰氨基)噻唑-4-基]乙酸。

2.权利要求1所述的阿魏酰胺衍生物的制备方法，其特征在于，它的制备反应如下：

其中，阿魏酰胺衍生物Ⅰ的定义如权利要求1所述；HOBt：1-羟基苯并三唑；EDCI：1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐；DMF：N,N二甲基甲酰胺。

3.权利要求1所述的阿魏酰胺衍生物在制备流感病毒神经氨酸酶抑制剂中的应用。

4.化学结构式Ⅱ所示的(E)-N-(4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶体：

其特征在于它的晶体结构的晶胞参数如下：单斜晶系,空间群P21/c，α＝90°，β＝90.12(3)°，γ＝90°；Z＝4，F(000)＝840，Mr＝399.47，Dx＝1.377mg.m-3，μ＝0.20mm-1，T＝273K，S＝0.96；

化合物Ⅱ中碳碳双键(C8＝C9)为E式构型，键长化合物Ⅱ中苯环与噻唑环的二面角为161.9°；噻唑环与1,2,3三氮唑的二面角为96.1°；化合物Ⅱ的晶胞中有4个分子；化合物Ⅱ存在分子间氢键作用：N1—H1A---N5；氢键键长分子间氢键角度为164.74°。

5.权利要求4所述的(E)-N-(4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶体的制备方法；其特征在于由(E)-N-(4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺在极性溶剂中结晶得到。

6.权利要求5所述的晶体的制备方法；其特征在于极性溶剂选自：甲醇、乙醇、丙酮或水中的一种或几种。

7.一种药物组合物，包括权利要求1中至少一种化合物和制药学上可用的载体。

说明书

技术领域

本发明涉及一类新化合物、其晶体结构与应用，具体是阿魏酰胺衍生物、其晶体结构及其在制备流感病毒神经氨酸酶抑制剂的应用。

背景技术

2012年，Li等[Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters,2012,22(19):6085-6088]通过把阿魏酸羧基端酯化后引入不同的杂环片段，设计合成多系列阿魏酸衍生物，活性测试结果发现阿魏酸衍生物对肺癌、黑色素瘤和乳腺癌等广谱癌细胞系具有普遍的生长抑制效果。构效关系发现，引入苯磺酰氟呋喃硝酸盐片段的化合物A抑制作用较好，其对上述广谱癌细胞系均具较好的生长抑制效果，IC50值在0.40～2.88μM范围内。

X＝(CH2)2O，(CH2)2CH(CH3)O，(CH2)4O，(CH2)2O(CH2)2O

2016年，Kumar等[Medicinal Chemistry Research,2016,25(6):1175-1192]设计合成了多种阿魏酸单双酰胺衍生物并进行了抗肿瘤和抗氧化活性测试。活性测试结果发现，阿魏酸羧基端成酰胺之后，抗增殖活性和抗氧化活性都有所提高，含有阿魏酸酰胺衍生物中含杂环胺片段的抗增殖活性普遍高于含苯胺片段的活性。其中化合物B1的整体抗增殖活性最好，对乳腺癌MDA-MB-231、肺癌A549细胞、肝癌HepG2细胞和宫颈癌HeLa细胞的抑制活性IC50值分别为7.29±2.72μM、8.13±3.11μM、9.88±4.67μM和8.75±3.72μM；而在抗氧化活性中阿魏酸双酰胺衍生物B2活性最好，EC50值为18.37±2.74μM。

等[Farmacia,2016,64(5):717-721]将阿魏酸与2-氮杂环丁酮衍生物以酰胺形式拼接设计合成了系阿魏酸的2-氮杂环丁酮衍生物C。DPPH和ABTS+自由基清除实验测试发现，当取代基R为4位卤原子取代时，抗氧化活性相对阿魏酸有所提高，尤其R＝4-F时的化合物活性最好，在两种抗氧化活性测试实验中的EC50值分别为3.81±0.35μg/mL和6.05±0.02μg/mL，其活性与阳性对照物抗坏血酸(EC50值分别为5.21±0.02μg/mL和5.23±0.06μg/mL)相当甚至更好。同时体外牛血清白蛋白(BSA)变性试验发现，该类化合物的抗炎作用均优于阿魏酸本身，且仍然是R＝4-F时抗蛋白变性作用最好，其活性与阳性对照物双氯芬酸相当。

R＝H,2-OH，2-NO2，4-Cl，4-F，4-Br

早在2004年刘艾林等[计算机与应用化学,2004,35(2):177-180]通过虚拟筛选的方法，筛选出部分待测化合物，再建立NA的高通量筛选模型，进而对这些化合物进行H3N2型流感病毒NA抑制活性评估，从中发现的2个具有阿魏酸片段的化合物D1和D2表现出了较好的NA抑制活性，其IC50值分别为0.11μM和2.4μM。

2012年，Liu等[Journal Of Medicinal Chemistry,2012,55(19):8493–8501]通过把肉桂酸衍生物与扎那米韦拼接，发现了即具有抗炎也具有抗流感作用的新型双靶向双功能抗流感药物E。构效关系研究发现，当肉桂酸衍生物与扎那米韦7位碳上羟基位点结合时，得到的目标化合物依旧能保持其较好的NA抑制活性，甚至好于扎那米韦本身。当R＝3,4-(OH)2，X＝O时的化合物E，对流感病毒NA和促炎细胞因子均表现出较好的抑制活性，其中对NA抑制活性IC50值为2.9～7.4μM，对(H1N1)A/WSN/1933型流感病毒抑制活性EC50值为1.4～10.0μM，在小鼠鼻内施用低剂量(<1.2μmol/kg/天)时，其抗炎效果和抗流感病毒效果比扎那米韦和咖啡酸联合治疗效果明显。

R＝3,4-(OH)2，3,4-OCH2O，5-NH2-2-OH；X＝O,NH

2016年，Harionol等[Scientific Reports,2016,6(1):38692-38701]通过对阿魏酸衍生物进行了NA抑制活性研究，结果发现阿魏酸本身具有一定的NA抑制活性IC50值为140μM，其中阿魏酸苯环上5位引入硝基后得到的化合物F1(IC50＝127μM)活性有稍微的提高，羧基端酯化后得到的阿魏酸衍生物F2(IC50＝191μM)和F3(IC50＝1000μM)的NA抑制活性明显降低。

2016年，Shi等[Chemical Research in Chinese Universities,2016,32(1):28-34]以2-氨基-4-硝基苯酚为起始原料，设计合成了苯丙烯酰胺衍生物，并对其进行了甲型流感病毒(H5N1)抑制活性评估，其中含有阿魏酸片段的化合物G的NA抑制活性为IC50值为147μM。

发明内容

本发明解决的技术问题是提供一类阿魏酰胺衍生物、其制备方法、晶体结构、药物组合物和用途。

为解决本发明的技术问题，本发明提供如下技术方案：

本发明技术方案的第一方面是提供了一类如结构式Ⅰ所示阿魏酰胺衍生物及其药学上可接受的盐：

其中，R选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基；R1选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基，或乙酰基；R2选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基、羧甲基、C1～C2烷氧基羰甲基、C3～C4直链烷氧基羰甲基或C3～C4支链烷氧基羰甲基；R3选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基、硝基、C1～C2烷氧基羰基、C3～C4直链烷氧基羰基或C3～C4支链烷氧基羰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、戊酰基、己酰基、1-咪唑基、1,2,4-三唑-1-基、1-(甲氧基亚氨基)乙基、1-(甲氧基亚氨基)丙基、1-(甲氧基亚氨基)丁基或1-(甲氧基亚氨基)戊基。

所述的阿魏酰胺衍生物是3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺衍生物。

本发明技术方案的第一方面还提供的一类阿魏酰胺衍生物选自下列化合物：

(E)-N-(4-叔丁基-5-硝基噻唑-2-基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺、(E)-N-(4-叔丁基-5-(咪唑-1-基)噻唑-2-基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺、(E)-N-(4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺、(E)-N-(5-乙氧羰基-4-甲基噻唑-2-基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺、(E)-N-(5-乙酰基-4-甲基噻唑-2-基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺、(E)-2-[2-(3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰氨基)噻唑-4-基]乙酸乙酯、(2E)-N-[5-(1-(甲氧基亚氨基)乙基)-4-甲基噻唑-2-基]-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺或(E)-2-[2-(3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰氨基)噻唑-4-基]乙酸。

本发明技术方案的第二方面是提供了阿魏酰胺衍生物的制备方法，其特征在于它的制备反应如下：

其中，R选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基；R1选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基，或乙酰基；R2选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基、羧甲基、C1～C2烷氧基羰甲基、C3～C4直链烷氧基羰甲基或C3～C4支链烷氧基羰甲基；R3选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基、硝基、C1～C2烷氧基羰基、C3～C4直链烷氧基羰基或C3～C4支链烷氧基羰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、戊酰基、己酰基、1-咪唑基、1,2,4-三唑-1-基、1-(甲氧基亚氨基)乙基、1-(甲氧基亚氨基)丙基、1-(甲氧基亚氨基)丁基或1-(甲氧基亚氨基)戊基；HOBt:1-羟基苯并三唑；EDCI:1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐；DMF:N,N二甲基甲酰胺。

本发明技术方案的第三方面是提供含有第一方面所述化合物及其药学上可接受的盐的药物组合物，该药物组合物含有治疗有效量的本发明的阿魏酰胺衍生物及其药学上可接受的盐，以及任选的含有药用载体。其中所述的药用载体指药学领域常用的药用载体；该药物组合物可根据本领域公知的方法制备。可通过将本发明化合物及其药学上可接受的盐与一种或多种药学上可接受的固体或液体赋形剂和/或辅剂组合，制成适于人或动物使用的任何剂型。本发明化合物及其药学上可接受的盐在其药物组合物中的含量通常为0.1％～95％重量百分比。

本发明化合物及其药学上可接受的盐或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮肤、阴道、直肠等。

给药剂型可以是液体剂型、固体剂型或半固体剂型。液体剂型可以是溶液剂(包括真溶液和胶体溶液)、乳剂(包括o/w型、w/o型和复乳)、混悬剂、注射剂(包括水针剂、粉针剂和输液)、滴眼剂、滴鼻剂、洗剂和搽剂等；固体剂型可以是片剂(包括普通片、肠溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口腔崩解片)、胶囊剂(包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊)、颗粒剂、散剂、微丸、滴丸、栓剂、膜剂、贴片、气(粉)雾剂、喷雾剂等；半固体剂型可以是软膏剂、凝胶剂、糊剂等。

本发明化合物及其药学上可接受的盐可以制成普通制剂、也制成是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。

为了将本发明化合物及其药学上可接受的盐制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂，包括稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助流剂。稀释剂可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等；湿润剂可以是水、乙醇、异丙醇等；粘合剂可以是淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解剂可以是干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠与枸橼酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠等；润滑剂和助流剂可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸盐、酒石酸、液体石蜡、聚乙二醇等。

还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。

为了将给药单元制成胶囊剂，可以将有效成分本发明化合物及其药学上可接受的盐与稀释剂、助流剂混合，将混合物直接置于硬胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明化合物及其药学上可接受的盐先与稀释剂、黏合剂、崩解剂制成颗粒或微丸，再置于硬胶囊或软胶囊中。用于制备本发明化合物及其药学上可接受的盐片剂的各稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、助流剂品种也可用于制备本发明化合物及其药学上可接受的盐的胶囊剂。

为将本发明化合物及其药学上可接受的盐制成注射剂，可以用水、乙醇、异丙醇、丙二醇或它们的混合物作溶剂并加入适量本领域常用的增溶剂、助溶剂、pH调剂剂、渗透压调节剂。增溶剂或助溶剂可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羟丙基-β-环糊精等；pH调剂剂可以是磷酸盐、醋酸盐、盐酸、氢氧化钠等；渗透压调节剂可以是氯化钠、甘露醇、葡萄糖、磷酸盐、醋酸盐等。如制备冻干粉针剂，还可加入甘露醇、葡萄糖等作为支撑剂。

此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂或其它添加剂。

为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的药物或药物组合物可用任何公知的给药方法给药。

本发明技术方案的第四方面是提供本发明所述阿魏酰胺衍生物及其药学上可接受的盐以及第三方面所述药物组合物在制备流感病毒神经氨酸酶抑制剂方面的应用。

本发明技术方案的第五方面是提供化学结构式Ⅱ所示的(E)-N-(4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶体。

(E)-N-(4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶体结构原子编号如下：

本发明的目的在于提供了(E)-N-(4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶体结构。其晶胞参数如下：单斜晶系,空间群P21/c， α＝90°，β＝90.12(3)°，γ＝90°；Z＝4， F(000)＝840，Mr＝399.47，Dx＝1.377mg.m-3，μ＝0.20mm-1，T＝273K，Mo Kαradiation， S＝0.96。

化合物Ⅱ中碳碳双键(C8＝C9)为E式构型，键长 化合物Ⅱ中苯环与噻唑环的二面角为161.9°；噻唑环与1,2,3三氮唑的二面角为96.1°；化合物Ⅱ的晶胞中有4个分子；化合物Ⅱ存在分子间氢键作用：N1—H1A---N5，氢键键长 分子间氢键角度为164.74°。

本发明的目的在于还提供所述的(E)-N-(4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶体的制备方法，其特征在于由(E)-N-(4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺在极性溶剂中结晶得到。

本发明的目的在于还提供所述(E)-N-(4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶体的制备方法，其特征在于极性溶剂是甲醇、乙醇、丙酮和水中的一种或几种。

附图说明

附图1是(E)-N-(4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶体的分子结构。

附图2是(E)-N-(4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶体的晶体堆积图。

附图3是(E)-N-(4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺晶体的分子间氢键作用图

有益技术效果：

本发明的阿魏酰胺衍生物是一类具有流感病毒神经氨酸酶抑制活性的化合物。

具体实施方式

以下实施例旨在说明本发明而不是对本发明的进一步限定。

实施例1

(E)-N-(4-叔丁基-5-硝基噻唑-2-基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺的制备

0.23g(1.2mmol)阿魏酸，0.16g(1.2mmol)1-羟基苯并三唑，0.23g(1.2mmol)1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶于10mL N,N二甲基甲酰胺中搅拌30min，加入0.20g(1mmol)2-氨基-4叔丁基-5-硝基噻唑，升温至115℃反应16h(TLC监测)，反应液冷却至室温，倒入冰水中，析出固体抽滤，依次用饱和碳酸氢钠溶液、稀盐酸、水洗涤，粗品经乙醇重结晶得红色粉末(E)-N-(4-叔丁基-5-硝基噻唑-2-基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺，收率36.8％，m.p.262～263℃。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：1.50(s，9H，3×CH3)，3.88(s，3H，CH3)，6.82(d，J＝15.6Hz，1H，＝CH)，6.91(d，J＝8.0Hz，1H，C6H3)，7.19(d，J＝8.0Hz，1H，C6H3)，7.26(s，1H，C6H3)，7.79(d，J＝15.6Hz，1H，＝CH)，9.81(s，1H，OH)，13.01(s，1H，NH)。

实施例2

(E)-N-(4-叔丁基-5-(咪唑-1-基)噻唑-2-基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺的制备

按实施例1的方法，0.23g(1.2mmol)阿魏酸与0.20g(1mmol)2-氨基-4-叔丁基-5-咪唑噻唑在115℃下反应10h(TLC监测)，粗品经乙醇重结晶得淡黄色粉末(E)-N-(4-叔丁基-5-(咪唑-1-基)噻唑-2-基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺，收率38.2％，m.p.244～246℃。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：1.15(s，9H，3×CH3)，3.85(s，3H，OCH3)，6.77(d，J＝15.6Hz，1H，＝CH)，6.88(d，J＝7.6Hz，1H，C6H3)，7.12～7.14(m，2H，咪唑环-H+C6H3)，7.21(s，1H，C6H3)7.47(s，1H，咪唑环-H)，7.67(d，J＝15.6Hz，1H，＝CH)，7.94(s，1H，咪唑环-H)，9.71(s，1H，OH)，12.40(s，1H，NH)。

实施例3

(E)-N-(4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺的制备

按实施例1的方法，0.23g(1.2mmol)阿魏酸与0.22g(1mmol)2-氨基-4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑)噻唑在115℃下反应10h(TLC监测)，粗品经乙醇重结晶得米黄色粉末(E)-N-(4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺，收率41.5％，m.p.196～198℃。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：1.14(s，9H，3×CH3)，3.85(s，3H，OCH3)，6.78(d，J＝15.6Hz，1H，＝CH)，6.88(d，J＝8.0Hz，1H，C6H3)，7.14(d，J＝8.0Hz，1H，C6H3)，7.22(s，1H，C6H3)，7.69(d，J＝15.6Hz，1H，＝CH)，8.28(s，1H，三唑环-H)，8.98(s，1H，三唑环-H)，9.74(s，1H，OH)，12.53(s，1H，NH)。

实施例4

(E)-N-(5-乙氧羰基-4-甲基噻唑-2-基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺的制备

按实施例1的方法，0.23g(1.2mmol)阿魏酸与0.19g(1mmol)2-氨基-4-甲基-5-羧酸乙酯噻唑在115℃下反应10h(TLC监测)，粗品经乙醇重结晶得米黄色粉末(E)-N-(5-乙氧羰基-4-甲基噻唑-2-基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺，收率40.2％，m.p.185～187℃。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：1.29(t，J＝7.0Hz，3H，CH3)，2.56(s，3H，CH3)，3.83(s，3H，OCH3)，4.25(q，J＝13.9，6.9Hz，2H，OCH2)，6.71(d，J＝15.6Hz，1H，＝CH)，6.85(d，J＝8.0Hz，1H，C6H3)，7.12(d，J＝8.0Hz，1H，C6H3)，7.21(s，1H，C6H3)，7.67(d，J＝15.6Hz，1H，＝CH)，9.70(s，1H，OH)，12.54(s，1H，NH)。

实施例5

(E)-N-(5-乙酰基-4-甲基噻唑-2-基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺的制备

按实施例1的方法，0.23g(1.2mmol)阿魏酸与0.16g(1mmol)2-氨基-4-甲基-5-乙酰基噻唑在115℃下反应12h(TLC监测)，粗品经DMF/H2O重结晶得黑色固体(E)-N-(5-乙酰基-4-甲基噻唑-2-基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺，收率36.4％，m.p.256～258℃。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：2.43(s，3H，CH3)，2.45(s，3H，CH3)，3.77(s，3H，OCH3)，6.66(d，J＝16.0Hz，1H，＝CH)，6.80(d，J＝8.0Hz，1H，C6H3)，7.06(d，J＝8.0Hz，1H，C6H3)，7.15(s，1H，C6H3)，7.61(d，J＝16.0Hz，1H，＝CH)，9.69(s，1H，OH)，12.49(s，1H，NH)。

实施例6

(E)-2-[2-(3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰氨基)噻唑-4-基]乙酸乙酯的制备

按实施例1的方法，0.23g(1.2mmol)阿魏酸与0.16g(1mmol)2-氨基-4乙酸乙酯噻唑在115℃下反应8h(TLC监测)，粗品经乙醇重结晶得白色固体(E)-2-[2-(3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰氨基)噻唑-4-基]乙酸乙酯，收率32.1％，m.p.181～183℃。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：1.19(t，J＝7.0Hz，3H，CH3)，3.70(s，2H，CH2)，3.83(s，3H，OCH3)，4.09(q，J＝7.1Hz，2H，OCH2)，6.69(d，J＝15.6Hz，1H，＝CH)，6.85(d，J＝8.0Hz，1H，C6H3)，6.99(s，1H，噻唑环-H)，7.09(d，J＝8.0Hz，1H，C6H3)，7.18(s，1H，C6H3)，7.62(d，J＝15.6Hz，1H，＝CH)，9.64(s，1H，OH)，12.24(s，1H，NH)。

实施例7

(2E)-N-[5-(1-(甲氧基亚氨基)乙基)-4-甲基噻唑-2-基]-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺的制备

0.17g(0.5mmol)(E)-N-(5-乙酰基-4-甲基噻唑-2-基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺溶于5mL DMF中；0.08g(1mmol)甲氧基胺盐酸盐，0.08g(1mmol)乙酸钠溶于3mL水中，搅拌10min后加入DMF溶液中升温至80℃反应10h,冷却至室温，反应液倒入水中，抽滤，滤饼依次用饱和碳酸氢钠溶液洗，水洗，烘干得白色粉末(2E)-N-[5-(1-(甲氧基亚氨基)乙基)-4-甲基噻唑-2-基]-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺，收率60.6％,m.p.133～135℃。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：2.23(s，2H，噻唑-CH3，E-式)，2.43(s，1H，噻唑-CH3，Z-式)，2.26(s，1H，CH3，Z-式)，2.45(s，2H，CH3，E-式)，3.85(s，3H，OCH3)，3.90(s，3H，NOCH3)，6.72(d，J＝15.6Hz，1H，＝CH)，6.87(d，J＝8.0Hz，1H，C6H3)，7.13(d，J＝8.0Hz，1H，C6H3)，7.22(s，1H，C6H3)，7.65(d，J＝15.6Hz，1H，＝CH)，9.70(s，1H，OH)，12.24(s，1H，NH)。

实施例8

(E)-2-[2-(3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰氨基)噻唑-4-基]乙酸的制备

0.10g(0.28mmol)(E)-2-[2-(3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰氨基)噻唑-4-基]乙酸乙酯溶于10mL乙醇，向其中滴加2mL 0.6N的氢氧化锂溶液，室温反应6h(TLC监测)，稀盐酸调pH至2～3，析出固体，抽滤，水洗得黄色粉末(E)-2-[2-(3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰氨基)噻唑-4-基]乙酸，收率65.9％，m.p.210～212℃。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：3.62(s，2H，CH2)，3.83(s，3H，OCH3)，6.69(d，J＝15.6Hz，1H，＝CH)，6.85(d，J＝8.0Hz，1H，C6H3)，6.96(s，1H，噻唑环-H)，7.10(d，J＝8.0Hz，1H，C6H3)，7.19(s，1H，C6H3)，7.63(d，J＝15.6Hz，1H，＝CH)，9.63(s，1H，OH)，12.24(s，1H，NH)，12.33(s，1H，COOH)。

实施例9

(E)-N-(4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酰胺(Ⅱ)的晶体结构

化合物Ⅱ溶于乙醇/水(V乙醇：V水＝5:1)中，在室温下经微孔滤膜过滤后通过溶剂缓慢挥发法，置于安静黑暗的环境中培养9天，得到黄色透明晶体。选择0.06×0.06×0.06mm3晶体使用BRUKER SMCRT CPEX 1000CCD X射线单晶衍射仪测定晶体结构，测定结果运用SHELXS-97、SHELXL-97和Mercury等程序进行解析、精修结构及三维图示编辑与显示。晶体测试数据及结构参数见表1。

表1化合物Ⅱ晶体数据及结构精修参数

X-Ray单晶衍射结果分析，其晶胞参数如下：单斜晶系,空间群P21/c，a＝10.43(3)，b＝10.642(14)， α＝90°，β＝90.12(3)°，γ＝90°；Z＝4， F(000)＝840，Mr＝399.47，Dx＝1.377mg.m-3，μ＝0.20mm-1，T＝273K，Mo Kαradiation， S＝0.96；化合物Ⅱ的晶体结构见附图1，分子堆积见附图2，分子间的氢键见附图3，键角和键长数据见表2和表3，分子间氢键数据见表4.

表2化合物Ⅱ晶体键长

表3化合物Ⅱ晶体的键角

化学键键角(°)化学键键角(°)C11—S1—C1789.6(2)C17—C12—N2111.8(3)C2—O1—C7115.9(3)C17—C12—C13128.4(3)C19—N5—C18103.2(3)N2—C12—C13119.8(3)C11—N2—C12114.2(3)C4—C3—C2118.3(3)C3—O2—H2108(3)C4—C3—O2122.2(4)C19—N3—N4110.1(3)C2—C3—O2119.5(4)C19—N3—C17127.9(3)N5—C19—N3109.6(3)N4—N3—C17121.9(3)N5—C19—H19125.2C10—N1—C11127.2(3)N3—C19—H19125.2C10—N1—H1A115(3)N4—C18—N5115.5(3)C11—N1—H1A118(3)N4—C18—H18122.3C8—C9—C10123.3(3)N5—C18—H18122.3C8—C9—H9118.3C6—C5—C4120.6(4)C10—C9—H9118.3C6—C5—H5119.7C18—N4—N3101.6(3)C4—C5—H5119.7C3—C4—C5122.1(4)C13—C15—H15A109.5C3—C4—H4118.9C13—C15—H15B109.5C5—C4—H4118.9H15A—C15—H15B109.5C5—C6—C1116.6(3)C13—C15—H15C109.5C5—C6—C8122.2(4)H15A—C15—H15C109.5C1—C6—C8121.2(3)H15B—C15—H15C109.5C6—C1—C2122.5(4)C3—C2—O1111.8(3)C6—C1—H1118.7C3—C2—C1119.8(4)C2—C1—H1118.7O1—C2—C1128.3(3)O3—C10—N1118.0(4)C13—C14—H14A109.5O3—C10—C9124.0(4)C13—C14—H14B109.5N1—C10—C9118.0(3)H14A—C14—H14B109.5N2—C11—N1122.5(3)C13—C14—H14C109.5N2—C11—S1113.4(3)H14A—C14—H14C109.5N1—C11—S1124.0(3)H14B—C14—H14C109.5C12—C17—N3127.2(3)O1—C7—H7A109.5C12—C17—S1110.9(3)O1—C7—H7B109.5N3—C17—S1121.9(3)H7A—C7—H7B109.5C12—C13—C14105.9(3)O1—C7—H7C109.5C12—C13—C15108.2(3)H7A—C7—H7C109.5C14—C13—C15111.0(3)H7B—C7—H7C109.5C12—C13—C16115.3(3)C13—C16—H16A109.5C14—C13—C16106.3(3)C13—C16—H16B109.5C15—C13—C16110.1(3)H16A—C16—H16B109.5C9—C8—C6130.4(3)C13—C16—H16C109.5C9—C8—H8114.8H16A—C16—H16C109.5C6—C8—H8114.8H16B—C16—H16C109.5

表4化合物Ⅱ的分子间氢键( 和°)

从附图1可看出化合物Ⅱ中碳碳双键(C8＝C9)为E式构型，键长为 这与1HNMR中的碳碳双键耦合常数值(J＝16.0Hz)说明的E式构型一致；化合物Ⅱ中苯环与噻唑环间通过CH＝CHCONH相连，其二面角为161.9°；噻唑环与1,2,3三氮唑直接相连，其二面角为96.1°。化合物Ⅱ的晶胞中有4个分子。附图3显示化合物Ⅱ存在分子间氢键作用，具体参数见表4。

实施例10

阿魏酰胺衍生物的抗流感病毒神经氨酸酶活性

1.实验原理

化合物MUNANA是神经氨酸酶的特异性底物，在神经氨酸酶作用下产生的代谢产物在360nm照射激发下，可以产生450nm荧光，荧光强度的变化可以灵敏地反应神经氨酸酶活性。酶分别来自A/PR/8/34(H1N1)病毒毒株和A/闽防/15/90(H3N2)病毒毒株。

2.实验方法

在酶反应体系中，一定浓度样品与流感病毒神NA悬浮于反应缓冲液中(pH 6.5)，加入荧光底物MUNANA启动反应体系，37℃孵育40分钟后，加反应终止液终止反应。在激发波长360nm和发射波长为450nm的参数条件下，测定荧光强度值。反应体系的荧光强度可以反映酶的活性。根据荧光强度的减少量可以计算化合物对NA活性的抑制率。

3.检测样品：实施例化合物

4.活性结果

化合物在反应系统中检测浓度40.0μg/mL时对神经氨酸酶的抑制率和IC50值列入表3。

表3阿魏酰胺衍生物对神经氨酸酶H1N1/H3N2的抑制活性和IC50

阿魏酰胺衍生物具有抗流感病毒神经氨酸酶活性，可用于制备流感病毒神经氨酸酶抑制剂。

阿魏酰胺衍生物及其医药用途与晶体结构专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。