专利摘要

本发明属于生物化学领域，尤其涉及一种利用芝麻菜苷制备莱菔硫烷的方法，包括：利用过氧化物酶-氧化酶反应体系氧化芝麻菜苷制备4-甲基-R-亚硫酰基丁基硫代葡萄糖苷；利用黑芥子酶水解4-甲基-R-亚硫酰基丁基硫代葡萄糖苷制备莱菔硫烷。本发明克服了现有制备方法原料成本高，莱菔硫烷产率低，工艺复杂，难以实现大规模生产的缺点，采用廉价易得的芝麻菜种子、花、茎或叶为原料，原料成本为使用西兰花为原料时的1/6，最终得到莱菔硫烷的产量为使用西兰花为原料时的4倍，产品纯度高，成本低廉，工艺简单，产率高，非常适合于大规模工业化生产。

权利要求

1.一种利用芝麻菜苷制备莱菔硫烷的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)制备4-甲基-R-亚硫酰基丁基硫代葡萄糖苷：

将每克芝麻菜苷溶解于50ml的磷酸盐缓冲液中，pH值为5-7，加入过氧化物酶和氧化酶，其中，所述过氧化物酶与所述芝麻菜苷的摩尔比为1：2000-10000，所述氧化酶与所述过氧化物酶的摩尔比为1:1-10，密封通入氧气，控制温度19-35℃，搅拌，15分钟后，加入所述氧化酶的相应底物，所述底物与所述芝麻菜苷的摩尔比为10-100:1，再次通入氧气，密封，搅拌反应2-5小时，得到4-甲基-R-亚硫酰基丁基硫代葡萄糖苷；

2)用黑芥子酶水解步骤1)中得到的4-甲基-R-亚硫酰基丁基硫代葡萄糖苷制备莱菔硫烷。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述pH值为7，所述过氧化酶与所述芝麻菜苷的摩尔比为1：10000，所述氧化酶与所述过氧化物酶的摩尔比为1：4，所述底物与所述芝麻菜苷的摩尔比为60:1，控制温度为28℃，反应时间为4小时。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述的过氧化物酶包括辣根过氧化物酶、氯过氧化物酶、木质素过氧化物酶、乳过氧化物酶中的一种。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述的氧化酶包括葡萄糖氧化酶、胆固醇氧化酶、超氧化物歧化酶、尿酸氧化酶、D-氨基酸氧化酶、L-氨基酸氧化酶或L-α-羟基酸氧化酶中的一种。

说明书

技术领域

本发明属于生物化学领域，尤其涉及一种利用芝麻菜苷制备莱菔硫烷的方法。

背景技术

目前，随着人们生活水平的提高，癌症的发病率显著提高，严重影响了人类生命健康。大量食用蔬菜水果，能够显著抑制或减慢癌症的发生。蔬菜水果中含有大量的活性成分，如番茄中的番茄红素，大豆中的大豆异黄酮，水果中的鞣花酸及十字花科蔬菜中的异硫氰酸酯，吲哚类物质，均被证实具有突出的防癌抗癌作用。

莱菔硫烷(sulforaphane,4-甲基-亚硫酰基丁基异硫氰酸酯)是目前公认的防癌和抗癌效果最好的天然产物之一，是自然界存在的诱导II型解毒酶能力最强的诱导物。天然莱菔硫烷为R型，不具有任何细胞毒性，能够抑制肺癌、食道癌、结肠癌、乳腺癌、肝癌及大肠癌等癌细胞的形成，提高组织谷胱甘肽的水平，诱导细胞合成Ⅱ型解毒酶。

目前莱菔硫烷的制备方法主要有化学合成和天然产物提取。化学法采用立体手性合成的方法，实验复杂，反应步骤多，副产物多，毒性大，产率低，原料成本高，分离难等缺点，难以实现大规模生产。

天然产物提取方法首先提取西兰花种子等十字花科植物中的4-甲基-R-亚硫酰基丁基硫代葡萄糖苷(R-glucoraphanin)，然后利用黑芥子酶水解4-甲基-R-亚硫酰基丁基硫代葡萄糖苷(R-glucoraphanin)得到R-莱菔硫烷(R-sulforaphane,4-甲基-R-亚硫酰基丁基异硫氰酸酯)，但由于西兰花种子成本高，且4-甲基-R-亚硫酰基丁基硫代葡萄糖苷含量低，得到的莱菔硫烷产品少，只能实验室规模生产。申请号为200910037363.1的中国发明专利申请公开了一种从西兰花芽苗菜中提取多功能莱菔硫烷的方法，该方法需考虑芽苗菜的生长时间，对芽苗菜进行预处理，工艺复杂，产率低，成本较高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用芝麻菜苷制备莱菔硫烷的方法，以解决上述问题。本发明的实施例提供了一种利用芝麻菜苷制备莱菔硫烷的方法，包括如下步骤：

1)制备4-甲基-R-亚硫酰基丁基硫代葡萄糖苷：

将每克芝麻菜苷溶解于50ml的磷酸盐缓冲液中，pH值为5-7，加入过氧化物酶和氧化酶，其中，过氧化物酶与芝麻菜苷的摩尔比为1：2000-10000，氧化酶与过氧化物酶的摩尔比为1：1-10，密封通入氧气，控制温度19-35℃，搅拌，15分钟后，加入氧化酶的相应底物，底物与芝麻菜苷的摩尔比为10-100:1，再次通入氧气，密封，搅拌反应2-5小时，得到4-甲基-R-亚硫酰基丁基硫代葡萄糖苷；

2)用黑芥子酶水解步骤1)中得到的4-甲基-R-亚硫酰基丁基硫代葡萄糖苷制备莱菔硫烷。

进一步，步骤1)中pH值为7，过氧化物酶与芝麻菜苷的摩尔比为1：10000，氧化酶与过氧化物酶的摩尔比为1：4，底物与芝麻菜苷的摩尔比为60:1，控制温度为28℃，反应时间为4小时。

进一步，步骤1)中的过氧化物酶包括辣根过氧化物酶、氯过氧化物酶、木质素过氧化物酶、乳过氧化物酶中的一种。

进一步，步骤1)中的氧化酶包括葡萄糖氧化酶、胆固醇氧化酶、超氧化物歧化酶尿酸氧化酶、D-氨基酸氧化酶、L-氨基酸氧化酶或L-α-羟基酸氧化酶中的一种。

与现有技术相比本发明的有益效果是：克服了现有制备方法原料成本高，莱菔硫烷产率低，工艺复杂，难以实现大规模生产的缺点，采用廉价易得的芝麻菜种子、花、茎或叶为原料，原料成本为使用西兰花为原料时的1/6，最终得到莱菔硫烷的产量为使用西兰花为原料时的4倍，产品纯度可达98％，对映选择性可达99％，成本低廉，工艺简单，产率高，非常适合于大规模工业化生产。

附图说明

图1是本发明一种利用芝麻菜苷制备莱菔硫烷的方法的流程图；

图2是本发明实施例1利用分析型高效液相色谱测定莱菔硫烷纯度的分析图；

图3是本发明实施例1利用质谱对产品进行鉴定的鉴定图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步的详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定发明。

参图1至图3所示，图1是本发明一种利用芝麻菜苷制备莱菔硫烷的方法的流程图；图2是本发明实施例1利用分析型高效液相色谱测定莱菔硫烷纯度的分析图；图3是本发明实施例1利用质谱对产品进行鉴定的鉴定图。

本发明的实施方式提供了一种利用芝麻菜苷制备莱菔硫烷的方法，包括如下步骤：

步骤S101，利用过氧化物酶-氧化酶反应体系氧化芝麻菜苷制备4-甲基-R-亚硫酰基丁基硫代葡萄糖苷：

将每克芝麻菜苷溶解于50ml的磷酸盐缓冲液中，pH值为5-7(可以为5.5、6或6.5)，加入过氧化物酶和氧化酶，其中，过氧化物酶与芝麻菜苷的摩尔比为1：2000-10000(可以为1：2000、1：3000、1：4000、1：5000、1：6000、1：7000、1：8000或1：9000)，氧化酶与过氧化物酶的摩尔比为1：1-10(可以为1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8或1:9)，密封通入氧气(1mL/min)，控制温度19-35℃(可以为20℃、22℃、24℃、26℃、28℃、30℃、32℃或34℃)，搅拌，15分钟后，加入氧化酶的相应底物，底物与芝麻菜苷的摩尔比为10-100:1(可以为20:1、30:1、40:1、50:1、60:1、70:1、80:1或90:1)，再次通入氧气，密封，搅拌反应2-5小时(可以为2.5小时、3小时、3.5小时、4小时或4.5小时)，得到4-甲基-R-亚硫酰基丁基硫代葡萄糖苷。

步骤S101中采用过氧化物酶(如辣根过氧化物酶、氯过氧化物酶、木质素过氧化物酶、乳过氧化物酶)催化芝麻菜苷氧化为4-甲基-R-亚硫酰基丁基硫代葡萄糖苷。过氧化物酶是由微生物或植物所产生的一类氧化还原酶，过氧化物酶催化氧化反应需要以过氧化氢为氧化剂，但是过氧化物酶对过氧化氢浓度极其敏感，高浓度的过氧化氢会将其氧化成没有催化活性的中间态。氧化酶属氧化还原酶类，能够在有分子氧的条件下将相应底物氧化，并生成过氧化氢，步骤S101中采用多种氧化酶(如葡萄糖氧化酶、胆固醇氧化酶、超氧化物歧化酶尿酸氧化酶、D-氨基酸氧化酶、L-氨基酸氧化酶或L-α-羟基酸氧化酶)与其相应的底物反应，在反应体系中均匀、稳定、缓慢地原位生成过氧化氢(通过该氧化物酶-氧化酶反应体系，过氧化氢的浓度不会造成局部浓度过高，且更易于控制，过氧化氢的分散性更好)，进而氧化芝麻菜苷生成4-甲基-R-亚硫酰基丁基硫代葡萄糖苷。

步骤S102，用黑芥子酶水解步骤S101中得到的4-甲基-R-亚硫酰基丁基硫代葡萄糖苷制备莱菔硫烷。具体制备过程如下：

用黑芥子酶(可采用市售黑芥子酶，起始每克芝麻菜苷加入5mg黑芥子酶)水解步骤1)中得到的4-甲基-R-亚硫酰基丁基硫代葡萄糖苷，水解时间为60分钟，pH值采用pH值缓冲液调至6-7(pH值缓冲液可选用柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，醋酸缓冲液，Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液，K2HPO4-KH2PO4缓冲液中的一种)，温度30℃，水解后离心上清液用SP850树脂柱纯化(SP850大孔吸附树脂柱)，柱体积为上样液体积的1/5，用3倍柱体积的去离子水和3倍柱体积体积分数5％的乙醇溶液洗杂质，用5倍柱体积的体积分数85％乙醇洗产品，旋蒸去除溶剂后，用二氯甲烷萃取3次，旋干后进行冷冻干燥处理，得到高纯度的R-莱菔硫烷。

4-甲基-R-亚硫酰基丁基硫代葡萄糖苷经黑芥子酶水解生成R-莱菔硫烷的具体反应原理如下：

本实施方式提供的利用芝麻菜苷制备莱菔硫烷的方法，采用廉价易得的芝麻菜种子、花、茎或叶为原料，原料成本为使用西兰花为原料时的1/6，最终得到莱菔硫烷的产量为使用西兰花为原料时的4倍，产品纯度可达98％，对映选择性可达99％，成本低廉，工艺简单，产率高，非常适合于大规模工业化生产。

步骤S101中的芝麻菜苷可通过下述方法制备：

将芝麻菜种子、花、茎或叶粉碎，100℃灭酶30分钟，每千克粉末加入8-10L的磷酸盐缓冲液中，pH值为7，沸水下搅拌1-3小时，抽滤，pH值采用pH值缓冲液或加入碳酸钙或盐酸进行调控，滤液上D261阴离子交换树脂，柱体积为滤液体积的1/10，5倍柱体积去离子水洗杂质，5倍柱体积2M的氯化钾溶液洗芝麻菜苷，40℃旋干，甲醇萃取脱盐，旋干，经高效液相色谱检测，得到纯度80％的芝麻菜苷粗品。

在本实施方式中，步骤S101中pH值为7，过氧化酶与芝麻菜苷的摩尔比为1：10000，氧化酶与过氧化物酶的摩尔比为1:4，底物与芝麻菜苷的摩尔比为60:1，控制温度为28℃，反应时间为4小时。

在本实施方式中，步骤S101中的过氧化物酶包括辣根过氧化物酶、氯过氧化物酶、木质素过氧化物酶、乳过氧化物酶中的一种。

在本实施方式中，步骤S101中的氧化酶包括葡萄糖氧化酶、胆固醇氧化酶、超氧化物歧化酶尿酸氧化酶、D-氨基酸氧化酶、L-氨基酸氧化酶或L-α-羟基酸氧化酶中的一种。

下面结合具体实施例对本发明做进一步的描述，但这些实施例的目的并不在于限制本发明的保护范围。

实施例1：

芝麻菜苷的制备：取100g芝麻菜种子，100℃灭酶30分钟，粉碎，加入1L磷酸盐缓冲液中，pH值为7，沸水下搅拌1小时，抽滤。滤液上D261树脂柱，柱体积为100ml，500ml去离子水洗杂质，500ml2M的氯化钾溶液洗芝麻菜苷产品，40℃旋蒸除去溶剂，500ml甲醇萃取脱盐，40℃旋蒸除去溶剂，得到芝麻菜苷粗品9.87g。

4-甲基-R-亚硫酰基丁基硫代葡萄糖苷的制备：将芝麻菜苷粗品溶解于500ml磷酸盐缓冲液中(pH值为7)，加入葡萄糖氧化酶0.0006mmol辣根过氧化物酶0.0024mmol，密封通入氧气(1ml/min)，控制温度28℃，用磁力搅拌器搅拌。15min后，加入葡萄糖1.4mol，搅拌反应4小时。用高效液相色谱检测其反应物生成情况，转化率为92.4％。

制备R-莱菔硫烷：向上一步的溶液中加入50mg黑芥子酶，室温下搅拌反应，调pH值至7，水解4-甲基-R-亚硫酰基丁基硫代葡萄糖苷60分钟后，离心上清液上SP850树脂柱，柱体积为100ml，用3倍柱体积的去离子水和3倍柱体积的体积分数5％的乙醇溶液洗杂质，用5倍柱体积的体积分数85％乙醇溶液洗产品。样品旋蒸去除溶剂后用50ml去离子水溶解，用二氯甲烷3次，旋干后样品进行冷冻干燥后，得到2.01g纯度为98.01％的R-莱菔硫烷产品。利用旋光仪检测对映选择性为99％，用分析型高效液相色谱测定产品纯度为98％(如图2所示)，并利用质谱对产品进行鉴定(如图3所示)。该化合物[M+H+]＝178.0，该化合物的理论分子量为177.29。

实施例2：

芝麻菜苷的制备：取100g芝麻菜种子，100℃灭酶30分钟，粉碎，加入1L磷酸盐缓冲液中，pH值为7，沸水下搅拌1小时，抽滤。滤液上D261树脂柱，柱体积为100ml，500ml去离子水洗杂质，500ml2M的氯化钾溶液洗芝麻菜苷产品，40℃旋蒸除去溶剂，500ml甲醇萃取脱盐，40℃旋蒸除去溶剂，得到芝麻菜苷粗品10.12g。

4-甲基-R-亚硫酰基丁基硫代葡萄糖苷的制备：将芝麻菜苷粗品溶解于500ml磷酸盐缓冲液中(pH值为7)，加入葡萄糖氧化酶0.0006mmol辣根过氧化物酶0.0024mmol，密封通入氧气(1ml/min)，控制温度28℃，用磁力搅拌器搅拌。15min后，加入葡萄糖1.4mol，搅拌反应2小时。用高效液相色谱检测其反应物生成情况，转化率为56.2％。

制备R-莱菔硫烷：向上一步的溶液中加入50mg黑芥子酶，室温下搅拌反应，调pH值至7，水解4-甲基-R-亚硫酰基丁基硫代葡萄糖苷60分钟后，离心上清液上SP850树脂柱，柱体积为100ml，用3倍柱体积的去离子水和3倍柱体积体积分数5％的乙醇溶液洗杂质，用5倍柱体积的体积分数85％乙醇溶液洗产品。样品旋蒸去除溶剂后用50ml去离子水溶解，用二氯甲烷萃取3次，旋干后样品进行冷冻干燥后，得到1.01g纯度为98.23％的R-莱菔硫烷产品。利用旋光仪检测对映选择性为95％。

实施例3：

芝麻菜苷的制备：取1000g芝麻菜种子，100℃灭酶30分钟，粉碎，加入10L磷酸盐缓冲液中，pH值为7，沸水下搅拌1小时，抽滤。滤液上D261树脂柱，柱体积为1000ml，5000ml去离子水洗杂质，5000ml2M的氯化钾溶液洗芝麻菜苷产品，40℃旋蒸除去溶剂，5000ml甲醇萃取脱盐，40℃旋蒸除去溶剂，得到芝麻菜苷粗品97.28g。

4-甲基-R-亚硫酰基丁基硫代葡萄糖苷的制备：将芝麻菜苷粗品荣誉500ml磷酸盐缓冲液中(pH值为7)，加入葡萄糖氧化酶0.006mmol氯过氧化物酶0.024mmol，控制温度31℃，用磁力搅拌器。15min后，加入葡萄糖14mol，搅拌反应4小时。用高效液相色谱检测其反应物生成情况，转化率为90.3％。

制备R-莱菔硫烷：向上一步的溶液中加入500mg黑芥子酶，室温下搅拌反应，调pH值至7，水解产生的4-甲基-R-亚硫酰基丁基硫代葡萄糖苷60分钟后，离心上清液上SP850树脂柱，柱体积为1000ml，用3倍柱体积的去离子水和3倍柱体积体积分数5％的乙醇溶液洗杂质，用5倍柱体积的体积分数85％乙醇溶液洗产品。样品旋蒸去除溶剂后用500ml去离子水溶解，用500ml二氯甲烷萃取3次，旋干后样品进行冷冻干燥后，得到19.17g纯度为97.92％的R-莱菔硫烷产品。利用旋光仪检测对映选择性为93％。

实施例4：

芝麻菜苷的制备：取1000g芝麻菜种子，100℃灭酶30分钟，粉碎，加入10L磷酸盐缓冲液中，pH值为7，沸水下搅拌1小时，抽滤.滤液上D261树脂柱，柱体积为1000ml，5000ml去离子水洗杂质，5000ml2M的氯化钾溶液洗芝麻菜苷产品，40℃旋蒸除去溶剂，5000ml甲醇萃取脱盐，40℃旋蒸除去溶剂，得到芝麻菜苷粗品98.75g。

4-甲基-R-亚硫酰基丁基硫代葡萄糖苷的制备：将芝麻菜苷粗品溶解于500ml磷酸盐缓冲液中(pH值为6)，加入葡萄糖氧化酶0.006mmol氯过氧化物酶0.024mmol，密封通入氧气(10ml/min)，控制温度31℃，用磁力搅拌器搅拌。15min后，加入葡萄糖14mol，搅拌反应4小时。用高效液相色谱检测其反应物生成情况，转化率为45.2％。

制备R-莱菔硫烷：向上一步的溶液中加入500mg黑芥子酶，室温下搅拌反应，调pH值至7，水解产生的4-甲基-R-亚硫酰基丁基硫代葡萄糖苷60分钟后，离心上清液上SP850树脂柱，柱体积为1000ml，用3倍柱体积的去离子水和3倍柱体积体积分数5％的乙醇溶液洗杂质，用5倍柱体积的体积分数85％乙醇溶液洗产品。样品旋蒸去除溶剂后用500ml去离子水溶解，用500ml二氯甲烷萃取3次，旋干后样品进行冷冻干燥后，得到10.23g纯度为97.92％的R-莱菔硫烷产品。利用旋光仪检测对映选择性为92％。

实施例5：

芝麻菜苷的制备：取1000g芝麻菜种子，100℃灭酶30分钟，粉碎，加入1L磷酸盐缓冲液中，pH值为7，沸水下搅拌1小时，抽滤.滤液上D261树脂柱，柱体积为100ml，500ml去离子水洗杂质，500ml2M的氯化钾溶液洗芝麻菜苷产品，40℃旋蒸除去溶剂，500ml甲醇萃取脱盐，40℃旋蒸除去溶剂，得到芝麻菜苷粗品9.72g。

4-甲基-R-亚硫酰基丁基硫代葡萄糖苷的制备：将芝麻菜苷粗品溶解于500ml磷酸盐缓冲液中(pH值为7)，加入胆固醇氧化酶0.0006mmol，辣根过氧化物酶0.0024mmol，密封通入氧气(1ml/min)，控制温度28℃，用磁力搅拌器搅拌。15min后，加入胆固醇14mol，搅拌反应5小时。用高效液相色谱检测其反应物生成情况，转化率为91.4％。

制备R-莱菔硫烷：向上一步的溶液中加入50mg黑芥子酶，室温下搅拌反应，调pH值至7，水解产生的4-甲基-R-亚硫酰基丁基硫代葡萄糖苷60分钟后，离心上清液上SP850树脂柱，柱体积为100ml，用3倍柱体积的去离子水和3倍柱体积体积分数5％的乙醇溶液洗杂质，用5倍柱体积的体积分数85％乙醇溶液洗产品。样品旋蒸去除溶剂后用50ml去离子水溶解，用二氯甲烷萃取3次，旋干后样品进行冷冻干燥后，得到2.01g纯度为98.23％的R-莱菔硫烷产品。利用旋光仪检测对映选择性为95％。

实施例6：

芝麻菜苷的制备：取100g芝麻菜种子，100℃灭酶30分钟，粉碎，加入1L磷酸盐缓冲液中，pH值为7，沸水下搅拌1小时，抽滤。滤液上D261树脂柱，柱体积为100ml，500ml去离子水洗杂质，500ml2M的氯化钾溶液洗芝麻菜苷产品，40℃旋蒸除去溶剂，500ml甲醇萃取脱盐，40℃旋蒸除去溶剂，得到芝麻菜苷粗品9.87g。

4-甲基-R-亚硫酰基丁基硫代葡萄糖苷的制备：将芝麻菜苷粗品溶解于500ml磷酸盐缓冲液中(pH值为5)，加入葡萄糖氧化酶0.0024mmol辣根过氧化物酶0.0024mmol，密封通入氧气(1ml/min)，控制温度19℃，用磁力搅拌器搅拌。15min后，加入葡萄糖0.23mol，搅拌反应5小时。用高效液相色谱检测其反应物生成情况，转化率为46.23％。

制备R-莱菔硫烷：向上一步的溶液中加入50mg黑芥子酶，室温下搅拌反应，调pH值至7，水解4-甲基-R-亚硫酰基丁基硫代葡萄糖苷60分钟后，离心上清液上SP850树脂柱，柱体积为100ml，用3倍柱体积的去离子水和3倍柱体积体积分数5％的乙醇溶液洗杂质，用5倍柱体积的体积分数85％乙醇溶液洗产品。样品旋蒸去除溶剂后用50ml去离子水溶解，用二氯甲烷3次，旋干后样品进行冷冻干燥后，得到1.23g纯度为98.01％的R-莱菔硫烷产品。利用旋光仪检测对映选择性为77％，用分析型高效液相色谱测定产品纯度为98％。

实施例7：

芝麻菜苷的制备：取100g芝麻菜种子，100℃灭酶30分钟，粉碎，加入1L磷酸盐缓冲液中，pH值为7，沸水下搅拌1小时，抽滤，滤液上D261树脂柱，柱体积为100ml，500ml去离子水洗杂质，500ml2M的氯化钾溶液洗芝麻菜苷产品，40℃旋蒸除去溶剂，500ml甲醇萃取脱盐，40℃旋蒸除去溶剂，得到芝麻菜苷粗品10.12g。

4-甲基-R-亚硫酰基丁基硫代葡萄糖苷的制备：将芝麻菜苷粗品溶解于500ml磷酸盐缓冲液中(pH值为7)，加入葡萄糖氧化酶0.012mmol辣根过氧化物酶0.012mmol，密封通入氧气(1ml/min)，控制温度35℃，用磁力搅拌器搅拌。15min后，加入葡萄糖2.4mol，搅拌反应5小时。用高效液相色谱检测其反应物生成情况，转化率为85.25％。

制备R-莱菔硫烷：向上一步的溶液中加入50mg黑芥子酶，室温下搅拌反应，调pH值至7，水解4-甲基-R-亚硫酰基丁基硫代葡萄糖苷60分钟后，离心上清液上SP850树脂柱，用3倍柱体积的去离子水和3倍柱体积体积分数5％的乙醇溶液洗杂质，用5倍柱体积的体积分数85％乙醇溶液洗产品。样品旋蒸去除溶剂后用50ml去离子水溶解，用二氯甲烷萃取3次，旋干后样品进行冷冻干燥后，得到1.98g纯度为98.13％的R-莱菔硫烷产品。利用旋光仪检测对映选择性为92％。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用于限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

一种利用芝麻菜苷制备莱菔硫烷的方法专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。