专利摘要

N-[5-（1，2，4-三唑-1-基）噻唑-2-基]月桂酰胺及其应用。本发明涉及化学结构式Ⅰ所示的N-[5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]脂肪酰胺：式中R选自：C1～C2烷基、C3～C4直链或支链烷基；R1选自：C1～C2烷基、C3～C17直链或支链烷基。5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺经酰化制得N-[5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]脂肪酰胺。N-[5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]脂肪酰胺可作为制备抗癌药物的应用。

权利要求

1.N-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]月桂酰胺。

2.权利要求1所述的N-[5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]月桂酰胺在制备抗宫颈癌药物中的应用。

3.权利要求1所述的N-[5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]月桂酰胺在制备抗人肺腺癌药物中的应用。

说明书

技术领域

本发明涉及化合物的制备方法，具体是N-[5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]月桂酰胺的制备方法与在制备抗癌药物中的应用。

背景技术

中国发明专利[ZL200910043920.0；CN102057918；CN201210052546.2]和学位论文描述了经4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺制备4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-苄亚氨基噻唑和4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)-2-芳氨基噻唑，并研究了其杀菌活性、除草活性和抗癌活性等生物活性。

4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺由3,3-二甲基-1-(1，2，4-三唑-1-基)-2-丁酮与等摩尔溴反应制得3,3-二甲基-1-(1，2，4-三唑-1-基)-1-溴-2-丁酮，再环合中和制得[有机化学，2010，30(6)：923-927；结构化学，2010，29(11)：1680-1683；于海波.博士学位论文.天津：南开大学，2007，102-110，2012年公开]。

发明内容

本发明的目的在于提供化学结构式Ⅰ所示N-[5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]脂肪酰胺：

式中R选自：C₁～C₂烷基、C₃～C₄直链或支链烷基；R¹选自：C₁～C₂烷基、C₃～C₁₇直链或支链烷基、含氯C₁～C₂的烷基、含氯C₃～C₇的直链或支链烷基，含溴C₁～C₂的烷基，含氟C₁～C₂的烷基，乙烯基、丙烯基、含双键或三键的C₄～C₁₇烃基，或苄基。

本发明的目的在于提供的N-[5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]脂肪酰胺选自下列化合物：

本发明的目的在于提供N-[5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]脂肪酰胺的制备方法：其特征在于它的制备操作是：4-烷基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺与酰氯在四氢呋喃中，以无水碳酸钾为缚酸剂，室温反应2.0～3.0h，制得N-[5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]脂肪酰胺；制备反应如下：

式中R选自：C₁～C₂烷基、C₃～C₄直链或支链烷基；R¹选自：C₁～C₂烷基、C₃～C₁₇直链或支链烷基、含氯C₁～C₂的烷基、含氯C₃～C₇的直链或支链烷基，含溴C₁～C₂的烷基，含氟C₁～C₂的烷基，乙烯基、丙烯基、含双键或三键的C₄～C₁₇烃基，或苄基。

本发明的目的在于提供N-[5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]脂肪酰胺的制备方法：其特征在于它的制备操作是：4-烷基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺与脂肪酸在二氯甲烷中，以4-二甲氨基吡啶为催化剂，N，N′-二环己基碳二亚胺为脱水剂，室温反应5.0～10.0h，制得N-[5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]脂肪酰胺；制备反应如下：

式中R选自：C₁～C₂烷基、C₃～C₄直链或支链烷基；R¹选自：C₁～C₂烷基、C₃～C₁₇直链或支链烷基、含氯C₁～C₂的烷基、含氯C₃～C₇的直链或支链烷基，含溴C₁～C₂的烷基，含氟C₁～C₂的烷基，乙烯基、丙烯基、含双键或三键的C₄～C₁₇烃基，或苄基。

本发明的目的在于提供N-[5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]脂肪酰胺的制备方法：其特征在于它的制备操作是：4-烷基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺与酸酐在50℃下反应0.5～1.5h，制得N-[5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]脂肪酰胺；制备反应如下：

式中R选自：C₁～C₂烷基、C₃～C₄直链或支链烷基；R¹选自：C₁～C₂烷基、C₃～C₁₇直链或支链烷基、含氯C₁～C₂的烷基、含氯C₃～C₇的直链或支链烷基，含溴C₁～C₂的烷基，含氟C₁～C₂的烷基，乙烯基、丙烯基、含双键或三键的C₄～C₁₇烃基，或苄基。

本发明的目的在于提供了N-[5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]脂肪酰胺在制备抗癌药物中的应用。

本发明与现有技术相比具有如下优点：

首次制备了N-[5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]脂肪酰胺，并发现其具有抗癌活性。

具体实施方式

以下实施例旨在说明本发明而不是对本发明的进一步限定。

实施例1

4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺的制备

(1)3,3-二甲基-1-(1，2，4-三唑-1-基)-1-溴-2-丁酮的制备

0.02mol3,3-二甲基-1-(1，2，4-三唑-1-基)-2-丁酮、4.0mL冰乙酸、40.0mL四氯化碳、3.2mL40％氢溴酸加入反应瓶中，65℃下搅拌，滴加4.6mL30％双氧水，反应3.5h；加20.0mL碳酸氢钠水溶液，搅拌至无气泡冒出；分出有机层，二氯甲烷萃取，合并有机层，饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥，脱溶剂得3,3-二甲基-1-(1，2，4-三唑-1-基)-1-溴-2-丁酮淡黄色液体，黄色液体产物直接用于下一步反应。

(2)4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺的制备

上一步得到的3,3-二甲基-1-(1，2，4-三唑-1-基)-1-溴-2-丁酮黄色液体、25.0mL乙醇、0.02mol硫脲，回流1.5h。冷却析出固体，抽滤；固体溶于40.0mL水，0.01mol碳酸钾水溶液调节pH＝7；析出白色固体，抽滤、干燥得3.74g4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺，总产率83.9％；熔点178～181℃，¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ：1.11(s，9H，3×CH₃)，4.38(s，2H，NH₂)，8.06(s，1H，C₂H₂N₃3-H)，8.23(s，1H，C₂H₂N₃5-H)；滤液回收溴化钾1.87g，直接用于实施例2的第一步反应。

实施例2

4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺的制备

(1)3,3-二甲基-1-(1，2，4-三唑-1-基)-1-溴-2-丁酮的制备

0.02mol3,3-二甲基-1-(1，2，4-三唑-1-基)-2-丁酮、4.0mL冰乙酸、40.0mL四氯化碳、0.021mol溴化钾或回收的溴化钾、6.0mL水，搅拌，加1.1mL浓硫酸，65℃下滴加4.6mL30％双氧水，反应3.0h；加20.0mL碳酸氢钠水溶液，搅拌至无气泡冒出，分出有机层，二氯甲烷萃取，合并有机层，用饱和氯化钠洗涤，无水硫酸钠干燥。脱溶剂得3,3-二甲基-1-(1，2，4-三唑-1-基)-1-溴-2-丁酮淡黄色液体。淡黄色液体直接用于下一步反应。

(2)4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺的制备

上一步得到的3,3-二甲基-1-(1，2，4-三唑-1-基)-1-溴-2-丁酮溶于25.0mL乙醇中，加入0.02mol硫脲，回流1.5h。冷却、析出固体，抽滤；固体溶于40.0mL水中，加入0.01mol碳酸钾水溶液调节pH＝7；析出白色固体，抽滤、干燥得3.79g4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺白色固体。两步反应总产率85.0％[以3,3-二甲基-1-(1，2，4-三唑-1-基)-2-丁酮计]；熔点178～181℃，¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ：1.11(s，9H，3×CH₃)，4.38(s，2H，NH₂)，8.06(s，1H，C₂H₂N₃3-H)，8.23(s，1H，C₂H₂N₃5-H)。滤液回收溴化钾1.85g，直接用于上一步反应。

实施例3

N-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]乙酰胺的制备

2mmol4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺，6.0mL乙酸酐，50℃反应1.5h，冷却后倒入冰水中搅拌，得到N-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]乙酰胺，收率90.6％，m.p.190～191℃。¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ：1.13(s，9H，3×CH₃)，2.29(s，3H，CH₃)，8.12(s，1H，C₂N₃H₂3-H)，8.28(s，1H，C₂N₃H₂5-H)，9.16(s，1H，NH)。

实施例4

N-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]丙酰胺的制备

按实施例3的方法，4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺与丙酸酐反应0.5h，得到N-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]丙酰胺，收率87.2％，m.p.159～161℃。¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ：1.13(s，9H，3×CH₃)，1.28(t，J＝7.6Hz，3H，CH₃)，2.54(q，J＝7.6Hz，2H，CH₂)，8.15(s，1H，C₂N₃H₂3-H)，8.31(s，1H，C₂N₃H₂5-H)，9.49(s，1H，NH)。

实施例5

N-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-2-氯乙酰胺的制备

2mmol4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺溶于20.0mL四氢呋喃中，加入8mmol无水碳酸钾，冰浴搅拌下滴加3mmol氯乙酰氯，室温反应2.0h，过滤，滤液旋蒸，柱层析得到N-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-2-氯乙酰胺，收率77.3％，m.p.130～133℃。¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ：1.15(s，9H，3×CH₃)，4.30(s，2H，CH₂)，8.13(s，1H，C₂N₃H₂3-H)，8.29(s，1H，C₂N₃H₂5-H)，9.83(s，1H，NH)。

实施例6

N-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-2-氯丙酰胺的制备

按实施例5的方法，4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺与2-氯丙酰氯反应3.0h，得到N-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-2-氯丙酰胺，收率72.5％，m.p.133～136℃。¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ：1.15(s，9H，3×CH₃)，1.85(d，J＝7.2Hz，3H，CH₃)，4.64(q，J＝7.2Hz，1H，CH)，8.12(s，1H，C₂N₃H₂3-H)，8.27(s，1H，C₂N₃H₂5-H)，9.79(s，1H，NH)。

实施例7

N-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]三氟甲酰胺的制备

2mmol4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺溶于20.0mL二氯甲烷中，加入2.2mmol三氟乙酸，0.03g4-二甲氨基吡啶(DMAP)，0.5h后加入2.2mmolN，N'-二环己基碳二亚胺(DCC)，室温搅拌，反应10.0h，反应液用碳酸氢钠水溶液中和，静置，分层，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，旋蒸，柱层析得到N-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]三氟甲酰胺，收率10.5％，m.p.219～221℃。¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ：1.16(s，9H，3×CH₃)，8.14(s，1H，C₂N₃H₂3-H)，8.30(s，1H，C₂N₃H₂5-H)。

实施例8

N-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-2-丁烯酰胺的制备

按实施例7的方法，4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺与2-丁烯酸反应6.0h，得到N-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-2-丁烯酰胺，收率35.8％，m.p.205～208℃。¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ：1.15(s，9H，3×CH₃)，1.98(dd，J＝7.0Hz，J＝1.6Hz，3H，CH₃)，5.99(dd，J＝14.2Hz，J＝1.6Hz，1H，3'-H)，7.13-7.19(m，1H，2'-H)，8.12(s，1H，C₂N₃H₂3-H)，8.26(s，1H，C₂N₃H₂5-H)，8.92(s，1H，NH)。

实施例9

N-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]己酰胺的制备

按实施例7的方法，4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺与己酸反应7.0h，得到N-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]己酰胺，收率68.5％，m.p.173～174℃。¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ：0.92(t，J＝6.8Hz，3H，CH₃)，1.15(s，9H，3×CH₃)，1.35-1.38(m，4H，2',3'-H)，1.76(m，2H，4'-H)，2.48(t，J＝7.6Hz，2H，5'-H)，8.12(s，1H，C₂N₃H₂3-H)，8.26(s，1H，C₂N₃H₂5-H)，9.16(s，1H，NH)。

实施例10

N-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]辛酰胺的制备

按实施例7的方法，4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺与辛酸反应5.5h，得到N-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]辛酰胺，收率62.5％，m.p.138～140℃。¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ：0.87-0.90(m，3H，CH₃)，1.13(s，9H，3×CH₃)，1.29-1.34(m，8H，2',3',4',5'-H)，1.75-1.77(m，2H，6'-H)，2.47(t，J＝7.6Hz，2H，7'-H)，8.12(s，1H，C₂N₃H₂3-H)，8.27(s，1H，C₂N₃H₂5-H)，9.00(s，1H，NH)。

实施例11

N-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-2-乙基己酰胺的制备

按实施例7的方法，4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺与2-乙基己酸反应6.0h，得到N-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-2-乙基己酰胺，收率39.8％，m.p.133～135℃。¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ：0.89(t，3H，J＝7.0Hz，1'-H)，0.95(t，J＝7.4Hz，3H，7'-H)，1.14(s，9H，3×CH₃)，1.29-1.32(m，4H，2',3'-H)，1.57-1.64(m，2H，4'-H)，1.71-1.75(m，2H，6'-H)，2.26(m，1H，5'-H)，8.12(s，1H，C₂N₃H₂3-H)，8.26(s，1H，C₂N₃H₂5-H)，8.96(s，1H，NH)。

实施例12

N-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]月桂酰胺的制备

按实施例7的方法，4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺与月桂酸反应6.0h，得到N-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]月桂酰胺，收率54.3％，m.p.103～105℃。¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ：0.88(t，J＝6.8Hz，3H，CH₃)，1.13(s，9H，3×CH₃)，1.26-1.36(m，16H，2'～9'-H)，1.71-1.75(m，2H，10'-H)，2.47(t，J＝7.4Hz，2H，11'-H)，8.11(s，1H，C₂N₃H₂3-H)，8.26(s，1H，C₂N₃H₂5-H)，8.98(s，1H，NH)。

实施例13

N-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]硬脂酰胺的制备

按实施例7的方法，4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺与硬脂酸反应5.0h，得到N-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]硬脂酰胺，收率89.2％，m.p.88～90℃。¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ：0.88(t，J＝7.0Hz，3H，CH₃)，1.13(s，9H，3×CH₃)，1.25-1.33(m，28H，2'～15'-H)，1.70-1.74(m，2H，16'-H)，2.47(t，J＝7.6Hz，2H，17'-H)，8.12(s，1H，C₂N₃H₂3-H)，8.26(s，1H，C₂N₃H₂5-H)，9.42(s，1H，NH)

实施例14

N-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]苯乙酰胺的制备

按实施例7的方法，4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺与苯乙酸反应6.0h，得到N-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]苯乙酰胺，收率58.1％，m.p.177～180℃。¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ：1.09(s，9H，3×CH₃)，3.85(s，2H，CH₂)，7.33(d，J＝7.2Hz，2H，C₆H₅2,6-H)，7.38-7.45(m，3H，C₆H₅3,4,5-H)，8.11(s，1H，C₂N₃H₂3-H)，8.25(s，1H，C₂N₃H₂5-H)，9.03(s，1H，NH)。

实施例15

N-[5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]脂肪酰胺的抗肿瘤活性

1.抗肿瘤活性原理

MTT法生物活性测试又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。MTT分析法以活细胞代谢物还原剂噻唑蓝[3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2，5-二苯基溴化四氮唑；3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide，MTT]为基础。MTT是一种能接受氢原子的染料。活细胞线粒体中与NADP相关的脱氢酶在细胞内可将黄色的MTT转化成不溶性的蓝紫色的甲瓒(formazon)，而死细胞则无此功能。用DMSO溶解formazon后，在一定波长下用酶标仪测定光密度值，既可定量测出细胞的存活率。根据光密度值的变化观察样品对肿瘤细胞的抑制作用。

2.抗肿瘤活性实验

试样：N-[5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]脂肪酰胺(Ⅰ)：

式中R选自：C₁～C₂烷基、C₃～C₄直链或支链烷基；R¹选自：C₁～C₂烷基、C₃～C₁₇直链或支链烷基、含氯C₁～C₂的烷基、含氯C₃～C₇的直链或支链烷基，含溴C₁～C₂的烷基，含氟C₁～C₂的烷基，乙烯基、丙烯基、含双键或三键的C₄～C₁₇烃基，或苄基。

细胞系：宫颈癌细胞系Hela和肺腺癌细胞系A549(中南大学湘雅医学院细胞库提供)。

试剂：噻唑蓝(MTT)、RPMI1640培养液、新生牛血清、抗生素(美国英杰生命技术公司)；胰酶(美国AMRESCO公司)；96孔培养板(美国英杰生命技术公司)；二甲基亚砜(美国Sigma公司)。

仪器：HFsafe-1500型超净工作台、HF151UV型CO₂培养箱(上海力申科学仪器有限公司)；XSP-15C型倒置显微镜(上海长方光学仪器有限公司)；MultiskanMK₃型酶标仪(美国Thermo公司)；超纯水制备仪(美国Milli-Q公司)。

实验操作：试样对于Hela细胞和A549细胞的测试。每种细胞的实验操作过程相同，一次实验过程中，每种试样设置5个浓度梯度(0.010μmol/mL、0.030μmol/mL、0.100μmol/mL、0.300μmol/mL和1.000μmol/mL)，每个浓度四个平行试样，每组实验平行3次，并通过空白组对照得出结论。酶标仪检测各孔OD值，检测波长570nm。

3.抗肿瘤活性评价

1)细胞抑制率计算：

2)IC₅₀值计算

试样浓度对数值与细胞抑制率线性回归，利用软件计算试样对细胞的半数抑制浓度IC₅₀值。优选化合物对于Hela细胞和A549细胞的IC₅₀见表1。

表1N-[5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]脂肪酰胺对于Hela细胞和A549细胞的抑制活性

活性测试结果显示，N-[5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]脂肪酰胺对于宫颈癌细胞(Hela细胞)和人肺腺癌细胞(A549细胞)具有良好的抑制活性，可用于制备抗肿瘤药物。

N-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]月桂酰胺及其应用专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。