专利摘要
本发明公开了一种反相高效液相色谱检测萘草胺与乙草胺的方法，具体包括以下步骤：步骤1，配置萘草胺和乙草胺标准溶液，步骤2，使用紫外‑可见分光光度计检测萘草胺标准溶液的吸收波长，根据萘草胺标准溶液的吸收波长设置高效液相色谱仪的检测参数，步骤3，使用高效液相色谱仪检测标准混合储备液，获得萘草胺与乙草胺的质量浓度‑峰面积回归方程，步骤4，根据待测样品的高效液相色谱检测结果计算待测样品中萘草胺与乙草胺的质量浓度；本发明通过合理设置检验参数，实现对萘草胺和乙草胺质量浓度的同时检测，检测过程中萘草胺与乙草胺互不影响，检测过程简单、检测结果准确。
权利要求
1.反相高效液相色谱检测萘草胺与乙草胺的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
步骤1，配置萘草胺和乙草胺标准溶液；
称取0.02g萘草胺溶于10mL容量瓶中，使用色谱纯甲醇溶液溶解、定容，制得质量浓度为2mg/mL的标准储备液，移取1mL萘草胺标准储备液于100mL容量瓶中，稀释、定容形成萘草胺标准溶液；
移取10mL质量浓度为10mg/mL的乙草胺置于100mL容量瓶中，用色谱纯甲醇稀释、定容制成质量浓度为1mg/mL的乙草胺标准溶液；
将萘草胺标准溶液与乙草胺标准溶液等体积混合后，使用色谱纯甲醇定容，配置成标准混合溶液，采用逐级稀释法按照由高浓度到低浓度的原则，使用色谱纯甲醇对标准混合溶液进行稀释、定容，获得一系列质量浓度比相同的标准混合储备液；
步骤2，使用紫外-可见分光光度计检测萘草胺标准溶液的吸收波长，然后根据萘草胺标准溶液的吸收波长设置高效液相色谱仪的检测参数；
高效液相色谱仪的检测参数为：高效液相色谱仪的固定相为Durashell C18，5μm.100A.4.6×250mm，流动相为体积比为80：20的乙腈与水，流动相流速为1mL/min，进样量为10μL，色谱柱的温度为30℃，检测波长为220nm；
步骤3，使用高效液相色谱仪检测标准混合工作液，获得标准混合储备液的液相色谱图，分别以乙草胺和萘草胺的质量浓度为横坐标，以乙草胺和萘草胺的峰面积为纵坐标，获得萘草胺与乙草胺的质量浓度-峰面积回归方程；
所述萘草胺质量浓度-峰面积线性回归方程为y＝1.9261x-0.4682，峰面积与质量浓度的相关系数为R
步骤4，以萘草胺与乙草胺的质量浓度-峰面积回归方程为标准，使用高效液相色谱仪检测待测样品，根据待测样品的峰面积计算待测样品中萘草胺与乙草胺的质量浓度。
说明书
技术领域
本发明属于化工检测技术领域，特别是涉及一种反相高效液相色谱检测萘草胺与乙草胺的方法。
背景技术
酰胺类除草剂主要通过抑制脂类的合成和细胞的生长、分裂，抑制杂草的生长，达到除草的目的，酰胺类除草剂能防除一年生禾本科杂草和部分阔叶杂草，但对多年生杂草的防除效果较差，酰胺类除草剂广泛应用于旱作地和水田，在环境里会有一定的残留和毒性；萘草胺和乙草胺作为酰胺类除草剂的典型代表，具有除草范围广泛、效果明显、价格低廉、方便施用和易于降解等优点，广泛应用于芽前除草。
通过相关研究报道可知，萘草胺和乙草胺具有较好的除草活性，但鲜少有报道对萘草胺和乙草胺标准混合储备液进行研究，对乙草胺的检测和分离多数采用正相液相色谱，正相液相体系具有溶剂极性低、柱压低等特点，能有效检测极性化合物，但溶剂价格高，不利于推广应用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种反相高效液相色谱检测萘草胺与乙草胺的方法，通过合理设置反相高效液相色谱检测条件，建立萘草胺和乙草胺的质量浓度与峰面积曲线，准确检测农残中的萘草胺与乙草胺含量。
本发明所采用的技术方案是，反相高效液相色谱检测萘草胺与乙草胺的方法，具体包括以下步骤：
步骤1，配置萘草胺和乙草胺标准溶液，
称取0.02g萘草胺溶于10mL容量瓶中，使用色谱纯甲醇溶液溶解、定容，制得质量浓度为2mg/mL的标准储备液，移取1mL萘草胺标准储备液于100mL容量瓶中，稀释、定容形成萘草胺标准溶液；
移取10mL质量浓度为10mg/mL的乙草胺置于100mL容量瓶中，用色谱纯甲醇稀释、定容制成质量浓度为1mg/mL的乙草胺标准溶液；
将萘草胺标准溶液与乙草胺标准溶液等体积混合后，使用色谱纯甲醇定容，配置成标准混合溶液，采用逐级稀释法按照由高浓度到低浓度的原则，使用色谱纯甲醇对标准混合溶液进行稀释、定容，获得一系列质量浓度比相同的标准混合储备液；
步骤2，使用紫外-可见分光光度计检测萘草胺标准溶液的吸收波长，然后根据萘草胺标准溶液的吸收波长设置高效液相色谱仪的检测参数；
步骤3，使用高效液相色谱仪检测标准混合储备液，获得标准混合储备液的液相色谱图，分别以乙草胺和萘草胺的质量浓度为横坐标，以乙草胺和萘草胺的峰面积为纵坐标，获得萘草胺与乙草胺的质量浓度-峰面积回归方程；
步骤4，以萘草胺与乙草胺的质量浓度-峰面积回归方程为标准，使用高效液相色谱仪检测待测样品，根据待测样品的峰面积计算待测样品中萘草胺与乙草胺的质量浓度。
进一步的，步骤2中高效液相色谱仪的检测参数为：高效液相色谱仪的固定相为Durashell C18，5µm.100A.4.6×250mm，流动相为体积比为50：50～80：20的乙腈与水，流动相流速为1mL/min，进样量为10µL，色谱柱的温度为30℃，检测波长为220nm、254nm和280nm。
进一步的，高效液相色谱仪的流动相为体积比为80：20的乙腈与水。
进一步的，高效液相色谱仪的检测波长为220nm。
进一步的，步骤3中获得的萘草胺质量浓度-峰面积线性回归方程为y=1.9261x-0.4682，峰面积与质量浓度的相关系数为R2=0.9986，乙草胺的质量浓度-峰面积线性回归方程为y=381.7x+0.7808，峰面积与质量浓度的相关系数为R2=0.9999。
本发明的有益效果是：本发明通过合理设置检测过程中的各项参数，使得溶液中萘草胺与乙草胺检测互不影响，检测过程简单、快速，灵敏度高且重复性好，检测结果准确、可靠，适用于不同质量浓度萘草胺和乙草胺混合试剂的检测。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1（a）、（b）分别是萘草胺、乙草胺的质量浓度-峰面积线性曲线图。
图2是实施例1的检测结果图。
图3是实施例2的检测结果图。
图4是实施例3的检测结果图。
图5是实施例4的检测结果图。
图6是实施例5的检测结果图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
反相高效液相色谱检测萘草胺与乙草胺的方法，具体包括以下步骤：
步骤1，萘草胺和乙草胺标准溶液的配置，
单一标准溶液：
称取0.02g萘草胺溶于10mL容量瓶中，使用色谱纯甲醇溶液溶解、定容，制得质量浓度为2mg/mL的标准储备液，移取1mL萘草胺标准储备液于100mL容量瓶中，稀释、定容形成萘草胺标准溶液；
移取10mL质量浓度为10mg/mL的乙草胺置于100mL容量瓶中，用色谱纯甲醇稀释、定容制成质量浓度为1mg/mL的乙草胺标准溶液；
标准混合储备液：
将萘草胺标准溶液与乙草胺标准溶液等体积混合后，使用色谱纯甲醇定容，配置成标准混合溶液，采用逐级稀释法按照由高浓度到低浓度的原则，使用色谱纯甲醇对标准混合溶液进行稀释、定容，获得一系列质量浓度比相同的标准混合储备液；
步骤2，使用紫外-可见分光光度计检测萘草胺的吸收波长，根据萘草胺的吸收波长设置高效液相色谱仪的检测参数；
用色谱纯甲醇将萘草胺标准溶液稀释至质量浓度为1µg/mL，在单色光波长为190~900nm的范围内进行波谱扫描，同时做空白实验以扣除溶剂对检测结果的影响，紫外可见分光光度计检测到萘草胺在波长为220nm处有最大吸收峰，在波长254nm处存在波谷，在280nm处存在吸收峰；
高效液相色谱仪的固定相为Durashell C18，5µm.100A.4.6×250mm，流动相为体积比为50：50～80：20的乙腈与水，流动相的流速为1mL/min，进样量为10µL，色谱柱的温度为30℃，检测波长为220nm、254nm和280nm；
步骤3，使用高效液相色谱仪对标准混合储备液进行检测，获得标准混合储备液的液相色谱图，分别以乙草胺和萘草胺的质量浓度为横坐标，以乙草胺和萘草胺的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，获得萘草胺与乙草胺的质量浓度-峰面积回归方程；
萘草胺质量浓度-峰面积线性回归方程为：y=1.9261x-0.4682，峰面积与质量浓度的相关系数R2=0.9986，乙草胺质量浓度-峰面积的线性回归方程为：y=381.7x+0.7808，峰面积与质量浓度的相关系数R2=0.9999，萘草胺和乙草胺的质量浓度与标准品峰面积呈良好的线性关系，线性方程曲线如图1（a）、（b）所示；
步骤4，使用高效液相色谱仪检测待测样品，通过将待测样品的峰面积代入萘草胺、乙草胺质量浓度-峰面积线性回归方程，获得待测样品中萘草胺和乙草胺的质量浓度。
本发明使用高效液相色谱仪对萘草胺和乙草胺进行检测，所获得的色谱图峰型良好，背景对检测结果影响小，检测结果准确，获得的质量浓度-峰面积回归曲线拟合性好，能有效检测待测萘草胺、乙草胺质量浓度。
实施例1
步骤1，萘草胺和乙草胺标准溶液的配置，
单一标准溶液：
称取0.02g萘草胺溶于10mL色谱纯甲醇中溶解、定容，再从中量取1mL溶液于容量瓶中，定容至100mL，配制得到质量浓度20µg/mL的萘草胺标准溶液；
量取10mL质量浓度为10mg/mL的乙草胺，用色谱纯甲醇定容至100mL，配制得到质量浓度1mg/mL的乙草胺标准溶液；
标准混合储备液：
分别移取5mL萘草胺标准溶液和5mL乙草胺标准溶液至10mL容量瓶中，用色谱纯甲醇稀释，配成乙草胺质量浓度：萘草胺质量浓度=50：1的标准混合溶液，采用逐级稀释法，移取不同体积的萘草胺和乙草胺标准混合溶液至10mL容量瓶中，用色谱纯甲醇稀释定容，配成乙草胺质量浓度：萘草胺质量浓度=50：1的标准混合储备液，冷藏保存、备用；
步骤2，使用紫外-可见分光光度计检测萘草胺的吸收波长，根据萘草胺的吸收波长设置高效液相色谱仪的检测参数如下，高效液相色谱仪的固定相为Durashell C18(5µm.100A.4.6×250mm)，流动相为体积比为80：20的乙腈与水，进样量为10µL，色谱柱的温度为30℃，流动相的流速为1mL/min，检测波长为220nm，对萘草胺和乙草胺的标准混合储备液进行分析检测，检测结果如图2所示。
实施例2
在实施例1其他检测条件不变的情况下，将高效液相色谱仪的检测波长改为254nm，对萘草胺和乙草胺的标准混合储备液进行分析检测，检测结果如图3所示。
实施例3
在实施例1其他检测条件不变的情况下，将高效液相色谱仪的检测波长改为280nm，对萘草胺和乙草胺的标准混合储备液进行分析检测，检测结果如图4所示。
对比图2、图3、图4可知，在检测波长为254nm和280nm时，萘草胺和乙草胺的标准混合储备液的响应信号较弱，背景干扰较多，分析检测结果不够准确，检测波长为220nm时，检测的标准混合储备液的峰型相对较好，响应信号强，背景干扰少，检测效果好。
实施例4
在实施例1其他检测条件不变的情况下，改变高效液相色谱仪中的流动相乙腈和水的体积比为50：50，对萘草胺和乙草胺的标准混合储备液进行分析检测，检测结果如图5所示。
实施例5
在实施例1其他检测条件不变的情况下，改变高效液相色谱仪中的流动相乙腈和水的体积比为70：30，对萘草胺和乙草胺的标准混合储备液进行分析检测，检测结果如图6所示；对比图3、图5和图6可知，当乙腈和水比例为50:50时，检测图谱峰型较差，背景干扰较多；乙腈和水比例为70:30时，萘草胺的保留时间比较小，乙草胺的色谱峰上有分叉现象的存在，且基线不平稳；当乙腈和水比例为80:20时，峰型相对较好，基线平稳，干扰较少，对萘草胺和乙草胺标准混合储备液的检测效果最好。
本说明书中的各个实施例均采用相关的方式描述，各个实施例之间相同相似的部分互相参见即可，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处。尤其，对于系统实施例而言，由于其基本相似于方法实施例，所以描述的比较简单，相关之处参见方法实施例的部分说明即可。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用于限定本发明的保护范围。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换、改进等，均包含在本发明的保护范围内。
反相高效液相色谱检测萘草胺与乙草胺的方法专利购买费用说明
Q：办理专利转让的流程及所需资料
A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。
1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。
2：按规定缴纳著录项目变更手续费。
3：同时提交相关证明文件原件。
4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。
Q:专利著录项目变更费用如何缴交
A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式
Q：专利转让变更，多久能出结果
A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。
动态评分
0.0