专利摘要
本发明涉及一种从人参叶中提取纯化vinaginsenosideR15的方法,采用干燥的人参叶为提取原料,乙醇回流提取,经大孔吸附树脂纯化、利用硅胶柱层析、ODS柱层析及制备液相等手段制备vinaginsenosideR15。本发明操作方法简便、快速,纯度可达98%以上。
权利要求
1.一种从人参叶中提取纯化vinaginsenoside R
说明书
技术领域
本发明属于天然药物化学领域,涉及一种从人参叶中提取纯化 vinaginsenosideR15的方法。
背景技术
人参叶为五加科(Araliaceae)人参属植物人参的干燥叶,具有滋补、强壮、调节机能、提高机体免疫力以及抗炎等多种作用。现代研究表明,人参叶主要化学成分为主要含有皂苷类、黄酮类、甾类、人参挥发油、有机酸类、人参多糖等多种类型化合物,其皂苷具有抗疲劳,活血化瘀,保护神经系统,抑制白血病细胞增殖,提高皮质激素水平,调节免疫功能,抗病毒,抗糖尿病等活性。人参皂苷主要分为达玛烷型,齐墩果酸型和奥克梯隆型,其中达玛烷型为四环三萜类物质。目前已分离得到的人参皂苷,绝大多数都是达玛烷三萜类及其衍生物。据文献检索,已经有人从人参的根中分离出vinaginsenoside R15,而尚未见从人参叶中分离vinaginsenoside R15的报道。本发明提供了一种从人参叶中提取分离纯化vinaginsenoside R15的方法,为vinaginsenoside R15单体的分离提供了一种新的思路和途径,本发明可为其单体的活性研究提供物质基础。
发明内容
本发明的目的是提供一种从人参叶中提取纯化高纯度vinaginsenoside R15的方法。
为实现上述目的,本发明采用以下技术方案:
将人参叶适当粉碎,乙醇水溶液提取,提取液减压浓缩至无醇味后稀释,稀释液经大孔树脂吸附后用Na0H水溶液洗脱,洗脱液用37%盐酸中和至中性后重新过大孔树脂吸附,用乙醇水溶液洗脱,收集洗脱液,减压浓缩,拌入硅胶,干燥得上柱样品。此样品经硅胶柱层析、ODS柱层析及制备液相分离纯化后获得 vinaginsenoside R15。其中所述提取溶剂乙醇水溶液的体积百分比为70%,提取方法为回流提取,提取溶剂的体积为药材的10倍。Na0H水溶液为0.1-1.0%的Na0H 水溶液,用98%硫酸中和洗脱液至pH=6-8。硅胶柱层析的流动相体系为二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇=6:1:1,展开剂为氯仿-甲醇-水=2.5:1.5:0.35。ODS柱的流动相体系仅为甲醇-水=1:2,展开剂为甲醇-水=1:1.5。制备液相色谱分离流速为2.5ml/min,检测波长为203nm,流动相为乙腈-水=14:86,分段收集含 vinaginsenosideR15流出液,回收溶剂,最后经冷冻干燥得产品。经HPLC测定 vinaginsenoside R15的纯度可达到99.0%。
本发明的有益效果:
本发明方法具有分离效果好、高效、快速、产品纯度高、操作简单、所用有机试剂较少、绿色环保等优点。
具体实施方式
为了进一步了解本发明的技术特征,下面结合具体实施例对本发明进行详细地阐述。实施例只对本发明具有示例性的作用,而不具有任何限制性的作用,本领域的技术人员在本发明的基础上作出的任何非实质性的修改,都应属于本发明的保护范围。
实施例1:
取人参叶1kg,粉碎,加入10升70%乙醇水溶液回流提取3次,每次2小时,提取液减压浓缩,浓缩液用水稀释5倍,上D101大孔吸附树脂柱吸附,用0.2%的Na0H水溶液洗脱,洗脱液用37%盐酸中和至pH=7。洗脱液重新过大孔吸附树脂吸附,用85%乙醇水溶液洗脱,收集洗脱液,减压浓缩,拌入硅胶200克,干燥得上柱样品,然后以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇=6:1:1为流动相进行硅胶柱层析,TLC检测(展开剂:氯仿-甲醇-水=2.5:1.5:0.35),合并相同组分,接着以甲醇-水=1:2为流动相进行ODS柱层析(展开剂:甲醇水1:1.5)得到含vinaginsenoside R15的皂苷粉末400mg。最后利用制备型高效液相色谱仪进行纯化,将样品溶于甲醇中,流速控制为2.5ml/min,检测波长为203nm,流动相为乙腈-水=14:86。分段收集流出液,回收溶剂后冻干得vinaginsenoside R15165mg。经高效液相色谱仪检验,纯度为98.6%,将其核磁数据与vinaginsenoside R15文献核磁数据对比,两者一致,确定其为vinaginsenoside R15。
实施例2:
取人参叶1kg,粉碎,加入10升70%乙醇水溶液回流提取3次,每次1.5小时,提取液减压浓缩,浓缩液用水稀释5倍,上D4020大孔吸附树脂柱吸附,用 0.3%的Na0H水溶液洗脱,用98%硫酸中和洗脱液至pH=6。洗脱液重新过大孔吸附树脂吸附,用75%乙醇水溶液洗脱,收集洗脱液,减压浓缩,拌入硅胶200 克,干燥得上柱样品,然后以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇=6:1:1为流动相进行硅胶柱层析,TLC检测(展开剂:氯仿-甲醇-水=2.5:1.5:0.35),合并相同组分,接着以甲醇-水=1:2为流动相进行ODS柱层析(展开剂:甲醇水1:1.5)得到含 vinaginsenoside R15的皂苷粉末430mg。最后利用制备型高效液相色谱仪进行纯化,将样品溶于甲醇中,流速控制为2.5ml/min,检测波长为203nm,流动相为乙腈-水=14:86。分段收集流出液,回收溶剂后冻干得vinaginsenoside R15268mg。经高效液相色谱仪检验,纯度为98.9%。
实施例3:
取人参叶1kg,粉碎,加入10升70%乙醇水溶液回流提取3次,每次1小时,提取液减压浓缩,浓缩液用水稀释5倍,上HP20大孔吸附树脂柱吸附,用0.8%的Na0H水溶液洗脱干净,用硝酸中和洗脱液至pH=8。洗脱液重新过大孔吸附树脂吸附,用95%乙醇水溶液洗脱,收集洗脱液,减压浓缩,拌入硅胶200克,干燥得上柱样品,然后以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇=6:1:1为流动相进行经硅胶柱层析,TLC检测(展开剂:氯仿-甲醇-水=2.5:1.5:0.35),合并相同组分,接着以甲醇-水=1:2为流动相进行ODS柱层析(展开剂:甲醇水1:1.5)得到含vinaginsenoside R15的皂苷粉末300mg。最后利用制备型高效液相色谱仪进行纯化,将样品溶于甲醇中,流速控制为2.5ml/min,检测波长为203nm,流动相为乙腈-水=14:86。分段收集流出液,回收溶剂后冻干得vinaginsenoside R15159mg。经高效液相色谱仪检验,纯度为99.6%。
实施例4:
取人参叶1kg,粉碎,加入10升70%乙醇水溶液回流提取3次,每次2小时,提取液减压浓缩,浓缩液用水稀释5倍,上AB-8大孔吸附树脂柱吸附,用1.0%的Na0H水溶液洗脱,用磷酸中和洗脱液至pH=7。洗脱液重新过大孔吸附树脂吸附,用55%乙醇水溶液洗脱,收集洗脱液,减压浓缩,拌入硅胶200克,干燥得上柱样品,然后以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇=6:1:1为流动相进行硅胶柱层析, TLC检测(展开剂:氯仿-甲醇-水=2.5:1.5:0.35),合并相同组分,接着以甲醇-水=1:2为流动相进行ODS柱层析(展开剂:甲醇水1:1.5)得到含vinaginsenoside R15的皂苷粉末520mg。最后利用制备型高效液相色谱仪进行纯化,将样品溶于甲醇中,流速控制为2.5ml/min,检测波长为203nm,流动相为乙腈-水=14;86。分段收集流出液,回收溶剂后冻干得vinaginsenoside R15155mg。经高效液相色谱仪检验,纯度为99.5%。
一种从人参叶中提取纯化vinaginsenosideR的方法专利购买费用说明
Q:办理专利转让的流程及所需资料
A:专利权人变更需要办理著录项目变更手续,有代理机构的,变更手续应当由代理机构办理。
1:专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。
2:按规定缴纳著录项目变更手续费。
3:同时提交相关证明文件原件。
4:专利权转移的,变更后的专利权人委托新专利代理机构的,应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。
Q:专利著录项目变更费用如何缴交
A:(1)直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,(2)通过代办处缴纳,(3)通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式
Q:专利转让变更,多久能出结果
A:著录项目变更请求书递交后,一般1-2个月左右就会收到通知,国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。
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