专利摘要

本发明公开了一种从废弃的栝楼或双边栝楼果瓤中分离得到的一个新的三萜类化合物，分子式为C33H48O9，体外抗肿瘤活性研究表明，该化合物具有抗肿瘤活性，包括对结肠癌细胞、前列腺癌细胞、胰腺癌细胞、肺癌细胞均具有很强的抑瘤作用。本发明可解决栝楼或双边果瓤废弃、污染环境的问题，同时可为抗肿瘤药物的开发提供原料，具有重要的实际应用价值。

权利要求

1.一种新的三萜化合物，其特征在于，它是通过以下方法制备得到：

(1)取新鲜栝楼果瓤10kg，加入适量体积的95％乙醇使醇浓度达到80％，回流提取2小时，提取2次，过滤，合并滤液，减压浓缩至无醇味，得到栝楼果瓤乙醇提取物浓缩液；

(2)取栝楼果瓤乙醇提取物浓缩液，分别依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和萃余部位；

(3)取步骤(2)所得的乙酸乙酯部位减压浓缩，得到乙酸乙酯部位的浸膏30g，取乙酸乙酯部位的浸膏与硅胶按重量比1:2拌样，然后以1:1的比例上样量上硅胶柱，用石油醚-乙酸乙酯、乙酸乙酯、乙酸乙酯-甲醇体系梯度洗脱，根据薄层层析情况，将馏分合并成14个部位F1-F14，取其中F7部位2g经大孔树脂吸附，用不同浓度的甲醇-水体系洗脱，得三萜类成分部位，经液相检测，将80％甲醇、90％甲醇洗脱馏分合并得Ff7；

(4)将步骤(3)制得的Ff7部位浓缩后，经聚苯乙烯基的反相树脂柱纯化，依次用体积浓度70％、75％、80％、85％、90、100％的甲醇水体系洗脱，每个浓度的甲醇洗脱五个柱体积，每个柱体积单独接液，分别标记为Ff7-70％-1～Ff7-70％-5，Ff7-75％-1～Ff7-75％-5，Ff7-80％-1～Ff7-80％-5，Ff7-85％-1～Ff7-785％-5，Ff7-90％-1～Ff7-90％-5，Ff7-100％-1～Ff7-100％-5，并分别液相检测，归一化结果显示Ff7-70％-3、Ff7-70％-4、Ff7-70％-5、Ff7-75％-1四个部位在5.85min处峰面积占比85％以上，λmax＝232.9nm，将此四个部位合并成Ff7-MCI-1；Ff7-75％-3、Ff7-75％-4、Ff7-75％-5、Ff7-80％-1、Ff7-80％-2部位在6.85min处峰面积占比85％以上，λmax＝232.9nm，将以上部位合并成Ff7-MCI-2；经检测并与标准品比对，Ff7-MCI-1为葫芦素D，Ff7-MCI-2为未知化合物；

(5)将步骤(4)制得的Ff7-MCI-2部位浓缩，用C18制备液相分离，条件为A相为水，B相为甲醇，0-5min:45-45％A，5-10min:45-30％A，10-30min:30-30％A，30-40min:30-11％A，40-50min:11-11％A，得到纯的化合物15mg；

该化合物分子式为C33H48O9，结构式如下：

说明书

技术领域

本发明涉及具有抗肿瘤活性的化合物，具体涉及从中药材非药用部位栝楼或双边栝楼果瓤提取得到的具有抗肿瘤活性的三萜化合物及其在预防和治疗肿瘤疾病中的用途。

背景技术

葫芦科植物栝楼(Trichosanthes kirilowii Maxim.)或双边栝楼(Trichosanthes rosthornii Harms)是现行版中国药典收录的瓜蒌、瓜蒌皮、瓜蒌子及天花粉药材的基源植物。近年来全国范围的栝楼种植面积约五十万亩，主要集中在安徽、河南、江苏等地，以收集种子，生产吊瓜子产生经济效益，附带收集少量瓜蒌皮和天花粉。瓜蒌全果的果皮、种子和果瓤质量比为1:1:1(干重)，在产地剖瓜取子的过程中，大量的果瓤废弃在田埂、河道，不仅造成资源浪费，也对环境造成了污染，其绿色、健康开发利用亟待解决。缓解这一矛盾的主要方法是对栝楼或双边栝楼的果瓤进行深加工与综合利用。

本发明对废弃的栝楼或双边栝楼果瓤中三萜类成分进行系统提取分离纯化，可解决栝楼或双边栝楼果瓤废弃且污染环境的问题，同时可为抗肿瘤药物的开发提供原料，具有重要的实际应用价值。

发明内容

发明目的：本发明的目的是解决栝楼或双边栝楼果瓤废弃且污染环境的问题，提供一种具有强抗肿瘤活性的新的三萜化合物，为抗肿瘤药物的开发提供原料。

技术方案：为实现以上目的，本发明采取的技术方案为：

一种从废弃栝楼果瓤中分离得到的具有抗肿瘤活性的三萜化合物，其结构式如下：

分子式为：C₃₃H₄₈O₉。

本发明所述的具有抗肿瘤活性的三萜化合物的制备方法，其步骤如下：

a.取废弃的栝楼或双边栝楼果瓤，然后加入提取溶剂提取，浓缩，得到浓缩液；

b.将步骤a制备得到的浓缩液，经不同极性溶剂萃取，分别得到不同极性部位。

c.将步骤b得到的萃取部位，经正相、反相色谱层析分离，得到三萜化合物。

作为优选方案，以上所述的具有抗肿瘤活性的三萜化合物的制备方法，提取溶剂为不同浓度的乙醇水溶液，特别优选80％乙醇溶液。

作为优选方案，以上所述的具有抗肿瘤活性的三萜化合物的制备方法，萃取溶剂为石油醚、乙酸乙酯、正丁醇或以上结合梯度萃取。

作为优选方案，以上所述的具有抗肿瘤活性的三萜化合物的制备方法，色谱层析分离的材料为硅胶或十八烷基硅烷键合硅胶或聚苯乙烯基的反相树脂(MCI)或以上几种结合。特别优选几种色谱层析材料结合。

以上制备方法中，步骤a提取方法可以是冷浸、温浸、超声提取、回流提取、渗漉提取等，提取次数1～3次，提取时间1～3小时。

本发明提供的具有抗肿瘤活性的三萜类化合物在制备预防和治疗恶性肿瘤的药物中的应用。

作为优选方案，以上所述的具有抗肿瘤活性的三萜化合物在制备预防和治疗结肠癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌的药物中的应用。

有益效果：与现有技术相比，本发明具有以下优点：

(1)本发明通过对栝楼或双边栝楼果瓤化学成分系统研究，经过波谱和质谱数据分析表明，从栝楼或双边栝楼果瓤中分离得到的三萜化合物为新化合物。

(2)经过体外抗肿瘤实验研究表明，本发明提供的三萜化合物对多种肿瘤细胞，包括结肠癌和肺癌等均具有很强的抗肿瘤活性。

(3)本发明对废弃不用的栝楼或双边栝楼果瓤中三萜类成分进行系统提取分离纯化，可解决栝楼或双边栝楼果瓤废弃且污染环境的问题，同时可为抗肿瘤药物的开发提供原料，具有重要的实际应用价值。

(4)本发明提供的三萜类成分可方便和药学上可接受的载体制备成片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、注射剂或口服液等制剂，方便临床服用。

附图说明

图1为三萜化合物的结构示意图；

图2为三萜化合物的质谱图；

图3为三萜化合物的1H-NMR图；

图4为三萜化合物的13C-NMR图。

具体实施方案

根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的提取、分离、纯化及其抗肿瘤活性评价仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。

实施例1

一种新的三萜化合物，它是通过以下方法制备得到：

(1)取新鲜栝楼果瓤10kg，加入适量体积的95％乙醇使醇浓度达到80％，回流提取2小时，提取2次，过滤，合并滤液，减压浓缩至无醇味，得到栝楼果瓤乙醇提取物浓缩液。

(2)取栝楼果瓤乙醇提取物浓缩液，分别依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和萃余部位。

(3)取步骤(2)所得的乙酸乙酯萃取液减压浓缩，得到乙酸乙酯萃取部位的浸膏30g，取乙酸乙酯部位与硅胶按重量比1:2拌样，然后以1:1的比例上样量上硅胶柱，用石油醚-乙酸乙酯、乙酸乙酯、乙酸乙酯-甲醇体系梯度洗脱，根据薄层层析情况，将馏分合并成14个部位(F1-F14)，取其中F7(2g)部分经大孔树脂吸附，用不同浓度的甲醇-水体系洗脱，得三萜类成分部位，经液相检测，将80％甲醇、90％甲醇洗脱馏分合并得Ff7。

(4)将步骤(3)制得的Ff7部位浓缩后，经聚苯乙烯基的反相树脂(MCI)柱纯化，依次用体积浓度70％、75％、80％、85％、90、100％的甲醇水体系洗脱，每个浓度的甲醇洗脱五个柱体积，每个柱体积单独接液，分别标记为Ff7-70％-1～Ff7-70％-5，Ff7-75％-1～Ff7-75％-5，Ff7-80％-1～Ff7-80％-5，Ff7-85％-1～Ff7-785％-5，Ff7-90％-1～Ff7-90％-5，Ff7-100％-1～Ff7-100％-5，并分别液相检测，归一化结果显示Ff7-70％-3、Ff7-70％-4、Ff7-70％-5、Ff7-75％-1四个部位在5.85min处峰面积占比85％以上，λmax＝232.9nm，将此四个部位合并成Ff7-MCI-1；Ff7-75％-3、Ff7-75％-4、Ff7-75％-5、Ff7-80％-1、Ff7-80％-2部位在6.85min处峰面积占比85％以上，λmax＝232.9nm，将以上部位合并成Ff7-MCI-2。经检测并与标准品比对，Ff7-MCI-1为葫芦素D，Ff7-MCI-2为未知化合物。

(5)将步骤(4)制得的Ff7-MCI-2部位浓缩，用C₁₈制备液相分离，条件为A相为水，B相为甲醇，0-5min:45-45％A，5-10min:45-30％A，10-30min:30-30％A，30-40min:30-11％A，40-50min:11-11％A，得到纯的化合物15mg。

得到的化合物为淡黄色粉末状，分子式为C₃₃H₄₈O₉，易溶于氯仿，质谱图见图2，¹HNMR如图3和表1所示，¹³CNMR见图4和表1。通过文献检索，确定该化合物为新的三萜化合物，其结构式如图1。

表1化合物的¹HNMR和¹³CNMR数据(δ/ppm,J,Hz)

实施例2抗肿瘤实验

以肺癌细胞(A549、H1299)、结肠癌细胞(SW480、HT29)、胰腺癌细胞(BxPC-3、PANC-1)、前列腺癌细胞(PC3、LNCaP)采用CCK-8法进行体外抗肿瘤实验，受试药物为实施例1制备得到的三萜化合物。以样品的溶剂二甲亚砜为对照。由表2实验结果表明，本发明制备得到的三萜化合物对肿瘤细胞显示较强的抑制作用。特别是对肺癌细胞具有特别显著的抑制作用。

表2三萜类化合物对肿瘤细胞的抑制作用

以上实验结果表明，本发明变废为宝，通过优选的方法，以栝楼或双边栝楼的果瓤为原料，制备得到抑瘤作用较好的一种新的三萜葫芦素类化合物，可解决栝楼果瓤废弃且污染环境的问题，同时可为抗肿瘤药物的开发提供原料，具有重要的实际应用价值。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

一种从废弃栝楼果瓤中分离得到的具有抗肿瘤活性的三萜化合物及其应用专利购买费用说明

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。