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特定和定量兽毛种类的方法

特定和定量兽毛种类的方法

IPC分类号 : G01N27/62,C07K5/00,C07K7/00,G01N33/483

申请号
CN201380019380.7
可选规格
  • 专利类型: 发明专利
  • 法律状态: 有权
  • 申请日: 2013-04-10
  • 公开号: 104395745A
  • 公开日: 2015-03-04
  • 主分类号: G01N27/62
  • 专利权人: 国立大学法人岐阜大学 ; 一般财团法人毛检试验认证中心

专利摘要

本申请发明的课题在于:提供可以特定和定量兽毛种类的方法,该方法是:对于包含上述兽毛的试样,不是对存在量少的DNA进行分析,而是对作为兽毛的主要成分的蛋白质进行直接分析。本申请发明提供:对于作为兽毛的主要蛋白质成分的角蛋白等的蛋白质成分,通过对兽毛样本进行质谱分析,特定作为分析结果的质量、质荷比(m/z)、上述质荷比的LC洗脱时间、和作为标志物有用的部分序列,基于这些,进行兽毛种类的特定和定量的方法。

权利要求

1.特定和/或定量兽毛种类的方法,其为对于包含兽毛的试样特定和/或定量上述兽毛种类的方法,其特征在于,该方法包含下述步骤:

(a) 通过前处理从上述试样中获得分析样本的步骤;

(b) 使用质谱分析法,分析上述步骤(a)中获得的分析样本,以获得结果的步骤;以及

(c) 根据上述步骤(b)中获得的结果,特定和/或定量上述兽毛种类的步骤。

2.权利要求1中记载的方法,其中,除了上述质谱分析法之外,将液相色谱法与质谱分析组合使用(也记作LC-MS或UPLC-MS)。

3.权利要求1和2的任一项中记载的方法,其中,上述兽毛的种类为选自下述的1个以上的种:牛科山羊属绒山羊种、牛科山羊属安哥拉种、牛科牛属牦牛种、牛科绵羊属绵羊种、骆驼科骆驼属、骆驼科羊驼属羊驼种(或骆马属羊驼种)、和兔科穴兔属安哥拉兔种。

4.权利要求1~3的任一项中记载的方法,其特征在于,上述步骤(c)是:将上述步骤(b)中获得的结果,与对于预先确认了兽毛种类的参照兽毛的试样,在相同条件下进行上述(a)和(b)步骤的结果而获得的参照数据的至少一个进行比较,基于兽毛种特异性检测的质量、和/或质荷比(也记作m/z)、和/或该质荷比的洗脱时间,特定和/或定量兽毛种类的步骤。

5.权利要求4中记载的方法,其中,在上述特定和/或定量兽毛种类的步骤中,上述参照数据为选自下述的质量和质荷比的1种以上的质量和/或质荷比,

(I) 关于牦牛

(1) 牦牛种特异性检测的质量:5948.90±0.02%、或2137.92±0.02%,

(2) 上述起因于质量的分子离子的质荷比(m/z)或其它牦牛种特异性检测的质荷比(m/z):9255.5±0.02%、7392.6±0.02%、5908.7±0.02%、5543.1±0.02%、5949.90±0.02%、1983.52±0.02%、1487.64±0.02%、1191.52±0.02%、2138.92±0.02%、或1069.98±0.02%;

(II) 关于绒山羊种

(1) 绒山羊种特异性检测的质量:8976.45±0.02%、7102.18±0.02%、或7074.18±0.02%,

(2) 上述起因于质量的分子离子的质荷比(m/z)或其它绒山羊种特异性检测的质荷比(m/z):10384.2±0.02%、8976.9±0.02%、6662.2±0.02%、6093.2±0.02%、6002.2±0.02%、8977.45±0.02%、2244.50±0.02%、1795.78±0.02%、7103.18±0.02%、

1776.54±0.02%、1421.44±0.02%、7075.18±0.02%、1769.55±0.02%、或1415.83±0.02%;

(III) 关于绵羊种

(1) 绵羊种特异性检测的质量:17538.88±0.02%、或17584.26±0.02%,

(2) 上述起因于质量的分子离子的质荷比(m/z)或其它绵羊种特异性检测的质荷比(m/z):10339.6±0.02%、8954.6±0.02%、6665.7±0.02%、6036.4±0.02%、17539.88±0.02%、1949.84±0.02%、1754.82±0.02%、1595.47±0.02%、17585.26±0.02%、1955.10±0.02%、1759.47±0.02%、或1599.55±0.02%;

(IV) 关于安哥拉种(也记作马海毛)

(1) 安哥拉种特异性检测的质量:6329.52±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z);

(V) 关于骆驼科羊驼属羊驼种(或骆马属羊驼种)

(1) 羊驼种特异性检测的质量:6358.60±0.02%、或6342,70±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z);

(VI) 兔科穴兔属安哥拉兔种(也记作安哥拉)

(1) 安哥拉兔种特异性检测的质量:1042.43±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z)。

6.权利要求1~3的任一项中记载的方法,其中,通过前处理从上述试样中获得分析样本的步骤(a)包含使用赖氨酰肽链内切酶(也记作Lys-C)的步骤。

7.权利要求6中记载的方法,其特征在于,上述步骤(c)是:将上述步骤(b)中获得的结果,与对于预先确认了兽毛种类的参照兽毛的试样,在相同的条件下进行上述步骤(a)和步骤(b)的结果而获得的参照数据的至少一个进行比较,基于兽毛种特异性检测的质量、和/或质荷比(也记作m/z)、和/或该质荷比的洗脱时间,特定和/或定量兽毛种类的步骤。

8.权利要求6中记载的兽毛种类的特定方法,其特征在于,在上述步骤(c)中,将上述步骤(b)中获得的结果,通过数据处理,作为表示有洗脱时间、检测质荷比和检测强度的图谱表示,与对于预先确认了兽毛种类的参照兽毛的试样,在相同条件下进行上述步骤(a)和步骤(b)的结果而获得的参照图谱的至少一个进行比较,根据其相关度,特定兽毛种类的步骤。

9.权利要求7中记载的方法,其中,在上述特定和/或定量兽毛种类的步骤中,上述参照数据为选自下述的质量和质荷比的1种以上的质量和/或质荷比,

(I) 关于牛科牛属牦牛种 

(1) 牦牛种特异性检测的质量:1364.70±0.02%、1383.72±0.02%、1431.67±0.02%、2469.27±0.02%、或2495.30±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z);

(II) 关于牛科山羊属绒山羊种

(1) 绒山羊种特异性检测的质量:2218.19±0.02%、3379.48±0.02%、或2391.99±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z);

(III) 关于牛科绵羊属绵羊种

(1) 绵羊种特异性检测的质量:2479.30±0.02%、4977.24±0.02%、2340.03±0.02%、2358.02±0.02%、1051.41±0.02%、1033.39±0.02%、2074.12±0.02%、或2174.00±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z);

(IV) 关于骆驼科骆驼属

(1) 骆驼属特异性检测的质量:2888.35±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z);

(V) 关于骆驼科羊驼属羊驼种(或骆马属羊驼种)

(1) 羊驼种(或骆马属羊驼种)特异性检测的质量:4599.37±0.02%、901.47±0.02%、或532.32±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z);

(VI) 兔科穴兔属安哥拉兔种

(1) 安哥拉兔种特异性检测的质量:2303.07±0.02%、2502.15±0.02%、2058.02±0.02%、或1554.81±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z)。

10.权利要求7或9中记载的方法,其特征在于:上述参照数据为牦牛种特异性的质荷比,是包含SEQ ID NO: 1所示氨基酸序列的肽和/或蛋白质的分子离子的质荷比。

11.下述的(1)~(5)的任一项中的兽毛标志物:

(1) SEQ ID NO: 1所示牦牛种兽毛特异性的肽标志物;

(2) SEQ ID NO: 3所示绒山羊兽毛特异性的肽标志物;

(3) 包含SEQ ID NO: 4~9所示氨基酸序列的2个以上组合的绵羊兽毛特异性的肽标志物;

(4) 包含SEQ ID NO: 10~13所示氨基酸序列的2个以上组合的绵羊兽毛特异性的肽标志物;

(5) SEQ ID NO: 2所示牦牛种兽毛特异性的核酸标志物。

12.混用率的算出方法,其是对于包含2种类兽毛的试样,算出其混用率的方法,该方法包含下述步骤:

(a) 通过前处理从上述试样中获得分析样本的步骤;

(b) 使用质谱分析法,分析上述步骤(a)中获得的分析样本,以获得结果的步骤;

(c) 将上述(a)和(b)的步骤在相同条件下,对于2种的片方,从该兽种的兽毛试样的总质量的离子色谱中,仅萃取该兽种特异性的质荷比,制作所表示的离子色谱,对该色谱进行数据处理,算出该兽毛种特异性质荷比的峰面积的步骤;以及

(d) 根据峰面积算出混用率的步骤。

13.权利要求12中记载的方法,其中,在上述步骤(d)之前,追加有下述步骤:

(i) 对于来自2种通用的分子种的质荷比(m/z)制作离子色谱,选择各兽毛通用的质荷比,求出该通用质荷比的峰面积的步骤;以及

(ii) 对于通用质荷比的峰面积,算出兽种特异性的质荷比的峰面积的步骤。

14.权利要求12或13中记载的方法,首先,使用人为混用预先确认了兽毛种类的参照兽毛的试样,将峰面积和混用率图表化,制作标准曲线,在未知试样中使用该标准曲线,根据峰面积算出混用率。

15.混用率的算出方法,其是对于包含1种类以上兽毛的试样,特定上述兽毛的种类,兽毛的种类为2种以上的情形下,算出其混用率的方法,该方法包含下述步骤:

(a) 通过前处理从上述试样中获得分析样本的步骤;

(b) 使用质谱分析法,分析上述步骤(a)中获得的分析样本,以获得结果的步骤;

(c) 根据上述步骤(b)获得的结果,特定上述兽毛种类的步骤;

(d) 上述特定的兽毛种类为2种以上的情形下,对于被鉴定的各兽种,算出该特定的兽特异性质荷比的峰面积;以及

(e) 该兽种与100%参照试样的峰面积进行比较,算出该兽种的混用率的步骤。

16.权利要求15中记载的方法,在上述步骤(e)之前,追加有下述步骤:

(i) 对于来自混用种通用的分子种的质荷比(m/z)制作离子色谱,选择各兽毛通用的质荷比,求出该通用质荷比的峰面积的步骤;以及

(ii) 对于通用质荷比的峰面积,算出兽种特异性的质荷比的峰面积的步骤。

17.权利要求12~16的任一项中记载的方法,其中,在包含2种类以上(以下记载为N种)兽毛的试样中,算出(N-1)种类的兽毛种的混用率,根据与100%的差求出N种的混用率。

18.权利要求12~17的任一项中记载的方法,其是对于包含1种类以上的兽毛和兽毛以外的纤维的试样,算出与其兽毛相关的混用率的方法,该方法包含下述步骤:

通过前处理从上述试样中获得分析样本的步骤(a)之前、或、算出与兽毛相关的混用率的步骤之后,根据JIS L1030规定的解舒法或溶解法等算出兽毛以外的纤维与兽毛的混用比例的步骤。

19.权利要求12~18的任一项中记载的方法,其中,上述兽种特异性的质荷比为选自下述的质荷比的1个以上质荷比,

(I) 关于牦牛种

(1) 牦牛种特异性检测的质量:5948.90±0.02%、或2137.92±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z)或其它牦牛种特异性检测的质荷比(m/z):9255.5±0.02%、7392.6±0.02%、5908.7±0.02%、5543.1±0.02%、5949.90±0.02%、1983.52±0.02%、1487.64±0.02%、1191.52±0.02%、2138.92±0.02%、或1069.98±0.02%;

(II) 关于绒山羊种

(1) 绒山羊种特异性检测的质量:8976.45±0.02%、7102.18±0.02%、或7074.18±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z)或其它绒山羊种特异性检测的质荷比(m/z):10384.2±0.02%、8976.9±0.02%、6662.2±0.02%、6093.2±0.02%、6002.2±0.02%、8977.45±0.02%、2244.50±0.02%、1795.78±0.02%、7103.18±0.02%、

1776.54±0.02%、1421.44±0.02%、7075.18±0.02%、1769.55±0.02%、或1415.83±0.02%;

(III) 关于绵羊种

(1) 绵羊种特异性检测的质量:17538.88±0.02%、或17584.26±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z)或其它绵羊种特异性检测的质荷比(m/z):10339.6±0.02%、8954.6±0.02%、6665.7±0.02%、6036.4±0.02%、

17539.88±0.02%、1949.84±0.02%、1754.82±0.02%、1595.47±0.02%、17585.26±0.02%、1955.10±0.02%、1759.47±0.02%、或1599.55±0.02%;

(IV) 关于安哥拉种(也记作马海毛)

(1) 安哥拉种特异性检测的质量:6329.52 ±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z);

(V) 关于骆驼科羊驼属羊驼种(或骆马属羊驼种)

(1) 羊驼种特异性检测的质量:6358.60±0.02%、或6342,70±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z);

(VI) 兔科穴兔属安哥拉兔种(也记作安哥拉)

(1) 安哥拉兔种特异性检测的质量:1042.43±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z)。

20.权利要求12~18的任一项中记载的方法,其中,通过前处理从上述试样中获得分析样本的步骤(a)包含使用赖氨酰肽链内切酶(也记作Lys-C)的步骤,上述兽种特异性的质荷比为选自下述的质荷比的1个以上质荷比,

(I) 关于牛科牛属牦牛种

(1) 牦牛种特异性检测的质量:1364.70±0.02%、1383.72±0.02%、1431.67±0.02%、2469.27±0.02%、或2495.30±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z);

(II) 关于牛科山羊属绒山羊种

(1) 绒山羊种特异性检测的质量:2218.19±0.02%、3379.48±0.02%、或2391.99±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z);

(III) 关于牛科绵羊属绵羊种

(1) 绵羊种特异性检测的质量:2479.30±0.02%、4977.24±0.02%、2340.03±0.02%、2358.02±0.02%、1051.41±0.02%、1033.39±0.02%、2074.12±0.02%、或2174.00±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z);

(IV) 关于骆驼科骆驼属

(1) 骆驼属特异性检测的质量:2888.35±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z);

(V) 关于骆驼科羊驼属羊驼种(或骆马属羊驼种)

(1) 羊驼种(或骆马属羊驼种)特异性检测的质量:4599.37±0.02%、901.47±0.02%、或532.32±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z);

(VI) 兔科穴兔属安哥拉兔种

(1) 安哥拉兔种特异性检测的质量:2303.07±0.02%、2502.15±0.02%、2058.02±0.02%、或1554.81±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z)。

21.权利要求13或16中记载的方法,其中,通过前处理从上述试样中获得分析样本的步骤(a)包含使用赖氨酰肽链内切酶(也记作Lys-C)的步骤,牦牛种、绒山羊种、和绵羊种通用的质荷比(m/z)为选自下述揭示的质荷比的1个以上质荷比:

(1) 根据质量1070.5±0.02%算出的分子离子的质荷比;

(2) 根据质量1555.76±0.02%算出的分子离子的质荷比;

(3) 根据质量1160.58±0.02%算出的分子离子的质荷比;

(4) 根据质量602.30±0.02%算出的分子离子的质荷比。

22.定量试样中的兽毛的方法,该定量方法包含下述步骤:

(a) 通过前处理从上述试样中获得分析样本的步骤;

(b) 向上述步骤(a)中获得的分析样本中加入包含稳定同位素的兽毛标志物,使用质谱分析法进行分析,以获得结果的步骤;

(c) 算出兽特异性质荷比的峰面积和包含稳定同位素的兽毛标志物的质荷比的峰面积,根据分析样本中加入的兽毛标志物的浓度,将兽毛标志物的质荷比的峰面积换算为浓度或量;以及

(d) 通过与来自萃取液试样的峰面积进行比较,进行萃取液试样中所含兽毛的定量的步骤。

23.权利要求22中记载的方法,其中,通过前处理从上述试样中获得分析样本的步骤(a)包含使用赖氨酰肽链内切酶的步骤,兽毛标志物为权利要求11中记载的任意1个肽标志物。

说明书

技术领域

本发明涉及特定兽毛种类的方法。详细而言,涉及从包含兽毛的试样中获得萃取物,对该萃取物使用质谱分析法特定和/或定量上述兽毛种类的方法。

背景技术

在兽毛产品中,山羊绒(cashmere)纤维由于采自在严酷自然环境下饲养的绒山羊(cashmere goat),因此持有特有的优异性质,以高价进行交易。但是,最近发生了在山羊绒纤维中混入其它动物纤维的质量伪装,已成为问题。

关于这些衣料品所涉及的标识,作为纤维鉴别或纤维混用率的试验方法,根据日本工业规格JIS L 1030(纤维产品的混用率试验方法),规定了使用显微镜法的试验方法。在显微镜法中,作为鉴别毛外观的手法,由于加工而使纤维表面的表面改变或山羊绒在外观上极为相似的情形,有可能影响鉴定结果。特别是,牦牛毛与棕色山羊绒在纤维的表面形状上酷似,被标识为100%山羊绒的产品中即使混入、混用牦牛毛,通过显微镜法也难以鉴定牦牛毛的混入,因此需要更确实且简便地鉴定在山羊绒中混入牦牛毛的方法。

除此之外,在显微镜法中,由于鉴别者的熟练度也可能发生鉴定的偏差。通常,通过多数人的鉴别者进行鉴定,来进行可信赖的鉴别,但显微镜法的辅助技术或与其相关的鉴定方法的开发是重要的课题。

作为利用显微镜法进行的鉴别技术的辅助技术,近年报道了利用DNA进行的鉴别法。特别是,关于包含山羊绒产品的纤维的鉴定,有来自财团法人日本纺织检查协会的申请号:特愿2003-297332(专利文献1:特开2004-121229号公报)、来自财团法人日本化学纤维检查协会的申请号:特愿平11-15616(专利文献2:特开2000-210084号公报)、申请号:特愿平11-135993(专利文献3:特开2000-325098号公报)等专利申请,其中,申请号:特愿平11-15616已经获得授权 (专利文献4:专利第3566570号公报)。这些方法是,基于每个细胞的存在数多的线粒体DNA、例如细胞色素b的序列来设计种特异性的DNA引物,通过以从兽毛产品中萃取的DNA为模板进行PCR来扩增DNA,通过分析该扩增DNA的分子量等来判定种。但是,尽管本发明人也开发了利用DNA进行的鉴定法,但在PCR中,在将是否扩增作为鉴定的判断标准时,即使由兽毛可以观察到扩增也存在着由于毛产品而无法扩增的情形。包含毛根的梳取下来的毛纤维比较容易进行DNA分析,而不含毛根的剪取下来毛纤维难以进行DNA分析,然而,在工业上,使用的几乎都是不含毛根的剪取下来毛纤维。另外,由于进行染料等的处理等,难以有效地萃取DNA。另外,由于对极少的DNA进行扩增,还存在假阳性的危险性,并且,实际上也存在着难以定量的问题。

现有技术文献

专利文献

专利文献1:特开2004-121229号公报;

专利文献2:特开2000-210084号公报;

专利文献3:特开2000-325098号公报;

专利文献4:专利第3566570号公报。

发明内容

为了避免上述问题,本发明的课题在于,提供可以特定和定量兽毛种类的方法,该方法是:对于包含上述兽毛的试样,不是对存在量少的DNA进行分析,而是对作为兽毛的主要成分的蛋白质进行直接分析。

本发明的课题在于:提供通过日本工业规格JIS L 1030(纤维产品的混用率试验方法)规定的显微镜法进行的兽毛产品鉴别法的辅助或与其相关技术的开发。

本申请发明提供:对于作为兽毛的主要蛋白质成分的角蛋白等的蛋白质成分,通过对兽毛样本进行质谱分析,特定作为分析结果的质量、质荷比(m/z)、上述质荷比的LC洗脱时间、和作为标志物有用的部分序列,基于这些,进行兽毛种类的特定和定量、及混用率的算出的方法。

更具体而言,本申请发明人提供实现上述课题的下述发明。

A. 本申请发明

[1]特定和/或定量兽毛种类的方法,其是对于包含兽毛的试样特定和/或定量上述兽毛种类的方法,其特征在于,该方法包含下述步骤:

(a) 通过前处理从上述试样中获得分析样本的步骤;

(b) 使用质谱分析法,分析上述步骤(a)中获得的分析样本,以获得结果的步骤;以及

(c) 根据上述步骤(b)中获得的结果,特定和/或定量上述兽毛种类的步骤。

[2][1]中记载的方法,其中,除了上述质谱分析法之外,还可以将液相色谱法与质谱分析组合使用(也记作LC-MS或UPLC-MS)。

[3][1]和[2]的任一项中记载的方法,其中,上述兽毛的种类为选自下述的1个以上的种:牛科山羊属绒山羊种、牛科山羊属安哥拉种、牛科牛属牦牛种、牛科绵羊属绵羊种、骆驼科骆驼属、骆驼科羊驼属羊驼种(或骆马属羊驼种)、和兔科穴兔属安哥拉兔种。

[4][1]~[3]的任一项中记载的方法,其特征在于,上述步骤(c)是:将上述步骤(b)中获得的结果,与对于预先确认了兽毛种类的参照兽毛的试样、在相同条件下进行上述(a)和(b)步骤的结果而获得的参照数据的至少1个进行比较,基于兽毛种特异性检测的质量、和/或质荷比(也记作m/z)、和/或该质荷比的洗脱时间,特定和/或定量兽毛种类的步骤。

[5][4]中记载的方法,其中,在特定和/或定量上述兽毛种类的步骤中,上述参照数据为选自下述的质量和质荷比的1种以上的质量和/或质荷比,

(I) 关于牦牛种

(1) 牦牛种特异性检测的质量:5948.90±0.02%、或2137.92±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z)或其它牦牛种特异性检测的质荷比(m/z):9255.5±0.02%、7392.6±0.02%、5908.7±0.02%、5543.1±0.02%、

5949.90±0.02%、1983.52±0.02%、1487.64±0.02%、1191.52±0.02%、2138.92±0.02%、或1069.98±0.02%;

(II) 关于绒山羊种

(1) 绒山羊种特异性检测的质量:8976.45±0.02%、7102.18±0.02%、或7074.18 ±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z)或其它绒山羊种特异性检测的质荷比(m/z):10384.2±0.02%、8976.9±0.02%、6662.2±0.02%、6093.2±0.02%、6002.2±0.02%、8977.45±0.02%、2244.50±0.02%、1795.78±0.02%、7103.18±0.02%、

1776.54±0.02%、1421.44±0.02%、7075.18±0.02%、1769.55±0.02%、或1415.83±0.02%;

(III) 关于绵羊种

(1) 绵羊种特异性检测的质量:17538.88±0.02%、或17584.26±0.02%,

(2) 起因于上述质量的分子离子的质荷比(m/z)或其它绵羊种特异性检测的质荷比(m/z):10339.6±0.02%、8954.6±0.02%、6665.7±0.02%、6036.4±0.02%、17539.88±0.02%、1949.84±0.02%、1754.82±0.02%、1595.47±0.02%、17585.26±0.02%、1955.10±0.02%、1759.47±0.02%、或1599.55±0.02%;

(IV) 关于安哥拉种(也记作马海毛)

(1) 安哥拉种特异性检测的质量:6329.52±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z);

(V) 关于骆驼科羊驼属羊驼种(或骆马属羊驼种)

(1) 羊驼种特异性检测的质量:6358.60±0.02%、或6342,70±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z);

(VI) 兔科穴兔属安哥拉兔种(也记作安哥拉)

(1) 安哥拉兔种特异性检测的质量:1042.43±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z)。

[6][1]~[3]的任一项中记载的方法,其中,通过前处理从上述试样中获得分析样本的步骤(a)包含使用赖氨酰肽链内切酶(也记作Lys-C)的步骤。

[7][6]中记载的方法,其特征在于,上述步骤(c)是:将上述步骤(b)中获得的结果,与对于预先确认了兽毛种类的参照兽毛的试样、在相同条件下进行上述步骤(a)和步骤(b)的结果而获得的参照数据的至少1个进行比较,基于兽毛种特异性检测的质量、和/或质荷比(也记作m/z)、和/或该质荷比的洗脱时间,特定和/或定量兽毛种类的步骤。

[8][6]中记载的特定兽毛种类的方法,其特征在于,在上述步骤(c)中,将上述步骤(b)中获得的结果,通过数据处理,作为表示有洗脱时间、检测质荷比和检测强度的图谱表示,与对于预先确认了兽毛种类的参照兽毛的试样、在相同条件下进行上述步骤(a)和步骤(b)的结果而获得的参照图谱的至少1个进行比较,根据其相关度,特定兽毛种类的步骤。

[9][7]或[8]中记载的方法,其中,在上述特定和/或定量兽毛种类的步骤中,上述参照数据为下述的1种以上的质量或质荷比,

(I) 关于牛科牛属牦牛种

(1) 牦牛种特异性检测的质量:1364.70±0.02%、1383.72±0.02%、1431.67±0.02%、2469.27±0.02%、或2495.30±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z);

(II) 关于牛科山羊属绒山羊种

(1) 绒山羊种特异性检测的质量:2218.19±0.02%、3379.48±0.02%、或2391.99±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z);

(III) 关于牛科绵羊属绵羊种

(1) 绵羊种特异性检测的质量:2479.30±0.02%、4977.24±0.02%、2340.03±0.02%、2358.02±0.02%、1051.41±0.02%、1033.39±0.02%、2074.12±0.02%、或2174.00±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z);

(IV) 关于骆驼科骆驼属

(1) 骆驼属特异性检测的质量:2888.35±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z);

(V) 关于骆驼科羊驼属羊驼种(或骆马属羊驼种)

(1) 羊驼种(或骆马属羊驼种)特异性检测的质量:4599.37±0.02%、901.47±0.02%、或532.32±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z);

(VI) 兔科穴兔属安哥拉兔种

(1) 安哥拉兔种特异性检测的质量:2303.07±0.02%、2502.15±0.02%、2058.02±0.02%、或1554.81±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z)。

[10][7]或[9]中记载的方法,其特征在于,上述参照数据为牦牛种特异性的质荷比,且为包含SEQ ID NO: 1所示氨基酸序列的肽和/或蛋白质的分子离子的质荷比,

SEQ ID NO: 1:GLNNRFAAFIDK。

[11][7]或[9]中记载的方法,其特征在于,上述参照数据为牦牛种特异性质荷比,且为由包含SEQ ID NO: 2所示DNA序列的基因表达的蛋白质的分子离子的质荷比,

SEQ ID NO: 2:GGT CTC AAC AAC AGG TTT GCT GCC TTC ATC GAC AAG GTG CGC。

[12][7]或[9]中记载的方法,其特征在于,上述参照数据为绒山羊种特异性的质荷比,且为包含SEQ ID NO: 3所示氨基酸序列的肽和/或蛋白质的分子离子的质荷比,

SEQ ID NO: 3:SD(L或I)EA(Q或K)VES(L或I)(Q或K)M(Q或K)FDVRPK。

[13][7]或[9]中记载的方法,其特征在于,上述参照数据为绵羊种特异性质荷比,且为包含1个以上SEQ ID NO: 4~13所示氨基酸序列的肽和/或蛋白质的分子离子的质荷比:

SEQ ID NO: 4:QF(L或I);

SEQ ID NO: 5:FENEY;

SEQ ID NO: 6:(Q或K)NFVA(L或I)(Q或K);

SEQ ID NO: 7:(L或I)FQ;

SEQ ID NO: 8:YENEF;

SEQ ID NO: 9:(Q或K)(L或I)AVFN(Q或K);

SEQ ID NO: 10:SD(L或I)E;

SEQ ID NO: 11:(Q或K)EE(L或I)(L或I)C(L或I)K;

SEQ ID NO: 12:E(L或I)DS;

SEQ ID NO: 13:K(L或I)C(L或I)(L或I)EE(Q或K)。

[14]下述(1)~(5)的任一项中的肽或核酸兽毛标志物:

(1) SEQ ID NO: 1所示的牦牛种兽毛特异性的肽标志物;

(2) SEQ ID NO: 3所示的绒山羊兽毛特异性的肽标志物;

(3) 包含SEQ ID NO: 4~9所示氨基酸序列的2个以上组合的绵羊兽毛特异性的肽标志物;

(4) 包含SEQ ID NO: 10~13所示氨基酸序列的2个以上组合的绵羊兽毛特异性的肽标志物;

(5) SEQ ID NO: 2所示的牦牛种兽毛特异性的核酸标志物。

[15]混用率的算出方法,其是对于包含2种类兽毛的试样,算出其混用率的方法,该方法包含下述步骤:

(a) 通过前处理从上述试样中获得分析样本的步骤;

(b) 使用质谱分析法,分析上述步骤(a)中获得的分析样本,以获得结果的步骤;

(c) 将上述(a)和(b)的步骤在相同条件下、对于2种的片方,从该兽种的兽毛试样的总质量的离子色谱中仅萃取该兽种特异性的质荷比,制作所表示的离子色谱,数据处理该色谱,算出该兽毛种特异性质荷比的峰面积的步骤;以及

(d) 根据峰面积算出混用率的步骤。

[16][15]中记载的方法,其中,在上述步骤(D)之前,追加有下述步骤:

(i) 对于来自2种通用的分子种的质荷比(m/z),制作离子色谱,选择各兽毛通用的质荷比,求出该通用质荷比的峰面积的步骤;以及

(ii) 对于通用质荷比的峰面积,算出兽种特异性的质荷比的峰面积的步骤。

[17][15]或[16]中记载的方法,首先,使用人为地混用预先确认了兽毛种类的参照兽毛的试样,将峰面积和混用率图表化,制作标准曲线,在未知试样中,使用该标准曲线,根据峰面积算出混用率。

[18]混用率的算出方法,其是对于包含1种类以上兽毛的试样,特定上述兽毛的种类,兽毛种类为2种以上的情形,算出其混用率的方法,该方法包含下述步骤:

(a) 通过前处理从上述试样中获得分析样本的步骤;

(b) 使用质谱分析法,分析上述步骤(a)中获得的分析样本,以获得结果的步骤;

(c) 根据上述步骤(b)中获得的结果,特定上述兽毛种类的步骤;

(d) 上述特定的兽毛种类为2种以上的情形,对于鉴定的各兽种,算出该特定的兽特异性质荷比的峰面积;以及

(e) 该兽种与100%参照试样的峰面积进行比较,算出该兽种的混用率的步骤。

[19][18]中记载的方法,其中,在上述步骤(e)之前,追加有下述步骤:

(i) 对于来自混用种通用的分子种的质荷比(m/z),制作离子色谱,选择各兽毛通用的质荷比,求出该通用质荷比的峰面积的步骤;以及

(ii) 对于通用质荷比的峰面积,算出兽种特异性的质荷比的峰面积的步骤。

[20][15]~[19]中记载的方法,其中,在包含2种类以上 (以下记载为N种)兽毛的试样中,算出(N-1)种类的兽毛种的混用率,根据与100%的差求出N种的混用率。

[21][15]~[20]的任一项中记载的方法,其中,对于包含1种类以上的兽毛和兽毛以外的纤维的试样,算出与其兽毛相关的混用率的方法,该方法包含下述步骤:

通过前处理从上述试样中获得分析样本的步骤(a)之前、或、算出与兽毛相关的混用率的步骤之后,根据JIS L1030规定的解舒法(解じょ法)或溶解法等算出兽毛以外的纤维与兽毛的混用比例的步骤。

[22][15]~[21]的任一项中记载的方法,其中,上述兽种特异性的质荷比为从下述的质荷比中选择的1个以上的质荷比,

(I) 关于牦牛种

(1) 牦牛种特异性检测的质量: 5948.90±0.02%、或2137.92±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z)或其它牦牛种特异性检测的质荷比(m/z):9255.5±0.02%、7392.6±0.02%、5908.7±0.02%、5543.1±0.02%、5949.90±0.02%、1983.52±0.02%、1487.64±0.02%、1191.52±0.02%、2138.92±0.02%、或1069.98±0.02%;

(II) 关于绒山羊种

(1) 绒山羊种特异性检测的质量:8976.45±0.02%、7102.18±0.02%、或7074.18±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z)或其它绒山羊种特异性检测的质荷比(m/z):10384.2±0.02%、8976.9±0.02%、6662.2±0.02%、6093.2±0.02%、6002.2±0.02%、8977.45±0.02%、2244.50±0.02%、1795.78±0.02%、7103.18±0.02%、1776.54±0.02%、1421.44±0.02%、7075.18±0.02%、1769.55±0.02%、或1415.83±0.02%;

(III) 关于绵羊种

(1) 绵羊种特异性检测的质量:17538.88±0.02%、或17585.26±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z)或其它绵羊种特异性检测的质荷比(m/z):10339.6±0.02%、8954.6±0.02%、6665.7±0.02%、6036.4±0.02%、17539.88±0.02%、1949.84±0.02%、1754.82±0.02%、1595.47±0.02%、17586.26±0.02%、1955.10±0.02%、1759.47±0.02%、或1599.55±0.02%;

(IV) 关于安哥拉种(也记作马海毛)

(1) 安哥拉种特异性检测的质量:6329.52±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z);

(V) 关于骆驼科羊驼属羊驼种(或骆马属羊驼种)

(1) 羊驼种特异性检测的质量:6358.60±0.02%、或6342,70±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z);

(VI) 兔科穴兔属安哥拉兔种(也记作安哥拉)

(1) 安哥拉兔种特异性检测的质量:1042.43±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z)。

[23][15]~[21]的任一项中记载的方法,其中,通过前处理从上述试样中获得分析样本的步骤(a)包含使用赖氨酰肽链内切酶(也记作Lys-C)的步骤,上述兽种特异性的质荷比为从下述的质荷比中选择的1个以上的质荷比,

(I) 关于牛科牛属牦牛种

(1) 牦牛种特异性检测的质量:1364.70±0.02%、1383.72±0.02%、1431.67±0.02%、2469.27±0.02%、或2495.30±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z);

(II) 关于牛科山羊属绒山羊种

(1) 绒山羊种特异性检测的质量:2218.19±0.02%、3379.48±0.02%、或2391.99±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z);

(III) 关于牛科绵羊属绵羊种

(1) 绵羊种特异性检测的质量:2479.30±0.02%、4977.24±0.02%、2340.03±0.02%、2358.02±0.02%、1051.41±0.02%、1033.39±0.02%、2074.12±0.02%、或2174.00±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z);

(IV) 关于骆驼科骆驼属

(1) 骆驼属特异性检测的质量:2888.35±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z);

(V) 关于骆驼科羊驼属羊驼种(或骆马属羊驼种)

(1) 羊驼种(或骆马属羊驼种)特异性检测的质量:4599.37±0.02%、901.47±0.02%、或532.32±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z);

(VI) 兔科穴兔属安哥拉兔种

(1) 安哥拉兔种特异性检测的质量:2303.07±0.02%、2502.15±0.02%、2058.02±0.02%、或1554.81±0.02%,

(2) 根据上述(1)记载的质量算出的分子离子的质荷比(m/z)。

[24][16]或[19]中记载的方法,其中,通过前处理从上述试样中获得分析样本的步骤(a)包含使用赖氨酰肽链内切酶(也记作Lys-C)的步骤,牦牛种、绒山羊种和绵羊种通用的质荷比为从下述的质荷比中选择的1个以上的质荷比:

(1) 根据质量1070.5±0.02%算出的分子离子的质荷比; 

(2) 根据质量1555.76±0.02%算出的分子离子的质荷比;

(3) 根据质量1160.58±0.02%算出的分子离子的质荷比;

(4) 根据质量602.30±0.02%算出的分子离子的质荷比。

[25]定量试样中的兽毛的方法,该方法包含下述步骤:

(a) 通过前处理从上述试样中获得分析样本的步骤;

(b) 向上述步骤(a)中获得的分析样本中加入包含稳定同位素的兽毛标志物,使用质谱分析法进行分析,以获得结果的步骤;

(c) 算出兽特异性质荷比的峰面积和包含稳定同位素的兽毛标志物的质荷比的峰面积,根据分析样本中加入的兽毛标志物的浓度,将兽毛标志物的质荷比的峰面积换算为浓度或量;以及

(d) 通过与来自萃取液试样的峰面积进行比较,进行萃取液试样中所含兽毛的定量的步骤。

[26][25]中记载的方法,其中,通过前处理从上述试样中获得分析样本的步骤(a)包含使用赖氨酰肽链内切酶(也记作Lys-C)的步骤,兽毛标志物为[14]中记载的任一种。

B. 而且,本申请发明还包含下述的发明。

[1]特定和/或定量兽毛种类的方法,其是对于包含兽毛的试样特定和/或定量上述兽毛种类的方法,其特征在于,该方法包含下述步骤:

(a) 通过前处理从上述试样中获得分析样本的步骤;

(b) 使用质谱分析法,分析上述步骤(a)中获得的分析样本,以获得结果的步骤;以及

(c) 根据上述步骤(b)中获得的结果,特定和/或定量上述兽毛种类的步骤。

[2][1]中记载的方法,其中,除了上述质谱分析法之外,还可以将液相色谱法与质谱分析组合使用(也记作LC-MS或UPLC-MS)。

[3][1]或[2]中记载的方法,其中,通过前处理从上述试样中获得分析样本的步骤包含使用赖氨酰肽链内切酶(也记作Lys-C)的步骤。

[4][1]~[3]的任一项中记载的方法,其特征在于,在上述方法中,进一步包含下述步骤:将上述步骤(b)中获得的结果,与对于预先确认了兽毛种类的参照兽毛的试样、在相同条件下进行上述(a)和(b)步骤的结果而获得的参照数据的至少1个进行比较,基于兽毛种特异性检测的质量、和/或质荷比(也记作m/z)、和/或该质荷比的洗脱时间,特定和/或定量兽毛种类的步骤。

[5][1]~[4]的任一项中记载的方法,其中,上述兽毛的种类为选自下述的1个以上的种:牛科山羊属绒山羊种、牛科山羊属安哥拉种、牛科牛属牦牛种、牛科绵羊属绵羊种、骆驼科骆驼属、骆驼科羊驼属羊驼种(或骆马属羊驼种)、和兔科穴兔属安哥拉兔种。

[6][1]或[2]中记载的方法,其特征在于,在上述特定和/或定量兽毛种类的步骤中,基于5948.90±0.02%和2137.92±0.02%等牦牛种特异性检测的质量、和/或包含起因于该质量的分子离子的质荷比的m/z=9255.5±0.02%、7392.6±0.02%、5908.7±0.02%、5543.1±0.02%、5949.90±0.02%、1983.52±0.02%、1487.64±0.02%、1191.52±0.02%、2138.92±0.02%和1069.98±0.02%等牦牛种特异性检测的质荷比(也记作m/z)、和/或该质荷比的洗脱时间,特定和/或定量上述兽毛种类。

[7][1]或[2]中记载的方法,其特征在于,在上述特定和/或定量兽毛种类的步骤中,基于8976.45±0.02%、7102.18±0.02%、和7074.18±0.02%等绒山羊种特异性检测的质量、和/或包含起因于该质量的分子离子的质荷比的m/z=10384.2±0.02%、8976.9±0.02%、6662.2±0.02%、6093.2±0.02%、6002.2±0.02%、8977.45±0.02%、2244.50±0.02%、1795.78±0.02%、7103.18±0.02%、1776.54±0.02%、1421.44±0.02%、7075.18±0.02%、1769.55±0.02%、和1415.83±0.02% 等绒山羊种特异性检测的质荷比(也记作m/z)、和/或该质荷比的洗脱时间,特定和/或定量上述兽毛种类。

[8][1]或[2]中记载的方法,其特征在于,在上述特定和/或定量兽毛种类的步骤中,基于17538.88±0.02%、和17584.26±0.02%等绵羊种特异性检测的质量、和/或包含起因于该质量的分子离子的质荷比的m/z=10339.6±0.02%、8954.6±0.02%、6665.7±0.02%、6036.4±0.02%、17539.88±0.02%、1949.84±0.02%、1754.82±0.02%、1595.47±0.02%、17585.26±0.02%、1955.10±0.02%、1759.47±0.02%、和1599.55±0.02%等绒山羊种特异性检测的质荷比(也记作m/z)、和/或该质荷比的洗脱时间,特定和/或定量上述兽毛种类。

[9][1]或[2]中记载的方法,其特征在于,在上述特定和/或定量兽毛种类的步骤中,基于质荷比m/z=1055.92±0.02%等安哥拉种(也记作马海毛)特异性检测的质荷比(也记作m/z)、和/或该质荷比的洗脱时间,特定和/或定量上述兽毛种类。

[10][1]或[2]中记载的方法,其特征在于,在上述特定和/或定量兽毛种类的步骤中,基于质荷比m/z=1272.72±0.02%、或1269.54±0.02%等羊驼种特异性检测的质荷比(也记作m/z)、和/或该质荷比的洗脱时间,特定和/或定量上述兽毛种类。

[11][1]或[2]中记载的方法,其特征在于,在上述特定和/或定量兽毛种类的步骤中,基于质荷比m/z=1043.43±0.02%等安哥拉兔种(也记作安哥拉)特异性检测的质荷比(也记作m/z)、和/或该质荷比的洗脱时间,特定和/或定量上述兽毛种类。

[12][3]中记载的方法,其特征在于,在上述特定和/或定量兽毛种类的步骤中,基于1364.70±0.02%、1383.72±0.02%、1431.67±0.02%、2469.27±0.02%、和2495.30±0.02%等牦牛种特异性的质量(M)、或起因于具有特异性质量的分子的分子离子的质荷比、和/或该质荷比的洗脱时间,特定和/或定量上述兽毛种类。

[13][3]中记载的方法,其特征在于,在上述特定和/或定量兽毛种类的步骤中,基于2218.19±0.02%、3379.48±0.02%、和2391.99±0.02%等绒山羊种特异性的质量(M)、或起因于具有特异性质量的分子的分子离子的质荷比、和/或该质荷比的洗脱时间,特定和/或定量上述兽毛种类。

[14][3]中记载的方法,其特征在于,在上述特定和/或定量兽毛种类的步骤中,基于2479.30±0.02%、4977.24±0.02%、2340.03±0.02%、2358.02±0.02%、1051.41±0.02%、1033.39±0.02%、2074.12±0.02%、和2174.00±0.02%等绵羊种特异性的质量(M)、或起因于具有特异性质量的分子的分子离子的质荷比、和/或该质荷比的洗脱时间,特定和/或定量上述兽毛种类。

[15][3]中记载的方法,其特征在于,在上述特定和/或定量兽毛种类的步骤中,基于牦牛种特异性的质荷比m/z=1365.7±0.02%、683.35±0.02%、和455.90±0.02%的任一个、或包含2个以上质荷比的组合、和/或该质荷比的洗脱时间,特定和/或定量上述兽毛种类。

[16][15]中记载的方法,其特征在于,上述牦牛种特异性的质荷比为包含SEQ ID NO: 1所示氨基酸序列的肽和/或蛋白质的分子离子的质荷比,

SEQ ID NO: 1:GLNNRFAAFIDK。

[17][15]中记载的方法,其特征在于,上述牦牛种特异性的质荷比为由包含SEQ ID NO: 2所示DNA序列的基因表达的蛋白质的分子离子的质荷比,

SEQ ID NO: 2:GGT CTC AAC AAC AGG TTT GCT GCC TTC ATC GAC  AAG GTG CGC。

[18][3]中记载的方法,其特征在于,在上述特定和/或定量兽毛种类的步骤中,基于绒山羊种特异性的质荷比m/z=2219.19±0.02%、1110.10±0.02%、740.40±0.02%、555.55±0.02%的任一个、或包含2个以上质荷比的组合、和/或该质荷比的洗脱时间,特定和/或定量上述兽毛种类。

[19][18]中记载的方法,其特征在于,绒山羊种特异性的质荷比为包含SEQ ID NO: 3所示氨基酸序列的肽和/或蛋白质的分子离子的质荷比,

SEQ ID NO: 3:SD(L或I)EA(Q或K)VES(L或I)(Q或K)M(Q或K)FDVRPK。

[20][3]中记载的方法,其特征在于,在上述特定和/或定量兽毛种类的步骤中,基于绵羊种特异性的质荷比m/z=2480.30±0.02%、1240.65±0.02%、827.43±0.02%、620.82±0.02%、和496.86±0.02%的任一个、或包含2个以上质荷比的组合、和/或该质荷比的洗脱时间,特定和/或定量上述兽毛种类。

[21][20]中记载的方法,其特征在于,上述绵羊种特异性的质荷比为包含2个以上SEQ ID NO: 4~9所示氨基酸序列的肽和/或蛋白质的分子离子的质荷比:

SEQ ID NO: 4:QF(L或I);

SEQ ID NO: 5:FENEY;

SEQ ID NO: 6:(Q或K)NFVA(L或I)(Q或K);

SEQ ID NO: 7:(L或I)FQ;

SEQ ID NO: 8:YENEF;

SEQ ID NO: 9:(Q或K)(L或I)AVFN(Q或K)。

[22][3]中记载的方法,其特征在于,在上述特定和/或定量兽毛种类的步骤中,基于绵羊种特异性的质荷比m/z=2075.12±0.02%、1038.06±0.02%、692.37±0.02%、519.53±0.02%、和415.82±0.02%的任一个、或包含2个以上质荷比的组合、和/或该质荷比的洗脱时间,特定和/或定量上述兽毛种类。

[23][22]中记载的方法,其特征在于,上述绵羊种特异性的质荷比为包含1个以上SEQ ID NO: 10~13所示氨基酸序列的肽和/或蛋白质的分子离子的质荷比:

SEQ ID NO: 10:SD(L或I)E;

SEQ ID NO: 11:(Q或K)EE(L或I)(L或I)C(L或I)K;

SEQ ID NO: 12:E(L或I)DS;

SEQ ID NO: 13:K(L或I)C(L或I)(L或I)EE(Q或K)。

本说明书包含作为本申请优先权基础的日本专利申请2012-089662号的说明书和/或附图中记载的内容。

附图简述

图1显示兽毛萃取物的质谱分析(MALDI-TOF型质谱分析装置)的结果。需要说明的是,绒山羊种记载为山羊绒、牦牛种记载为牦牛毛、绵羊种记载为羊毛。

图2-1显示各兽毛萃取物中、牦牛种特异性质荷比m/z=1983.52±0.02%和1487.64±0.02%累计的离子色谱。

图2-2显示各兽毛萃取物中、牦牛种特异性质荷比m/z=1069.98±0.02%的离子色谱。

图2-3显示各兽毛萃取物中、绒山羊种特异性质荷比m/z=1795.78±0.02%的离子色谱。

图2-4显示各兽毛萃取物中、绒山羊种特异性质荷比m/z=1421.44±0.02%的离子色谱。

图2-5显示各兽毛萃取物中、绒山羊种特异性质荷比m/z=1415.83±0.02%的离子色谱。

图2-6显示各兽毛萃取物中、绵羊种特异性质荷比m/z=1754.82±0.02%和1949.84±0.02%累计的离子色谱。

图2-7显示各兽毛萃取物中、绵羊种特异性质荷比m/z=1759.47±0.02%的离子色谱。

图2-8显示各兽毛萃取物中、安哥拉种(马海毛)特异性质荷比m/z=1055.92±0.02%的离子色谱。

图2-9显示各兽毛萃取物中、羊驼种特异性质荷比m/z=1272.72±0.02%的离子色谱。

图2-10显示各兽毛萃取物中、羊驼种特异性质荷比m/z=1269.54±0.02%的离子色谱。

图2-11显示各兽毛萃取物中、安哥拉兔种特异性质荷比m/z=1043.43±0.02%的离子色谱。

图3-1显示质荷比m/z=1365.7付近的放大图。

图3-2显示质荷比m/z=2287付近的放大图。

图4a显示从实施了染色处理等的兽毛中萃取后,进行酶处理、质谱分析1的结果。

图4b显示从实施了染色处理等的兽毛中萃取后,进行酶处理、质谱分析2的结果。

图5-1显示将兽毛萃取物进行酶处理、质谱分析(总质量色谱)的结果。

图5-2显示上述图5-1中绒山羊特异性质量的色谱结果。

图5-3显示上述图5-1中牦牛特异性质量的色谱结果。

图5-4显示图5-1中绵羊特异性质量的色谱结果。

图5-5显示将兽毛(牦牛毛)萃取物进行酶处理、质谱分析结果的图谱表示。横轴为洗脱时间,纵轴为质量分布。伴随着颜色变红,离子强度增强。

图5-6显示将兽毛(山羊绒)萃取物进行酶处理、质谱分析结果的图谱表示。横轴为洗脱时间,纵轴为质量分布。伴随着颜色变红,离子强度增强。

图5-7显示将兽毛(绵羊)萃取物进行酶处理、质谱分析结果的图谱表示。横轴为洗脱时间,纵轴为质量分布。伴随着颜色变红,离子强度增强。

图6-1显示绒山羊种原毛与牦牛种原毛的各混用比率样本的总质量离子色谱。

图6-2显示上述图6-1中牦牛种特异性的质荷比m/z=683.35的离子色谱。另外,明确了牦牛的混入率在2%以上时可以检测到。

图6-3显示上述图6-2的牦牛特异性质量峰面积与混用率的关系。

图7-1显示从实施了染色处理等的兽毛(也记作原毛或原料)中萃取后,进行酶处理、质谱分析的结果。

图7-2显示从实施了染色处理等的兽毛(也记作原毛或原料)中萃取后,进行酶处理、质谱分析的结果。

图7-3显示从实施了染色处理等的兽毛(也记作原毛或原料)中萃取后,进行酶处理、质谱分析的结果。

图7-4显示从实施了染色处理等的兽毛(也记作原毛或原料)中萃取后,进行酶处理、质谱分析的结果。

图7-5显示从实施了染色处理等的兽毛(也记作原毛或原料)中萃取后,进行酶处理、质谱分析的结果。

图7-6显示从实施了染色处理等的兽毛(也记作原毛或原料)中萃取后,进行酶处理、质谱分析的结果。

图7-7显示从实施了染色处理等的兽毛(也记作原毛或原料)中萃取后,进行酶处理、质谱分析的结果。

图7-8显示从实施了染色处理等的兽毛(也记作原毛或原料)中萃取后,进行酶处理、质谱分析的结果。

图7-9显示从实施了染色处理等的兽毛(也记作原毛或原料)中萃取后,进行酶处理、质谱分析的结果。

图7-10显示从实施了染色处理等的兽毛(也记作原毛或原料)中萃取后,进行酶处理、质谱分析的结果。

图7-11显示从实施了染色处理等的兽毛(也记作原毛或原料)中萃取后,进行酶处理、质谱分析的结果。

图7-12显示从实施了染色处理等的兽毛(也记作原毛或原料)中萃取后,进行酶处理、质谱分析的结果。

图7-13显示从实施了防水加工等的兽毛(也记作原毛或原料)中萃取后,进行酶处理、质谱分析的结果。

图7-14显示从实施了防水加工等的兽毛(也记作原毛或原料)中萃取后,进行酶处理、质谱分析的结果。

图7-15显示从实施了防水加工等的兽毛(也记作原毛或原料)中萃取后,进行酶处理、质谱分析的结果。

图7-16显示从实施了防水加工等的兽毛(也记作原毛或原料)中萃取后,进行酶处理、质谱分析的结果。

图7-17显示从实施了防水加工等的兽毛(也记作原毛或原料)中萃取后,进行酶处理、质谱分析的结果。

图7-18显示从实施了防水加工等的兽毛(也记作原毛或原料)中萃取后,进行酶处理、质谱分析的结果。

图7-19显示从实施了柔软加工等的兽毛(也记作原毛或原料)中萃取后,进行酶处理、质谱分析的结果。

图7-20显示从实施了柔软加工等的兽毛(也记作原毛或原料)中萃取后,进行酶处理、质谱分析的结果。

图7-21显示从实施了柔软加工等的兽毛(也记作原毛或原料)中萃取后,进行酶处理、质谱分析的结果。

图7-22显示从实施了柔软加工等的兽毛(也记作原毛或原料)中萃取后,进行酶处理、质谱分析的结果。

图7-23显示从实施了柔软加工等的兽毛(也记作原毛或原料)中萃取后,进行酶处理、质谱分析的结果。

图7-24显示从实施了柔软加工等的兽毛(也记作原毛或原料)中萃取后,进行酶处理、质谱分析的结果。

图8-1显示将产品萃取物进行酶处理、质谱分析(MALDI-TOF型质谱分析装置)的结果。

图8-2显示将产品萃取物进行酶处理、质谱分析(MALDI-TOF型质谱分析装置)的结果。

图8-3显示将产品萃取物进行酶处理、质谱分析(MALDI-TOF型质谱分析装置)的结果。

图9-1显示将产品萃取物进行酶处理、质谱分析的结果。

图9-2显示上述图9-1中山羊绒特异性质量的色谱结果。

图9-3显示上述图9-1中牦牛特异性质量的色谱结果。

图9-4显示上述图9-1中绵羊特异性质量的色谱结果。

图10-1显示牦牛种特异性的质荷比m/z=683.35的分析结果。

图10-2显示绒山羊种特异性的质荷比m/z=740.4的分析结果。

图10-3显示绵羊种特异性的质荷比m/z=620.8的分析结果。

图10-4显示绵羊种特异性的质荷比m/z=692.4的分析结果。

图11显示利用牦牛种特异性分子质量的牦牛种兽毛的定量的研究结果。

图12-1显示山羊绒产品与牦牛产品的各混用率样本的总质量离子色谱。

图12-2显示图12-1中牦牛种特异性的质荷比m/z=683.35的离子色谱。

图12-3显示山羊绒产品与绵羊产品(羊毛)的各混用比率样本的总质量离子色谱。

图12-4显示图12-3中绵羊种特异性的质荷比m/z=620.82的离子色谱。

图12-5显示得自图12-2的牦牛种特异性的质荷比m/z=683.35的峰面积和各分析中牦牛产品的重量%的关系。

图12-6显示得自图12-4的绵羊种特异性的质荷比m/z=620.82的峰面积和各分析中绵羊产品(羊毛)的重量%的关系。

具体实施方式

1. 首先

根据以往的基于DNA的分析法、例如通过以从兽毛产品中萃取的DNA为模板进行PCR来扩增DNA,通过分析该扩增DNA的分子量等来判定种的方法,存在着由于毛产品而无法分析?鉴别的情形。因此,本申请发明人研究了更确实的种辨别方法的提供。

本发明人研究的不是通过扩增毛产品中微量含有的DNA来进行检测,而是对是否可以开发将作为兽毛构成分子的蛋白质等进行直接分析的分析?鉴别方法的、各种分析方法进行了研究。

作为蛋白质的分析方法,已知有各种方法,但是作为无论哪个序列都可再现性高且简便地进行分析的方法,本申请发明人尝试了通过质谱分析法进行的分析。质谱分析兽毛中的蛋白质时,由于获得了与兽种特异性的蛋白质序列相符的质谱分析结果,于是,本发明人通过分析该质谱分析的结果,对可以鉴别兽毛种类的可能性进行了研究。通过将试行错误的结果、包含兽毛的产品等调制的样本,根据需要进行前处理之后,进行质谱分析,发现了依据该兽毛的种类、换句话说依据生长有该兽毛的兽的种类,观察到特异性的质量峰。

2. 利用质谱分析的兽毛鉴别方法和兽毛种定量方法

在本申请发明中,包含上述“用于解决课题的手段”中记载的方法,并且,包含“通过将从包含兽毛等的产品中采取的含兽毛试样,根据需要进行前处理,进行质谱分析、或

特定和定量兽毛种类的方法专利购买费用说明

专利买卖交易资料

Q:办理专利转让的流程及所需资料

A:专利权人变更需要办理著录项目变更手续,有代理机构的,变更手续应当由代理机构办理。

1:专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2:按规定缴纳著录项目变更手续费。

3:同时提交相关证明文件原件。

4:专利权转移的,变更后的专利权人委托新专利代理机构的,应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A:(1)直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,(2)通过代办处缴纳,(3)通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q:专利转让变更,多久能出结果

A:著录项目变更请求书递交后,一般1-2个月左右就会收到通知,国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。

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