专利摘要

本发明公开了一种结构通式为[99mTc‑(CNAA)6]+的锝‑99m标记含异腈的氨基酸衍生物及制备方法和应用。通过配体CNAA的合成以及[99mTc‑(CNAA)6]+的制备两个步骤，得到[99mTc‑(CNAA)6]+配合物。该配合物制备简便，放射化学纯度高，稳定性好，在荷瘤小鼠肿瘤部位有较高的摄取与良好的滞留，肿瘤/非靶比值高，是一种具有推广应用价值的新型肿瘤显像剂。

权利要求

1.一种99mTc标记的含异腈的氨基酸衍生物，结构通式为[99mTc-(CNAA)6]+，其结构如下式所示：

该结构式中：以99mTc+核为中心核，CNAA配体分子中异腈的碳原子与99mTc(I)配位形成六配位的[99mTc-(CNAA)6]+配合物，n为大于或等于2的整数，R为H,CH3,CH(CH3)2,CH2CH(CH3)2,CH(CH3)CH2CH3,CH2COOH,CH2CONH2,(CH2)2COOH,(CH2)2CONH2,(CH2)2SCH3,CH2OH,CH(CH3)OH,CH2SH,

2.如权利要求1所述99mTc标记的含异腈的氨基酸衍生物的制备方法，其工艺步骤如下：

a:配体CNAA的合成:

称取适量氢氧化钠于圆底烧瓶中，加入适量甲醇溶解，然后加入适量氨基酸和化合物1，室温过夜反应,反应结束后减压蒸馏除去溶剂，柱层析纯化(二氯甲烷-甲醇)得到配体CNAA；

具体合成路线为：

b:[99mTc-(CNAA)6]+配合物的制备：

称取适量的柠檬酸钠、L-半胱氨酸溶于生理盐水中，加入一定量的SnCl2·2H2O，调节溶液pH为5.8-6.0，向其中依次加入适量的配体CNAA和新鲜淋洗的Na99mTcO4，沸水浴加热30min即可得到所述的[99mTc-(CNAA)6]+配合物。

3.如权利要求1或2所述99mTc标记的含异腈的氨基酸衍生物作为肿瘤显像药物在核医学领域的应用。

说明书

技术领域

本发明属于放射性药物领域，特别涉及一种锝-99m标记含异腈的氨基酸衍生物及制备方法和应用。

背景技术

氨基酸是构成蛋白质的主要成分，在人体其他生命活动中不可或缺。由于肿瘤细胞中蛋白质代谢旺盛，对氨基酸需求增加且肿瘤细胞的氨基酸转运增强，因此可以通过放射性核素标记氨基酸及其衍生物用于肿瘤显像。研究表明放射性核素标记的氨基酸及其衍生物可以克服2-18F-2-脱氧-D-葡萄糖([18F]FDG)的一些不足，如O-(2-[18F]氟代乙基)-L-酪氨酸([18F]FET)可以更好的区分肿瘤和炎症部位。由于99mTc可以通过99Mo/99mTc发生器淋洗获得，其具有优良的核性质而且99mTc标记的药物可通过药盒化制备，易于临床推广使用，因此研制新型99mTc标记的氨基酸类肿瘤显像剂具有重要的现实意义。

异腈(RNC)作为一种单齿配体可以与99mTc(I)配位形成正一价的稳定性优良的[99mTc-(CNR)6]+配合物，如99mTc-甲氧基异丁基异腈(99mTc-MIBI)是临床上现广泛应用的心肌灌注显像剂。基于以上背景，本发明以常见的氨基酸为原料，对其进行结构修饰，使其与含有异腈基团的活化酯反应以得到含异腈的氨基酸衍生物，将其进行99mTc标记来探求新型SPECT肿瘤显像剂，具有重要的科学意义和实用价值。

发明内容

本发明的目的是提供一种可用于肿瘤显像的锝-99m标记含异腈的氨基酸衍生物，同时也提供其制备方法。

为了实现上述目的，本发明提供的一种锝-99m标记含异腈的氨基酸衍生物，结构通式为[99mTc-(CNAA)6]+，其结构如式(I)所示：

该结构式中：以99mTc+核为中心核，CNAA配体分子中异腈的碳原子与99mTc(I)配位形成六配位的[99mTc-(CNAA)6]+配合物。n为大于或等于2的整数，R为H,CH3,CH(CH3)2,CH2CH(CH3)2,CH(CH3)CH2CH3,CH2COOH,CH2CONH2,(CH2)2COOH,(CH2)2CONH2,(CH2)2SCH3,CH2OH,CH(CH3)OH,CH2SH,

锝-99m标记的含异腈的氨基酸衍生物的制备方法，其制备步骤如下：

a:配体CNAA的合成:

称取适量氢氧化钠于圆底烧瓶中，加入适量甲醇溶解，然后加入适量氨基酸和化合物1，室温过夜反应。反应结束后减压蒸馏除去溶剂，柱层析纯化(二氯甲烷-甲醇)得到配体CNAA。

具体合成路线为：

b:[99mTc-(CNAA)6]+配合物的制备：

称取适量的柠檬酸钠、L-半胱氨酸溶于生理盐水中，加入一定量的SnCl2·2H2O，调节溶液pH为5.8-6.0，向其中依次加入适量的配体CNAA和新鲜淋洗的Na99mTcO4，沸水浴加热30min即可得到所述的[99mTc-(CNAA)6]+配合物。

具体制备步骤如下：

1.CNLeuAA的合成

称取适量氢氧化钠于100mL圆底烧瓶中，加入适量甲醇溶解，然后加入L-亮氨酸和化合物1(n＝5)，室温过夜反应。反应结束后减压蒸馏除去溶剂，柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝5:1)得到配体CNLeuAA。

2.CNMetAA的合成

称取适量氢氧化钠于100mL圆底烧瓶中，加入适量甲醇溶解，然后加入L-蛋氨酸和化合物1(n＝5)，室温过夜反应。反应结束后减压蒸馏除去溶剂，柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝5:1)得到配体CNMetAA。

3.[99mTc-(CNLeuAA)6]+和[99mTc-(CNMetAA)6]+的制备

称取适量的柠檬酸钠、L-半胱氨酸溶于生理盐水中，加入一定量的SnCl2·2H2O，调节溶液pH为5.8-6.0，向其中依次加入适量的配体CNLeuAA和新鲜淋洗的Na99mTcO4，沸水浴加热30min即可得到所述的[99mTc-(CNLeuAA)6]+配合物。

称取适量的柠檬酸钠、L-半胱氨酸溶于生理盐水中，加入一定量的SnCl2·2H2O，调节溶液pH为5.8-6.0，向其中依次加入适量的配体CNMetAA和新鲜淋洗的Na99mTcO4，沸水浴加热30min即可得到所述的[99mTc-(CNMetAA)6]+配合物。

通过上述方法制备的[99mTc-(CNLeuAA)6]+和[99mTc-(CNMetAA)6]+配合物的放射化学纯度大于90％，为亲水性物质，体外稳定性良好。其在荷瘤小鼠肿瘤部位有较高的摄取与良好的滞留，肿瘤/肌肉和肿瘤/血比值好，在心、肝、肺等非靶器官中的摄取值低,是性能优良的可用于肿瘤显像的新型SPECT分子探针。

本发明[99mTc-(CNAA)6]+配合物的性能测定：

1.配合物的鉴定

[99mTc-(CNAA)6]+采用高效液相色谱(HPLC)法鉴定：用C18反向柱，SCL-10AVP型高压液相色谱仪，A相为纯水，B相为乙腈，梯度为0-2min B相为10％，2-5min B相由10％变为90％，5-20min B相为90％，20-24min B相由90％变为10％，24-25min B相为10％。进样量为15μL，流速为1mL/min。测定的各组分的保留时间(Rt)分别为：99mTcO4-：2.6min；[99mTc-(CNLeuAA)6]+：9.9min；[99mTc-(CNMetAA)6]+：9.8min。

2.配合物的脂水分配系数的测定

取0.6mL pH 7.4的磷酸盐缓冲液(0.025mol/L)于2mL离心试管中，在离心试管中加入0.7mL正辛醇和0.1mL[99mTc-(CNAA)6]+溶液，盖上塞子，充分摇匀，离心5min(5000r/min)。然后分别从有机相和水相中取出3×0.1mL，测定二相的放射性计数，并计算其分配系数P(P＝有机相的放射性活度/水相的放射性活度)，重复五组，测得logP值为[99mTc-(CNLeuAA)6]+：-1.99±0.04；[99mTc-(CNMetAA)6]+：-2.93±0.07，表明其皆为亲水性物质。

3.配合物的稳定性测定

将标记物在室温下放置6小时后测定其放射化学纯度，结果表明其在室温下放置6小时后放射化学纯度仍然大于90％，说明其体外稳定性良好。

4.配合物在荷瘤小鼠中的生物分布实验

从荷S180肉瘤模型小鼠的尾静脉注射0.10mL标记液(约7.4×105Bq)，注射1小时和2小时后断头处死小白鼠。取其心、肝、肺、肾、脾、骨、肠、胃、肌肉、血、肿瘤等有关组织和器官，擦净后称重，并在γ-Counter上测其放射性计数，计算各组织的每克百分注射剂量(％ID/g)。每个时项的小鼠数为5只。结果见表1。

表1[99mTc-(CNLeuAA)6]+和[99mTc-(CNMetAA)6]+在S180小鼠中的生物分布

5.配合物在荷瘤小鼠的SPECT显像

从荷S180肉瘤模型小鼠的尾静脉注射[99mTc-(CNLeuAA)6]+或[99mTc-(CNMetAA)6]+溶液(约18.5MBq)，2小时后，腹腔注射戊巴比妥麻醉。将小鼠俯卧固定，使用SPECT/CT进行显像。采用感兴趣区(region of interest，ROI)技术测定肿瘤和对侧正常部位的放射性计数，计算肿瘤和正常组织的摄取比值。SPECT显像结果表明其在肿瘤中浓集明显，除了在肾脏中有较高浓集外在其他非靶器官中摄取较低，表明其可作为亲肿瘤性能优良的新型SPECT分子探针。

具体实施方式

下面通过实施例详述本发明：一种锝-99m标记含异腈的氨基酸衍生物，结构通式为[99mTc-(CNAA)6]+，其结构式如下：

该结构式中：以99mTc+核为中心核，CNAA配体分子中异腈的碳原子与99mTc(I)配位形成六配位的[99mTc-(CNAA)6]+配合物。n为大于或等于2的整数，R为H,CH3,CH(CH3)2,CH2CH(CH3)2,CH(CH3)CH2CH3,CH2COOH,CH2CONH2,(CH2)2COOH,(CH2)2CONH2,(CH2)2SCH3,CH2OH,CH(CH3)OH,CH2SH,

锝-99m标记的含异腈的氨基酸衍生物的制备方法，其制备步骤如下：

a:配体CNAA的合成:

称取适量氢氧化钠于圆底烧瓶中，加入适量甲醇溶解，然后加入适量氨基酸和化合物1，室温过夜反应。反应结束后减压蒸馏除去溶剂，柱层析纯化(二氯甲烷-甲醇)得到配体CNAA。

具体合成路线为：

b:[99mTc-(CNAA)6]+配合物的制备：

称取适量的柠檬酸钠、L-半胱氨酸溶于生理盐水中，加入一定量的SnCl2·2H2O，调节溶液pH为5.8-6.0，向其中依次加入适量的配体CNAA和新鲜淋洗的Na99mTcO4，沸水浴加热30min即可得到所述的[99mTc-(CNAA)6]+配合物。

具体制备步骤如下：

1.CNLeuAA的合成

具体合成路线为：

称取氢氧化钠0.22g(5.5mmol)于100mL圆底烧瓶中，加入80mL甲醇溶解，然后加入L-亮氨酸0.66g(5.0mmol)和化合物1 1.74g(n＝5,6.0mmol)，室温过夜反应。反应结束后减压蒸馏除去溶剂，柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝5:1)，得到配体0.44g，产率32％。1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ7.95(s,1H),4.30(d,J＝7.6Hz,1H),3.15(t,J＝7.0Hz,2H),2.18(t,J＝7.2Hz,2H),1.64-1.43(m,7H),1.35-1.27(m,2H),0.87(dd,J＝12.0,6.1Hz,6H)；13C-NMR(100MHz,Methanol-d4)δ(ppm):179.97,174.27,154.31,53.23,41.16,40.91,35.42,28.63,25.73,24.87,24.71,22.42,20.82；IR:3286.25,2954.97,2931.82,2868.17,2220.57,2149.68,1640.95,1576.82,1424.44,1167.91,941.75,728.62,564.18,419.04；HR-MS(ESI)for C13H21N2O3:found253.1560,calcd 253.1557.

2.CNMetAA的合成

具体合成路线为：

称取氢氧化钠0.22g(5.5mmol)于100mL圆底烧瓶中，加入80mL甲醇溶解，然后加入L-蛋氨酸0.75g(5.0mmol)和化合物1 1.74g(n＝5,6.0mmol)，室温过夜反应。反应结束后减压蒸馏除去溶剂，柱层析纯化(二氯甲烷/甲醇＝5:1)，得到配体0.48g，产率33％。1H NMR(400MHz,Deuterium Oxide)δ4.19(dd,J＝9.1,4.4Hz,1H),3.38(ddt,J＝6.6,4.0,2.0Hz,2H),2.55-2.33(m,2H),2.27-2.15(m,2H),2.03-1.95(m,4H),1.95-1.75(m,1H),1.66-1.47(m,4H),1.39-1.28(m,2H)；13C-NMR(100MHz,Deuterium Oxide)δ(ppm):178.80,176.31,150.33,54.17,41.48,35.57,31.17,29.90,27.95,25.19,24.53,14.28；IR:3277.20,3072.74,2922.28,2858.63,2148.79,1637.63,1575.91,1423.53,1350.23,1317.44,1282.72,1240.28,1180.49,686.69；HR-MS(ESI)for C12H19N2O3S:found 271.1120,calcd271.1121.

3.[99mTc-(CNLeuAA)6]+和[99mTc-(CNMetAA)6]+的制备

称取2.6mg的柠檬酸钠、1.0mg的L-半胱氨酸溶于0.5mL生理盐水中，加入0.1mg的SnCl2·2H2O，调节溶液pH为5.8-6.0，向其中依次加入0.2mg的配体CNLeuAA和0.5mL新鲜淋洗的Na99mTcO4，沸水浴加热30min即可得到所述的[99mTc-(CNLeuAA)6]+配合物。

称取2.6mg的柠檬酸钠、1.0mg的L-半胱氨酸溶于0.5mL生理盐水中，加入0.1mg的SnCl2·2H2O，调节溶液pH为5.8-6.0，向其中依次加入0.2mg的配体CNMetAA和0.5mL新鲜淋洗的Na99mTcO4，沸水浴加热30min即可得到所述的99mTc-(CNMetAA)6]+配合物。

锝-99m标记含异腈的氨基酸衍生物及制备方法和应用专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。