专利摘要

本发明公开了结构式Ⅰ所示的2?(2?苄亚肼基)噻唑?5?羧酸酯衍生物及其药学上可接受的盐，其制备方法和药物组合物以及其在制备流感病毒神经氨酸酶抑制剂中的应用。其中，R选自：C1～C2、C3～C4直链或C3～C4支链烷基；R1选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或支链烷基、三氟甲基；X1、X5选自：氢、氘、C1～C2烷基、羟基、甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴、碘、硝基；X2、X4选自：氢、氘、C1～C2烷基、C3～C4直链或支链烷基、羟基、甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴、碘、硝基；X3选自：氢、氘、C1～C2烷基、羟基、甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴、碘、硝基、羧基或烷氧羰基。

权利要求

1.一类化学结构式Ⅰ所示的2-(2-苄亚肼基)噻唑-5-羧酸酯衍生物及其药学上可接受的盐：

其中，R选自：C₁～C₂、C₃～C₄直链或C₃～C₄支链烷基；

R¹选自：氢、C₁～C₂烷基、C₃～C₄直链或支链烷基、三氟甲基；

X¹、X⁵选自：氢、氘、C₁～C₂烷基、羟基、甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴、碘、硝基；

X²、X⁴选自：氢、氘、C₁～C₂烷基、C₃～C₄直链或支链烷基、羟基、甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴、碘、硝基；

X³选自：氢、氘、C₁～C₂烷基、羟基、甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴、碘、硝基、羧基或烷氧羰基。

2.权利要求1所述的2-(2-苄亚肼基)噻唑-5-羧酸酯衍生物及其药学上可接受的盐，其特征在于，所述的化合物选自：

2-(2-(3-甲氧基-4-羟基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯、

2-(2-(3-氟苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯、

2-(2-(2,4-二羟基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯、

2-(2-(3-甲氧基-2-羟基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯、

2-(2-(4-甲氧羰基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯、

2-(2-(4-羧基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯。

3.权利要求1所述的2-(2-苄亚肼基)噻唑-5-羧酸酯衍生物的制备方法，其特征在于它的制备反应如下：

式中，R、R¹、X¹～X⁵如权利要求1所述，HX选自：盐酸、氢溴酸。

4.权利要求1～2任一项所述的2-(2-苄亚肼基)噻唑-5-羧酸酯衍生物在制备流感病毒神经氨酸酶抑制剂中的应用。

说明书

技术领域

本发明涉及一类新化合物、其制备方法与应用，具体是2-(2-苄亚肼基)噻唑-5-羧酸酯衍生物、其制备方法及其在制备流感病毒神经氨酸酶抑制剂的应用。

背景技术

5-羧酸酯噻唑腙及其类似物具有广泛生物活性，P.Makam等[Eur.J.Med.Chem.,2013.69:564-576，Eur.J.Pharm.Sci.,2014.52:138-145]报道了系列2-(2-亚肼基)噻唑衍生物(A)具有良好的抗结核分枝杆菌作用和抗疟疾作用；A.Grozav等[Int.J.Mol.Sci.,2014.15(12):22059-22072]合成了系列苄亚肼基噻唑化合物(B)，发现部分化合物对两种癌细胞(MDA-MB231和HeLa)具有明显抗增殖活性；M.H.Shin等[Chem.Pharm.Bull.,2007.55(8):1126-1135]发现某些芳香环取代的噻唑腙(C)具有一定的抗氧化性；A.Ignat等[Arch.Pharm.Chem.LifeSci.,2012.345(7):574-583]发现含噻吩嗪基的噻唑腙(D)对结肠癌和肝癌细胞具有抗增殖活性。

中国发明专利[CN104774199A]描述了2-(2-苄亚肼基)-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑的合成及其对流感病毒神经氨酸酶的抑制活性。

发明内容

本发明解决的技术问题是提供一类2-(2-苄亚肼基)噻唑-5-羧酸酯衍生物、其制备方法、药物组合物和用途。

为解决本发明的技术问题，本发明提供如下技术方案：

本发明技术方案的第一方面是提供了一类如结构式Ⅰ所示2-(2-苄亚肼基)噻唑-5-羧酸酯衍生物：

其中，R选自：C₁～C₂、C₃～C₄直链或C₃～C₄支链烷基；R¹选自：氢、C₁～C₂烷基、C₃～C₄直链或支链烷基、三氟甲基；式中X¹、X⁵选自：氢、氘、C₁～C₂烷基、羟基、甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴、碘、硝基；X²、X⁴选自：氢、氘、C₁～C₂烷基、C₃～C₄直链或支链烷基、羟基、甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴、碘、硝基；X³选自：氢、氘、C₁～C₂烷基、羟基、甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴、碘、硝基、羧基或烷氧羰基。

本发明技术方案的第一方面还提供的一类2-(2-苄亚肼基)噻唑-5-羧酸酯衍生物选自下列化合物：

2-(2-(3-甲氧基-4-羟基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯、2-(2-(3-氟苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯、2-(2-(2,4-二羟基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯、2-(2-(3-甲氧基-2-羟基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯、2-(2-(4-甲氧羰基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯或2-(2-(4-羧基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯，其结构式如下：

本发明技术方案的第二方面是提供了2-(2-苄亚肼基)噻唑-5-羧酸酯衍生物的制备方法，其特征在于它的制备反应如下：

或

其中，R选自：C₁～C₂、C₃～C₄直链或C₃～C₄支链烷基；R¹选自：氢、C₁～C₂烷基、C₃～C₄直链或支链烷基、三氟甲基；式中X¹、X⁵选自：氢、氘、C₁～C₂烷基、羟基、甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴、碘、硝基；X²、X⁴选自：氢、氘、C₁～C₂烷基、C₃～C₄直链或支链烷基、羟基、甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴、碘、硝基；X³选自：氢、氘、C₁～C₂烷基、羟基、甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴、碘、硝基、羧基或烷氧羰基；HX选自：盐酸、氢溴酸。

本发明技术方案的第三方面是提供含有第一方面所述化合物及其药学上可接受的盐的药物组合物，该药物组合物含有治疗有效量的本发明的2-(2-苄亚肼基)噻唑-5-羧酸酯衍生物及其药学上可接受的盐，以及任选的含有药用载体。其中所述的药用载体指药学领域常用的药用载体；该药物组合物可根据本领域公知的方法制备。可通过将本发明化合物及其药学上可接受的盐与一种或多种药学上可接受的固体或液体赋形剂和/或辅剂组合，制成适于人或动物使用的任何剂型。本发明化合物及其药学上可接受的盐在其药物组合物中的含量通常为0.1％～95％重量百分比。

本发明化合物及其药学上可接受的盐或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮肤、阴道、直肠等。

给药剂型可以是液体剂型、固体剂型或半固体剂型。液体剂型可以是溶液剂(包括真溶液和胶体溶液)、乳剂(包括o/w型、w/o型和复乳)、混悬剂、注射剂(包括水针剂、粉针剂和输液)、滴眼剂、滴鼻剂、洗剂和搽剂等；固体剂型可以是片剂(包括普通片、肠溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口腔崩解片)、胶囊剂(包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊)、颗粒剂、散剂、微丸、滴丸、栓剂、膜剂、贴片、气(粉)雾剂、喷雾剂等；半固体剂型可以是软膏剂、凝胶剂、糊剂等。

本发明化合物及其药学上可接受的盐可以制成普通制剂、也制成是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。

为了将本发明化合物及其药学上可接受的盐制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂，包括稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助流剂。稀释剂可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等；湿润剂可以是水、乙醇、异丙醇等；粘合剂可以是淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解剂可以是干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠与枸橼酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠等；润滑剂和助流剂可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸盐、酒石酸、液体石蜡、聚乙二醇等。

还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。

为了将给药单元制成胶囊剂，可以将有效成分本发明化合物及其药学上可接受的盐与稀释剂、助流剂混合，将混合物直接置于硬胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明化合物及其药学上可接受的盐先与稀释剂、黏合剂、崩解剂制成颗粒或微丸，再置于硬胶囊或软胶囊中。用于制备本发明化合物及其药学上可接受的盐片剂的各稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、助流剂品种也可用于制备本发明化合物及其药学上可接受的盐的胶囊剂。

为将本发明化合物及其药学上可接受的盐制成注射剂，可以用水、乙醇、异丙醇、丙二醇或它们的混合物作溶剂并加入适量本领域常用的增溶剂、助溶剂、pH调剂剂、渗透压调节剂。增溶剂或助溶剂可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羟丙基-β-环糊精等；pH调剂剂可以是磷酸盐、醋酸盐、盐酸、氢氧化钠等；渗透压调节剂可以是氯化钠、甘露醇、葡萄糖、磷酸盐、醋酸盐等。如制备冻干粉针剂，还可加入甘露醇、葡萄糖等作为支撑剂。

此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂或其它添加剂。

为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的药物或药物组合物可用任何公知的给药方法给药。

本发明技术方案的第四方面是提供本发明所述2-(2-苄亚肼基)噻唑-5-羧酸酯衍生物及其药学上可接受的盐以及第三方面所述药物组合物在制备流感病毒神经氨酸酶抑制剂方面的应用。

2-(2-(2-羟基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯、2-(2-(4-羟基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯或2-(2-(3-甲氧基-4-羟基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯及其在药学上可接受的盐在流感病毒神经氨酸酶抑制剂中的应用。

有益技术效果：

本发明的2-(2-苄亚肼基)噻唑-5-羧酸酯衍生物是一类新结构类型的具有流感病毒神经氨酸酶抑制活性的化合物。

具体实施方式

以下实施例旨在说明本发明而不是对本发明的进一步限定。

实施例1

2-(2-(4-甲氧羰基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯盐酸盐(2a·HCl)的制备

1.18g(5mmol)2-(4-甲氧羰基苯亚肼基)硫代甲酰胺1a和0.84g(5.1mmol)2-氯乙酰乙酸乙酯溶于20mL无水乙醇，回流2h，冷却，抽滤，滤饼依次用乙醇、饱和食盐水和水洗，干燥得浅黄色固体2-(2-(4-甲氧羰基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯盐酸盐，收率91％，m.p.231～233℃。¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：8.17(s，1H，＝CH)，8.01(d，J＝8.4Hz，2H，C₆H₄)，7.82(d，J＝8.4Hz，2H，C₆H₄)，4.22(q，J＝7.2Hz，2H，OCH₂)，3.87(s，3H，OCH₃)，2.49(s，3H，噻唑环-CH₃)，1.27(t，J＝7.2Hz，3H，CH₃)。

2-(2-(4-甲氧羰基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯盐酸盐经NaOH溶液中和得到2-(2-(4-甲氧羰基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯。

实施例2

2-(2-(2,4-二羟基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯盐酸盐(2b·HCl)的制备

1.05g(5mmol)2-(2,4-二羟基苄亚肼基)硫代甲酰胺1b和0.84g(5.1mmol)2-氯乙酰乙酸乙酯溶于20mL无水乙醇，回流2h，倒入饱和食盐水中，析出大量灰白色固体，抽滤，滤饼依次用乙醇和水洗，乙醇/水重结晶得灰白色固体2-(2-(2,4-二羟基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯盐酸盐，收率69％，m.p.250～252℃。¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：10.39(s，1H，NH)，8.34(s，1H，＝CH)，7.44(d，J＝8.4Hz，1H，C₆H₃)，6.38(d，J＝2.0Hz，1H，C₆H₃)，6.36(dd，1H，J＝8.4Hz，J＝2.0Hz，C₆H₃)，4.20(q，J＝7.2Hz，2H，OCH₂)，2.46(s，3H，噻唑环-CH₃)，1.27(t，J＝7.2Hz，3H，CH₃)。

2-(2-(2,4-二羟基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯盐酸盐经NaOH溶液中和得到2-(2-(2,4-二羟基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯。

实施例3

2-(2-(3-甲氧基-4-羟基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯盐酸盐(2c·HCl)的制备

5mmol2-(3-甲氧基-4-羟基苄亚肼基)硫代甲酰胺1c和5.1mmol2-氯乙酰乙酸乙酯溶于20mL无水乙醇，回流2h，冷却，抽滤，滤饼依次用乙醇、饱和食盐水和水洗，干燥得浅黄色固体2-(2-(3-甲氧基-4-羟基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯盐酸盐，收率83％，m.p.213～215℃。¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：8.03(s，1H，＝CH)，7.24(d，J＝1.8Hz，1H，C₆H₃)，7.11(dd，J＝8.2，1.8Hz，1H，C₆H₃)，6.85(d，J＝8.2Hz，1H，C₆H₃)，4.21(q，J＝7.2Hz，2H，OCH₂)，3.82(s，3H，OCH₃)，2.48(s，3H，噻唑环-CH₃)，1.26(t，J＝7.2Hz，3H，CH₃)。

2-(2-(3-甲氧基-4-羟基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯盐酸盐经NaOH溶液中和得到2-(2-(3-甲氧基-4-羟基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯。

实施例4

2-(2-(3-氟苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯盐酸盐(2d·HCl)的制备

0.99g(5mmol)2-(3-氟苄亚肼基)硫代甲酰胺1d和0.84g(5.1mmol)2-氯乙酰乙酸叔丁酯溶于20mL无水乙醇，回流2h，冷却，抽滤，滤饼依次用乙醇、饱和食盐水和水洗，干燥得浅黄色固体2-(2-(3-氟苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯盐酸盐，收率92％，m.p.197～199℃。¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：12.61(s，1H，NH)，8.12(s，1H，＝CH)，7.54～7.46(m，3H，C₆H₄)，7.28～7.21(m，1H，C₆H₄)，4.21(q，J＝7.2Hz，2H，OCH₂)，2.48(s，3H，噻唑环-CH₃)，1.27(t，J＝7.2Hz，3H，CH₃)。

2-(2-(3-氟苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯盐酸盐经NaOH溶液中和得到2-(2-(3-氟苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯。

实施例5

2-(2-(3-甲氧基-4-羟基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸叔丁酯盐酸盐(2e·HCl)的制备

1.13g(5mmol)2-(3-甲氧基-4-羟基苄亚肼基)硫代甲酰胺1e和0.84g(5.1mmol)2-氯乙酰乙酸叔丁酯溶于20mL无水乙醇，回流2h，冷却，抽滤，滤饼依次用乙醇、饱和食盐水和水洗，干燥得白色固体2-(2-(3-甲氧基-4-羟基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸叔丁酯盐酸盐，收率49％，m.p.197～199℃。¹HNMR(400MHz，CDCl₃)δ：13.36(s，1H，NH)，8.30(s，1H，＝CH)，7.24～7.23(m，2H，C₆H₃)，6.97(d，J＝8.4Hz，1H，C₆H₃)，6.07(s，1H，OH)，3.97(s，3H，OCH₃)，2.64(s，3H，噻唑环-CH₃)，1.59(s，9H，3×CH₃)。

2-(2-(3-甲氧基-4-羟基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸叔丁酯盐酸盐经NaOH溶液中和得到2-(2-(3-甲氧基-4-羟基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸叔丁酯。

实施例6

2-(2-(3-甲氧基-2-羟基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯盐酸盐(2f·HCl)的制备

0.76g(5mmol)邻香草醛、0.455g(5mmol)氨基硫脲和0.85g(5mmol)2-氯乙酰乙酸乙酯溶于25mL无水乙醇，回流6.8h，冷却，抽滤，滤饼用乙醇洗，干燥得白色固体2-(2-(3-甲氧基-2-羟基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯盐酸盐，收率54.3％，m.p.220～222℃。¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：9.75(s，1H，OH)，8.43(s，1H，＝CH)，7.25(d，J＝7.6Hz，1H，C₆H₃)，7.01(d，J＝7.6Hz，1H，C₆H₃)，6.85(t，J＝7.6Hz，1H，C₆H₃)，4.21(q，J＝7.2Hz，2H，OCH₂)，3.83(s，3H，OCH₃)，2.47(s，3H，噻唑环-CH₃)，1.27(t，J＝7.2Hz，3H，CH₃)。

2-(2-(3-甲氧基-2-羟基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯盐酸盐经NaOH溶液中和得到2-(2-(3-甲氧基-2-羟基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯。

实施例7

2-(2-(2-羟基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯盐酸盐(2g·HCl)的制备

0.61g(5mmol)水杨醛、0.455g(5mmol)氨基硫脲和0.85g(5mmol)2-氯乙酰乙酸乙酯溶于25mL无水乙醇，回流0.8h，冷却，抽滤，滤饼用乙醇洗，干燥得黄色固体2-(2-(2-羟基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯盐酸盐，收率52.6％，m.p.175～177℃。¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：10.36(s，1H，OH)，8.44(s，1H，＝CH)，7.65(d，J＝7.6Hz，1H，C₆H₄)，7.26(t，J＝7.6Hz，1H，C₆H₄)，6.94(d，J＝7.6Hz，1H，C₆H₄)，6.89(t，J＝7.6Hz，1H，C₆H₄)，4.21(q，J＝7.2Hz，2H，OCH₂)，2.47(s，3H，噻唑环-CH₃)，1.27(t，J＝7.2Hz，3H，CH₃)。

2-(2-(2-羟基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯盐酸盐经NaOH溶液中和得到2-(2-(2-羟基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯。

实施例8

2-(2-(4-羟基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯盐酸盐(2h·HCl)的制备

0.61g(5mmol)对羟基苯甲醛、0.455g(5mmol)氨基硫脲和0.85g(5mmol)2-氯乙酰乙酸乙酯溶于25mL无水乙醇，回流7.4h，冷却，抽滤，滤饼用乙醇洗，干燥得黄色固体2-(2-(4-羟基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯盐酸盐，收率55.5％，m.p.170～172℃。¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：8.06(s，1H，＝CH)，7.52(d，J＝8.8Hz，2H，C₆H₄)，6.84(d，J＝8.8Hz，2H，C₆H₄)，4.18(q，J＝7.2Hz，2H，OCH₂)，2.45(s，3H，CH₃)，1.24(t，J＝7.2Hz，3H，CH₃)。

2-(2-(4-羟基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯盐酸盐经NaOH溶液中和得到2-(2-(4-羟基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯。

实施例9

2-(2-(4-羧基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯盐酸盐(2i·HCl)的制备

0.75g(5mmol)对羧基苯甲醛、0.455g(5mmol)氨基硫脲和0.85g(5mmol)2-氯乙酰乙酸乙酯溶于25mL无水乙醇，回流7.5h，冷却，抽滤，滤饼用乙醇洗，干燥得黄色固体2-(2-(4-羧基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯盐酸盐，收率24.9％，m.p.316～318℃。¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：12.85(s，1H，COOH)，8.13(s，1H，＝CH)，7.98(d，J＝8.0Hz，2H，C₆H₄)，7.78(d，J＝8.0Hz，2H，C₆H₄)，4.20(m，2H，OCH₂)，2.48(s，3H，CH₃)，1.26(t，J＝7.2Hz，3H，CH₃)。

2-(2-(4-羧基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯盐酸盐经NaOH溶液中和得到2-(2-(4-羧基苄亚肼基))-4-甲基噻唑-5-羧酸乙酯。

实施例10

2-(2-苄亚肼基)噻唑-5-羧酸酯衍生物的抗流感病毒神经氨酸酶活性

1.实验原理

化合物MUNANA是神经氨酸酶的特异性底物，在神经氨酸酶作用下产生的代谢产物在360nm照射激发下，可以产生450nm荧光，荧光强度的变化可以灵敏地反应神经氨酸酶活性。酶都来自A/PR/8/34(H₁N₁)病毒毒株。

2.实验方法

在酶反应体系中，一定浓度样品与流感病毒神NA悬浮于反应缓冲液中(pH6.5)，加入荧光底物MUNANA启动反应体系，37℃孵育40分钟后，加反应终止液终止反应。在激发波长360nm和发射波长为450nm的参数条件下，测定荧光强度值。反应体系的荧光强度可以反映酶的活性。根据荧光强度的减少量可以计算化合物对NA活性的抑制率。

3.检测样品：实施例化合物

4.活性结果

优选化合物在反应系统中检测浓度40.0μg/mL时对神经氨酸酶的抑制率和IC₅₀值列入表1：

表12-(2-苄亚肼基)噻唑-5-羧酸酯衍生物对神经氨酸酶的抑制活性

2-(2-苄亚肼基)噻唑-5-羧酸酯衍生物具有抗流感病毒神经氨酸酶活性，可用于制备流感病毒神经氨酸酶抑制剂。

2-(2-苄亚肼基)噻唑-5-羧酸酯及其制备方法与医药用途专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。