专利摘要

本发明涉及化学结构式Ⅰ所示的[2‑(1H)‑喹啉酮‑3‑基]氨甲基膦酸酯或其盐：R选自：C1～C2烷基、C3～C4直链烷基或支链烷基；X1、X2选自：氢、氘、C1～C2烷基；X3、X7选自：氢、氘、C1～C2烷基、氟、氯、溴、碘或硝基；X4、X6选自：氢、氘、C1～C2烷基；X5选自：氢、氘、C1～C2烷基或硝基；n＝0或1。[2‑(1H)‑喹啉酮‑3‑基]氨甲基膦酸酯或其盐在制备神经氨酸酶抑制剂中的应用。

权利要求

1.化学结构式Ⅰ所示的[2-(1H)-喹啉酮-3-基]氨甲基膦酸酯或其盐：

R选自：C1～C2烷基、C3～C4直链烷基或支链烷基；X1、X2选自：氢、氘、C1～C2烷基；X3、X7选自：氢、氘、C1～C2烷基、氟、氯、溴、碘或硝基；X4、X6选自：氢、氘、C1～C2烷基；X5选自：氢、氘、C1～C2烷基或硝基；n＝0或1；盐选自：盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、硫酸盐、硝酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、苹果酸盐、乳酸盐、丁二酸盐或丁烯二酸盐。

2.权利要求1所述的[2-(1H)-喹啉酮-3-基]氨甲基膦酸酯或其盐，其选自下列化合物：

其中，R如权利要求1所述。

3.权利要求1所述的[2-(1H)-喹啉酮-3-基]氨甲基膦酸酯或其盐，其选自：[2-(1H)-喹啉酮-3-基]苯氨甲基膦酸二乙酯、[2-(1H)-喹啉酮-3-基]苄氨甲基膦酸二乙酯、[2-(1H)-喹啉酮-3-基]-2-甲基苯氨甲基膦酸二乙酯、[2-(1H)-喹啉酮-3-基]-2,4-二硝基苯氨甲基膦酸二乙酯或[2-(1H)-喹啉酮-3-基]-2-氯-4-硝基苯氨甲基膦酸二乙酯。

4.权利要求1所述的[2-(1H)-喹啉酮-3-基]氨甲基膦酸酯的制备方法，其特征在于它的制备反应如下：

其中，n、R、X1～X7如权利要求1所述。

5.权利要求1～3中任意一项所述的[2-(1H)-喹啉酮-3-基]氨甲基膦酸酯或其盐在制备神经氨酸酶抑制剂中的应用。

说明书

技术领域

本发明涉及一类新化合物的制备与应用；具体是[2-(1H)-喹啉酮-3-基]氨甲基膦酸酯的制备与作为流感病毒神经氨酸酶抑制剂的应用。

背景技术

禽流感病毒(avian influenza virus，AIV)属于甲型流感病毒，可以分为16个H(H1-H16)亚型和9个N(N1-N9)亚型，在甲型流感病毒众多亚型中，H5和H7为高致病性禽流感病毒。至今发现能直接感染人的禽流感病毒亚型有H5N1、H7N2、H7N3、H7N7、H9N2、H10N7、H7N9以及2013年12月在我国江西发现了新禽流感H10N9亚型。这些亚型的症状表现各不一样，主要可以表现为呼吸道症状、结膜炎，甚至死亡。其中高致病性H5N1亚型和2013年3月在人体上首次发现的新禽流感H7N9亚型尤为引人关注。

1997年，在香港首次发现能直接感染人类的H5N1亚型。截止到2014年7月，全球共报告了人感染高致病性H5N1禽流感667例，其中死亡了393例。病例分布于16个国家，其中，我国发现了45例，死亡30例。大多数人感染H5N1禽流感病例为年轻人和儿童。2009爆发的H1N1流感病毒，导致了全球性的高速传播，对全球健康构成了严重的威胁。截止到2014年12月世界卫生组织(World Health Organization，WHO)公布的H1N1流感确诊131万多人，死亡14000多人。2013年3月，我国首次发现人感染H7N9禽流感病例，为全球首次发现的新禽流感病毒亚型。截止2015年1月25日，世界卫生组织公布的H7N9禽流感确诊494人，死亡221人。

抗流感病毒药物主要分为两类：M2离子通道抑制剂和NA抑制剂。M2离子通道抑制剂因易产生耐药性，对胃肠道及中枢神经系统表现出严重副作用，且仅对A型有效，临床应用受到极大限制。而NA抑制剂是一类相对较新的抗A、B型流感病毒药物，它通过粘附于新形成病毒颗粒NA表面的糖蛋白，阻止宿主细胞释放新的病毒，并增加新生病毒自身聚集，降低其扩散性和感染性。因此，NA抑制剂成为目前抗流感药物研究的重点。到目前为止，作为神经氨酸酶抑制剂已上市的抗流感病毒药物主要有扎那米韦(Zanamivir)，奥司米韦(Oseltamivir)和帕拉米韦(Peramivir)。

2011年，美国TSRL公司和中国台湾的中央研究院在扎那米韦的结构基础上进行修饰，分别设计合成了一系列扎那米韦氨基酸前药和扎那米韦膦酸酯类药物，这两类药物也具有显 著的NA抑制作用，有可能作为抗流感的治疗药物。

近年来药物研究工作者对大量化合物的神经氨酸酶抑制活性进行了研究。中国发明专利(CN101570521B)描述了4-叔丁基-6-苯基-2-氨基-6H-1，3-噻嗪盐的制备方法及其医药上用于制备流感病毒神经氨酸酶抑制剂。

中国发明专利(CN101891705B；CN102204914B)分别描述了4-烷基-6-芳基-2-酰氨基-1，3-噻嗪-5-甲酸酯和4-烷基-6-芳基-5-乙酰基-1，3-噻嗪作为制备神经氨酸酶抑制剂的应用。

发明内容

本发明的目的在于提供化学结构式Ⅰ所示的[2-(1H)-喹啉酮-3-基]氨甲基膦酸酯或其盐：

R选自：C1～C2烷基、C3～C4直链烷基或支链烷基；X1、X2选自：氢、氘、C1～C2烷基；X3、X7选自：氢、氘、C1～C2烷基、氟、氯、溴、碘或硝基；X4、X6选自：氢、氘、C1～C2烷基；X5选自：氢、氘、C1～C2烷基或硝基；n＝0，1；盐选自：盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、硫酸盐、硝酸盐、硝酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、苹果酸盐、乳酸盐、丁二酸盐或丁烯二酸盐。

本发明的目的在于提供的[2-(1H)-喹啉酮-3-基]氨甲基膦酸酯选自下列化合物：

其中，R选自：C1～C2烷基、C3～C4直链烷基或支链烷基。

本发明的目的在于提供的[2-(1H)-喹啉酮-3-基]氨甲基膦酸酯选自：[2-(1H)-喹啉酮-3-基]苯氨甲基膦酸二乙酯、[2-(1H)-喹啉酮-3-基]苄氨甲基膦酸二乙酯、[2-(1H)-喹啉酮-3-基]-2-甲基苯氨甲基膦酸二乙酯、[2-(1H)-喹啉酮-3-基]-2,4-二硝基苯氨甲基膦酸二乙酯或[2-(1H)-喹啉酮-3-基]-2-氯-4-硝基苯氨甲基膦酸二乙酯。

本发明的目的在于提供了[2-(1H)-喹啉酮-3-基]氨甲基膦酸酯的制备方法，其特征在于它的制备反应如下：

其中，R选自：C1～C2烷基、C3～C4直链烷基或支链烷基；X1、X2选自：氢、氘、C1～C2烷基；X3、X7选自：氢、氘、C1～C2烷基、氟、氯、溴、碘或硝基；X4、X6选自：氢、氘、C1～C2烷基；X5选自：氢、氘、C1～C2烷基或硝基；n＝0，1；盐选自：盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、硫酸盐、硝酸盐、硝酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、苹果酸盐、乳酸盐、丁二酸盐或丁烯二酸盐。

本发明的目的在于提供了[2-(1H)-喹啉酮-3-基]氨甲基膦酸酯或其盐在制备神经氨酸酶抑制剂中的应用。

本发明与现有技术相比具有如下优点：

本发明首次制备了[2-(1H)-喹啉酮-3-基]氨甲基膦酸酯或其盐；其具有抗流感病毒神经氨酸酶活性。

具体实施方式

以下实施例旨在说明本发明而不是对本发明的进一步限定。

实施例1

[2-(1H)-喹啉酮-3-基]苯氨甲基膦酸二乙酯的制备

(1)3-甲酰基-2-(1H)-喹啉酮的制备

98ml POCl3逐滴加入到7ml N,N-二甲基甲酰胺中，在0～5℃搅拌30min，加入50mmol乙酰苯胺，升温至90℃，反应16h。冷却，反应也倾入500ml冰水中，抽滤，用水洗涤。固体中加入200ml 70％的醋酸溶液，95℃反应4h。冷却反应液，析出絮状固体，过滤，水洗，干燥得3-甲酰基-2-(1H)-喹啉酮，收率73.8％，m.p.303～305℃。

(2)[2-(1H)-喹啉酮-3-基]苯氨甲基膦酸二乙酯的制备

2mmol 3-甲酰基-2-(1H)-喹啉酮、2mmol苯胺和15ml甲苯，室温搅拌10min，加入2mmol亚磷酸二乙酯，回流4h(TLC监测)，冷却，反应液旋蒸部分溶剂，析出固体，过滤，乙醇洗涤，干燥得[2-(1H)-喹啉酮-3-基]苯氨甲基膦酸二乙酯，收率60％，m.p.194～196℃。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ：11.52(s，1H，NH)，8.06(d，J＝3.7Hz，1H)，7.52(t，J＝6.9Hz，1H)，7.48(d，J＝7.9Hz，1H)，7.36(d，J＝8.1Hz，1H)，7.19(t，J＝7.5Hz，1H)，7.11(t，J＝8Hz，1H)，6.74～6.68(m，3H)，5.58～5.52(m，1H，NCHP)，4.32～4.25(m，2H，OCH2)，4.11～3.99(m，2H，OCH2)，1.34(t，3H，J＝7.1Hz，CH3)，1.14(t，3H，J＝7.0Hz，CH3)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ：163.43、146.26、138.66、138.04、130.53、129.30、128.66、128.17、122.69、119.99、118.47、115.81、113.74、63.89、63.52、48.70、47.16、16.54和16.30。

实施例2

[2-(1H)-喹啉酮-3-基]苄氨甲基膦酸二乙酯的制备

2mmol 3-甲酰基-2-(1H)-喹啉酮，2mmol苄胺和15ml甲苯，室温搅拌10min，加入2mmol亚磷酸二乙酯，回流1h(TLC监测)；用V石油醚：V乙酸乙酯＝1：1柱层析，干燥得[2-(1H)-喹啉酮-3-基]苄氨甲基膦酸二乙酯，收率67.5％，m.p.113～116℃。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：12.34(s，1H，NH)，8.10(d，J＝3.2Hz，1H)，7.61(d，J＝7.6Hz，2H)，7.51(t，J＝7.6Hz，1H)，7.40(d，1H，J＝8.4Hz，1H)，7.65(d，J＝7.6Hz，1H)，7.34～7.26(m，4H)，7.24～7.21(m，2H)，4.80～4.75(m，1H，NCHP)，4.32～4.20(m，2H，OCH2)，4.11～4.00(m，2H，OCH2)，3.90～3.69(m，2H，CH2)，1.32(t，J＝6.8Hz，3H，CH3)，1.18(t，J＝6.8Hz，3H，CH3)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ：163.61、139.44、138.01、130.53、128.40、128.35、127.95、127.12、122.69、119.92、115.96、109.38、63.46、62.88、51.97、51.82、18.35、16.51和16.35。

实施例3

[2-(1H)-喹啉酮-3-基]-2-甲基苯氨甲基膦酸二乙酯的制备

2mmol 3-甲酰基-2-(1H)-喹啉酮，2mmol 2-甲基苯胺和15ml甲苯，室温搅拌10min，加入2mmol亚磷酸二乙酯，回流3h(TLC监测)；用V石油醚：V乙酸乙酯＝1：1柱层析，干燥得[2-(1H)-喹啉酮-3-基]-2-甲基苯氨甲基膦酸二乙酯，收率86.3％，m.p.191～193℃。 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ：11.59(s，1H，NH)，8.01(d，J＝3.6Hz，1H)，7.54(d，J＝7.9Hz，1H)，7.49(t，J＝7.6Hz，1H)，7.20(t，J＝7.4Hz，1H)，7.05(d，J＝7.2Hz，1H)，6.97(t，J＝7.7Hz，1H)，6.65(t，J＝7.3Hz，1H)，6.58(d，J＝8.0Hz，1H)，5.56～5.50(m，1H，NCHP)，4.86(s，1H，NH)，4.31～4.26(m，2H，OCH2)，4.14～3.99(m，2H，OCH2)，2.30(s，3H，CH3)，1.34(t，3H，J＝7.0Hz，CH3)，1.15(t，3H，J＝6.9Hz，CH3)；13C NMR(100MHz，CDCl3)δ：163.37、143.92、138.35、138.02、130.58、130.30、128.49、128.17、127.23、123.02、122.78、119.98、118.31、115.89、111.00、63.79、63.53、49.26、47.71、17.66、16.54和16.32。

实施例4

[2-(1H)-喹啉酮-3-基]-2-氯-4-硝基苯氨甲基膦酸二乙酯的制备

2mmol 3-甲酰基-2-(1H)-喹啉酮，2mmol 2-氯-4-硝基苯胺和15ml甲苯，室温搅拌10min，加入2mmol亚磷酸二乙酯，回流4h(TLC监测)；用V石油醚：V乙酸乙酯＝1：1柱层析，干燥得[2-(1H)-喹啉酮-3-基]-2-氯-4-硝基苯氨甲基膦酸二乙酯，收率70.0％，m.p.137～139℃。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ：12.15(s，1H)，8.23(d，J＝2.6Hz，1H)，8.18(d，J＝3.2Hz，1H)，8.10(dd，J＝9.1，2.8Hz，1H)，7.71(d，J＝7.7Hz，1H)，7.54(t，J＝7.7Hz，1H)，7.36(d，J＝8.2Hz，1H)，7.22(t，J＝7.3Hz，1H)，6.96(d，J＝9.3Hz，1H)，5.63～5.55(m，1H，NCHP)，4.15～4.07(m，2H，OCH2)，4.02(m，2H，OCH2)，1.22(t，J＝7.0Hz，3H，CH3)，1.12(t，J＝7.0Hz，3H，CH3)；13CNMR(100MHz，DMSO-d6)δ：161.29、147.65、138.77、138.12、137.35、130.84、128.07、125.57、125.04、124.75、122.33、117.80、115.15、113.52、110.90、63.08、63.02、50.99、49.46、16.20和16.11。

实施例5

[2-(1H)-喹啉酮-3-基]-2,4-二硝基苯氨甲基膦酸二乙酯的制备

2mmol 3-甲酰基-2-(1H)-喹啉酮，2mmol 2,4-二硝基苯胺和15ml甲苯，室温搅拌10 min，加入2mmol亚磷酸二乙酯，回流4h(TLC监测)；冷却，反应液旋蒸部分溶剂，析出固体，过滤，乙醇洗涤，干燥得[2-(1H)-喹啉酮-3-基]-2,4-二硝基苯氨甲基膦酸二乙酯，收率57.4％，m.p.201～204℃。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ：12.20(s，1H，NH)，9.70(s，1H)，8.89(d，J＝2.8Hz，1H)，8.34(dd，J＝2.4，2.4Hz，1H)，8.13(d，J＝7.6Hz，1H)，7.68(t，J＝8.0Hz，1H)，7.54(t，J＝8.4Hz，1H)，7.35(d，J＝8.0Hz，2H)，7.20(t，J＝7.2Hz，1H)，7.11(d，J＝9.6Hz，1H)，5.78～5.70(m，1H，NCHP)，4.17～4.03(m，4H，2×OCH2)，1.25(t，J＝7.2Hz，3H，CH3)，1.15(t，J＝6.8Hz，3H，CH3)；13C NMR(100MHz，DMSO-d6)δ：160.94、146.67、138.44、138.22、136.10、131.11、130.92、130.36、128.16、125.72、123.34、122.29、118.68、115.51、115.13、63.38、63.32、50.54、49.02、16.18和16.09。

实施例6

[2-(1H)-喹啉酮-3-基]氨甲基膦酸酯的抗流感病毒神经氨酸酶活性

按专利方法[ZL200910043678,2010.8.18授权]测定。

1.实验原理

化合物MUNANA是神经氨酸酶的特异性底物，在神经氨酸酶作用下产生的代谢产物在360nm照射激发下，可以产生450nm荧光，荧光强度的变化可以灵敏地反应神经氨酸酶活性。酶都来自A/PR/8/34(H1N1)病毒毒株。

2.实验方法

在酶反应体系中，一定浓度样品与流感病毒神NA悬浮于反应缓冲液中(pH6.5)，加入荧光底物MUNANA启动反应体系，37℃孵育40分钟后，加反应终止液终止反应。在激发波长360nm和发射波长为450nm的参数条件下，测定荧光强度值。反应体系的荧光强度可以反映酶的活性。根据荧光强度的减少量可以计算化合物对NA的抑制率。

3.检测样品：[2-(1H)-喹啉酮-3-基]氨甲基膦酸酯(Ⅰ)：

R选自：C1～C2烷基、C3～C4直链烷基或支链烷基；X1、X2选自：氢、氘、C1～C2烷基；X3、X7选自：氢、氘、C1～C2烷基、氟、氯、溴、碘或硝基；X4、X6选自：氢、氘、C1～C2烷基；X5选自：氢、氘、C1～C2烷基或硝基；n＝0，1；

4.活性结果

优选化合物在反应系统中检测浓度40.0μg/mL时对神经氨酸酶的抑制活性：[2-(1H)-喹啉酮-3-基]-2,4-二硝基苯氨甲基膦酸二乙酯和[2-(1H)-喹啉酮-3-基]-2-氯-4-硝基苯氨甲基膦酸二乙酯的抑制率分别为53.09％和42.02％；[2-(1H)-喹啉酮-3-基]-2,4-二硝基苯氨甲基膦酸二乙酯和[2-(1H)-喹啉酮-3-基]-2-氯-4-硝基苯氨甲基膦酸二乙酯对神经氨酸酶的IC50分别为43.2±6.95μM和42.57±3.28μM。

[2-(1H)-喹啉酮-3-基]氨甲基膦酸酯对神经氨酸酶具有较好的抑制活性，可用于制备流 感病毒神经氨酸酶抑制剂。

[2-(1H)-喹啉酮-3-基]氨甲基膦酸酯及其制备方法与应用专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。