专利摘要

本发明涉及化学结构式Ⅰ所示的2‑[5‑(氮唑‑1‑基)噻唑‑2‑亚氨基]‑5‑亚苄基‑4‑噻唑啉酮：其中，R1选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或支链烷基；X、Y选自：CH或N；Z选自：氰基、C1～C2烷氧羰基、C3～C4直链烷氧羰基、C3～C4支链烷氧羰基或羧基。2‑[5‑(氮唑‑1‑基)噻唑‑2‑亚氨基]‑5‑亚苄基‑4‑噻唑啉酮在制备流感病毒神经氨酸酶抑制剂中的应用。

权利要求

1.化学结构式Ⅰ所示的2-[5-(氮唑-1-基)噻唑-2-亚氨基]-5-亚苄基-4-噻唑啉酮：

其中，R1选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或支链烷基；X、Y选自：CH或N；Z选自：2-氰基、3-氰基、4-氰基、2-C1～C2烷氧羰基、3-C1～C2烷氧羰基、4-C1～C2烷氧羰基、2-C3～C4直链烷氧羰基、3-C3～C4直链烷氧羰基、4-C3～C4直链烷氧羰基、2-C3～C4支链烷氧羰基、3-C3～C4支链烷氧羰基、4-C3～C4支链烷氧羰基、2-羧基、3-羧基或4-羧基。

2.权利要求1所述的2-[5-(氮唑-1-基)噻唑-2-亚氨基]-5-亚苄基-4-噻唑啉酮选自2-{[4-叔丁基-5-(1H-1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]亚氨基}-5-(4-氰基亚苄基)-4-噻唑啉酮或2-{[4-叔丁基-5-(1H-1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]亚氨基}-5-(2-羧基亚苄基)-4-噻唑啉酮。

3.权利要求1所述的2-[5-(氮唑-1-基)噻唑-2-亚氨基]-5-亚苄基-4-噻唑啉酮的制备方法，其特征在于它的制备反应如下：

式中，R1、X、Y、Z如权利要求1所述。

4.权利要求1～2中任一项所述2-[5-(氮唑-1-基)噻唑-2-亚氨基]-5-亚苄基-4-噻唑啉酮在制备流感病毒神经氨酸酶抑制剂中的应用。

说明书

技术领域

本发明涉及一类新化合物的制备与应用，具体是2-[5-(氮唑-1-基)噻唑-2-亚氨基]-5-亚苄基-4-噻唑啉酮的制备及其在作为流感病毒神经氨酸酶(NA)抑制剂的应用。

背景技术

禽流感病毒可引起禽类的呼吸器官或全身性感染，高致病性禽流感病毒可直接感染禽类，也能直接或间接感染人类。高致病性禽流感病毒是在人群中引发流感的一个潜在危险因素，并会严重地威胁人类健康。2003年7月之后，H5N1禽流感疫情呈现前所未有的暴发，波及亚洲、北美洲、欧洲和非洲17个国家和地区，造成数百人感染及死亡，直接经济损失高达100亿美元。2003年3月，荷兰发生H7N7型禽流感并波及整个欧洲，人类感染者达83例，不仅造成了人类的伤亡，同时重创了家禽养殖业。2009年3月底，墨西哥暴发人感染H1N1型猪流感疫情并扩散到世界各地，据世界卫生组织于2010年2月26日发布的甲型H1N1流感全球情况报告，至少有213个国家和地区的16226例病人死于这场大流感[曾祥兴，李康生。医学与社会，2010，11，4-6。]。经过基因序列分析，H1N1型病毒包含人流感病毒、北美禽流感病毒和北美、欧、亚猪流感病毒基因片段，为几种不同物种流感病毒的混合毒株，而非单独一种猪流感或禽流感病毒。2013年3月，我国首次发现人感染H7N9禽流感病例，截止2015年1月25日，世界卫生组织公布的H7N9禽流感确诊494人，死亡221人。抗禽流感病毒药物的研发，已成为世界各国政府及卫生防疫部门日益关注重大问题之一。

以NA为作用靶标，通过抑制NA活性来抑制流感病毒复制和毒性的NA抑制剂是抗禽流感病毒的第一线药物，代表药物有Zanamivir、Oseltamivir和Peramivir及其衍生物，其中Oseltamivir应用广泛。但已有研究发现一些病毒株对Oseltamivir产生了耐药性。

2010年，Mohan等设计并合成了一类含有三氮唑结构的Oseltamivir类似物，体外酶抑制剂活性测试筛选出一个对NAs(Nl)具有较高活性和选择性的抑制剂A[Mohan S.etal，J.Med.Chem.2010，53(20)，7377-7391]。谢元超以L-羟脯氨酸的吡咯烷为基本母核，设计合成出一类含有三氮唑的化合物B显示有较好的NA抑制活性[谢元超，山东大学，2014]。

A Ki＝0.07μM(N1)，Ki＝2.6μM(N2) B1:IC50＝66.6μM B2:IC50＝58.7μM

发明内容

本发明的目的在于提供化学结构式Ⅰ所示的2-[5-(氮唑-1-基)噻唑-2-亚氨基]-5-亚苄基-4-噻唑啉酮：

其中，R1选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或支链烷基；X、Y选自：CH或N；Z选自：2-氰基、3-氰基、4-氰基、2-C1～C2烷氧羰基、3-C1～C2烷氧羰基、4-C1～C2烷氧羰基、2-C3～C4直链烷氧羰基、3-C3～C4直链烷氧羰基、4-C3～C4直链烷氧羰基、2-C3～C4支链烷氧羰基、3-C3～C4支链烷氧羰基、4-C3～C4支链烷氧羰基、2-羧基、3-羧基或4-羧基。

本发明的目的在于提供的2-[5-(氮唑-1-基)噻唑-2-亚氨基]-5-亚苄基-4-噻唑啉酮选自2-{[4-叔丁基-5-(1H-1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]亚氨基}-5-(4-氰基亚苄基)-4-噻唑啉酮或2-{[4-叔丁基-5-(1H-1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]亚氨基}-5-(2-羧基亚苄基)-4-噻唑啉酮。

本发明的目的在于提供的2-[5-(氮唑-1-基)噻唑-2-亚氨基]-5-亚苄基-4-噻唑啉酮的制备方法，其特征在于它的制备反应如下：

其中，R1选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或支链烷基；X、Y选自：CH或N；Z选自：2-氰基、3-氰基、4-氰基、2-C1～C2烷氧羰基、3-C1～C2烷氧羰基、4-C1～C2烷氧羰基、2-C3～C4直链烷氧羰基、3-C3～C4直链烷氧羰基、4-C3～C4直链烷氧羰基、2-C3～C4支链烷氧羰基、3-C3～C4支链烷氧羰基、4-C3～C4支链烷氧羰基、2-羧基、3-羧基或4-羧基。

本发明的目的在于提供的2-[5-(氮唑-1-基)噻唑-2-亚氨基]-5-亚苄基-4-噻唑啉酮具有流感病毒神经氨酸酶抑制活性，在制备流感病毒神经氨酸酶(NA)抑制剂中的应用。

本发明与现有技术相比具有如下优点：

发明了2-[5-(氮唑-1-基)噻唑-2-亚氨基]-5-亚苄基-4-噻唑啉酮具有流感病毒神经氨酸酶抑制活性。

具体实施方式

以下实施例旨在说明本发明而不是对本发明的进一步限定。

实施例1

2-{[4-叔丁基-5-(1H-1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]亚氨基}-4-噻唑啉酮(2)的制备

11.25g(50mmol)4-叔丁基-5-(1H-1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-胺，100mL二氯甲烷，搅拌溶解，加入6.90g(50mmol)无水碳酸钾，常温搅拌30min，滴加4.0ml(50mmol)氯乙酰氯，常温反应2.5h。反应液倒入冰水，二氯甲烷萃取，饱和碳酸钠水溶液洗涤，合并有机相，无水硫酸钠干燥，脱溶，乙醇重结晶得13.50g白色固体1，收率93％，m.p.130～133℃。

10.25g化合物1，4.95g硫氰酸钾，100ml乙醇溶解，加热回流反应5.0h。冷却，析出固体，抽滤，干燥得9.50g淡黄色固体2-{[4-叔丁基-5-(1H-1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]亚氨基}-4-噻唑啉酮2，收率86％，m.p.182～185℃。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ:1.19(s，9H，3×CH3)，3.90(s，2H，CH2)，8.11(s，1H，C2H2N33-H)，8.28(s，1H，C2H2N35-H)，12.01(s，1H，NH)。

实施例2

2-{[4-叔丁基-5-(1H-1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]亚氨基}-5-(4-氰基亚苄基)-4-噻唑啉酮的制备

30ml乙酸、12.0mmol乙酸钠、4.0mmol中间体2和8.0mmol 4-氰基苯甲醛，加热回流反应10h。冷却，倒入饱和食盐水中，抽滤，水洗，乙醇重结晶得黄色固体2-{[4-叔丁基-5-(1H-1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]亚氨基}-5-(4-氰基亚苄基)-4-噻唑啉酮，收率75％，m.p.250～253℃。1H NMR(DMSO，400MHz)δ:1.19(s，9H，3×CH3)，7.76(d，J＝8.0Hz，2H，C6H42,6-H)，7.99(d，J＝8.0Hz，2H，C6H43,5-H)，8.08(s，1H，＝CH)，8.29(s，1H，C2H2N33-H)，9.03(s，1H，C2H2N35-H)，13.00(s，1H，NH)。

实施例3

2-{[4-叔丁基-5-(1H-1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]亚氨基}-5-(2-羧基亚苄基)-4-噻唑啉酮的制备

30ml乙酸、12.0mmol乙酸钠、4.0mmol中间体2和8.0mmol邻甲酰基苯甲酸，加热回流反应10h。冷却，倒入饱和食盐水中，抽滤，水洗，乙醇重结晶得黄色固体2-{[4-叔丁基-5-(1H-1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]亚氨基}-5-(2-羧基亚苄基)-4-噻唑啉酮，收率79％，m.p.258～260℃。1H NMR(DMSO，400MHz)δ:1.10(s，9H，3×CH3)，7.57～7.61(m，1H，C6H44-H)，7.71～7.72(m，2H,C6H45,6-H)，8.02(d，J＝7.6Hz，1H，C6H43-H)，8.29(s，1H，C2H2N33-H)，8.34(s，1H，＝CH)，9.01(s，1H，C2H2N35-H)，12.88(s，1H，NH)，13.39(s，1H，COOH)。

实施例4

2-{[4-叔丁基-5-(1H-1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]亚氨基}-5-(4-羧基亚苄基)-4-噻唑啉酮的制备

30ml乙酸、12.0mmol乙酸钠、4.0mmol中间体2和8.0mmol对甲酰基苯甲酸，加热回流反应10h。冷却，倒入饱和食盐水中，抽滤，水洗，乙醇重结晶得黄色固体2-{[4-叔丁基-5-(1H-1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]亚氨基}-5-(4-羧基亚苄基)-4-噻唑啉酮，收率82％，m.p.>300℃。1H NMR(DMSO，400MHz)δ:1.19(s，9H，3×CH3)，7.78(d，J＝8.0Hz，2H，C6H42,6-H)，7.81(s，1H，＝CH)，8.05(d，J＝8.0Hz，2H，C6H43,5-H)，8.29(s，1H，C2H2N33-H)，9.03(s，1H，C2H2N35-H)，12.96(s，1H，NH)，13.25(s，1H，COOH)。

实施例5

2-{[4-叔丁基-5-(1H-1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]亚氨基}-5-(4-甲氧羰基亚苄基)-4-噻唑啉酮的制备

30ml乙酸、16.0mmol乙酸钠、4.0mmol中间体2和8.0mmol对甲酰基苯甲酸甲酯，加热回流反应10h。冷却，倒入饱和食盐水中，抽滤，水洗，乙醇重结晶得黄色固体2-{[4-叔丁基-5-(1H-1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]亚氨基}-5-(4-甲氧羰基亚苄基)-4-噻唑啉酮，收率72％，m.p.246～248℃。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ:1.26(s，9H，3×CH3)，3.96(s，3H，CO2CH3)，7.66(d，J＝7.2Hz，2H，C6H42,6-H)，7.85(s，1H，＝CH)，8.14(s，1H，C2H2N33-H)，8.16(d，J＝7.2Hz，2H，C6H43,5-H),8.33(s，1H，C2H2N35-H)，12.03(s，1H，NH)。

实施例6

2-[5-(氮唑-1-基)噻唑-2-亚氨基]-5-亚苄基-4-噻唑啉酮抗流感病毒神经氨酸酶活性

1.实验原理

化合物MUNANA是神经氨酸酶的特异性底物，在神经氨酸酶作用下产生的代谢产物在360nm照射激发下，可产生450nm荧光，荧光强度的变化可以灵敏地反映神经氨酸酶活性。酶均来自A/PR/8/34(H1N1)病毒毒株。

2.实验方法

在酶反应体系中，一定浓度样品与流感病毒神经氨酸酶NA悬浮于反应缓冲液中(pH6.5)，加入荧光底物MUNANA启动反应体系，37℃孵育40分钟后，加反应终止液终止反应。在激发波长360nm和发射波长为450nm的参数条件下，测定荧光强度值。根据荧光强度的减少量可以计算化合物对NA活性的抑制率。

3.检测样品：2-[5-(氮唑-1-基)噻唑-2-亚氨基]-5-亚苄基-4-噻唑啉酮(Ⅰ)

其中，R1选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或支链烷基；X、Y选自：CH或N；Z选自：2-氰基、3-氰基、4-氰基、2-C1～C2烷氧羰基、3-C1～C2烷氧羰基、4-C1～C2烷氧羰基、2-C3～C4直链烷氧羰基、3-C3～C4直链烷氧羰基、4-C3～C4直链烷氧羰基、2-C3～C4支链烷氧羰基、3-C3～C4支链烷氧羰基、4-C3～C4支链烷氧羰基、2-羧基、3-羧基或4-羧基。

4.活性结果

2-[5-(氮唑-1-基)噻唑-2-亚氨基]-5-亚苄基-4-噻唑啉酮在反应系统中检测浓度40.0μg/mL时对神经氨酸酶的抑制率及其IC50值列入表1：

表12-[5-(氮唑-1-基)噻唑-2-亚氨基]-5-亚苄基-4-噻唑啉酮对神经氨酸酶的抑制活性

2-[5-(氮唑-1-基)噻唑-2-亚氨基]-5-亚苄基-4-噻唑啉酮具有良好的抗流感病毒神经氨酸酶活性，可用于制备流感病毒神经氨酸酶抑制剂。

2-[5-(氮唑-1-基)噻唑-2-亚氨基]-5-亚苄基-4-噻唑啉酮作为NA抑制剂的应用专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。