专利摘要

本发明一种具有蛋白印迹的二氧化碳气体刺激响应磁性纳米材料及其制备方法，包括步骤1，将具有CO2响应特性的磁性纳米粒子加入到溶解有目标蛋白质的缓冲溶液中，缓冲溶液pH值为8.0～9.0，得到吸附有目标蛋白质的磁性纳米粒子；步骤2，将该粒子分散在pH值均为8.0～9.0的Tris‑HCl缓冲液或海水中，加入多巴胺盐酸盐反应后洗涤反应产物，得到表面构建有目标蛋白质分子印迹的磁性纳米粒子；步骤3，将表面构建有目标蛋白质分子印迹的磁性纳米粒子分散在水溶液中，通入CO2气体使目标蛋白质脱附，通入N2排除CO2气体，真空干燥后得到所述的磁性纳米材料；可逆性好、能在温和条件下实现对目标蛋白质进行选择性分离。

权利要求

1.一种具有蛋白印迹的二氧化碳气体刺激响应磁性纳米材料的制备方法，其特征在于，包括如下步骤，

步骤1，将具有CO2响应特性的磁性纳米粒子加入到溶解有目标蛋白质的缓冲溶液中，缓冲溶液的pH值为8.0～9.0，得到吸附有目标蛋白质的磁性纳米粒子；

所述具有CO2响应特性的磁性纳米粒子按如下步骤得到：

步骤1a，在甲苯和冰醋酸中加入Fe3O4，然后滴加氨基丙基三甲氧基硅烷，在氮气保护下反应72h，洗涤并干燥得到带有氨基的Fe3O4；

步骤1b，将带有氨基的Fe3O4放入甲苯和三乙胺中，逐滴滴加2-溴异丁酰溴，在氮气的保护下，先在0℃的冰水浴下磁力搅拌3h，之后在室温下反应8～12h，生成2-溴异丁酰溴包覆的Fe3O4；

步骤1c，将2-溴异丁酰溴包覆的Fe3O4分散在无水乙醇中，加入CO2响应单体，通氮气15min，在反应混合物中加入溴化亚铜CuBr及其配体N,N,N',N”,N”-五甲基二亚乙基三胺，再通入氮气反应10分钟后密封，在氮气氛围45℃搅拌反应12h，反应产物洗涤后减压干燥，得到具有CO2响应特性的磁性纳米粒子；

步骤2，将吸附有目标蛋白质的磁性纳米粒子分散在pH值均为8.0～9.0的Tris-HCl缓冲液或海水中，加入多巴胺盐酸盐在室温下反应8h以上，发生多巴胺自聚合反应，生成聚多巴胺，而后洗涤反应产物，得到表面构建有目标蛋白质分子印迹的磁性纳米粒子；

步骤3，将表面构建有目标蛋白质分子印迹的磁性纳米粒子分散在水溶液中，通入CO2气体使目标蛋白质脱附，通入N2排除CO2气体，真空干燥后得到具有蛋白印迹的二氧化碳气体刺激响应磁性纳米材料。

2.根据权利要求1所述的一种具有蛋白印迹的二氧化碳气体刺激响应磁性纳米材料的制备方法，其特征在于，步骤1中所述的磁性纳米粒子加入到溶解有目标蛋白质的缓冲溶液中搅拌8～12h，得到吸附有目标蛋白质的磁性纳米粒子。

3.根据权利要求1所述的一种具有蛋白印迹的二氧化碳气体刺激响应磁性纳米材料的制备方法，其特征在于，步骤1中所述的缓冲溶液为Tris-HCl缓冲液。

4.根据权利要求1所述的一种具有蛋白印迹的二氧化碳气体刺激响应磁性纳米材料的制备方法，其特征在于，步骤3在30～45℃下真空干燥。

5.根据权利要求1所述的一种具有蛋白印迹的二氧化碳气体刺激响应磁性纳米材料的制备方法，其特征在于，步骤1中所述的磁性纳米粒子为顺磁性纳米粒子。

6.根据权利要求5所述的一种具有蛋白印迹的二氧化碳气体刺激响应磁性纳米材料的制备方法，其特征在于，步骤1通过磁铁沉积的方式除去未完全吸附的目标蛋白质，得到吸附有目标蛋白质的磁性纳米粒子。

7.根据权利要求5所述的一种具有蛋白印迹的二氧化碳气体刺激响应磁性纳米材料的制备方法，其特征在于，步骤2加入多巴胺盐酸盐反应后通过磁铁沉积的方式洗涤反应产物，得到表面构建有目标蛋白质分子印迹的磁性纳米粒子。

8.一种由权利要求1～7中任意一项所述的制备方法得到的具有蛋白印迹的二氧化碳气体刺激响应磁性纳米材料。

说明书

技术领域

本发明属于纳米材料和智能材料领域，具体为一种具有蛋白印迹的二氧化碳气体刺激响应磁性纳米材料及其制备方法。

背景技术

磁性纳米粒子因其在药物传递、生物分离、细胞靶向和磁共振成像等领域的潜在应用而备受关注，其中磁性纳米粒子可简称为MNP。为了使MNP具有良好的稳定性、分散性及特定功能性，常需对其进行表面修饰。采用刺激响应聚合物修饰MNP的方式可获得具有刺激响应特性的智能MNP。常见的刺激响应方式包括温度、pH、氧化还原等，然而这些刺激响应方式都存在一定的不足，例如温度响应有一定能耗且可能对生物样品产生一定不良影响，如高温易导致蛋白质变性；pH响应因需要通过反复加入酸和碱来调节pH值，会导致体系中盐的累积。

CO2气体刺激响应能克服传统刺激响应方式的不足，该方式反应条件温和、能赋予材料更好的可逆性，同时CO2气体是一种生物代谢产物，具有良好的细胞渗透性和生物相容性，因此CO2气体刺激响应的智能MNP在生物医疗领域具有广泛的应用前景。清华大学袁金颖教授团队以CO2气体刺激响应聚合物修饰的MNP用于牛血清白蛋白的捕获与释放，证明了具有CO2气体刺激响应的MNP在蛋白质的分离领域具有潜在应用，其中牛血清白蛋白可简称为BSA，具体发表的文章见“Yuan,J.etc al.,Hybrid nanoparticles with CO2-responsive shells and fluorescence-labelled magnetic cores.Journal ofMaterials Chemistry B,2014,2,437-442”；也有研究者将其他的CO2气体刺激响应材料用于BSA的吸附，具体发表的文章见“S.Lin,Patrick T.etc al.,Facile Fabrication ofCO2-Responsive Nanofibers from Photo-Cross-Linked Poly(pentafluorophenylacrylate)Nanofibers,ACS Macro Letter2018,7,431-436”，然而要实现对蛋白质的特异性分离，还存在一个瓶颈问题，即已报道的CO2气体刺激响应聚合物修饰的MNP对蛋白质缺乏选择性，无法对特定蛋白质进行专一性捕获，从而无法实现对不同蛋白质进行有效分离。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明提供一种具有蛋白印迹的二氧化碳气体刺激响应磁性纳米材料及其制备方法，可逆性好、生物相容性好、生物毒性低，能在温和条件下实现对目标蛋白质进行选择性分离。

本发明是通过以下技术方案来实现：

一种具有蛋白印迹的二氧化碳气体刺激响应磁性纳米材料的制备方法，包括如下步骤，

步骤1，将具有CO2响应特性的磁性纳米粒子加入到溶解有目标蛋白质的缓冲溶液中，缓冲溶液的pH值为8.0～9.0，得到吸附有目标蛋白质的磁性纳米粒子；

步骤2，将吸附有目标蛋白质的磁性纳米粒子分散在pH值均为8.0～9.0的Tris-HCl缓冲液或海水中，加入多巴胺盐酸盐反应后洗涤反应产物，得到表面构建有目标蛋白质分子印迹的磁性纳米粒子；

步骤3，将表面构建有目标蛋白质分子印迹的磁性纳米粒子分散在水溶液中，通入CO2气体使目标蛋白质脱附，通入N2排除CO2气体，真空干燥后得到具有蛋白印迹的二氧化碳气体刺激响应磁性纳米材料。

优选的，步骤1中所述的磁性纳米粒子加入到溶解有目标蛋白质的缓冲溶液中搅拌8～12h，得到吸附有目标蛋白质的磁性纳米粒子。

优选的，步骤1中所述的缓冲溶液为Tris-HCl缓冲液。

优选的，步骤2中加入的多巴胺盐酸盐在室温下反应8h以上。

优选的，步骤3在30～45℃下真空干燥。

优选的，步骤1中所述的磁性纳米粒子为顺磁性纳米粒子。

进一步，步骤1通过磁铁沉积的方式除去未完全吸附的目标蛋白质，得到吸附有目标蛋白质的磁性纳米粒子。

再进一步，步骤2加入多巴胺盐酸盐反应后通过磁铁沉积的方式洗涤反应产物，得到表面构建有目标蛋白质分子印迹的磁性纳米粒子。

一种由上述任意一项所述的制备方法得到的具有蛋白印迹的二氧化碳气体刺激响应磁性纳米材料。

与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：

本发明具有蛋白印迹的CO2气体刺激响应磁性纳米材料的制备方法，首先在pH值为8.0～9.0的缓冲溶液中溶解目标蛋白质，将具有CO2响应特性的磁性纳米粒子加入其中后可通过目标蛋白质与CO2响应聚合物之间的疏水相互作用得到吸附有目标蛋白质的磁性纳米粒子，然后将吸附有目标蛋白质的磁性纳米粒子分散在pH值均为8.0～9.0的Tris-HCl缓冲液或海水中，加入多巴胺盐酸盐后，多巴胺盐酸盐在混合体系中形成多巴胺，多巴胺通过自聚合反应，在这种弱碱性水溶液和有氧的温和条件下可有效构建蛋白质分子印迹表面，洗涤反应产物后即可得到表面构建有目标蛋白质分子印迹的磁性纳米粒子，最后将得到的表面构建有目标蛋白质分子印迹的磁性纳米粒子分散在水环境中，通入CO2气体可使目标蛋白质脱附，通入N2排除掉CO2气体，真空干燥，最终得到所需要的具有蛋白印迹的CO2气体刺激响应磁性纳米材料；本发明通过CO2气体刺激响应的表面构建有目标蛋白质分子印迹的磁性纳米粒子，具有反应条件温和，可逆性好，且生物相容性好的优点，对目标蛋白质的空间构象没有影响，有助于目标蛋白质活性的保持，聚多巴胺分子印迹具有反应条件温和的特点，所得到的材料对目标蛋白质具有良好的选择性。

进一步的，选择顺磁性纳米粒子作为磁性纳米粒子展开本发明所述的方法，可方便在之后对吸附体系和反应体系作分离和洗涤操作，也有利于对目标蛋白质进行选择分离的操作。

本发明具有蛋白印迹的CO2响应的磁性纳米粒子，可在混合蛋白质溶液中捕获目标蛋白质，目标蛋白质吸附在磁性纳米粒子上，经过磁场进行分离，再将含有目标蛋白质的磁性纳米粒子单独存放，通入CO2气体可脱附目标蛋白质，进而可对实现目标蛋白质的分离，而磁性纳米粒子可在N2的作用下可排除CO2，能使具有蛋白印迹的CO2响应的磁性纳米粒子回到最初的形态。由于使用CO2气体刺激响应方式，该材料及蛋白质分离过程均具有可逆性好，生物相容性好、生物毒性低。

附图说明

图1为本发明所述的磁性纳米材料的CO2刺激响应过程示意图，其中磁性纳米材料以Fe3O4为例。

图2为本发明所述的磁性纳米材料的合成路线示意图，其中磁性纳米材料以Fe3O4为例。

图3为本发明所述的磁性纳米材料对目标蛋白质进行选择性分离的过程示意图，其中磁性纳米材料以Fe3O4为例。

具体实施方式

下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。

本发明采用分子印迹技术，分子印迹技术是创造一种对特定分子的形状、大小或官能团具有相互匹配功能的识别材料的过程，它能在材料表面形成一种具有特异性识别作用的分子孔穴，因而赋予材料表面优异的选择性，可实现对蛋白质的选择性分离。

本发明利用多巴胺的自聚合反应，可在弱碱性水溶液和有氧的温和条件下有效构建蛋白质分子印迹表面，CO2气体刺激响应原理如图1，聚多巴胺附着在CO2响应的磁性纳米粒子Fe3O4表面，CO2响应聚合物呈收缩的疏水状态，聚多巴胺包覆着CO2响应聚合物，在CO2的作用下CO2响应聚合物带正电，转变为亲水状态，其链状结构伸展开来。在N2的作用下可排除CO2，能使CO2响应单体回到最初的形态，因此这些分子印迹表面可实现不同蛋白质的选择性分离。

本发明一种具有蛋白印迹的二氧化碳气体刺激响应磁性纳米材料的制备方法，包括以下步骤，

步骤1，采用表面引发原子转移自由基聚合技术在磁性纳米粒子表面合成聚合物刷，从而得到CO2气体刺激响应聚合物修饰的MNP，其中表面引发原子转移自由基聚合可简称为SI-ATRP；

步骤2，在无CO2气体刺激的条件下，将目标蛋白质吸附在CO2气体刺激响应聚合物修饰的MNP表面；

步骤3，利用多巴胺的原位聚合在CO2气体刺激响应聚合物修饰的MNP表面构建分子印迹层；

步骤4，在水环境下通入CO2气体，使聚合物链伸展，聚合物由疏水状态转变为亲水状态，将目标蛋白质脱附，通入N2排除CO2，真空干燥后得到具有蛋白印迹的CO2气体刺激响应磁性纳米材料。

本发明具有蛋白印迹的CO2气体刺激响应磁性纳米材料在CO2气体作用下，可对目标蛋白质进行选择性分离。

具体地如图2所示，

步骤1，在干燥的甲苯和冰醋酸中加入磁性纳米粒子，然后滴加氨基丙基三甲氧基硅烷，形成带有氨基的磁性纳米粒子，反应过程在氮气保护下进行72h，洗涤、干燥；然后把带有氨基的磁性纳米粒子放入干燥的甲苯和干燥的三乙胺中，逐滴滴加2-溴异丁酰溴，生成引发剂包覆的磁性纳米粒子，反应过程在氮气保护下进行，先在0℃的冰水浴下磁力搅拌3h以降低反应速率，之后在室温下提高反应速率，可反应8～12h，其中磁性纳米粒子为Fe3O4，引发剂为2-溴异丁酰溴，图中将三乙胺简写为TEA；

将包覆ATRP引发剂的磁性纳米粒子分散在无水乙醇中，加入CO2响应单体，通氮气15min，在反应混合物中加入催化剂溴化亚铜CuBr及其配体N,N,N',N”,N”-五甲基二亚乙基三胺，其中N,N,N',N”,N”-五甲基二亚乙基三胺可简写为PMDETA，再通入氮气反应10分钟后密封，在氮气氛围45℃搅拌反应12h，反应产物洗涤后减压干燥，得到具有CO2响应特性的磁性纳米粒子；

步骤2，将具有CO2响应特性的磁性纳米粒子加入到溶解有BSA的缓冲溶液中搅拌8～12h，以提升BSA与磁性纳米粒子的接触效果，此时MNP表面的聚合物收缩，BSA吸附完成后用磁铁沉积纳米粒子，水洗去未完全吸附的BSA，其中缓冲溶液为Tris-HCl缓冲液，pH值为8.0～9.0，以避免CO2与酸反应；

步骤3，将吸附有目标蛋白BSA的磁性纳米粒子分散在缓冲液中，然后加入多巴胺盐酸盐，可在室温下反应，反应时间在8h以上，以便多巴胺与吸附有目标蛋白BSA的磁性纳米粒子反应完全，避免后期在洗涤时浪费原料，之后在磁铁提供的磁场条件下洗涤，其中缓冲溶液为Tris-HCl缓冲液，pH值为8.0～9.0，图中展示了pH值为8.5，另外，缓冲溶液也可以用海水来代替，需要说明的是Tris代表三羟甲基氨基甲烷，多巴胺盐酸盐简称为DA；

步骤4，将步骤3得到的构建有目标蛋白质分子印迹层的磁性纳米粒子分散在水溶液中，通入CO2气体，使聚合物链伸展，聚合物由疏水状态转变为亲水状态，将目标蛋白质脱附，通入N2排除CO2，真空干燥后得到具有蛋白印迹的CO2气体刺激响应磁性纳米材料。

步骤1中，甲苯和三乙胺必须是干燥的，使用之前要除水；反应全过程要在氮气保护下；氨基丙基三甲氧基硅烷和2-溴异丁酰溴摩尔比为1:1～1.5；磁性纳米粒子为顺磁性纳米粒子，可采用共沉淀法、氧化还原法、水热法中的一种方法制备；同时，ATRP引发剂、CO2响应单体、催化剂和催化剂配体摩尔比约为1：(200～500)：0.1：(0.1～0.2)；CO2响应单体可以是甲基丙烯酸二乙氨基乙酯(简写为DEAEMA)或2-(二甲氨基)甲基丙烯酸乙酯(简写为DMAEMA)中的一种。

步骤2中的目标蛋白质除了BSA还可以是人血清白蛋白(简写为HSA)和溶菌酶(简写为Lys)中的一种。

本发明的蛋白印迹的CO2气体刺激响应磁性纳米材料在CO2气体作用下，可对目标蛋白质进行选择性分离，具体过程如图3所示，以目标蛋白质为印迹模板，在混合蛋白质溶液中，用步骤4得到的具有蛋白印迹的CO2响应的磁性纳米粒子捕获目标蛋白质，目标蛋白质吸附在磁性纳米粒子上经过磁场可进行分离，再将含有目标蛋白质的磁性纳米粒子单独存放，通入CO2气体可脱附目标蛋白质，进而可对目标蛋白质进行分离，而磁性纳米粒子可在N2的作用下可排除CO2，能使具有蛋白印迹的CO2响应的磁性纳米粒子回到最初的形态。

实施例1

本发明一种具有蛋白印迹的二氧化碳气体刺激响应磁性纳米材料的制备方法，包括以下步骤，

步骤1，将100mg磁性纳米粒子分散于50mL干燥的甲苯中，加入49.3μL的冰醋酸，再加入相对应20mmol的4.7mL的氨基丙基三甲氧基硅烷，在氮气保护下室温搅拌72h，得到带有氨基的磁性纳米粒子。乙醇和水洗涤三次，45℃干燥；

在100mL干燥的甲苯和对应25mmol的3.5mL干燥的三乙胺中加入100mg带有氨基的磁性纳米粒子，然后逐滴滴加对应25mmol的3.2mL的2-溴异丁酰溴，在氮气保护下0℃磁力搅拌3h，然后室温下反应8h,得到包覆ATRP引发剂的磁性纳米粒子；

将100mg包覆ATRP引发剂的磁性纳米粒子分散在4mL的无水乙醇中，放入含有磁子的圆底烧瓶，加入940mg的CO2响应单体DEAEMA，通氮气15min，在反应的混合物中加入对应于0.07mmol的10.2mg CuBr和33.2mg的N,N,N',N”,N”-五甲基二亚乙基三胺，再通入氮气反应10分钟后，密封在氮气气氛中45℃搅拌反应12h，反应产物用无水乙醇稀释，在磁铁提供的磁场条件下沉淀，无水乙醇洗涤，洗涤过程重复三次，然后减压干燥，得到具有CO2响应特性的磁性纳米粒子；

步骤2，将1g具有CO2响应特性的磁性纳米粒子分散在50mL的Tris-HCl缓冲液中，pH值为8.5，然后加入0.02g的BSA，搅拌12h，BSA吸附完成后用磁铁沉积纳米粒子，水洗二次，除去未完全吸附的BSA,；

步骤3，将1g吸附有目标蛋白BSA的磁性纳米粒子分散在200mL的Tris-HCl缓冲液中，pH值为8.5，加入0.1g的多巴胺盐酸盐，室温下反应8h，磁场条件下水洗除去缓冲溶液、未反应的多巴胺以及未附在磁性纳米材料上但分散在缓冲液中的聚多巴胺；

步骤4，将步骤3得到的构建有目标蛋白质分子印迹层的磁性纳米粒子分散在水溶液中，通入CO2气体10分钟，脱附目标蛋白BSA，通入N2排除CO2，然后在45℃下真空干燥，得到具有蛋白印迹的CO2响应的磁性纳米材料。

本发明的蛋白印迹的CO2气体刺激响应磁性纳米材料在CO2气体作用下能够实现对BSA的选择性分离。

实施例2

本发明一种具有蛋白印迹的二氧化碳气体刺激响应磁性纳米材料的制备方法，包括以下步骤，

步骤1，将100mg磁性纳米粒子分散于50mL干燥的甲苯中，加入49.3μL的冰醋酸，再加入相对应20mmol的4.7mL的氨基丙基三甲氧基硅烷，在氮气保护下室温搅拌72h，得到带有氨基的磁性纳米粒子。乙醇和水洗涤三次，45℃干燥；

在100mL干燥的甲苯和对应25mmol的3.5mL干燥的三乙胺中加入100mg带有氨基的磁性纳米粒子,然后逐滴滴加对应25mmol的3.2mL的2-溴异丁酰溴，在氮气保护下0℃磁力搅拌3h，然后室温下反应10h,得到包覆ATRP引发剂的磁性纳米粒子；

将100mg包覆ATRP引发剂的磁性纳米粒子分散在4mL的无水乙醇中，放入含有磁子的圆底烧瓶，加入940mg的CO2响应单体DEAEMA，通氮气15min，在反应的混合物中加入对应于0.07mmol的10.2mg CuBr和33.2mg的N,N,N',N”,N”-五甲基二亚乙基三胺，再通入氮气反应10分钟后，密封在氮气氛中45℃搅拌反应12h，反应产物用无水乙醇稀释，磁沉淀，无水乙醇洗涤，过程重复三次，然后减压干燥，得到具有CO2响应特性的磁性纳米粒子；

步骤2，将1g具有CO2响应特性的磁性纳米粒子分散在50mL的Tris-HCl缓冲液中，pH值为8，然后加入0.02g的HSA，搅拌8h，HSA吸附完成后用磁铁沉积纳米粒子，水洗三次，除去未完全吸附的BSA；

步骤3，将1g吸附有目标蛋白HSA的磁性纳米粒子分散在200mL的Tris-HCl缓冲液中，pH值为8，加入0.1g的多巴胺盐酸盐，室温下反应24h，磁场条件下水洗除去缓冲溶液、未反应的多巴胺以及未附在磁性纳米材料上但分散在缓冲液中的聚多巴胺；

步骤4，将步骤3得到的构建有目标蛋白质分子印迹层的磁性纳米粒子分散在水溶液中，通入CO2气体10分钟，脱附目标蛋白HSA，通入N2排除CO2，然后在40℃下真空干燥，得到具有蛋白印迹的CO2响应的磁性纳米材料。

本发明的蛋白印迹的CO2气体刺激响应磁性纳米材料在CO2气体作用下能够实现对HSA的选择性分离。

实施例3

本发明一种具有蛋白印迹的二氧化碳气体刺激响应磁性纳米材料的制备方法，包括以下步骤，

步骤1，将100mg磁性纳米粒子分散于50mL干燥的甲苯中，加入49.3μL的冰醋酸，再加入相对应20mmol的4.7mL的氨基丙基三甲氧基硅烷，在氮气保护下室温搅拌72h，得到带有氨基的磁性纳米粒子。乙醇和水洗涤三次，45℃干燥；

在100mL干燥的甲苯和对应25mmol的3.5mL干燥的三乙胺中加入100mg带有氨基的磁性纳米粒子,然后逐滴滴加对应25mmol的3.2mL的2-溴异丁酰溴，在氮气保护下0℃磁力搅拌3h，然后室温下反应12h,得到包覆ATRP引发剂的磁性纳米粒子；

将100mg包覆ATRP引发剂的磁性纳米粒子分散在4mL的无水乙醇中，放入含有磁子的圆底烧瓶，加入940mg的CO2响应单体DEAEMA，通氮气15min，在反应的混合物中加入对应于0.07mmol的10.2mgCuBr和33.2mg的N,N,N',N”,N”-五甲基二亚乙基三胺，再通入氮气反应10分钟后，密封在氮气氛中45℃搅拌反应12h，反应产物用无水乙醇稀释，磁沉淀，无水乙醇洗涤，过程重复三次，然后减压干燥，得到具有CO2响应特性的磁性纳米粒子；

步骤2，将1g具有CO2响应特性的磁性纳米粒子分散在50mL的Tris-HCl缓冲液中，pH值为9，然后加入0.02g的Lys，搅拌10h，Lys吸附完成后用磁铁沉积纳米粒子，水洗三次，除去未完全吸附的Lys；

步骤3，将1g吸附有目标蛋白Lys的磁性纳米粒子分散在200mL的Tris-HCl缓冲液中，pH值为9，加入0.1g的多巴胺盐酸盐，室温下反应16h，磁场条件下水洗除去缓冲溶液、未反应的多巴胺以及未附在磁性纳米材料上但分散在缓冲液中的聚多巴胺；

步骤4，将步骤3得到的构建有目标蛋白质分子印迹层的磁性纳米粒子分散在水溶液中，通入CO2气体10分钟，脱附目标蛋白Lys，通入N2排除CO2，然后在30℃下真空干燥，得到具有蛋白印迹的CO2响应的磁性纳米材料。

本发明的蛋白印迹的CO2气体刺激响应磁性纳米材料在CO2气体作用下能够实现对Lys的选择性分离。

本发明一种具有蛋白印迹的二氧化碳气体刺激响应磁性纳米材料及其制备方法，以MNP为基底，首先以表面引发原子转移自由基聚合技术在MNP表面构建具有CO2气体刺激响应特性的聚合物分子刷；随后以目标蛋白质为模板在聚合物分子刷表面合成聚多巴胺分子印迹层，赋予其对目标蛋白质的良好选择性。与现有的刺激响应型蛋白质分离材料相比，本发明使用的CO2气体刺激具有温和、无残留、生物相容性好，生物毒性低的特点，能避免pH、温度等传统刺激响应方式可能导致的对蛋白质空间构象和性能的不良影响，分子印迹技术赋予材料良好的选择性，可实现气体控制条件下蛋白质的选择性分离。

一种具有蛋白印迹的二氧化碳气体刺激响应磁性纳米材料及其制备方法专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。