IPC分类号 : C07D277/46,A61K31/426,A61P35/00
专利摘要
本发明涉及化学结构式Ⅰ所示的N‑(4‑烷基‑5‑苄基噻唑‑2‑基)氨基烷酰胺或其盐;式中R选自:C1~C2烷基、C3~C4直链或C3~C4支链烷基;Y1、Y3选自:氢、甲基、乙基、羟基、甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴或碘;Y2、Y4选自:氢、甲基、乙基;n选自:1~9;盐选自:盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、苹果酸盐、乳酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐或富马酸盐。N‑(4‑烷基‑5‑苄基噻唑‑2‑基)氨基烷酰胺或其盐在制备抗癌药物中的应用。
权利要求
1.化学结构式Ⅰ所示的化合物或其盐:
其中,R选自:叔丁基;Y
2.权利要求1所述的化合物的制备方法;其特征在于它制备反应如下:
其中,R、Y
3.N-(4-叔丁基-5-(2,4-二氯苄基)噻唑-2-基)-4-氨基丁酰胺或其盐在制备抗宫颈癌药物中的应用。
4.N-(4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄基)噻唑-2-基)氯乙酰胺或其盐在制备抗人肺腺癌或人乳腺癌药物中的应用。
说明书
技术领域
本发明涉及新化合物的制备方法与应用,具体是N-(4-烷基-5-苄基噻唑-2-基)氨基烷酰胺及其作为制备抗癌药的应用。
背景技术
Holla等[European Medical Chemistry,2003,38:313-318]描述了2-芳氨基-4-(2,4-二氯-5-氟苯基)噻唑的制备与生物活性;中国发明专利(CN1018445026,CN101781269)描述了5-(4-氯苯甲基)-4-叔丁基噻唑衍生物和4-叔丁基-2-(硝基苄亚氨基)噻唑的制备及其作为制备抗肿瘤药物的应用。中国发明专利(CN101277692A,2008.10.01公开)描述了5-苄基-4-甲基/三氟甲基-2-芳氨基噻唑的制备。中国发明专利(CN102070556A,2011.5.25公开;CN102067845A,2011.5.25公开)描述了5-苄基-4-烷基-2-芳氨基噻唑氢溴酸盐的制备。中国发明专利(CN102964312A,2013.3.13公开;CN102924400A,2013.2.13公开;CN102936229A;2013.2.20公开)描述了N-(4-叔丁基-5-苄基噻唑-2-基)酰胺的制备及其生物活性。
发明内容
本发明的目的在于提供N-(4-烷基-5-苄基噻唑-2-基)氨基烷酰胺(I)或其盐:
式中R选自:C1~C2烷基、C3~C4直链或C3~C4支链烷基;Y
本发明的目的在于提供的N-(4-烷基-5-苄基噻唑-2-基)氨基烷酰胺选自下列化合物:
本发明的目的在于提供N-(4-烷基-5-苄基噻唑-2-基)氨基烷酰胺的制备方法;其特征在于它制备反应如下:
式中R选自:C1~C2烷基、C3~C4直链或C3~C4支链烷基;Y
本发明的目的在于提供N-(4-烷基-5-苄基噻唑-2-基)氨基烷酰胺及其盐在制备抗癌药物中的应用。
本发明的目的在于提供N-(4-烷基-5-苄基噻唑-2-基)卤代烷酰胺(Ⅱ)或其盐:
式中R选自:C1~C2烷基、C3~C4直链或C3~C4支链烷基;Y
本发明的目的在于提供N-(4-烷基-5-苄基噻唑-2-基)卤代烷酰胺(Ⅱ)或其盐在制备抗乳腺癌药物中的应用:
式中R选自:C1~C2烷基、C3~C4直链或C3~C4支链烷基;Y
本发明与现有技术相比具有如下优点:
本发明首次制备N-(4-烷基-5-苄基噻唑-2-基)氨基烷酰胺及其盐,并发现N-(4-烷基-5-苄基噻唑-2-基)氨基烷酰胺或其盐具有抗癌活性。
具体实施方式
以下实施例旨在说明本发明而不是对本发明的进一步限定。
实施例1
N-(4-叔丁基-5-(4-氯苄基)噻唑-2-基)-4-氯丁酰胺的制备
(1)氯丁酰氯的制备
1.5g无水氯化锌溶于20mL二氯亚砜,搅拌,滴加19mL丁内酯,60℃反应5.0h,旋蒸过量的二氯亚砜,得到橙黄色液体4-氯丁酰氯,放入冰箱保存备用。
(2)N-(4-叔丁基-5-(4-氯苄基)噻唑-2-基)-4-氯丁酰胺的制备
1mmol 4-叔丁基-5-(4-氯苄基)噻唑-2-胺和20mL二氯甲烷,冰浴,搅拌,加入0.5mL三乙胺,滴加溶于2mL二氯甲烷的1.2mmol 4-氯丁酰氯,TLC监测反应,反应1.0h。旋蒸溶剂,干法上样,柱层析分离得黄色固体N-(4-叔丁基-5-(4-氯苄基)噻唑-2-基)-4-氯丁酰胺,收率72.5%,m.p.90~92℃。
实施例2
N-(4-叔丁基-5-(4-氯苄基)噻唑-2-基)-5-氯戊酰胺的制备
1mmol 4-叔丁基-5-(4-氯苄基)噻唑-2-胺和20mL二氯甲烷,冰浴,搅拌,加入0.5mL三乙胺,滴加溶于2mL二氯甲烷的1.2mmol 5-氯戊酰氯,TLC监测反应,反应2.0h。旋蒸溶剂,干法上样,柱层析分离得黄色固体N-(4-叔丁基-5-(4-氯苄基)噻唑-2-基)-5-氯戊酰胺,收率90.4%,m.p.143~144℃。
实施例3
N-(4-叔丁基-5-(2,4-二氯苄基)噻唑-2-基)-4-氯丁酰胺的制备
1mmol 4-叔丁基-5-(2,4-二氯苄基)噻唑-2-胺和20mL二氯甲烷,冰浴,搅拌,加入0.5mL三乙胺,滴加溶于2mL二氯甲烷的1.2mmol酰氯,TLC监测反应,反应1.0h。旋蒸溶剂,干法上样,柱层析分离,得深黄色固体N-(4-叔丁基-5-(2,4-二氯苄基)噻唑-2-基)-4-氯丁酰胺,收率68.3%,m.p.123~124℃。
实施例4
N-(4-叔丁基-5-(2,4-二氯苄基)噻唑-2-基)-5-氯戊酰胺的制备
按照实施例3的制备方法,反应2.0h,得黄色固体N-(4-叔丁基-5-(2,4-二氯苄基)噻唑-2-基)-5-氯戊酰胺,收率97.8%,m.p.108~110℃。
实施例5
N-(4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄基)噻唑-2-基)-4-氯丁酰胺的制备
1mmol 4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄基)噻唑-2-胺和20mL二氯甲烷,冰浴,搅拌,加入0.5mL三乙胺,滴加溶于2mL二氯甲烷的1.2mmol酰氯,TLC监测反应,反应1.5h。旋蒸溶剂,干法上样,柱层析分离得黄色固体N-(4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄基)噻唑-2-基)-4-氯丁酰胺,收率67.6%,m.p.79~80℃。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.10(d,2H,J=8.4Hz,C6H4),6.83(d,2H,J=8.0Hz,C6H4),4.16(s,2H,CH2),3.78(s,3H,CH3),3.60(t,2H,ClCH2),2.60(t,2H,COCH2),2.16(m,2H,CH2),1.37(s,9H,3×CH3)。
实施例6
N-(4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄基)噻唑-2-基)-5-氯戊酰胺的制备
按照实施例5的制备方法,反应2.0h,得黄色固体N-(4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄基)噻唑-2-基)-5-氯戊酰胺,收率86.5%,m.p.77~78℃。
实施例7
N-(4-叔丁基-5-(2,4-二氯苄基)噻唑-2-基)-4-氨基丁酰胺的制备
(1)邻苯二钾酰亚胺钾盐的制备
3.0g(20.4mmol)邻苯二甲酰亚胺和30mL乙醇,搅拌,滴加溶于10mL乙醇中的30.6mmolKOH,滴完,回流,TLC监测,反应2.0h,冷却,抽滤,干燥,得白色固体邻苯二钾酰亚胺钾盐3.43g,收率91.5%。
(2)N-(4-叔丁基-5-(2,4-二氯苄基)噻唑-2-基)-4-(1,3-二氧代吲哚啉-2-基)丁酰胺的制备
1mmol N-(4-叔丁基-5-(2,4-二氯苄基)噻唑-2-基)-5-氯丁酰胺与1.2mmol邻苯二甲酰胺钾盐溶于10mL DMF,搅拌,回流,TLC监测,反应3.5h。反应液冷却,倒入20mL水中,2×20mL乙酸乙酯萃取,无水硫酸钠干燥,静置过夜。抽滤,旋蒸除去溶剂,得黄色油状液体,冰箱中静置,析出黄色晶体N-(4-叔丁基-5-(2,4-二氯苄基)噻唑-2-基)-4-(1,3-二氧代吲哚啉-2-基)丁酰胺,干燥得0.22g,收率85.3%,m.p.95~96℃。
(3)N-(4-叔丁基-5-(2,4-二氯苄基)噻唑-2-基)-4-氨基丁酰胺的制备
1.89mmol N-(4-叔丁基-5-(2,4-二氯苄基)噻唑-2-基)-4-(1,3-二氧代吲哚啉-2-基)丁酰胺和20mL乙醇,搅拌,升温至50℃,滴加溶于5mL乙醇的0.66g 80%水合肼,滴完,升温至回流,TLC监测,反应9.0h。冷却,析出较多黄色固体,过滤,少量乙醇多次洗涤固体,减压除去滤液中的乙醇,冷却,加入10mL石油醚与乙酸乙酯混合溶剂,加入6mL10%稀盐酸,搅拌溶解,25℃搅拌0.5h,用石油醚与乙酸乙酯的混合溶剂溶解,洗涤水层,分液,水层中加入10mL混合溶剂,NaOH调pH12~13,分层,用混合溶剂萃取水相,合并有机相并用无水硫酸钠干燥,过滤,减压回收溶剂,干燥,得白色固体N-(4-叔丁基-5-(2,4-二氯苄基)噻唑-2-基)-4-氨基丁酰胺0.35g,收率46.7%,m.p.118~119℃。
实施例8
N-(4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄基)噻唑-2-基)-4-氨基丁酰胺的制备
(1)N-(4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄基)噻唑-2-基)-4-(1,3-二氧代吲哚啉-2-基)丁酰胺的制备
按照实施例7的方法制备,反应2.0h,得黄色固体N-(4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄基)噻唑-2-基)-4-(1,3-二氧代吲哚啉-2-基)丁酰胺,收率83.8%,m.p.89~90℃。
(2)N-(4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄基)噻唑-2-基)-4-氨基丁酰胺的制备
按照实施例5的制备方法,反应9.5h,得黄色固体N-(4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄基)噻唑-2-基)-4-氨基丁酰胺,收率42.3%,m.p.135~136℃。
实施例9
N-(4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄基)噻唑-2-基)-5-氨基戊酰胺的制备
(1)N-(4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄基)噻唑-2-基)-4-(1,3-二氧代吲哚啉-2-基)戊酰胺的制备
按照实施例7的方法制备,反应3.0h,得黄色固体N-(4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄基)噻唑-2-基)-4-(1,3-二氧代吲哚啉-2-基)戊酰胺,收率88.5%,m.p.82~83℃。
(2)N-(4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄基)噻唑-2-基)-5-氨基戊酰胺的制备按照实施例5的制备方法,反应11.0h,得黄色固体N-(4-叔丁基-5-(4-甲氧基苄基)噻唑-2-基)-5-氨基戊酰胺,收率43.8%,m.p.℃。
实施例10
N-(4-叔丁基-5-(4-氯苄基)噻唑-2-基)-5-氨基戊酰胺的制备
(1)N-(4-叔丁基-5-(4-氯基苄基)噻唑-2-基)-4-(1,3-二氧代吲哚啉-2-基)戊酰胺的制备
按照实施例7的方法制备,反应2.5h,得黄色固体N-(4-叔丁基-5-(4-氯基苄基)噻唑-2-基)-4-(1,3-二氧代吲哚啉-2-基)戊酰胺,收率88.2%,m.p.78~79℃。
(2)N-(4-叔丁基-5-(4-氯基苄基)噻唑-2-基)-5-氨基戊酰胺的制备
按照实施例7的制备方法,反应11.5h,得黄色固体N-(4-叔丁基-5-(4-氯基苄基)噻唑-2-基)-5-氨基戊酰胺,收率45.5%,m.p.86~88℃。
实施例11
N-(4-叔丁基-5-(2,4-二氯苄基)噻唑-2-基)-5-氨基戊酰胺的制备
(1)N-(4-叔丁基-5-(2,4-二氯苄基)噻唑-2-基)-4-(1,3-二氧代吲哚啉-2-基)戊酰胺的制备
按照实施例7的方法制备,反应2.0h,得黄色固体N-(4-叔丁基-5-(2,4-二氯苄基)噻唑-2-基)-4-(1,3-二氧代吲哚啉-2-基)戊酰胺,收率78.8%,m.p.89~90℃。
(2)N-(4-叔丁基-5-(2,4-二氯苄基)噻唑-2-基)-5-氨基戊酰胺的制备
按照实施例7的制备方法,反应7.0h,得黄色固体N-(4-叔丁基-5-(2,4-二氯苄基)噻唑-2-基)-5-氨基戊酰胺,收率46.7%,m.p.115~117℃。
实施例12
N-(4-叔丁基-5-(2,4-二氯苄基)噻唑-2-基)-4-氨基丁酰胺的制备
按照实施例7的方法制备。
实施例13
N-(4-烷基-5-苄基噻唑-2-基)氨基烷酰胺及其盐的抗肿瘤活性
1.抗肿瘤活性原理
MTT法生物活性测试又称MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。MTT分析法以活细胞代谢物还原剂噻唑蓝[3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四氮唑;3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]为基础。MTT是一种能接受氢原子的染料。活细胞线粒体中与NADP相关的脱氢酶在细胞内可将黄色的MTT转化成不溶性的蓝紫色的甲瓒(formazon),而死细胞则无此功能。用DMSO溶解formazon后,在一定波长下用酶标仪测定光密度值,既可定量测出细胞的存活率。根据光密度值的变化观察样品对肿瘤细胞的抑制作用。
2.抗肿瘤活性实验
试样:N-(4-烷基-5-苄基噻唑-2-基)氨基烷酰胺和N-(4-烷基-5-苄基噻唑-2-基)卤代烷酰胺及其盐。
式中R选自:C1~C2烷基、C3~C4直链或C3~C4支链烷基;Y
细胞系:宫颈癌细胞系Hela、肺腺癌细胞系A549和乳腺癌细胞系MCF-7(中南大学湘雅医学院细胞库提供)。
试剂:噻唑蓝(MTT)、RPMI 1640培养液、新生牛血清、抗生素(美国英杰生命技术公司);胰酶(美国AMRESCO公司);96孔培养板(美国英杰生命技术公司);二甲基亚砜(美国Sigma公司)。
仪器:HFsafe-1500型超净工作台、HF151UV型CO2培养箱(上海力申科学仪器有限公司);XSP-15C型倒置显微镜(上海长方光学仪器有限公司);Multiskan MK3型酶标仪(美国Thermo公司);超纯水制备仪(美国Milli-Q公司)。
实验操作:试样对Hela细胞、A549细胞和MCF-7细胞的测试。每种细胞的实验操作过程相同,一次实验过程中,每种试样设置5个浓度梯度(0.010μmol/mL、0.030μmol/mL、0.100μmol/mL、0.300μmol/mL和1.000μmol/mL),每个浓度四个平行试样,每组实验平行3次,并通过空白组对照得出结论。酶标仪检测各孔OD值,检测波长570nm。
3.抗肿瘤活性评价
1)细胞抑制率计算:
2)IC50值计算
试样浓度对数值与细胞抑制率线性回归,利用软件计算试样对细胞的半数抑制浓度IC50值。优选化合物对Hela细胞、A549细胞和MCF-7细胞的IC50见表1~3。
表1 N-(4-烷基-5-苄基噻唑-2-基)氨基烷酰胺及其中间体对Hela细胞的抑制活性
表2 N-(4-烷基-5-苄基噻唑-2-基)氨基烷酰胺及其中间体对A549细胞的抑制活性
表3 N-(4-烷基-5-苄基噻唑-2-基)氨基烷酰胺及其中间体对MCF-7细胞的抑制活性
活性测试结果显示,N-(4-烷基-5-苄基噻唑-2-基)氨基烷酰胺及其中间体N-(4-烷基-5-苄基噻唑-2-基)卤代烷酰胺或其盐对宫颈癌细胞、人肺腺癌细胞(A549细胞)和人乳腺癌细胞(MCF-7细胞)具有良好的抑制活性,可用于制备抗肿瘤药物。
N-(4-烷基-5-苄基噻唑-2-基)氨基烷酰胺及其制备方法与应用专利购买费用说明
Q:办理专利转让的流程及所需资料
A:专利权人变更需要办理著录项目变更手续,有代理机构的,变更手续应当由代理机构办理。
1:专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。
2:按规定缴纳著录项目变更手续费。
3:同时提交相关证明文件原件。
4:专利权转移的,变更后的专利权人委托新专利代理机构的,应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。
Q:专利著录项目变更费用如何缴交
A:(1)直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,(2)通过代办处缴纳,(3)通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式
Q:专利转让变更,多久能出结果
A:著录项目变更请求书递交后,一般1-2个月左右就会收到通知,国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。
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