专利摘要

本发明公开一种微生物菌株及其在绢纺原料除油中的应用，所述微生物菌株为产气肠杆菌，命名为产气肠杆菌Enterobactersp.TY‑4，该微生物于2018年6月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:M2018291；此微生物菌株是从绢纺原料腐化液中筛选得到，本发明将该微生物菌株直接作用于绢纺原料（或茧丝），能有效去除绢纺原料中的油脂，并可进一步减少绢纺原料脱油过程化工料的使用，改善劳动环境、减少污染。

权利要求

1.一种微生物菌株，其特征在于：所述微生物菌株为产气肠杆菌，命名为产气肠杆菌Enterobacter sp.TY-4，该微生物于 2018年6月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO: M2018291。

2.如权利要求1所述的一种微生物菌株在绢纺原料除油中的应用，其特征在于：所述的微生物菌株用于绢纺原料除油，且所述的微生物菌株用于绢纺原料除油时包括以下步骤：

（1）除油微生物的制备，包括以下步骤：

（1.1）配制种子培养基：3 g/L的牛肉膏，10 g/L的蛋白胨，以及5 g/L的NaCl，pH为7.0；

（1.2）将权利要求1所述的微生物菌株和甘油配制成微生物甘油管储存液，并置于-80℃保藏；

（1.3）以1-2%（V/V）的接种量接种（1.2）所述微生物甘油管储存液于（1.1）所述的种子培养基中，置于37℃进行摇床，180 rpm震荡培养12 h，得到脱油微生物；

（2）绢纺原料微生物脱油处理，包括以下步骤：

（2.1）微生物脱油培养基的配制：10 g/L蛋白胨；2.5 g/L蔗糖； 5 g/L NaCl，1 g/LSDS；pH 7.0；

（2.2）以1-2%（V/V）的接种量接种所述步骤（1.3）制备得到的脱油微生物于步骤（2.1）所述的微生物脱油培养基中，按浴比2:100加入绢纺原料，于37℃摇床，180 rpm震荡培养48h；

（3）水洗：脱油结束后，取出绢纺原料，用水清洗；

（4）烘干：将水洗后的绢纺原料烘干；

（5）按照索氏抽提法进行残油率的测定。

3.根据权利要求2所述的一种微生物菌株在绢纺原料除油中的应用，其特征在于：所述微生物菌株与甘油的配比为7：3。

4.根据权利要求2所述的一种微生物菌株在绢纺原料除油中的应用，其特征在于：所述步骤（3）的水洗具体方式为：利用水温为30-40oC的水清洗脱油后的绢纺原料2-4次。

5.根据权利要求2或3所述的一种微生物菌株在绢纺原料除油中的应用，其特征在于：所述步骤（3）的水洗具体方式为：利用水温为30-40oC的水清洗脱油后的绢纺原料2-4次。

6.根据权利要求2或3或4所述的一种微生物菌株在绢纺原料除油中的应用，其特征在于：所述步骤（4）的烘干具体方式为：将水洗后的绢纺原料在100-110oC条件下烘干2-4 h。

说明书

技术领域

本发明涉及微生物菌及其应用技术领域，具体的说，一种微生物菌株及其在绢纺原料除油中的应用。

背景技术

绢纺原料来自于丝绸工程剔除或产生的各类下茧、滞头、废丝、缫丝脚渣等。这些下脚原料除含丝胶、油脂外，还粘附有其它污染物和杂质等，必须通过精练整理去除油脂、大部分丝胶、蜡质等。

绢纺原料的除油是绢绵制备的主要难题，目前常用的除油方法有化学和生物-化学法两种。化学法主要采用大量碱类等化工料高温煮练去除油脂，其效果不尽理想，而且污染严重；生物-化学法即先经自然发酵腐化，利用多种微生物并存的混菌发酵体系的作用，去除大部分油脂，再经较为温和的精练整理达到除油的目的。但是该体系易受环境因素如空气、温度、原料来源等的影响，使其中的微生物种类和数量发生改变，从而影响产品的品质和质量。

因此，筛选性能优良的脱油微生物并将其应用于绢纺原料脱油过程中，对于进一步提高绢纺原料精练质量、减少环境污染等具有重要的现实意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种微生物菌株及其在绢纺原料除油中的应用，在提供可用于进行绢纺原料脱油的微生物菌株的同时，提供了应用该微生物菌株进行绢纺原料除油的方法。

本发明通过下述技术方案实现：一种可用于绢纺原料除油的微生物菌株，所述微生物菌株为产气肠杆菌，命名为产气肠杆菌Enterobacter sp.TY-4，该微生物菌株于2018年6月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为 CCTCC NO:M2018291。

一种微生物菌株在绢纺原料除油中的应用，所述的微生物菌株用于绢纺原料(或茧丝)除油，去除绢纺原料(或茧丝)中的油脂。

进一步的为更好地实现本发明所述的一种微生物菌株在绢纺原料除油中的应用，特别采用下述设置方式：所述的微生物菌株在用于绢纺原料除油时包括以下步骤：

(1)除油微生物的制备；

(2)绢纺原料微生物脱油处理；

(3)水洗：脱油结束后，取出绢纺原料，用水清洗；

(4)烘干：将水洗后的绢纺原料烘干；

(5)残油率的测定。

进一步的为更好地实现本发明所述的一种微生物菌株在绢纺原料除油中的应用，特别采用下述设置方式：所述步骤(1)包括以下步骤：

(1.1)配制种子培养基：3g/L的牛肉膏，10g/L的蛋白胨，以及5g/L 的NaCl，pH为7.0；

(1.2)将所述的微生物菌株和甘油配制成微生物甘油管储存液，并置于- 80℃保藏；

(1.3)以1-2％(V/V)的接种量接种(1.2)所述微生物甘油管储存液于 (1.1)所述的种子培养基中，置于37℃进行摇床，180rpm震荡培养12h，得到脱油微生物。

进一步的为更好地实现本发明所述的一种微生物菌株在绢纺原料除油中的应用，特别采用下述设置方式：所述微生物菌株与甘油的配比为7：3。

进一步的为更好地实现本发明所述的一种微生物菌株在绢纺原料除油中的应用，特别采用下述设置方式：所述的步骤(2)包括以下步骤：

(2.1)微生物脱油培养基的配制：10g/L蛋白胨；2.5g/L蔗糖；5g/L NaCl，1g/LSDS；pH 7.0；

(2.2)以1-2％(V/V)的接种量接种所述步骤(1.3)制备得到的脱油微生物于步骤(2.1)所述的微生物脱油培养基中，按浴比2:100加入绢纺原料，于37℃摇床，180rpm震荡培养48h。

进一步的为更好地实现本发明所述的一种微生物菌株在绢纺原料除油中的应用，特别采用下述设置方式：所述步骤(3)的水洗具体方式为：利用水温为30-40℃的水清洗脱油后的绢纺原料2-4次。

进一步的为更好地实现本发明所述的一种微生物菌株在绢纺原料除油中的应用，特别采用下述设置方式：所述步骤(4)的烘干具体方式为：将水洗后的绢纺原料在100-110℃条件下烘干2-4h。

进一步的为更好地实现本发明所述的一种微生物菌株在绢纺原料除油中的应用，特别采用下述设置方式：所述步骤(5)中的残油率的测定是按照索氏抽提法进行。

本发明与现有技术相比，具有以下优点及有益效果：

本发明提供的产气肠杆菌Enterobacter sp.TY-4能在较短时间内有效降解绢纺原料中的油脂。应用该微生物菌株进行油脂去除的方法与现有方法相比，其操作方法简便，生产过程环保，对纤维作用温和，处理后的纤维光泽好、强力高、品质优良。

附图说明

图1为菌株系统发育树。

具体实施方式

下面给出实施例以对本发明进行具体描述，有必要在此指出的是以下实施例只用于对本发明进行进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的技术熟练人员可以根据本发明内容对本发明作出一些非本质的改进和调整。

实施例1：

一种可用于绢纺原料除油的微生物菌株，所述微生物菌株为产气肠杆菌，命名为产气肠杆菌Enterobacter sp.TY-4，该微生物菌株于2018年6月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2018291。

实施例2：

本实施例是在上述实施例的基础上进一步优化，一种微生物菌株在绢纺原料除油中的应用，所述的微生物菌株用于绢纺原料(或茧丝)除油，去除绢纺原料(或茧丝)中的油脂。

实施例3：

本实施例是在实施例2的基础上进一步优化，进一步的为更好地实现本发明所述的一种微生物菌株在绢纺原料除油中的应用，特别采用下述设置方式：所述的微生物菌株在用于绢纺原料(或茧丝)除油时包括以下步骤：

(1)除油微生物的制备；

(2)绢纺原料微生物脱油处理；

(3)水洗：脱油结束后，取出绢纺原料，用水清洗；

(4)烘干：将水洗后的绢纺原料烘干；

(5)残油率的测定。

实施例4：

本实施例是在实施例3的基础上进一步优化，进一步的为更好地实现本发明所述的一种微生物菌株在绢纺原料除油中的应用，特别采用下述设置方式：所述步骤(1)包括以下步骤：

(1.1)配制种子培养基：3g/L的牛肉膏，10g/L的蛋白胨，以及5g/L 的NaCl，pH为7.0；

(1.2)将所述的微生物菌株和甘油配制成微生物甘油管储存液，并置于- 80℃保藏；

(1.3)以1-2％(V/V)的接种量接种(1.2)所述微生物甘油管储存液于 (1.1)所述的种子培养基中，置于37℃进行摇床，180rpm震荡培养12h，得到脱油微生物；优选的，以1％(V/V)的接种量接种(1.2)所述微生物甘油管储存液于(1.1)所述的种子培养基中，置于37℃进行摇床，180rpm震荡培养12h，得到脱油微生物。

实施例5：

本实施例是在实施例3或4的基础上进一步优化，进一步的为更好地实现本发明所述的一种微生物菌株在绢纺原料除油中的应用，特别采用下述设置方式：所述微生物菌株与甘油的配比为7：3。

实施例6：

本实施例是在实施例3或4或5的基础上进一步优化，进一步的为更好地实现本发明所述的一种微生物菌株在绢纺原料除油中的应用，特别采用下述设置方式：所述的步骤(2)包括以下步骤：

(2.1)微生物脱油培养基的配制：10g/L蛋白胨；2.5g/L蔗糖；5g/L NaCl，1g/LSDS；pH 7.0；

(2.2)以1-2％(V/V)的接种量接种所述步骤(1.3)制备得到的脱油微生物于步骤(2.1)所述的微生物脱油培养基中，按浴比2:100加入绢纺原料，于37℃摇床，180rpm震荡培养48h；优选的，以1％(V/V)的接种量接种所述步骤(1.3)制备得到的脱油微生物于步骤(2.1)所述的微生物脱油培养基中，按浴比2:100加入绢纺原料，于37℃摇床，180rpm震荡培养48h。

实施例7：

本实施例是在实施例3-6任一实施例的基础上进一步优化，进一步的为更好地实现本发明所述的一种微生物菌株在绢纺原料除油中的应用，特别采用下述设置方式：所述步骤(3)的水洗具体方式为：利用水温为30-40℃的水清洗脱油后的绢纺原料2-4次。

实施例8：

本实施例是在实施例3-7任一实施例的基础上进一步优化，进一步的为更好地实现本发明所述的一种微生物菌株在绢纺原料除油中的应用，特别采用下述设置方式：所述步骤(4)的烘干具体方式为：将水洗后的绢纺原料在100- 110℃条件下烘干2-4h。

实施例9：

本实施例是在实施例3-8任一实施例的基础上进一步优化，进一步的为更好地实现本发明所述的一种微生物菌株在绢纺原料除油中的应用，特别采用下述设置方式：所述步骤(5)中的残油率的测定是按照索氏抽提法进行。

实施例10：

一种可用于绢纺原料除油的微生物菌株，命名为产气肠杆菌Enterobactersp.TY-4，该微生物菌株于2018年6月3日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2018291。

实施例11

实施例10中的一种可用于绢纺原料脱油的微生物菌株的筛选方法，包括以下步骤：

(1)将采样所得的绢纺原料腐化液10mL加入90mL的种子培养基中，该种子培养基配制为：3g/L的牛肉膏，10g/L的蛋白胨，以及5g/L的NaCl，pH 为7.0。之后置于37℃摇床，180rpm震荡培养12h，得到菌悬液；

(2)将上述培养好的菌悬液稀释不同倍数后涂布于以三丁酸甘油酯为唯一碳源的选择培养基琼脂平板上，该选择性培养基配制为：1g/L硝酸铵， 0.5g/L磷酸二氢钾，1.5g/L磷酸氢二钠，1g/L NaCl,0.2g/L MgSO₄.7H₂O，5 mL/L三丁酸甘油酯，置于37℃培养48h。

(3)根据透明圈大小和菌落直径的比值，挑选比值较大(即表示菌株脱油能力较强)的菌株。

(4)将上述挑选的脱油能力较强的菌株，接种至脱油培养基中(100mL)，该脱油培养基配制为：10g/L蛋白胨；2.5g/L蔗糖；5g/L NaCl，1g/L SDS； pH 7.0。再加入2g绢纺原料，置于37℃摇床，180rpm震荡培养48h。

(5)测定绢纺原料脱油率。

脱油完成后，弃去培养液，用水温为30-40℃的水清洗脱油后的绢纺原料 2-4次，再将水洗后的绢纺原料在100-110℃条件下烘干2-4h，将绢纺原料置于索氏抽提器中，测定残油率。

残油率的计算方式为：脱油处理后的绢纺原料在抽提后，烧瓶重量的增加和绢纺原料重量的损失来表征绢纺原料残油率。其计算的公式如下：

残油率(％)＝烧瓶变化的重量/(烧瓶变化的重量+绢纺原料脱油后干重)×100％。

(6)将获得的残油率最低的菌株进行16S rDNA鉴定，命名为产气肠杆菌Enterobacter sp.TY-4(如图1所示的菌株系统发育树)，并将菌株送至中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2018291，保藏地址为中国武汉. 武汉大学。

实施例12：

上述实施例所述的产气肠杆菌菌株，可应用于去除绢纺原料(或茧丝)中的油脂。

具体的绢纺原料除油应用包括以下步骤：

(1)脱油微生物的制备；

(2)绢纺原料微生物脱油处理；

(3)水洗：脱油结束后，取出绢纺原料，用水清洗；

(4)烘干：将水洗后的绢纺原料烘干；

(5)残油率的测定。

实施例13：

应用实施例10和11中的产气肠杆菌菌株进行如实施例12所示的绢纺原料除油的方法，在进行脱油微生物的制备时，先配制种子培养基：3g/L的牛肉膏，10g/L的蛋白胨，5g/L的NaCl，pH为7.0；之后将所述的产气肠杆菌菌株和甘油配制成微生物甘油管储存液(培养物(产气肠杆菌菌株)：甘油＝7:3)，并置于-80℃保藏；下一步以1-2％(V/V)的接种量接种微生物甘油管储存液于种子培养基中(优选的，以1％(V/V)或2％(V/V)的接种量接种微生物甘油管储存液于种子培养基中)，置于37℃进行摇床，180rpm震荡培养12h，得到脱油微生物。其余步骤与实施例12相同，在此不再赘述。

实施例14：

应用实施例10和11中的产气肠杆菌菌株进行如实施例12所示的绢纺原料除油的方法，在进行绢纺原料微生物脱油处理时，先配制微生物脱油培养基：10g/L蛋白胨；2.5g/L蔗糖；5g/L NaCl，1g/L SDS；pH 7.0。

之后以1-2％(V/V)的接种量(优选的，以1％(V/V)或2％(V/V)的接种量)接种如实施例13所述制备得到的脱油微生物于脱油培养基中，按浴比2:100加入绢纺原料，于37℃摇床，180rpm震荡培养48h。其余步骤与实施例12和实施例13所述相同，在此不再赘述。

实施例15：

应用实施例10和11中的气单胞菌菌株进行如实施例12所示的绢纺原料除油的方法，在进行水洗处理时，利用水温为35℃的水清洗脱油后的绢纺原料3次。

实施例16：

应用实施例10和11中的产气肠杆菌菌株进行如实施例12所示的绢纺原料除油的方法，在进行水洗处理时，利用水温为30℃的水清洗脱油后的绢纺原料2次。

实施例17：

应用实施例10和11中的产气肠杆菌菌株进行如实施例12所示的绢纺原料除油的方法，在进行水洗处理时，利用水温为40℃的水清洗脱油后的绢纺原料4次。

实施例18：

应用实施例10和11中的产气肠杆菌菌株进行如实施例12所示的绢纺原料除油的方法，在进行烘干时，将水洗后的绢纺原料在100-110℃条件下烘干 2-4h。

实施例19：

运用实施例10和11中的产气肠杆菌菌株进行如实施例12所示的绢纺原料除油的方法，在进行残油率测定时，所用方法为索氏抽提法。

实施例20：

应用实施例10和11中的产气肠杆菌菌株进行绢纺原料除油的方法，包括以下步骤：

(1)脱油微生物的制备；

(2)绢纺原料微生物脱油处理；

(3)水洗：脱油结束后，取出绢纺原料，用水清洗；

(4)烘干：将水洗后的绢纺原料烘干；

在脱油微生物制备中，先配制种子培养基：3g/L的牛肉膏，10g/L的蛋白胨，5g/L的NaCl，pH为7.0；之后将所述的产气肠杆菌菌株和甘油配制成微生物甘油管储存液，并置于-80℃保藏(培养物：甘油＝7:3)；下一步以1-2％ (V/V)的接种量(优选的，以1％(V/V)或2％(V/V)的接种量)接种微生物甘油管储存液于种子培养基中，置于37℃进行摇床，180rpm震荡培养12 h，得到脱油微生物。

之后进行绢纺原料微生物脱油处理，先配制微生物脱油培养基：10g/L蛋白胨；2.5g/L蔗糖；5g/L NaCl，1g/L SDS；pH 7.0；之后以1-2％(V/V)的接种量(优选的，以1％(V/V)或2％(V/V)的接种量)接种如实施例3或实施例4所述制备得到的脱油微生物于脱油培养基中，按浴比2:100加入绢纺原料，于37℃摇床，180rpm震荡培养48h。

之后进行水洗，利用水温为30-40℃的水清洗脱油后的绢纺原料2-4次。

水洗之后进行烘干，将水洗后的绢纺原料在100-110℃条件下烘干2-4h。

之后进行索氏抽提，测定残油率。

将按照实施例12中的步骤和条件进行脱油处理的绢纺原料结果作为实验组，并另外制备一组不接种该微生物菌株的绢纺原料结果作为对照组，将两组结果分别进行残油率的计算，结果如表1所示，显示实验组的残油率为 0.17％，远低于对照组的0.48％的残油率，由此可见，本发明所提供的微生物菌株能在较短时间内有效降解绢纺原料原料中的油脂，脱油效率高。

表1产气肠杆菌脱油效率

以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明做任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化，均落入本发明的保护范围之内。

一种微生物菌株及其在绢纺原料除油中的应用专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。