专利摘要
本发明公开了一种氧化聚蔗糖修饰环氧化物水解酶及在拆分环氧氯丙烷中的应用，所述酶将氧化聚蔗糖和环氧化物水解酶溶于0.2M、pH8.0、磷酸盐缓冲液中，混匀后于0‑15℃，600rpm反应3‑30h，蒸馏水透析，取截留液用体积浓度50％乙醇水溶液沉淀，取沉淀，获得聚蔗糖修饰的环氧化物水解酶；本发明通过聚蔗糖对环氧化物水解酶进行化学修饰，环氧化物水解酶的比活力和热稳定性得到大幅度提高，在光学纯环氧化物的酶法制备应用中前景广阔。该酶生产方法简便，成本较低，具有广阔的工业应用前景。
权利要求
1.一种氧化聚蔗糖修饰环氧化物水解酶，其特征在于所述酶按如下方法制备：(1)氧化聚蔗糖：将聚蔗糖溶于0.25M NaIO
2.如权利要求1所述氧化聚蔗糖修饰环氧化物水解酶，其特征在于步骤(2)所述环氧化物水解酶酶活为10～1000U/mg。
3.如权利要求1所述氧化聚蔗糖修饰环氧化物水解酶，其特征在于步骤(2)所述环氧化物水解酶是由含环氧化物水解酶基因的菌株经发酵培养获得的湿菌体分离提取的纯酶；所述菌株包括黑曲霉(Aspergillus niger)、放射性土壤农杆菌(Agrobacteriumradiobacter)或粘红酵母菌(Rhodotorula glutinis)。
4.如权利要求3所述氧化聚蔗糖修饰环氧化物水解酶，其特征在于所述环氧化物水解酶基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.2所示。
5.如权利要求1所述氧化聚蔗糖修饰环氧化物水解酶，其特征在于步骤(2)所述磷酸盐缓冲液体积用量以环氧化物水解酶质量计为0.1-10mL/mg。
6.如权利要求3所述氧化聚蔗糖修饰环氧化物水解酶，其特征在于所述环氧化物水解酶按如下方法制备：
(1)湿菌体：
将含环氧化物水解酶基因的菌株接种至斜面培养基，在37℃培养12h，获得斜面菌体；所述斜面培养基终浓度组成为：蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，氯化钠10g/L，琼脂20g/L，溶剂为去离子水，pH值自然；
将斜面菌体接种至种子培养基，在37℃培养10h，获得种子液；所述种子培养基终浓度组成为蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，氯化钠10g/L，溶剂为去离子水，pH值自然；
将种子液以体积浓度2％的接种量接种至含终浓度50μg/mL卡那霉素的发酵培养基中，在37℃恒温培养至OD
(2)环氧化物水解酶的分离纯化
取步骤(1)制备的湿菌体于pH 8.0、200mM PBS缓冲液中悬浮，震荡摇匀后在超声波功率为300W下破碎，超声频率1s间歇1s，破碎时间为20min，破碎液于10000r/min，4℃条件下离心10min去除细胞碎片，所得上清液即为粗酶液；将粗酶液用Ni-NTA进行纯化，先用上样缓冲液平衡Ni-NTA柱30min，接着上样粗酶液，然后用上样缓冲液以1mL/min的速度洗脱以除去未吸附的蛋白，最后用洗脱缓冲液以1mL/min的速度洗脱，收集目标蛋白；将目标蛋白在20mM，pH 8.0，0℃的PBS缓冲液中透析过夜，取截留液冻干，获得纯化的环氧化物水解酶；所述上样缓冲液为含500mM NaCl和20mM咪唑的20mM PBS缓冲液，pH 8.0；所述洗脱缓冲液为含500mM NaCl和500mM咪唑的20mM PBS缓冲液，pH 8.0。
7.一种权利要求1所述氧化聚蔗糖修饰环氧化物水解酶在拆分环氧氯丙烷中的应用。
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于所述应用方法为：以pH8.0、0.2M的PBS缓冲液为反应介质，以氧化聚蔗糖修饰环氧化物水解酶为催化剂、以外消旋环氧氯丙烷为底物构成反应体系，在温度35℃、转数100rpm下进行反应，反应完全后，将反应液分离纯化，获得R-环氧氯丙烷；所述反应体系中，底物终浓度800mM，催化剂用量为100～1000U/ml。
一种氧化聚蔗糖修饰环氧化物水解酶及应用专利购买费用说明
Q：办理专利转让的流程及所需资料
A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。
1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。
2：按规定缴纳著录项目变更手续费。
3：同时提交相关证明文件原件。
4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。
Q:专利著录项目变更费用如何缴交
A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式
Q：专利转让变更，多久能出结果
A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。
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