专利摘要

本发明提供了一种皂苷异构体分离纯化方法。采用亲水作用色谱在醇水洗脱体系下实现皂苷异构体的高效分离。流动相组成为甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇或水，无缓冲盐添加，便于样品制备后处理。采用线性梯度、台阶梯度或等度洗脱方式。选取三七叶水提物反相色谱制备分离所得4个馏分，通过亲水色谱制备获得4组皂苷异构体，共12个皂苷，其中包括1个新皂苷和2个首次从三七叶中分得的皂苷。该方法可以实现皂苷异构体的高效制备，特别是对含有呋喃型阿拉伯糖基、吡喃型阿拉伯糖基或吡喃型木糖基的皂苷异构体，该方法表现出优异的分离效果。从而可以不断丰富皂苷库，为皂苷类化合物的活性研究和单一成分的新药开发提供物质基础。

权利要求

1.一种皂苷异构体分离纯化方法，其特征在于：采用亲水作用色谱从皂苷提取物中高效分离纯化高纯度皂苷异构体；流动相组成为甲醇、乙醇、异丙醇或正丁醇中的一种或两种与水，无缓冲盐添加，便于样品制备后处理；采用线性梯度、台阶梯度或等度洗脱方式。

2.按照权利要求1所述皂苷分离纯化方法，其特征在于：亲水作用色谱柱为两性离子柱（Click XIon）。

3.按照权利要求1所述皂苷分离纯化方法，其特征在于：色谱操作参数如下：色谱柱内径为4.6-100mm；样品浓度为1mg/mL-1g/mL；进样量为1μL-40mL；流速为0.5-480mL/min；柱温为4-60℃。

4.按照权利要求1所述皂苷分离纯化方法，其特征在于：所述流动相组成为甲醇-水、乙醇-水、异丙醇-水、异丙醇-甲醇-水或正丁醇-甲醇-水。

5.按照权利要求1所述皂苷分离纯化方法，其特征在于：所述皂苷提取物为三七叶水提物。

6.一种权利要求1所述皂苷类化合物的制备方法，其特征在于：

1）三七叶水提物先经制备型RPLC分离，色谱条件：色谱柱为C18TDE柱；水（A）和乙腈（B）流动相体系；洗脱梯度为0-5min,体积浓度20％→32％B;5-45min,体积浓度32％→68％B;45-50min,体积浓度68％→100％B;50-55min,100％B；流速为300mL/min；检测波长为203nm；样品溶液浓度为300mg/mL，其采用体积浓度20％ACN-80％H₂O溶解；进样体积为10mL；1-55min，每分钟收集一份，共计54个组分，每个组分浓缩至干后备用；针对4个富含皂苷异构体的组分（F r.10,F r.12,Fr.17和Fr.26）采用亲水作用色谱进行制备，色谱柱为Click XIon柱；采用甲醇水流动相体系，根据各个组分的色谱保留特性，流动相中甲醇的体积浓度控制在80％-100％；采用等度洗脱方式制备皂苷异构体；

2）选取Fraction 10采用亲水色谱模式进行制备型HPLC分离，色谱条件：色谱柱为两性离子柱（Click XIon,150×10mm,i.d.,10μm）；水（A）和甲醇（B）流动相体系；体积浓度92％B等度洗脱；流速为2mL/min；检测波长为203nm；进样量为50μL；收集各个色谱峰，分别回收溶剂，经核磁实验确定，获得1,2,3三个化合物；

选取Fraction 12采用亲水色谱模式进行制备型HPLC分离，色谱条件：色谱柱为两性离子柱（Click XIon,150×10mm,i.d.,10μm）；水（A）和甲醇（B）流动相体系；体积浓度95％B等度洗脱；流速为2mL/min；检测波长为203nm；进样量为50μL；收集各个色谱峰，分别回收溶剂，经核磁实验确定，获得4,5,6三个化合物；

选取Fraction 17采用亲水色谱模式进行制备型HPLC分离，色谱条件：色谱柱为两性离子柱（Click XIon,150×10mm,i.d.,10μm）；100％甲醇等度洗脱；流速为2mL/min；检测波长为203nm；进样量为50μL；收集各个色谱峰，分别回收溶剂，经核磁实验确定，获得7,8,9三个化合物；

选取Fraction 26采用亲水色谱模式进行制备型HPLC分离，色谱条件：色谱柱为两性离子柱（Click XIon,150×10mm,i.d.,10μm）；100％甲醇等度洗脱；流速为1mL/min；检测波长为203nm；进样量为50μL；收集各个色谱峰，分别回收溶剂，经核磁实验确定，获得10,11,12三个化合物。

7.按照权利要求6所述皂苷异构体的制备方法，通过亲水色谱制备获得4组高纯度皂苷异构体，包括1个新皂苷和2个首次从三七叶中分得的皂苷，共12个皂苷；

所述化合物的结构信息如下：

化合物1为Notoginsenoside FP2，分子量为1210，分子式为C₅₈H₉₈O₂₆，R₁为O-glu(2→1)glu(2→1)xyl，R₂为O-glu(6→1)araF；化合物2为New Compound，分子量为1210，分子式为C₅₉H₉₈O₂₆，R₁为O-glu(2→1)glu(2→1)xyl，R₂为O-glu(6→1)araP；化合物3为NotoginsenosideFc，分子量为1210，分子式为C₅₈H₉₈O₂₆，R₁为O-glu(2→1)glu(2→1)xyl，R₂为O-glu(6→1)xyl；化合物4为Ginsenoside Rc，分子量为1078，分子式为C₅₃H₉₀O₂₂，R₁为O-glu(2→1)glu，R₂为O-glu(6→1)araF；化合物5为GinsenosideRb₂，分子量为1078，分子式为C₅₃H₉₀O₂₂，R₁为O-glu(2→1)glu，R₂为O-glu(6→1)araP；化合物6为Ginsenoside Rb₃，分子量为1078，分子式为C₅₃H₉₀O₂₂，R₁为O-glu(2→1)glu，R₂为O-glu(6→1)xyl；化合物7为Notoginsenoside Fe，分子量为916，分子式为C₄₇H₈₀O₁₇，R₁为O-glu，R₂为O-glu(6→1)araF；化合物8为Quinquenoside-L，分子量为916，分子式为C₄₇H₈₀O₁₇，R₁为O-glu，R₂为O-glu(6→1)araP；化合物9为Notoginsenoside Fd，分子量为916，分子式为C₄₇H₈₀O₁₇，R₁为O-glu，R₂为O-glu(6→1)xyl；化合物10为Ginsenoside Mc，分子量为754，分子式为C₄₁H₇₀O₁₂，R₁为OH，R₂为O-glu(6→1)araF；化合物11为Ginsenoside Y，分子量为754，分子式为C₄₁H₇₀O₁₂，R₁为OH，R₂为O-glu(6→1)araP；化合物12为Gypenoside XIII，分子量为754，分子式为C₄₁H₇₀O₁₂，R₁为OH，R₂为O-glu(6→1)xyl。

说明书

技术领域

本发明涉及皂苷类化合物的分离纯化，具体地说是一种利用亲水作用色谱在醇水洗脱体系中高效分离皂苷异构体的方法。该方法对包含呋喃型阿拉伯糖基、吡喃型阿拉伯糖基或吡喃型木糖基的皂苷异构体表现出较优的分离效果。 

背景技术

皂苷（Saponins）是苷元（Sapogenins）为三萜（Triterpenoids）或螺旋甾烷类（Spirostane）化合物的一类糖苷。在皂苷的化学结构中，由于苷元具有不同程度的亲脂性，糖链具有较强的亲水性，使皂苷成为一种表面活性剂，用力振摇其水溶液可产生持久性泡沫。 

皂苷类化合物除具有表面活性、溶血、毒鱼等特性外，还具有多种生理功能，是许多中药的主要活性成分。皂苷的生物活性除与苷元有关外，与糖链的结构也关系密切。S.G.Sparg、王楠、张云峰和张存莉等分别对皂苷类化合物具有的生物活性进行了综述，这些活性主要包括防治心血管系统疾病、抗癌、降血糖、降血脂、保肝、抗炎、抗过敏、抗微生物、抗衰老、抗生育等（S.G.Sparg,M.E.Light,J.van Staden,Biological activities and distribution of plant saponins,Journal of Ethnopharmacology 94(2004)219-243；王楠.皂苷生物活性的研究进展,医学研究生学报,2007,20(2):211-214；张云峰,魏东,邓雁如,等.三萜皂苷的生物活性研究新进展,中成药,2006,28(9):1349-1353；张存莉,吴战库,马惠玲,等.甾体皂苷的生物活性研究进展,西北林学院学报,2003,18(2):95-100.）。 

皂苷的苷元和糖链的结构多样性是皂苷众多生理活性的结构基础，但这种多样性也给皂苷的结构解析带来了很大困难，特别是皂苷异构体。因为常规的核磁表征方法需要毫克级的高纯度皂苷单体。反相色谱是目前皂苷分离中应用最广泛的色谱技术，但对于仅端基糖存在差异的皂苷异构体反相色谱的分离能力常常是不足的。例如，3种常见的人参皂苷Ginsenosides Rc,Rb2和Rb3，它们的差别仅存在于端基五碳糖上。采用反相色谱进行分离时，即使采用乙腈、甲醇和水三元流动相体系也很难将其有效分离（X.Qiao et al.J.Sep.Sci.2011,34,169-175）。这是因为反相色谱柱对皂苷的亲水选择性不足。而亲水作用色谱却恰恰是利用皂苷的亲水性差异对其进行分离，其有望成为反相色谱的替代色谱模式来分离该类皂苷异构体。 

发明内容

本发明涉及一种皂苷异构体的分离纯化方法。采用亲水作用色谱在醇水流动相体系下高效分离皂苷异构体。流动相组成为甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇或水，无缓冲盐添加，便于样品制备后处理。采用线性梯度、台阶梯度或等度洗脱方式。 

其中所述亲水色谱柱为两性离子柱（Click XIon，北京华谱新创科技有限公司）。色谱操作参数如下：色谱柱内径为4.6-100mm；样品浓度为1mg/mL-1g/mL；进样量为1μL-40mL；流速为0.5-480mL/min；柱温为4-60℃。所述流动相组成为甲醇-水、乙醇-水、异丙醇-水、异丙醇-甲醇-水或正丁醇-甲醇-水。 

采用以醇水为洗脱剂的亲水作用色谱从三七叶提取物中制备获得4组皂苷异构体，包括1个新皂苷、2个首次从三七叶中分得的皂苷，共12个高纯度皂苷。所述化合物的结构信息如下： 

所述化合物具体制备方法为： 

三七叶水提物先经制备型RPLC分离，色谱条件：色谱柱为C18TDE柱；水（A）和乙腈（B）流动相体系；洗脱梯度为0-5min,体积浓度20％→32％B;5-45min,体积浓度32％→68％B;45-50min,体积浓度68％→100％B;50-55min,100％B；流速为300mL/min；检测波长为203nm；样品溶液浓度为300mg/mL，其采用体积浓度20％ACN-80％H₂O溶解；进样体积为10mL；1-55min，每分钟收集一份，共计54个组分，每个组分浓缩至干后备用。选取Fraction 10采用亲水色谱模式进行制备型HPLC分离，色谱条件：色谱柱为两性离子柱（Click XIon,150×10mm,i.d.,10μm）；水（A）和甲醇（B）流动相体系；体积浓度92％B等度洗脱；流速为2mL/min；检测波长为203nm；进样量为50μL。收集各个色谱峰，分别回收溶剂，经核磁实验确定，获得1,2,3三个化合物。 

选取Fraction 12采用亲水色谱模式进行制备型HPLC分离，色谱条件：色谱柱为两性离子柱（Click XIon,150×10mm,i.d.,10μm）；水（A）和甲醇（B）流动相体系；体积浓度95％B等度洗脱；流速为2mL/min；检测波长为203nm；进样量为50μL。收集各个色谱峰，分别回收溶剂，经核磁实验确定，获得4,5,6三个化合物。 

[0013]选取Fraction 17采用亲水色谱模式进行制备型HPLC分离，色谱条件：色谱柱为两性离子柱（Click XIon,150×10mm,i.d.,10μm）；100％甲醇等度洗脱；流速为2mL/min；检测波长为203nm；进样量为50μL。收集各个色谱峰，分别回收溶剂，经核磁实验确定，获得7,8,9三个化合物。选取Fraction 26采用亲水色谱模式进行制备型HPLC分离，色谱条件：色谱柱为两性离子柱（Click XIon,150×10mm,i.d.,10μm）；100％甲醇等度洗脱；流速为1mL/min；检测波长为203nm；进样量为50μL。收集各个色谱峰，分别回收溶剂，经核磁实验确定，获得10,11,12三个化合物。 

该方法可以实现皂苷异构体的高效制备，特别是对含有呋喃型阿拉伯糖基、吡喃型阿拉伯糖基或吡喃型木糖基的皂苷异构体，该方法表现出优异的分离效果。从而可以不断丰富皂苷库，为皂苷类化合物的活性研究和单一成分的新药开发提供物质基础。 

具体实施方式

现结合实例，对本发明做进一步说明。实例仅限于说明本发明，而非对本发明的限定。 

1）三七叶水提物先经制备型RPLC分离，色谱条件：色谱柱为C18TDE柱；水（A）和乙腈（B）流动相体系；洗脱梯度为0-5min,体积浓度20％→32％B;5-45min,体积浓度32％→68％B;45-50min,体积浓度68％→100％B;50-55min,100％B；流速为300mL/min；检测波长为203nm；样品溶液浓度为300mg/mL，其采用体积浓度20％ACN-80％H₂O溶解；进样体积为10mL；1-55min，每分钟收集一份，共计54个组分，每个组分浓缩至干后备用；针对4个富含皂苷异构体的组分（Fr.10,Fr.12,Fr.17和Fr.26）采用亲水作用色谱进行制备，色谱柱为Click XIon柱；采用甲醇水流动相体 系，根据各个组分的色谱保留特性，流动相中甲醇的体积浓度控制在80％-100％；采用等度洗脱方式制备皂苷异构体； 

实施例1：化合物1,2,3的制备 

选取Fraction 10采用亲水色谱模式进行制备型HPLC分离（色谱柱为两性离子柱；水（A）和甲醇（B）流动相体系；体积浓度92％B等度洗脱）流速为2mL/min；检测波长为203nm；进样量为50μL。收集各个色谱峰，分别回收溶剂，经核磁实验确定，获得1,2,3三个化合物。HPLC检测纯度大于95％，经理化测定，数据如下：1，白色粉末，HR-ESI-MS:[M+H]⁺,found:1211.6409;Calcd:1211.6425 for C₅₈H₉₉O₂₆.¹H NMR(600MHz,pyridine-d5)δ:0.77(1H,s,H-19),0.92(2H,s,H-18,30),1.08(1H,s,H-29),1.25(1H,s,H-28),1.60(1H,s,H-21),1.62(1H,s,H-27),1.64(1H,s,H-26),3.28(1H,dd,J=4.2,11.4,H-3),5.29(1H,t,J=7.2,H-24),4.92(1H,d,J=7.8),5.50(1H,d,J=7.8),5.40(1H,d,J=6.6),5.13(1H,d,J=7.8),4.85(1H,brs).¹³C NMR:见表1.2,白色粉末,HR-ESI-MS:[M+H]⁺，found:1211.6360;Calcd:1211.6425 for C₅₈H₉₉O₂₆.¹H NMR(600MHz,pyridine-d5)δ:0.78(1H,s,H-19),0.93(1H,s,H-30),0.94(1H,s,H-18),1.09(1H,s,H-29),1.26(1H,s,H-28),1.60(1H,s,H-21),1.62(1H,s,H-27),1.64(1H,s,H-26),3.28(1H,dd,J=4.2,11.4,H-3),5.31(1H,t,J=6.0,H-24),4.92(1H,d,J=7.8),5.51(1H,d,J=7.8),5.40(1H,d,J=7.2),5.12(1H,d,J=7.8).¹³C NMR:见表1.3,白色粉末,HR-ESI-MS:[M+H]⁺,found:1211.6390;Calcd:1211.6425forC₅₈H₉₉O₂₆.¹H NMR(600MHz,pyridine-d5)δ:0.78(1H,s,H-19),0.92(1H,s,H-30),0.94(1H,s,H-18),1.09(1H,s,H-29),1.25(1H,s,H-28),1.59(1H,s,H-21),1.63(2H,s,H-26,27),3.28(1H,dd,J=4.2,12,H-3),5.29(1H,t,J=7.2,H-24),4.91(1H,d,J=7.8),5.50(1H,d,J=7.8),5.40(1H,d,J=7.2),5.12(1H,d,J=7.8),4.97(1H,d,J=7.2).¹³C NMR:见表1. 

实施例2：化合物4,5,6的制备 

选取Fraction 12采用亲水色谱模式进行制备型HPLC分离（色谱柱为两性离子柱；水（A）和甲醇（B）流动相体系；体积浓度95％B等度洗脱）流速为2mL/min；检测波长为203nm；进样量为50μL。收集各个色谱峰，分别回收溶剂，经核磁实验确定，获得4,5,6四个化合物。HPLC检测纯度大于95％，经理化测定，数据如下：4,白色粉末,HR-ESI-MS:[M+H]⁺,found:1079.5989;Calcd:1079.6002 for C₅₃H₉₁O₂₂.¹H NMR(600MHz,pyridine-d5)δ:0.78(1H,s,H-19),0.92(1H,s,H-30),0.93(1H,s,H-18),1.08(1H,s,H-29),1.26(1H,s,H-28),1.60(1H,s,H-21),1.62(1H,s,H-27),1.64(1H,s,H-26),3.24(1H,dd,J=4.2,11.4,H-3),5.29(1H,t,J=6.6,H-24),4.90(1H,d,J=7.8),5.35(1H,d,J=7.8),5.12(1H,d,J=7.8),4.85(1H,brs).¹³C NMR:见表1.5,白色粉末,HR-ESI-MS:[M+H]⁺,found:1079.6063;Calcd:1079.6002for C₅₃H₉₁O₂₂.¹H NMR(600MHz,pyridine-d5)δ:0.77(1H,s,H-19),0.91(1H,s,H-30),0.93(1H,s,H-18),1.07(1H,s,H-29),1.24(1H,s,H-28),1.59(1H,s,H-21),1.61(1H,s,H-27),1.63(1H,s,H-26),3.25(1H,dd,J=4.2,11.4,H-3),5.29(1H,t,J=6.0,H-24),4.89(1H,d,J=7.2),5.37(1H,d,J=7.8),5.11(1H,d,J=7.8),4.97(1H,d,J=6.0).¹³C NMR:见表1.6,白色粉末,HR-ESI-MS: [M+H]⁺,found:1079.5948;Calcd:1079.6002for C₅₃H₉₁O₂₂.¹H NMR(600MHz,pyridine-d5)δ:0.78(1H,s,H-19),0.93(1H,s,H-30),0.95(1H,s,H-18),1.09(1H,s,H-29),1.26(1H,s,H-28),1.59(1H,s,H-21),1.63(2H,s,H-26,27),3.26(1H,dd,J=4.2,12,H-3),5.29(1H,t,J=6.6,H-24),4.90(1H,d,J=7.2),5.35(1H,d,J=7.8),5.11(1H,d,J=7.8),4.97(1H,d,J=7.8).¹³C NMR:见表1. 

实施例3：化合物7,8,9的制备 

选取Fraction 17采用亲水色谱模式进行制备型HPLC分离（色谱柱为两性离子柱；100％甲醇等度洗脱）流速为2mL/min；检测波长为203nm；进样量为50μL。收集各个色谱峰，分别回收溶剂，经核磁实验确定，获得7,8,9三个化合物。HPLC检测纯度大于95％，经理化测定，数据如下：7,白色粉末,HR-ESI-MS:[M+H]⁺,found:917.5496;Calcd:917.5474for C₄₇H₈₁O₁₇. ¹H NMR (600MHz,pyridine-d5)δ:0.78(1H,s,H-19),0.93(1H,s,H-30),0.94(1H,s,H-18),0.97(1H,s,H-29),1.28(1H,s,H-28),1.59(1H,s,H-21),1.62(1H,s,H-27),1.64(1H,s,H-26),3.36(1H,dd,J=4.8,12,H-3),5.29(1H,t,J=6.0,H-24),4.92(1H,d,J=7.8),5.12(1H,d,J=7.8),4.85(1H,brs).¹³CNMR:见表1.8,白色粉末,HR-ESI-MS:[M+H]⁺,found:917.5398;Calcd:917.5474for C₄₇H₈₁O₁₇.¹H NMR(600MHz,pyridine-d5)δ:0.76(1H,s,H-19),0.91(1H,s,H-30),0.94(1H,s,H-18),0.96(1H,s,H-29),1.27(1H,s,H-28),1.58(1H,s,H-21),1.61(1H,s,H-27),1.63(1H,s,H-26),3.35(1H,dd,J=4.2,12,H-3),5.29(1H,t,J=6.0,H-24),4.92(1H,d,J=7.8),5.10(1H,d,J=7.8),4.97(1H,d,J=6.0).¹³C NM R:见表1.9,白色粉末,HR-ESI-MS:[M+H]⁺,found:917.5402;Calcd:917.5474for C₄₇H₈₁O₁₇.¹H NMR(600MHz,pyridine-d5)δ:0.79(1H,s,H-19),0.93(1H,s,H-30),0.96(1H,s,H-18),0.98(1H,s,H-29),1.29(1H,s,H-28),1.58(1H,s,H-21),1.63(2H,s,H-26,27),3.36(1H,dd,J=4.8,12,H-3),5.29(1H,t,J=7.2,H-24),4.92(1H,d,J=7.8),5.11(1H,d,J=7.8),4.97(1H,d,J=7.2).¹³C NMR:见表1. 

实施例4：化合物10,11,12的制备 

选取Fraction 26采用亲水色谱模式进行制备型HPLC分离，色谱条件：色谱柱为两性离子柱（Click XIon,150×10mm,i.d.,10μm）；100％甲醇等度洗脱；流速为1mL/min；检测波长为203nm；进样量为50μL。收集各个色谱峰，分别回收溶剂，经核磁实验确定，获得10,11,12三个化合物。HPLC检测纯度大于95％，经理化测定，数据如下：10,白色粉末,HR-ESI-MS:[M+H]⁺,found:755.4936;Calcd:755.4946 for C₄₁H₇₁O₁₂.¹H NMR (600MHz,pyridine-d5)δ:0.87(1H,s,H-19),0.91(1H,s,H-30),0.97(1H,s,H-18),1.01(1H,s,H-29),1.21(1H,s,H-28),1.60(1H,s,H-21),1.62(1H,s,H-27),1.65(1H,s,H-26),5.30(1H,t,J=7.2,H-24),5.13(1H,d,J=7.8),4.85(1H,brs). ¹³C NMR:见表1.11,白色粉末,HR-ESI-MS:[M+H]⁺,found:755.4927;Calcd:755.4946for C₄₁H₇₁O₁₂.¹H NMR (600MHz,pyridine-d5)δ:0.85(1H,s,H-19),0.91(1H,s,H-30),0.96(1H,s,H-18),1.01(1H,s,H-29),1.20(1H,s,H-28),1.60(1H,s,H-21),1.62(1H,s,H-27),1.64(1H,s,H-26),5.30(1H,t,J=7.2,H-24),5.11(1H,d,J=7.2),4.98(1H,d,J=6.0).¹³C NMR:见表1.12, 白色粉末,HR-ESI-MS:[M+H]⁺,found:755.4964;Calcd:755.4946forC₄₁H₇₁O₁₂.¹H NMR(600MHz,pyridine-d5)δ:0.87(1H,s,H-19),0.94(1H,s,H-30),0.97(1H,s,H-18),1.02(1H,s,H-29),1.21(1H,s,H-28),1.59(1H,s,H-21),1.64(2H,s,H-26,27),5.30(1H,t,J=7.2,H-24),5.12(1H,d,J=7.8),4.97(1H,d,J=7.2).¹³C NM R:见表1. 

表1化合物P1-P12的¹³C NMR数据(150MHz，氘代吡啶)（Table The¹³CNMR(150MHz)spectral data of the compounds1-12(in pyridine-d5)） 

glu:β-D-吡喃型葡萄糖基,xyl:β-D-吡喃型木糖基,ara:α-L-呋喃型阿拉伯糖基或α-L-吡喃型阿拉伯糖基 

（glu:β-D-glucopyranosyl,xyl:β-D-xylopyranosyl,araF:α-L-arabinofuranosyl,araP:α-L-arabinopyranosyl）。 

一种皂苷异构体分离纯化方法专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。