专利摘要

本发明公开了一种用于抗肿瘤的化合物，该化合物为B‑降‑3‑肟基胆甾‑4‑烯‑6‑(4'‑苯基)缩胺硫脲，其化学式如式5所示：或者该化合物为3‑氮杂‑4‑氧代‑6‑(2'‑(5'‑甲氨基)噻二唑)‑A‑同‑B‑降胆甾‑4a‑烯，其化学式如式6所示：本发明还公开了化合物的制备方法，包括如下步骤：由胆甾醇出发所制备得到的化合物1经Jone’s试剂氧化得到化合物2，之后化合物2与甲基缩氨硫脲和苯基缩氨硫脲各自分别反应，分别得到化合物3a和3b，然后对化合物3a和3b的3‑位羰基分别进行肟化，且分别得到化合物4和化合物5，所述化合物5为B‑降‑3‑肟基胆甾‑4‑烯‑6‑(4'‑苯基)缩胺硫脲。本发明还公开了化合物用于抗肿瘤的用途。本发明还公开了化合物用于制备治疗肺癌药物的用途。

权利要求

1.用于抗肿瘤的化合物，其特征在于，该化合物为3-氮杂-4-氧代-6-(2'-(5'-甲氨基)噻二唑)-A-同-B-降胆甾-4a-烯，其化学式如式6所示：

2.一种如权利要求1所述的化合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

由胆甾醇出发所制备得到的化合物1经Jone’s试剂氧化得到化合物2，之后化合物2与甲基缩氨硫脲和苯基缩氨硫脲各自分别反应，分别得到化合物3a和3b，然后对化合物3a和3b的3-位羰基分别进行肟化，且分别得到化合物4和化合物5，所述化合物5为B-降-3-肟基胆甾-4-烯-6-(4'-苯基)缩胺硫脲。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，还包括如下步骤：将所述化合物4经过Beckman重排及6-位取代基的环化反应合成化合物6，所述化合物6为3-氮杂-4-氧代-6-(2'-(5'-甲氨基)噻二唑)-A-同-B-降胆甾-4a-烯。

4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述化合物2与所述甲基缩氨硫脲和苯基缩氨硫脲的摩尔比为5:6。

5.权利要求1所述的化合物用于制备治疗肺癌药物的用途。

说明书

技术领域

本发明属于化学物合成及应用技术领域，涉及一种用于抗肿瘤的化合物及其制备方法和用途。

背景技术

癌症是危害人类健康的一种主要疾病，攻克恶性肿瘤是现代医学的难题，也是当今制医药工业面临的最大挑战。目前，各种不同类型的抗肿瘤药物不断出现并在临床上获得应用，但是在临床上使用的抗肿瘤药物由于其对人体组织造成的毒性较大，极大地限制了它们的使用范围。因此，寻找高效、高选择性和低毒的抗癌药物是抗癌药物开发的主要方向。

在癌症患者中，肺癌是死亡率最高的病种之一。在抗肺癌药物中，目前临床上获得应用的有特罗凯、易瑞沙、恩度、异环磷酰胺、凯美纳等，其中凯美纳是我国第一个具有完全自主知识产权的抗肺癌药物。甾体化合物作为抗肿瘤药物的研究开发，近年来也获得了快速的发展。如用于治疗前列腺增生的药物Finasteride，用于治疗晚期前列腺癌的药物雌莫司汀磷酸钠(Estramustine phosphate sodium)、醋酸阿比特龙和用于治疗绝经妇女乳腺癌的药物Exemestane，以及最近由EntreMed公司开发的作为单一疗法用于多发性骨髓瘤和前列腺癌治疗的抗癌药物2-甲氧雌二醇，它们都属于甾体抗肿瘤药物。1992年Merck公司上市的用于治疗前列腺增生的药物Finasteride属于甾体酰胺类化合物。近年来在抗肿瘤药物的研究中，还有过一些对甾体扩环内酰胺类化合物的报道，例如胆甾-4-烯-B-同环内酰胺甾体化合物(Natalija M. Mira S.Bielakoviá, Synthesis of somesteroidal oximes,lactams,thiolactams and their antitumor activities,steroids,2007,72:406–414)、雄甾-B-同环内酰胺类甾体化合物(Anna I.Koutsourea,MandisA.Fthanasios Papageorgiou,George N Pairas Papagerous,George N.Pairas andSotiris S.Nikolaropoulos.Bioorganic & Medical Chemistry,2008,16:5207-5212)、A-同环内酰胺甾体氮芥化合物(Dimitrios Trafalis,Elena Geromichalou,PanagiotisDalezis,Nikolaos Nikoleousakos,Vasiliki Sarli.Steroids,2016,115:1–8.)等，上述的某些化合物在体外对某些肿瘤细胞具有较强的细胞毒性。我们课题组也对此类化合物进行了研究，提供了发明专利：“6-取代-4-氮杂-A-homo-3-氧代甾体化合物及其在制备抗肿瘤药物中的应用”(崔建国，黄燕敏，周爱民，中国发明专利，申请号：201010107528.0；专利号：ZL 2010 1 0107528.0)，“一类具有[6-5-6-6]甾核结构B-降-D-homo-内酰胺甾体化合物的合成方法”(黄燕敏，林启福，崔建国，甘春芳，肖琦，刘亮，中国发明专利，申请号：201310184259.1；专利号：ZL201310184259.1.)。并公开发表了系列相关研究论文(Huang,Y.M.；Cui,J.G.；Zhong,Z.G.；Gan,C.F.；Zhang,W.Y.；Song,H.C.Bioorg.Med.Chem.Lett.2011,21,3641；Huang,Y.M.；Cui,J.G.；Chen,S.J.；Gan,C.F.；Zhou,A.M.Steroids 2011,76,1346；Huang,Y.M.；Chen,S.J.；Cui,J.G.；Gan,C.F.；Liu,Z.P.；Wei,Y.L.；Song,H.C.Steroids 2011,76,690；Yanmin HUANG,Jianguo CUI,SijingChen,Chunfang GAN,Qiucui YAO,Qifu Lin.Med.Chem.Lett.,2013,23,2265-2267；Jianguo Cui,Qifu Lin,Chunfang Gan,Qiucui Yao,Wei Su,Yanmin Huang.Steroids2014,79:14–18；Yanmin Huang,Jianguo Cui,Qiaoxia Zeng,Chun Zeng,Quan Chen,AiminZhou.Steroids 2012,77:829–834；Yanmin Huang,Jianguo Cui,Sijing Chen,Qifu Lin,Huacan Song,Chunfang Gan,Bin Su,Aimin Zhou,Mar.Drugs 2014,12,1715-1731；Jianguo Cui,Qifu Lin,Yanmin Huang,Chunfang Gan,Qiucui Yao,Yingliang Wei,QiXiao,Erbin Kong.Med Chem Res.,2015,24(7),2906-2915)，研究结果表明A-同及B-同胆甾类甾体内酰胺化合物具有很好的抗肿瘤活性。

B-降甾体化合物，是一类微量存在于自然界的天然甾体衍生物。Higuchi研究小组在日本海绵Stelletta hiwasaensis中分离得到具有B-降结构的甾体衍生物Orostanal，研究表明该化合物具有显著抑制肿瘤细胞生长增殖活性(Miyamoto,T.；Kodama,K.；Aramaki,Y.et al.Tetrahedron Lett.,2001,42:6349)；Xiaomei Wei研究小组从加勒比海海绵Svenzea zeai中分离得到了另一个具有很好抗结核杆菌功效的B-降结构甾体衍生物(WeiX,Rodríguez AD,Wang Y,Franzblau SG.Tetrahedron Lett 2007；48:8851-8854.)；另外，我们对B-降甾体化合物进行了广泛研究，提供了一类“B-降-3,6-二取代胆甾烷化合物及其制备方法和在抗肿瘤药物中的应用”的发明专利(崔建国，范良华，甘春芳，黄燕敏，中国专利号：ZL 2011 1 0179146.3)。同时，在期刊上公开发表了相关研究论文(Chunfang Gan,Lianghua Fan,Jianguo Cui,Yanmin Huang,Yanxiao Jiao,Wanxin Wei.Steroids 2012,77:1061-1068；Chunfang Gan,Lianghua Fan,Yanmin Huang,Zhiping Liu,JianguoCui.Med.Chem.2013,9:846-854；甘春芳、李伟玉、林启福、黄燕敏、崔建国，化学试剂，2013,35(3)，218-222；Chunfang Gan,Qifu Lin,Jianguo Cui,Jidan Feng,Jinni Guo,HuoyingLiao,Yanmin Huang.Steroids 2014,79:37-43；Jianguo Cui,Binbin Qi,Chunfang Gan,Zhipin Liu,Hu Huang,Qifu Lin,Dandan Zhao,Yanmin Huang.Mar.Drugs,2015,13,2488-2504.)。

但是，在甾体的甾核中同时引入A-同及B-降结构，制备A-同-B-降甾体衍生物，目前文献中未见报导。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题和/或缺陷，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供用于抗肿瘤的化合物。

本发明另有一个目的是提供所述的化合物的制备方法。

本发明再有一个目的是提供所述的化合物用于抗肿瘤的用途。

本发明再有一个目的是提供所述的化合物用于制备治疗肺癌药物的用途。

为此，本发明提供的技术方案为：

用于抗肿瘤的化合物，该化合物为B-降-3-肟基胆甾-4-烯-6-(4'-苯基)缩胺硫脲，其化学式如式5所示：

或者该化合物为3-氮杂-4-氧代-6-(2'-(5'-甲氨基)噻二唑)-A-同-B-降胆甾-4a-烯，其化学式如式6所示：

一种所述的化合物的制备方法，包括如下步骤：

由胆甾醇出发所制备得到的化合物1经Jone’s试剂氧化得到化合物2，之后化合物2与甲基缩氨硫脲和苯基缩氨硫脲各自分别反应，分别得到化合物3a和3b，然后对化合物3a和3b的3-位羰基分别进行肟化，且分别得到化合物4和化合物5，所述化合物5为B-降-3-肟基胆甾-4-烯-6-(4'-苯基)缩胺硫脲。

优选的是，所述的制备方法中，还包括如下步骤：将所述化合物4经过Beckman重排及6-位取代基的环化反应合成化合物6，所述化合物6为3-氮杂-4-氧代-6-(2'-(5'-甲氨基)噻二唑)-A-同-B-降胆甾-4a-烯。

优选的是，所述的制备方法中，所述化合物2与所述甲基缩氨硫脲和苯基缩氨硫脲的摩尔比为5:6。

所述的化合物用于抗肿瘤的用途。

所述的化合物用于制备治疗肺癌药物的用途。

本发明至少包括以下有益效果：

通过体外抑制癌细胞生长增殖活性试验表明，本发明的B-降-胆甾烷衍生物5和A-同-B-降-胆甾烷衍生物6对肺癌细胞A549具有很好的选择性生长增殖抑制作用，而对人体正常细胞人肾上皮细胞(HEK293T)没有明显的细胞毒性。因此，本发明的B-降-胆甾烷衍生物和A-同-B-降-胆甾烷衍生物可用于制备治疗癌症的药物。

本发明提供的化合物6为A-同及B-降结构，是一种新型的物质，具有广阔的治疗癌症的前景。

本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。

具体实施方式

下面对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。

应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不配出一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。

本发明提供一种用于抗肿瘤的化合物，该化合物为B-降-3-肟基胆甾-4-烯-6-(4'-苯基)缩胺硫脲，其化学式如式5所示：

或者该化合物为3-氮杂-4-氧代-6-(2'-(5'-甲氨基)噻二唑)-A-同-B-降胆甾-4a-烯，其化学式如式6所示：

本发明还提供一种所述的化合物的制备方法，包括如下步骤：

由胆甾醇出发所制备得到的化合物1经Jone’s试剂氧化得到化合物2，之后化合物2与甲基缩氨硫脲和苯基缩氨硫脲各自分别反应，分别得到化合物3a和3b，然后对化合物3a和3b的3-位羰基分别进行肟化，且分别得到化合物4和化合物5，所述化合物5为B-降-3-肟基胆甾-4-烯-6-(4'-苯基)缩胺硫脲。

在上述方案中，作为优选，该制备方法中，还包括如下步骤：将所述化合物4经过Beckman重排及6-位取代基的环化反应合成化合物6，所述化合物6为3-氮杂-4-氧代-6-(2'-(5'-甲氨基)噻二唑)-A-同-B-降胆甾-4a-烯。

在本发明的其中一个实施例中，作为优选，该制备方法中，所述化合物2与所述甲基缩氨硫脲和苯基缩氨硫脲的摩尔比为5:6。

本发明还提供所述的化合物用于抗肿瘤的用途。

本发明还提供所述的化合物用于制备治疗肺癌药物的用途。

实施例1

B-降-3-氧代胆甾-4-烯-6-醛(2)的制备

取化合物1 0.5mmol，置于100mL烧瓶中，加入50mL丙酮使之溶解。加入新制Jonesreagent 2-4mL，室温下搅拌至TLC(乙酸乙酯：石油醚＝1：4)检测无原料点存在。旋干大部分丙酮，加入适量水，用二氯甲烷萃取。有机相用饱和NaHCO3和NaCl溶液洗涤，无水Na2SO4干燥，除去溶剂得粗产物，用300-400目硅胶柱层析分离(流动相：乙酸乙酯：石油醚＝1：4)，干燥得淡黄色粉末状产物，产率94％，m.p.105-106℃。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ:0.67(3H,s,18-CH3),0.82(6H,d,J＝6.6,26-and 27-CH3),0.90(3H,d,J＝6.3,21-CH3),1.22(3H,s,19-CH3),2.44(1H,dd,J＝18,3.9,C4-H),2.67-2.55(1H,m,C8-H),6.22(1H,s,C6-H)；13C NMR(CDCl3,75MHz)δ:205.98(3-C＝O),200.15(6-CHO),162.31(5-C),122.51(7-C),54.87(17-C),53.04(14-C),51.15(9-C),50.31(13-C),44.59(8-C),39.93(10-C),39.40(4-C),38.91(24-C),36.17(12-C),36.03(2-C),35.64(22-C),34.07(20-C),28.66(1-C),27.94(16-C),23.85(25-C),23.62(15-C),22.80(23-C),22.54(26-and 27-C)，20.95(11-C)，18.82(21-C),17.27(19-C),12.18(18-C)；IR(KBr)ν:3434.07,2982.91,2883.18,1723.82,1681.44,1629.09,1459.86,1382.27,1287.82,941.00；HREIMS(m/z):[M+H]+399.3259(calcd.forC27H43O2,399.3263).

实施例2

B-降-3-氧代胆甾-4-烯-6-(4'-甲基)缩胺硫脲(3a)的制备

取化合物2 0.5mmol置于100mL烧瓶中，加入50mL无水乙醇使之溶解。加入NH2NHCSNHCH3 0.6mmol，80℃下，搅拌至TLC(乙酸乙酯：石油醚＝1：2)检测无原料点存在。旋干大部分乙醇，加水和二氯甲烷萃取，有机相用饱和NaHCO3和饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸出有机溶剂，粗产物用300-400目硅胶柱层析分离(展开剂：乙酸乙酯：石油醚＝1：2)得淡黄色粉末状产物，产率89.4％，m.p.196-198℃。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ:0.70(3H,s,18-CH3),0.87(6H,d,J＝6.6,26-and 27-CH3),0.94(3H,d,J＝6.3,21-CH3),1.11(3H,s,19-CH3),2.46-2.34(1H,m,C4-H),2.62(1H,dd,J＝17.1,4.5,C8-H),3.24(3H,d,J＝4.8,N-CH3),6.73(1H,s,C6-H),7.69(1H,br s,N-H),8.82(1H,s,N-N-H)；13C NMR(CDCl3,75MHz)δ:205.35(3-C),175.50(C＝S)，152.37(6-C),146.10(5-C),125.15(7-C),54.94(17-C),53.35(14-C),51.24(9-C),50.13(8-C),44.73(10-C),39.61(13-C),39.44(4-C),39.04(24-C),36.22(12-C),35.70(2-C),34.01(22-C),31.29(20-C),28.77(N-CH3),28.00(1-C),23.89(16-C),23.72(25-C),22.82(15-C),22.56(26-and 27-C),21.31(23-C),21.05(11-C),18.85(21-C),17.63(19-C),12.22(18-C)；IR(KBr)ν:3439.06,2910.53,2130.19,1649.03,1437.12,1404.71,1312.47,1025.16,983.46,706.86；HREIMS(m/z):[M+H]+486.3592(calcd.for C29H48N3OS,486.3518).

B-降-3-氧代胆甾-4-烯-6-(4'-苯基)缩胺硫脲(3b)的制备

取化合物2 0.5mmol置于100mL烧瓶中，加入50mL无水乙醇使之溶解。加入NH2NHCSNHPh 0.6mmol，80℃下搅拌至TLC(乙酸乙酯：石油醚＝1：2)检测无原料点存在。旋干大部分乙醇，加水和二氯甲烷萃取，有机相用饱和NaHCO3和饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸出有机溶剂，粗产物用300-400目硅胶柱层析分离(展开剂：乙酸乙酯：石油醚＝1：2)得淡黄色粉末状产物，产率78％，m.p.211-212℃。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ；0.72(3H,s,18-CH3),0.883(3H,d,J＝6.6,26-or 27-CH3),0.887(3H,d,J＝6.6,26-or 27-CH3),0.96(3H,d,J＝6.3,21-CH3),1.14(3H,s,19-CH3),2.55-2.46(1H,m,C4-H),2.67(1H,td,J＝18.3,5.1,C8-H),6.82(1H,s,C6-H),7.26(1H,t,J＝6.0,4'-PhH),7.41(2H,t,J＝7.8,3',5'-PhH),7.69(2H,d,J＝7.5,2',6'-PhH),8.92(1H,s,N-H),9.42(1H,s,-NH-Ph)；13C NMR(CDCl3,75MHz)δ:205.15(3-C),175.69(C＝S),152.69(5-C),146.47(7-C),137.67(1'-PhC),128.81(3',5'-PhC),126.19(6-C),124.96(4'-PhC),123.88(2',6'-PhC),54.98(17-C),53.38(14-C),51.26(9-C),50.15(8-C),44.74(10-C),39.99(13-C),39.66(4-C),39.45(24-C),39.07(12-C),36.24(2-C),35.69(22-C),34.07(20-C),28.75(1-C),28.69(16-C),27.99(25-C),23.90(15-C),23.73(23-C),22.80(26-or 27-C),22.54(26-or27-C),21.31(11-C),18.86(21-C),17.62(19-C),12.23(18-C)；IR(KBr)ν:3371.75,3000.28,2910.53,2254.85,1646.54,1444.60,1404.71,1312.47,1025.36,953.46,831.30；HREIMS(m/z):[M+H]+548.3648(calcd.for C34H50N3OS,548.3675).

实施例3

B-降-3-肟基胆甾-4-烯-6-(4'-甲基)缩胺硫脲(4)的制备

取化合物3a 0.5mmol置于100mL烧瓶中，加入50mL无水乙醇使之溶解。加入NH2OH.HCl 0.7mmol及CH3COONa.3H2O 0.7mmol,80℃下搅拌至TLC(乙酸乙酯：石油醚＝1：2)检测无原料点存在。旋干大部分乙醇，加入适量水，用二氯甲烷萃取，取有机相，用饱和NaHCO3和饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸出有机溶剂，粗产物用300-400目硅胶柱层析分离(展开剂：乙酸乙酯：石油醚＝1：2)得黄色粉末状产物，产率80.0％，m.p.146-148℃。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ:0.73(3H,s,18-CH3),0.88(6H,d,J＝6.6,26-and27-CH3),0.95(3H,d,J＝6.3,21-CH3),1.00(3H,s,19-CH3),3.23(3H,d,J＝4.5,N-CH3),7.48(1H,s,C6-H),7.67(2H,br s,N-H and N-OH),8.76(1H,s,N-NH)；13C NMR(CDCl3,75MHz)δ:178.41(C＝S),158.32(3-C),150.05(6-C),148.03(5-C),129.92(7-C),56.16(17-C),55.10(14-C),52.99(9-C),44.80(8-C),43.57(10-C),41.65(13-C),39.48(4-C),39.09(24-C),36.21(12-C),35.61(2-C),33.32(22-C),31.18(20-C),28.00(N-CH3),27.95(1-C),25.03(16-C),23.88(25-C),22.82(15-C),22.56(26-and 27-C),21.04(23-C),20.78(11-C),18.88(21-C),17.66(19-C),12.51(18-C)；IR(KBr)ν:3366.76,2950.42,2927.98,2866.68,1626.59,1549.31,1481.99,1412.10,1222.71,1098.87,953.46；HREIMS(m/z):[M+H]+501.3613(calcd.for C29H49N4OS,501.3627).

实施例4

B-降-3-肟基胆甾-4-烯-6-(4'-苯基)缩胺硫脲(5)的制备

取化合物3b 0.5mmol置于100mL烧瓶中，加入50mL无水乙醇使之溶解。加入NH2OH.HCl 0.7mmol及CH3COONa.3H2O 0.7mmol,80℃下搅拌至TLC(乙酸乙酯：石油醚＝1：2)检测无原料点存在。旋干大部分乙醇，加水和二氯甲烷萃取，取有机相，用饱和NaHCO3和饱和NaCl溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸出有机溶剂，粗产物用300-400目硅胶柱层析分离(展开剂：乙酸乙酯：石油醚＝1：2)得黄色粉末状产物，产率74.5％，m.p.152-153℃。1H NMR(CDCl3,300MHz)δ:0.74(3H,s,18-CH3),0.879(3H,d,J＝6.3,26-or 27-CH3),0.882(3H,d,J＝6.3,26-or 27-CH3),0.95(3H,d,J＝6.3,21-CH3),1.02(3H,s,19-CH3),2.64(1H,dd,J＝17.4,4.8,C7-H),6.78(1H,t,J＝7.5,4'-PhH),7.26-7.15(2H,m,3',5'-PhH),7.40(2H,t,J＝7.5,3',5'-PhH),7.57(1H,s,C6-H),7.68(2H,d,J＝7.5,2',6'-PhH),8.96(1H,s,N-H),9.43(1H,s,-NH-Ph)；13C NMR(CDCl3,75MHz)δ：175.64(C＝S),158.04(3-C),148.73(7-C),146.27(5-C),137.83(1'-PhC),128.76(3',5'-PhC),126.05(4'-PhC),124.03(2',6'-PhC),118.67(6-C),115.24,56.20(17-C),55.11(14-C),52.99(9-C),44.86(8-C),43.57(10-C),41.69(13-C),39.48(4-C),39.10(24-C),36.21(12-C),35.59(2-C),33.34(22-C),29.72(20-C),28.64(1-C),25.04(16-C),23.89(25-C),22.84(15-C),22.58(26-and 27-C),21.09(23-C),21.05(11-C),18.89(21-C),17.67(19-C),12.53(18-C)；IR(KBr)ν:3431.53,3002.77,2913.02,2120.22,1654.02,1434.63,1402.22,1317.45,1018.26,901.11,706.65；HREIMS(m/z):[M+H]+563.3770(calcd.for C34H51N4OS,563.3784).

实施例5

3-氮杂-4-氧代-6-(2'-5'-(4”-甲基氨基)噻二唑)-A-Homo-B-降胆甾-4a-烯(6)的制备

取化合物4 0.5mmol置于100mL烧瓶中，加入50mL无水THF使之溶解。冰水浴使反应温度稳定于0℃，氩气保护下滴加SOCl2 1.0mL(溶解于5mLTHF中)，搅拌反应至TLC(乙酸乙酯：石油醚＝2：1)检测无原料点存在。加水停止反应，旋干大部分THF，用二氯甲烷萃取，有机相用饱和NaHCO3和饱和NaCl溶液各洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤。减压蒸出有机溶剂，粗产物用300-400目硅胶柱层析分离(展开剂：乙酸乙酯：石油醚＝2:1)得黄色粉末状产物，产率72％，m.p.208-210℃。1H NMR(DMSO,300MHz)δ:0.70(3H,s,18-CH3),0.85(6H,d,J＝6.3,26-and 27-CH3),0.88(3H,d,J＝6.3,21-CH3),0.97(3H,s,19-CH3),2.88(1H,br d,J＝17.4,C7-H),3.23(1H,t,J＝9.6,C2-H),3.35(3H,s,N-CH3),6.85(1H,s,C4a-H),7.32(1H,s,N-H),11.44(1H,s,CO-NH)；13C NMR(DMSO,75MHz)δ:163.64(4-C),154.16(5-C),154.12(2-thiadiazole-C),142.16(5-thiadiazole-C),127.36(4a-C),55.78(9-C),54.94(17-C),51.38(14-C),49.81(7-C),43.84(8-C),38.99(13-C),38.95(1-C),38.91(10-C),36.06(24-C),35.52(12-C),35.32(22-C),32.61(20-C),32.58(N-CH3),28.31(2-C),28.26(16-C),27.86(25-C),23.74(15-C),23.15(23-C),23.00(26-C),22.85(27-C),20.42(11-C),18.95(21-C),17.34(19-C),12.52(18-C)；IR(KBr)ν:3438.67,2967.89,2928.48,2868.17,1721.33,1671.47,1459.56,1439.61,1377.29,1103.08,938.50；HREIMS(m/z):[M+H]+499.3502(calcd.for C29H46N4OS,499.3471).

实施例6

本发明的B-降-胆甾烷衍生物5和A-同-B-降-胆甾烷衍生物6，可从胆甾醇出发，经过臭氧化断裂、缩合关环、氧化、肟化及重排的化学方法转化而成。

制备本发明B-降-胆甾烷衍生物5和A-同-B-降-胆甾烷衍生物6的反应式如下所示：

由胆甾醇出发所制备得到的化合物1经Jone’s试剂氧化得到化合物2，化合物2与甲基缩氨硫脲或苯基缩氨硫脲反应得到化合物3a和3b。然后，对化合物3a和3b的3-位羰基进行肟化分别得到化合物4及5。最后，化合物4通过Beckman重排及6-位取代基的环化反应得到化合物6。

实施例7

本实施例是采用本发明所述的B-降-胆甾烷衍生物5和A-同-B-降-胆甾烷衍生物6对某些肿瘤细胞进行抑制肿瘤细胞生长增值活性试验的测试结果。

选择本发明的B-降-胆甾烷衍生物5和A-同-B-降-胆甾烷衍生物6试验其对人宫颈癌细胞株(HeLa)，鼻咽癌细胞株(CNE-2)，肝癌细胞株(HEPG2)，肺癌细胞株(A549)和人肾上皮细胞(HEK293T)的细胞毒性。采用MTT方法，进行体外细胞毒性测定。在96孔板中培养的对数生长期细胞中加入不同浓度的B-降-胆甾烷衍生物5和A-同-B-降-胆甾烷衍生物6，同时进行3个平行试验，与对照组进行比较。培养72小时后，加入MTT，测定其吸光度，分别计算抑制肿瘤细胞生长增殖到50％时化合物的浓度，以IC50值表示，结果如表1所示：

表1.B-降-胆甾烷衍生物5和A-同-B-降-胆甾烷衍生物6体外抑制肿瘤细胞生长增殖活性(IC50,μmol/L)

Comp.HeLaCNE-2HEPG2A-549HEK293T2>80>80>80>80>803a>80>80>80>80>803b>80>80>80>80>804>80>80>80>80>80518.7>80337.8>80628.5>80308.0>80Cisplatin15101020.811

从表1中所列化合物对人宫颈癌细胞、鼻咽癌细胞、肝癌细胞、肺癌细胞株抑制作用的IC50值可以看出，本发明所述的B-降-胆甾烷衍生物5和A-同-B-降-胆甾烷衍生物6对肺癌细胞A-549具有很好的选择性抑制生长增殖作用，优于同条件下的阳性对照物顺铂Cisplatin。然而，化合物5和6对人正常肾上皮细胞(HEK293T)的抑制IC50值却大于80μmol/L。这表明该化合物5和6对肿瘤细胞起到抑制的作用，但是对正常细胞没有伤害。

实施例8

化合物5和6用于制备治疗肺癌药物的用途

通过体外抑制癌细胞生长增殖活性试验表明，本发明的B-降-胆甾烷衍生物5和A-同-B-降-胆甾烷衍生物6对肺癌细胞A549具有很好的选择性生长增殖抑制作用，而对人体正常细胞人肾上皮细胞(HEK293T)没有明显的细胞毒性。因此，本发明的B-降-胆甾烷衍生物和A-同-B-降-胆甾烷衍生物可用于制备治疗癌症的药物。

本发明还提供一种用于抗肿瘤的药物，其含有上述B-降-胆甾烷衍生物5和A-同-B-降-胆甾烷衍生物6以及药学上可接受的辅助剂。该药物可以制成注射剂、片剂、丸剂、胶囊剂、悬浮剂或乳剂的形式使用，其给药途径可为口服，或经皮下、静脉或肌肉注射。

尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实施例。

用于抗肿瘤的化合物及其制备方法和用途专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。