专利摘要

本发明提供一种手性试剂或其盐，其中所述手性试剂具有下述化学式(I)。在式(I)中，G1和G2独立地为氢原子、硝基(-NO2)、卤素原子、氰基(-CN)、式(Ⅱ)或(Ⅲ)的基团，或G1和G2结合在一起形成的式(Ⅳ)的基团。

权利要求

1.一种手性试剂或其盐，其中，所述手性试剂有如下化学式(I)：

其中，所述G¹和G²独立地为氢原子、硝基、卤素原子、氰基、式(II)、(III)或(V)的基团，或者G¹和G²结合在一起形成式(IV)的基团，

其中，所述G²¹～G²³独立地为氢原子、硝基、卤素原子、氰基或C_1-3烷基，

其中，所述G³¹～G³³独立地为C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、C_6-14芳基、C_7-14芳烷基、C_1-4烷基C_6-14芳基、C_1-4烷氧基C_6-14芳基或C_6-14芳基C_1-4烷基，

其中，所述G⁴¹～G⁴⁶独立地为氢原子、硝基、卤素原子、氰基或C_1-3烷基，

所述G³和G⁴独立地为氢原子、C_1-3烷基、C_6-14芳基或者G³和G⁴结合在一起形成包含3～16个碳原子的含杂原子的环，

其中，所述G⁵¹～G⁵³独立地为氢原子、硝基、卤素原子、氰基、C_1-3烷基或C_1-3烷氧基。

2.根据权利要求1所述的手性试剂或其盐，其中，所述手性试剂有如下化学式(I'):

3.根据权利要求2所述的手性试剂或其盐，其中，所述G¹和G²各为式(II)的基团，其中所述G²¹～G²³独立地为氢原子、硝基、卤素原子、氰基或C_1-3烷基。

4.根据权利要求2所述的手性试剂或其盐，其中，所述G¹和G²各为式(II)的基团，其中，所述G²¹～G²³各为氢原子。

5.根据权利要求2所述的手性试剂或其盐，其中，所述G¹为氢原子，所述G²为式(II)的基团，其中，所述G²¹～G²³独立地为氢原子、硝基、卤素原子、氰基或C_1-3烷基。

6.根据权利要求2所述的手性试剂或其盐，其中，所述G¹为氢原子，G²为式(II)的基团，其中，所述G²¹和G²²各为氢原子，G²³为硝基。

7.根据权利要求2所述的手性试剂或其盐，其中，所述G¹为氢原子，所述G²为式(III)的基团，其中，所述G³¹～G³³独立地为C_1-4烷基、C_6-14芳基、C_7-14芳烷基、C_1-4烷基C_6-14芳基、C_1-4烷氧基C_6-14芳基或C_6-14芳基C_1-4烷基。

8.根据权利要求2所述的手性试剂或其盐，其中，所述G¹为氢原子，G²为式(III)的基团，其中，所述G³¹～G³³独立地为C_1-4烷基、C₆芳基、C_7-10芳烷基、C_1-4烷基C₆芳基、C_1-4烷氧基C_6-14芳基或C₆芳基C_1-4烷基。

9.根据权利要求2所述的手性试剂或其盐，其中，所述G¹为氢原子，G²为式(III)的基团，其中，所述G³¹～G³³独立地为C_1-4烷基或C₆芳基

10.根据权利要求2所述的手性试剂或其盐，其中，所述G¹为氢原子，所述G²为式(III)的基团，其中，所述G³¹～G³³独立地为C_1-4烷基。

11.根据权利要求2所述的手性试剂或其盐，其中，所述G¹为氢原子，所述G²为式(III)的基团，其中，所述G³¹和G³³独立地为C₆芳基，所述G³²为C_1-4烷基。

12.根据权利要求2所述的手性试剂或其盐，其中，所述G¹和G²结合在一起形成式(IV)的团，其中，所述G⁴¹～G⁴⁶独立地为氢原子、硝基、卤素原子、氰基或C_1-3烷基。

13.根据权利要求2所述的手性试剂或其盐，其中，所述G¹和G²结合在一起形成式(IV)的基团，其中，G⁴¹～G⁴⁶各为氢原子。

14.根据权利要求2所述的手性试剂或其盐，其中，所述G¹为氢原子，所述G²为式(V)的基团，其中，所述G⁵¹～G⁵³各独立地为氢原子、硝基、甲基或甲氧基。

15.根据权利要求2所述的手性试剂或其盐，其中，所述G¹为氢原子，所述G²为式(V)的基团，其中，所述G⁵¹和G⁵³各为氢原子，所述G⁵³为4-甲基。

16.根据权利要求2所述的手性试剂或其盐，其中，所述手性试剂由III-a、III-b、V-a、VII-a、VII-b、IX-a、IX-b、XI-a、XIII-a或XIII-b表示：

(S)-2-(甲基二苯基硅烷)-1-((S)-吡咯烷-2-基)乙醇(Ⅲ-a)

(R)-2-(甲基二苯基硅烷)-1-((R)-1-吡咯烷-2-基)乙醇(Ⅲ-b)

(S)-2-(三甲基硅烷)-1–((S)-1-吡咯烷-2-基)乙醇(V-a)

(R)-2,2-二苯基-1-((S)-吡咯烷-2-基)乙醇(Ⅶ-a)

(S)-2,2-二苯基-1-((R)-吡咯烷-2-基)乙醇(Ⅶ-b)

(R)-2-(4-硝基苯基)-1-((S)-吡咯烷-2-基)乙醇(Ⅸ-a)

(S)-2-(4-硝基苯基)-1-((R)-吡咯烷-2-基)乙醇(Ⅸ-b)

(R)-(9H-芴-9-基)((S)-吡咯烷-2-基)甲醇(Ⅺ-a)

(S)-2-对甲苯磺酰基-1-((S)-1-三苯甲基吡咯烷-2-基)乙醇(ⅩⅢ-a)

(R)-2-对甲苯磺酰基-1-((R)-1-三苯甲基吡咯烷-2-基)乙醇(ⅩⅢ-b)。

17.一种核苷3'-亚磷酰胺衍生物，其中所述核苷3'-亚磷酰胺衍生物由式(Va)或(Vb)表示，

其中所述G¹和G²独立地为氢原子、硝基、卤素原子、氰基、式(II)、(III)或(V)的基团，或者G¹和G²结合在一起形成式(IV)的基团，

其中所述G²¹～G²³独立地为氢原子、硝基、卤素原子、氰基或C_1-3烷基，

其中所述G³¹～G³³独立地为C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、C_6-14芳基、C_7-14芳烷基、C_1-4烷基C_6-14芳基、C_1-4烷氧基C_6-14芳基或C_6-14芳基C_1-4烷基，

其中所述G⁴¹～G⁴⁶独立地为氢原子、硝基、卤素原子、氰基或C_1-3烷基，

其中，所述G⁵¹～G⁵³独立地为氢原子、硝基、卤素原子、氰基、C_1-3烷基或C_1-3烷氧基，

所述G³和G⁴独立地为氢原子、C_1-3烷基、C_6-14芳基或者G³和G⁴结合在一起形成包含3～16个碳原子的含杂原子的环，

所述G⁵是羟基的保护基团，

所述R²为氢、-OH、-SH、-NR^dR^d、-N₃、卤素、烷基、烯基、炔基、烷基-Y¹-、烯基-Y¹-、炔基-Y¹-、芳基-Y¹-、杂芳基-Y¹-、-OR^b或-SR^b，其中所述R^b是一个阻断部分，

所述Y¹是O、NR^d、S或Se，

所述R^d独立地为氢、烷基、烯基、炔基、芳基、酰基、被取代的甲硅烷基、氨基甲酸酯、-P(O)(R^e)₂或-HP(O)(R^e)，

所述R^e独立地为氢、烷基、芳基、烯基、炔基、烷基-Y²-、烯基-Y²-、炔基-Y²-、芳基-Y²-，或杂芳基-Y²-，或阳离子Na⁺，Li⁺或K⁺，

所述Y²是O、NR^d或S，

所述R³是-CH₂-、-(CH₂)₂-、-CH₂NH-或-CH₂N(CH₃)-表示的基团，以及

所述Bs是从由下式(Ⅵ)～(Ⅺ)表示的基团或它们的衍生物中选出的基团

18.根据权利要求17所述的核苷3'-亚磷酰胺衍生物，其中，所述核苷3'-亚磷酰胺衍生物由式(VA')或(Vb')表示，

19.根据权利要求17所述的核苷3'-亚磷酰胺衍生物，其中，所述核苷3'-亚磷酰胺衍生物由式1a、1b、2a、2b、3a、3b、4a、4b、5a、5b、6a、6b、7a、7b、8a、8b、9a、9b、10a、10b、11a、11b、12a、12b、13a、13b、14a、14b、15a、15b、16a、16b、17a、17b、18a、18b、19a、19b、20a、20b、21a、21b、22a、22b、23a、23b或24a表示，

其中，所述DMTr表示4,4'-二甲氧基三苯甲基，所述TOM表示三异丙基硅氧基甲基。

20.一种用于合成立体控制的磷原子修饰的寡核苷酸衍生物的方法，其中所述方法包括以下步骤：

包含非手性H-膦酸酯部分的分子与手性试剂或其盐反应，生成核苷3'-亚磷酰胺衍生物的单体；

单体与核苷反应，生成缩合中间体；以及

将缩合中间体转化为包含手性的X-膦酸酯部分的核酸，

其中，所述手性试剂具有以下化学式(I)，

其中，所述G¹和G²独立地为氢原子、硝基、卤素原子、氰基、式(II)、(III)或(V)的基团，或者G¹和G²结合在一起形成式(IV)的基团，

其中，所述G²¹～G²³独立地为氢原子、硝基、卤素原子、氰基或C_1-3烷基，

其中，所述G³¹～G³³独立地为C_1-4烷基或C_6-14芳基、C_1-4烷氧基、C_6-14芳基、C_7-14芳烷基、C_1-4烷基C_6-14芳基、C_1-4烷氧基C_6-14芳基或C_6-14芳基C_1-4烷基，

其中，所述G⁴¹～G⁴⁶独立地为氢原子、硝基、卤素原子、氰基或C_1-3烷基，

其中，所述G⁵¹～G⁵³独立地为氢原子、硝基、卤素原子、氰基、C_1-3烷基或C_1-3烷氧基，

所述G³和G⁴独立地为氢原子、C_1-3烷基、C_6-14芳基或者G³和G⁴结合在一起形成包含3～16个碳原子的含杂原子的环。

21.根据权利要求20所述的用于合成立体控制的磷原子修饰的寡核苷酸衍生物的方法，其中所述手性试剂有如下化学式(I')，

22.根据权利要求20所述的用于合成立体控制的磷原子修饰的寡核苷酸衍生物的方法，其中所述手性试剂由III-a、III-b、V-a、VII-a、VII-b、IX-a、IX-b、XI-a、XIII-a或XIII-b表示：

(S)-2-(甲基二苯基硅烷)-1-((S)-吡咯烷-2-基)乙醇(Ⅲ-a)

(R)-2-(甲基二苯基硅烷)-1-((R)-1-吡咯烷-2-基)乙醇(Ⅲ-b)

(S)-2-(三甲基硅烷)-1-((S)-1-吡咯烷-2-基)乙醇(V-a)

(R)-2,2-二苯基-1-((S)-吡咯烷-2-基)乙醇(Ⅶ-a)

(S)-2,2-二苯基-1-((R)-吡咯烷-2-基)乙醇(Ⅶ-b)

(R)-2-(4-硝基苯基)-1-((S)-吡咯烷-2-基)乙醇(Ⅸ-a)

(S)-2-(4-硝基苯基)-1-((R)-吡咯烷-2-基)乙醇(Ⅸ-b)

(R)-(9H-芴-9-基)((S)-吡咯烷-2-基)甲醇(Ⅺ-a)

(S)-2-对甲苯磺酰基-1-((S)-1-三苯甲基吡咯烷-2-基)乙醇(ⅩⅢ-a)

(R)-2-对甲苯磺酰基-1-((R)-1-三苯甲基吡咯烷-2-基)乙醇(ⅩⅢ-b)

23.一种用于合成立体控制的磷原子修饰的寡核苷酸衍生物的方法，其中所述方法包括以下步骤：

由式(Va)或(Vb)表示的核苷3'-亚磷酰胺衍生物与活化剂和核苷反应，生成缩合中间体；以及将缩合中间体转化为包含手性的X-膦酸酯部分的核酸，

24.根据权利要求23所述的用于合成立体控制的磷原子修饰的寡核苷酸衍生物的方法，其中所述核苷3'-亚磷酰胺衍生物由式(Va')或(Vb')表示，

25.根据权利要求23所述的用于合成立体控制的磷原子修饰的寡核苷酸衍生物的方法，其中所述核苷3'-亚磷酰胺衍生物由式1a、1b、2a、2b、3a、3b、4a、4b、5a、5b、6a、6b、7a、7b、8a、8b、9a、9b、10a、10b、11a、11b、12a、12b、13a、13b、14a、14b、15a、15b、16a、16b、17a、17b、18a、18b、19a、19b、20a、20b、21a、21b、22a、22b、23a、23b或24a表示，

其中，所述DMTr表示4,4'-二甲氧基三苯甲基，所述TOM表示三异丙基硅氧基甲基。

说明书

技术领域

本发明涉及用于合成立体控制的磷原子修饰的寡核苷酸衍生物的手性试剂。

背景技术

日本专利JP2005-89441A中公开了一种名为恶唑磷烷方法(oxazaphospholidine method)的用于生产核苷酸衍生物的方法。然而，该方法中单体的分离率低，并且需要特殊的非市售的封端剂。后期得到的单体不具有化学稳定性。此外，寡核苷酸衍生物的分离率不高。寡核苷酸衍生物的低收率被认为是由脱保护步骤下的降解反应引起的。

国际公开第WO2010/064146号小册子公开了一种生产核苷酸衍生物的方法。其中公开的方法需要特殊的非市售的封端剂。此外，寡核苷酸衍生物的分离率不高。该低产量被认为是由脱保护步骤下降解反应所引起的。当寡核苷酸衍生物的长度增长时，该趋势变得极度明显。

国际公开第WO2012/039448号小册子公开了一种用于生产立体控制的磷原子修饰的寡核苷酸衍生物的不对称辅助基团。

引用列表

专利文献

[专利文献1]JP 2005-89441 A专利文献1

[专利文献2]WO2010/064146 A专利文献2

[专利文献3]WO2012/039448 A专利文献3

发明内容

本发明的第一个方面涉及一种手性试剂或其盐。所述手性试剂有如下化学式(I)：

在(I)式中，G¹和G²独立地为氢原子、硝基、卤素原子、氰基、式(II)、(III)或(V)的基团，或者G¹和G²结合在一起形成式(IV)的基团。

在(II)式中，G²¹～G²³独立地为氢原子、硝基、卤素原子、氰基或C_1-3烷基。

在(III)式中，G³¹～G³³独立地为C_1-4烷基、C_6-14芳基C_1-4烷氧基、C_7-14芳烷基、C_1-4烷基C_6-14芳基、C_1-4烷氧基C_6-14芳基或C_6-14芳基C_1-4烷基。

在(IV)式中，G⁴¹～G⁴⁶独立地为氢原子、硝基、卤素原子、氰基或C_1-3烷基。

在(V)式中，G⁵¹～G⁵³独立地为氢原子、硝基、卤素原子、氰基、C_1-3烷基或C_1-3烷氧基。

G³和G⁴独立地为氢原子、C_1-3烷基、C_6-14芳基或者G³和G⁴连同式(I)中的NH部分结合在一起形成包含3～16个碳原子的含杂原子的环。

作为一个优选实施例，该手性试剂有如下化学式(I')。

在式(I')中G¹和G²与上文所述相同。即，G¹和G²独立地为氢原子、硝基、卤素原子、氰基，式(II)或式(III)的基团，或者G¹和G²结合在一起形成式(IV)的基团。

作为一个优选实施例，该手性试剂有化学式(I')并且G¹和G²各为式(II)的基团，其中G²¹～G²³独立地为氢原子、硝基、卤素原子、氰基或C_1-3烷基。

作为一个优选实施例，该手性试剂有化学式(I')并且G¹和G²各为式(II)的基团，G²¹～G²³各为氢原子。

作为一个优选实施例，该手性试剂有化学式(I')并且G¹为氢原子，G²为式(II)的基团，并且G²¹～G²³独立地为氢原子、硝基、卤素原子、氰基或C_1-3烷基。

作为一个优选实施例，该手性试剂有化学式(I')并且G¹为氢原子，G²为式(II)的基团，G²¹和G²²各为氢原子，G²³为硝基。

作为一个优选实施例，该手性试剂有化学式(I')并且G¹为氢原子，G²为式(III)的基团，并且G³¹～G³³独立地为C_1-4烷基、C_6-14芳基、C_7-14芳烷基、C_1-4烷基C_6-14芳基、C_1-4烷氧基C_6-14芳基或C_6-14芳基C_1-4烷基。

作为一个优选实施例，该手性试剂有化学式(I')并且G¹为氢原子，G²为式(III)的基团，并且G³¹～G³³独立地为C_1-4烷基、C₆芳基、C_7-10芳烷基、C_1-4烷基C₆芳基、C_1-4烷氧基C_6-14芳基或C₆芳基C_1-4烷基。

作为一个优选实施例，该手性试剂有化学式(I')并且G¹为氢原子，G²为式(III)的基团，并且G³¹～G³³独立地为C_1-4烷基或C₆芳基。C_1-4烷基的实例是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基和叔丁基。

作为一个优选实施例，该手性试剂有化学式(I')并且G¹为氢原子，G²为式(III)的基团，并且G³¹～G³³独立地为C_1-4烷基。

作为一个优选实施例，该手性试剂有化学式(I')并且G¹为氢原子，G²为式(III)的基团，并且G³¹～G³³独立地为C₆芳基，G³²为C_1-4烷基。

作为一个优选实施例，该手性试剂有化学式(I')并且G¹和G²结合在一起形成式(IV)的基团，G⁴¹～G⁴⁶独立地为氢原子、硝基、卤素原子、氰基或C_1-4烷基。

作为一个优选实施例，该手性试剂有化学式(I')并且G¹和G²结合在一起形成式(IV)的基团，其中，G⁴¹～G⁴⁶各为氢原子。

作为一个优选实施例，该手性试剂有化学式(I')并且G¹为氢原子，G²为式(V)的基团。进一步地，G⁵¹～G⁵³各独立地为氢原子、硝基、甲基或甲氧基。作为更优选的实施例，G¹为氢原子，G²为式(V)的基团，其中，G⁵¹和G⁵³各为氢原子，G⁵³为4-甲基。

作为一个优选实施例，手性试剂从III-a、III-b、V-a、VII-a、VII-b、IX-a、IX-b、XI-a、XIII-a和XIII-b中选择一个：

(S)-2-(甲基二苯基硅烷)-1-((S)-吡咯烷-2-基)乙醇(Ⅲ-a)

(R)-2-(甲基二苯基硅烷)-1-((R)-1-吡咯烷-2-基)乙醇(Ⅲ-b)

(S)-2-(三甲基硅烷)-1-((S)-1-吡咯烷-2-基)乙醇(V-a)

(R)-2,2-二苯基-1-((S)-吡咯烷-2-基)乙醇(Ⅶ-a)

(S)-2,2-二苯基-1-((R)-吡咯烷-2-基)乙醇(Ⅶ-b)

(R)-2-(4-硝基苯基)-1-((S)-吡咯烷-2-基)乙醇(Ⅸ-a)

(S)-2-(4-硝基苯基)-1-((R)-吡咯烷-2-基)乙醇(Ⅸ-b)

(R)-(9H-芴-9-基)((S)-吡咯烷-2-基)甲醇(Ⅺ-a)

(S)-2-对甲苯磺酰基-1-((S)-1-三苯甲基吡咯烷-2-基)乙醇(ⅩⅢ-a)

(R)-2-对甲苯磺酰基-1-((R)-1-三苯甲基吡咯烷-2-基)乙醇(ⅩⅢ-b)

本发明的第二个方面涉及由式(Va)或(Vb)表示的核苷3'-亚磷酰胺衍生物。

在式(Va)和(Vb)中，G¹～G⁴与上述相同，G⁵是羟基的保护基团，且Bs是从由下式(Ⅵ)～(Ⅺ)表示的基团或其衍生物中选出的基团。

Bs的实例为腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶、鸟嘌呤、尿嘧啶、5-甲基胞嘧啶或其衍生物。

R²为氢、-OH、-SH、-NR^dR^d、-N₃、卤素、烷基、烯基、炔基、烷基-Y¹-、烯基-Y¹-、炔基-Y¹-、芳基-Y¹-、杂芳基-Y¹-、-OR^b或-SR^b，其中R^b是一个阻断部分。

Y¹是O、NR^d、S或Se。

R^d独立地为氢、烷基、烯基、炔基、芳基、酰基、被取代的甲硅烷基、氨基甲酸酯、-P(O)(R^e)₂或-HP(O)(R^e)。

R^e独立地为氢、烷基、芳基、烯基、炔基、烷基-Y²-、烯基-Y²-、

炔基-Y²-、芳基-Y²-，或杂芳基-Y²-，或阳离子Na⁺，Li⁺或K⁺。

Y²是O、NR^d或S。

R³是-CH₂-、-(CH₂)₂-、-CH₂NH-或-CH₂N(CH₃)-表示的基团。

G⁵的实例是三苯甲基、4-单甲氧基三苯甲基、4,4'-二甲氧基三苯甲基、4,4'，4″-三甲氧基三苯甲基，9-苯基黄嘌呤-9-基(Pixyl)和9-(对甲氧基苯基)黄嘌呤-9-基(MOX)。

第二方面的优选实施例是，核苷3'-亚磷酰胺衍生物由式(VA')或(Vb')表示。

在式(VA')和(Vb')中，G¹、G²、G⁵、Bs、R²和R³与上述相同。

本发明的第三方面涉及一种用于合成立体控制的磷原子修饰的寡核苷酸衍生物的方法。

第一步是包括非手性H-膦酸酯部分的分子与第一活化剂以及手性试剂或其盐反应，以形成一个单体的步骤。所述手性试剂具有化学式(I)或(I')，所述单体可由式(Va)、(Vb)、(Va')或(Vb')表示。所述单体与第二活化剂以及核苷发生反应，以形成缩合中间体。下一步骤是将缩合中间体转化为包含手性的X膦酸酯部分的核酸的步骤。

根据本发明的方法，可使用稳定的和市售的材料作为起始原料。可使用非手性起始原料产生立体控制的磷原子修饰的寡核苷酸衍生物。

如一个实施例中所示，本发明的方法不会导致脱保护步骤下的降解。此外，该方法不要求特殊的封端剂，以产生磷原子修饰的寡核苷酸衍生物。

本发明的第四方面涉及一种用于通过使用手性单体合成立体控制的磷原子修饰的寡核苷酸的衍生物的方法。

第一步是由式(Va)、(Vb)、(Va')或(Vb')表示的核苷3'-亚磷酰胺衍生物与第二活化剂以及核苷的反应，以形成缩合中间体。第二步是将所述缩合中间体转化为包含手性的X膦酸酯部分的核酸。

[引用并入]

正如每个单独的出版物或专利申请被特定单独地说明通过引用并入本文，本说明书在此公开的所有出版物和专利申请，以相同的程度通过引用将其全文并入本文。

附图说明

图1是通过使用4b的单体来生产寡核苷酸衍生物的UPLC图谱。

图2是通过使用25的单体来生产寡核苷酸衍生物的UPLC图谱。

具体实施方式

术语“核酸”包括：多聚核糖核苷酸或寡核糖核苷酸(RNA)、以及多聚脱氧核糖核苷酸或寡脱氧核糖核苷酸(DNA)；由核碱基和/或修饰的核碱基的N-糖苷或C-糖苷衍生的RNA或DNA；由糖和/或修饰的糖衍生的核酸；由磷酸桥和/或修饰的磷原子桥衍生的核酸。该术语包括含有核碱基、修饰的核碱基、糖、修饰的糖、磷酸桥或修饰的磷原子桥的任何组合的核酸。术语“核酸”的实例包括，并且不限于，含有核糖部分的核酸、含有脱氧核糖部分的核酸、同时含有核糖和脱氧核糖部分的核酸、含有核糖和修饰核糖部分的核酸。前缀“多聚”是指含有约1～10,000个核苷酸单体单元的核酸，并且其中，前缀“寡聚”是指包含约1～200个核苷酸单体单元的核酸。

术语“核碱基”是指参与以序列特异性的方式将一条核酸链与另一条互补链结合的氢键结合的核酸的部分。最常见的天然存在的核碱基是腺嘌呤(A)、鸟嘌呤(G)、尿嘧啶(U)、胞嘧啶(C)、5-甲基胞嘧啶和胸腺嘧啶(T)。

术语“修饰的核碱基”是指可以取代核碱基的部分。所述修饰核碱基模仿该核碱基的空间排列、电子特性或其它一些物理化学性质，并保留以序列特异性的方式将一条核酸链与另一条核酸链结合的氢键结合的性质。修饰的核碱基可以与所有5个天然存在的碱基(尿嘧啶、胸腺嘧啶、腺嘌呤、胞嘧啶或鸟嘌呤)配对而基本上不影响熔解行为、被胞内酶的识别或寡核苷酸双链体的活性。

术语“核苷”是指其中核碱基或修饰的核碱基与糖或修饰的糖共价结合的部分。

术语“糖”是指处于封闭的和/或开放的形式的单糖。糖包括，但不限于，核糖、脱氧核糖、呋喃戊糖、吡喃戊糖和吡喃己糖部分。

术语“修饰的糖”是指可以替代糖的部分。所述修饰的糖模拟糖的空间排列、电子特性或其它一些物理化学性质。

术语“核苷酸”是指其中核碱基或修饰核碱基与糖或修饰的糖共价连接，且糖或修饰的糖与磷酸基团或修饰的磷原子的部分共价连接的部分。

术语“手性试剂”是指是手性的或对映异构纯(enantiopure)的，并可用于核酸合成中不对称诱导的化合物。

术语“手性配体”或“手性助剂”是指手性或对映异构纯的，并控制反应的立体化学结果的部分。

在缩合反应中，术语“活性剂”是指一种激活反应活性较小的位点并使其更容易被亲核试剂攻击的试剂。

术语“阻断部分”是指一组瞬间屏蔽官能团的反应活性的部分。该官能团可以通过除去阻断部分之后被解除屏蔽。

术语“硼化剂”、“硫亲电试剂”、“硒亲电试剂”指的是在修饰步骤中可用于分别引入BH₃、S和Se的基团，来修饰磷原子的化合物。

术语“部分(moiety)”是指特定的分子的片段或官能团。化学部分通常被认为是嵌入或附加于分子的化学实体。

术语“固体支持物”是指能使合成核酸大量生产，并且可以根据需要再利用的任何支持物。如本文所用，该术语是指不溶于在进行合成核酸的反应步骤中使用的介质，并且被衍生以包括反应基团的聚合物。

术语“连接部分”是指任选位于末端核苷和固体支持物之间或在末端核苷和另一个核苷、核苷酸或核酸之间的任何部分。

如本文所用，“治疗”或“缓解”或“改善”在本文可互换使用。这些术语指的是一种用于获得有益或预期的效果，包括但不限于治疗益处和/或预防益处的方法。治疗益处意味着接受治疗的潜在疾病的根除或改善。另外，可通过一种或多种与潜在疾病相关的生理症状的根除或改善来获得治疗益处，这样尽管该患者仍然可能患有该潜在疾病，但可观察到其症状的改善。对于预防益处，所述组合物可以施用于处于患有某种特定疾病的风险的患者，或者可以施用于尽管可能并没有被诊断为某种疾病，但被报告出现一个或多个该疾病的生理症状的患者。

如本文所用，术语“治疗效果”，包括上述治疗益处和/或预防益处。所述预防益处包括延迟或消除疾病或病症的出现，延迟或消除疾病或病症的症状的发作，减缓、停止或逆转疾病或病症的发展，或上述任意组合。

“烷基”基团是指脂肪族烃基。烷基部分可以为饱和的烷基基团(指其不含有任何不饱和单元，例如碳-碳双键或碳-碳三键)，或烷基部分可以为不饱和的烷基基团(指其含有至少一个不饱和单元)。不论是饱和的或不饱和的烷基部分，其可以是支链、直链或包括环状部分。烷基的连接点是在不属于环的一部分的碳原子上。

“烷基”部分可含有1～10个碳原子(尽管本定义还涵盖了术语“烷基”在没有规定的数值范围的出现，但本文中无论何时出现如“1～10”这样的数值范围，均指在给定范围内的每个整数；例如，“1～10个碳原子”是指烷基基团可以由1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子等，多至并包括10个碳原子组成)。烷基包括支链和直链的烷基基团。本文所述的化合物的烷基基团可以规定为“C₁-C₆烷基”或是类似的规定。仅仅用来举例，“C₁-C₆烷基”表示在烷基链中有一个、两个、三个、四个、五个或六个碳原子，也就是说，该烷基链选自于甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基。典型的烷基，包括但不应以任何方式限于，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基、烯丙基、环丙基甲基、环丁基甲基、环戊基甲基、环己基甲基和它们的类似物。在本发明的一个方面中，烷基是C₁-C₆烷基。

C_1-3烷基是指具有1～3个碳原子的直链或支链烷基基团。C_1-3烷基的实例是甲基、乙基、丙基和异丙基。C_1-4烷基是指具有1～4个碳原子的直链或支链烷基基团。C_1-4烷基的实例是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基和叔丁基。

如本文所用，术语“芳基”是指其中每个形成环的原子均为碳原子的芳香环。芳基环由五个、六个、七个、八个、九个或九个以上碳原子形成。芳基可为取代或未取代的。在本发明的一个方面中，芳基为苯基或萘基。根据其结构，芳基基团可以是单自由基(monoradical)或双自由基(diradical)(即亚芳基)。在本发明的一个方面中，芳基是C₆-C₁₀芳基。

C_6-14芳基是指具有6～14个碳原子的芳基。C_6-14芳基的实例是苯基、联苯基、萘基、蒽基、茚满基、邻苯二甲酰亚胺、萘酰亚胺基(naphthimidyl)、菲啶基和四氢萘基。

术语“芳烷基”是指被芳基取代的烷基。合适的芳烷基包括均可任选被取代的苄基、吡啶甲基以及它们的类似物。

“酰基部分”是指烷基-(C＝O)、芳基-(C＝O)或芳烷基-(C＝O)基团。酰基部分可以有一个插入羰基和烃基基团之间的中间部分(Y)，其为氧基、氨基、硫基或硒基。例如，酰基基团可以是烷基-Y-(C＝O)、芳基-Y-(C＝O)或芳烷基-Y-(C＝O)。

“烯基”基团是含有至少一个碳-碳双键的直链、支链以及环状的烃基。烯基可以被取代。

“炔基”基团是含有至少一个碳-碳三键的直链、支链以及环状的烃基。炔基可以被取代。

“烷氧基”基团指连接氧的烷基，即(烷基)-O-基团，其中烷基如本文所定义。实例包括甲氧基(-OCH₃)或乙氧基(-OCH₂CH₃)基团。

“烯氧基”基团是指连接氧的烯基，即(烯基)-O-基团，其中烯基如本文所定义。

“炔氧基”基团指连接氧的炔基，即(炔基)-O-基团，其中炔基如本文所定义。

“芳氧基”基团指连接氧的芳基，即(芳基)-O-基团，其中该芳基如本文所定义。实例包括苯氧基(-OC₆H₅)基团。

术语“烷硒基”是指具有与其相连的取代的硒基的烷基，即(烷基)-Se-基团，其中烷基如本文所定义。

术语“烯硒基”是指具有与其相连的取代的硒基的烯基，即(烯基)-Se-基团，其中烯基如本文所定义。

术语“炔硒基”是指具有与其相连的取代的硒基的炔基，即(炔基)-Se-基团，其中炔基如本文所定义。

术语“烷硫基”是指连接到一个桥联硫原子的烷基，即(烷基)-S-基团，其中烷基如本文所定义。例如，烷硫基是甲硫基及其类似物。

术语“烯硫基”指的是连接到一个桥联硫原子的烯基，即(烯基)-S-基团，其中烯基如本文所定义。

术语“炔硫基”指的是连接到一个桥联硫原子的炔基，即(炔基)-S-基团，其中炔基如本文所定义。

术语“烷氨基”指的是被至少一个烷基替代的氨基，即-NH(烷基)或-N(烷基)₂，其中烷基如本文所定义。

术语“烯氨基”指的是被至少一个烯基替代的氨基，如-NH(烯基)或-N(烯基)₂，其中烯基如本文所定义。

术语“炔氨基”指的是被至少一个炔基替代的氨基，如-NH(炔基)或-N(炔基)₂，其中炔基如本文所定义。

术语“卤素”是指包括氟、氯、溴和碘。

“荧光基团”是指一种当被具有所选波长的光激发时，发射不同波长的光的分子。荧光基团包括，但不限于，吲哚基、荧光素、四甲基罗丹明、德克萨斯红、氟化硼二吡咯(BODIPY)、5-(2-氨基乙氨基)-1-萘磺酸(EDANS)、香豆素和荧光黄。

“铵离子”指化学式NH₄⁺的带正电荷的多原子阳离子。

“烷基铵离子”指至少有一个氢原子被烷基取代的铵离子，其中烷基如本文所定义。实例包括三乙基铵离子，N，N-二异丙基乙基铵离子。

“亚铵离子”具有通式结构R₂C＝NR₂⁺。所述R基团是指如本文所定义的烷基、烯基、炔基、芳基。“杂芳族亚铵离子”指的是其中氮及其连接的R基团形成杂芳环的亚铵离子。“杂环亚铵离子”是指其中氮及其连接的R基团形成杂环的亚铵离子。

除非本说明书内另有具体所指，术语“氨基”或“胺”指的是-N(R^h)₂自由基基团，其中每个R^h独立地为氢、烷基、氟烷基、碳环基、碳环基烷基、芳基、芳烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基或杂芳基烷基。当-N(R^h)₂基团具有两个非氢的R^h时，它们可以与氮原子组合形成四、五、六或七元环。例如，-N(R^h)₂是指包括，但不限于，1-吡咯烷基和4-吗啉基。任何一个或多个的氢、烷基、氟烷基、碳环基、碳环基烷基、芳基、芳烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基或杂芳基烷基可任选地被一个或多个取代基取代，该取代基独立地为烷基、杂烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、芳基、芳基烷基、杂芳基、杂芳基烷基、羟基、卤素、氰基、三氟甲基、三氟甲氧基、硝基、三甲基硅烷、-ORⁱ、-SRⁱ、-OC(O)Rⁱ、-N(Rⁱ)₂、-C(O)Rⁱ、-C(O)ORⁱ、-OC(O)N(Rⁱ)₂、-C(O)N(Rⁱ)₂、-N(Rⁱ)C(O)OR、-N(Rⁱ)C(O)Rⁱ、-N(Rⁱ)C(O)N(Rⁱ)₂、N(Rⁱ)C(NRⁱ)N(Rⁱ)₂、-N(Rⁱ)S(O)_tRⁱ(其中t为1或2)、-S(O)或-S(O)_tN(Rⁱ)₂(其中t为1或2)，其中每个Rⁱ独立地为氢、烷基、氟烷基、碳环基、碳环基烷基、芳基、芳烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基或杂芳基烷基。

本文使用的“氨基甲酸酯”是指连接到含有式-C(O)OR的氨基的部分，其中R是烷基、氟烷基、碳环基、碳环基烷基、芳基、芳烷基、杂环基、杂环基烷基、杂芳基或杂芳基烷基。实例包括但不限于Boc(叔丁基-OC(O)-)、CBz(苯甲基-OC(O)-)、Teoc((CH₃)₃SiCH2CH2OC(O)-)，alloc(烯丙基-OC(O)-)或Fmoc(9-芴甲基-OC(O)-)基团。

如本文所用的“取代的甲硅烷基”是指具有式R₃Si-的部分。实例包括，但不限于，TBDMS(叔丁基二甲基硅烷基)、TBDPS(叔丁基二苯基硅烷基)或TMS(三甲基硅烷基)。

术语“巯基”指-SH基团，并包括被取代的巯基，即-SR^J基团，其中R^J各独立地为如本文所定义的被取代或未被取代的烷基、环烷基、烯基、炔基、芳基芳烷基、杂环基或杂环基。

本发明的第一方面涉及一种手性试剂或其盐。所述手性试剂具有下述化学式(I)。术语“手性试剂”是指用于产生立体控制的磷原子修饰的核苷酸或寡核苷酸衍生物的化学组合物。手性试剂与核苷酸反应以形成手性中间体。

在(I)式中，G¹和G²独立地为氢原子、硝基、卤素原子、氰基、式(II)、(III)或(V)的基团，或者G¹和G²结合在一起形成式(IV)的基团。

在(II)式中，G²¹～G²³独立地为氢原子、硝基、卤素原子、氰基或C_1-3烷基。G²¹～G²³的优选实例为氢原子。

在(III)式中，G³¹～G³³独立地为C_1-4烷基、C_6-14芳基C_1-4烷氧基、C_7-14芳烷基、C_1-4烷基C_6-14芳基、C_1-4烷氧基C_6-14芳基或C_6-14芳基C_1-4烷基。

C_1-4烷基C_6-14芳基的实例是甲基苯基和乙基苯基。C_1-4烷氧基C_6-14芳基的实例是甲氧基苯基和乙氧基苯基。C_6-14芳基C_1-4烷基的实例是苄基和苯乙基。G³¹～G³³的优选实例独立地为甲基和苯基。

在(IV)式中，G⁴¹～G⁴⁶独立地为氢原子、硝基、卤素原子、氰基或C_1-3烷基。G⁴¹～G⁴⁶的优选实例为氢原子。

在式(V)中，G⁵¹～G⁵³独立地为氢原子、硝基、卤素原子、氰基、C_1-3烷基或C_1-3烷氧基。

G³和G⁴独立地为氢原子、C_1-3烷基、C_6-14芳基或者G³和G⁴结合在一起形成含有3～16个碳原子的含杂原子的环。G³和G⁴的优选实例是G³和G⁴结合在一起与式(I)中的NH部分形成含有3～16个碳原子的含杂原子的环。

作为一个优选的实施例，所述手性试剂具有下述化学式(I')。

在式(Ⅰ')中，G¹和G²与上述相同，且G¹和G²独立地为氢原子、硝基、卤素原子、氰基、式(Ⅱ)或(Ⅲ)的基团，或G¹和G²结合在一起形成式(Ⅳ)的基团。

作为一个优选的实施例，所述手性试剂具有化学式(I')，且G¹和G²各为式(II)的基团，其中G²¹～G²³独立地为氢原子、硝基、卤素原子、氰基或C_1-3烷基。

作为一个优选的实施例，所述手性试剂具有化学式(I')，且G¹和G²各为式(II)的基团，G²¹～G²³各为氢原子。

作为一个优选的实施例，所述手性试剂具有化学式(I')，且G¹是氢原子，G²为式(II)的基团，G²¹～G²³独立地为氢原子、硝基、卤素原子、氰基或C_1-3烷基。

作为一个优选的实施例，所述手性试剂具有化学式(I')，且G¹是氢原子，G²为式(II)的基团，G²¹和G²²各为氢原子，G²³是硝基(-NO₂)。

作为一个优选的实施例，所述手性试剂具有化学式(I')，且G¹是氢原子，G²为式(Ⅲ)的基团，G³¹～G³³独立地为C_1-4烷基、C_6-14芳基、C_7-14芳烷基、C_1-4烷基C_6-14芳基、C_1-4烷氧基C_6-14芳基或C_6-14芳基C_1-4烷基。

作为一个优选的实施例，所述手性试剂具有化学式(I')，且G¹是氢原子，G²为式(Ⅲ)的基团，G³¹～G³³独立地为C_1-4烷基、C₆芳基、C_7-10芳烷基、C_1-4烷基C₆芳基、C_1-4烷氧基C₆芳基或C₆芳基C_1-4烷基。

作为一个优选的实施例，所述手性试剂具有化学式(I')且G¹是氢原子，G²为式(Ⅲ)的基团，G³¹～G³³独立地为C_1-4烷基或C₆芳基(苯基)。C_1-4烷基的实例是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基和叔丁基。

作为一个优选的实施例，所述手性试剂具有化学式(I')，且G¹是氢原子，G²为式(Ⅲ)的基团，G³¹～G³³独立地为C_1-4烷基。

作为一个优选的实施例，所述手性试剂具有化学式(I')，且G¹是氢原子，G²为式(Ⅲ)的基团，G³¹和G³³为C₆芳基(苯基)，G³²为C_1-2烷基。

作为一个优选的实施例，所述手性试剂具有化学式(I')，且G¹和G²2一起形成式(Ⅳ)的基团，G⁴¹～G⁴⁶独立地为氢原子、硝基、卤素原子、氰基或C_1-3烷基。

作为一个优选的实施例，所述手性试剂具有化学式(I')，且G¹和G²一起形成式(Ⅳ)的基团，其中G⁴¹～G⁴⁶各为氢原子。

作为一个优选的实施例，所述手性试剂具有化学式(I')，且G¹是氢原子，G²为式(V)的基团。进一步地，G⁵¹～G⁵³各独立地为氢原子、硝基、甲基或甲氧基。作为更优选的实施例，G¹是氢原子，G²为式(V)的基团，其中，G⁵¹和G⁵³各为氢原子，G⁵³是4-甲基。

作为一个优选的实施例，所述手性试剂从III-a、III-b、V-a、VII-a、VII-b、IX-a、IX-b、XI-a、XIII-a和XIII-b中选择的一个：

(S)-2-(甲基二苯基硅烷)-1-((S)-吡咯烷-2-基)乙醇(Ⅲ-a)

(R)-2-(甲基二苯基硅烷)-1-((R)-1-吡咯烷-2-基)乙醇(Ⅲ-b)

(S)-2-(三甲基硅烷)-1-((S)-1-吡咯烷-2-基)乙醇(Va)

(R)-2,2-二苯基-1-((S)-吡咯烷-2-基)乙醇(Ⅶ-a)

(S)-2,2-二苯基-1-((R)-吡咯烷-2-基)乙醇(Ⅶ-b)

(R)-2-(4-硝基苯基)-1-((S)-吡咯烷-2-基)乙醇(Ⅸ-a)

(S)-2-(4-硝基苯基)-1-((R)-吡咯烷-2-基)乙醇(Ⅸ-b)

(R)-(9H-芴-9-基)((S)-吡咯烷-2-基)甲醇(Ⅺ-a)

(S)-2-对甲苯磺酰基-1-((S)-1-三苯甲基吡咯烷-2-基)乙醇(ⅩⅢ-a)

(R)-2-对甲苯磺酰基-1-((R)-1-三苯甲基吡咯烷-2-基)乙醇(ⅩⅢ-b)

手性试剂与核酸或修饰核酸反应，生成不对称辅助基团。通过手性试剂与核酸或修饰核酸反应，得到核苷3'-亚磷酰胺衍生物，其为生产立体控制的磷原子修饰的寡核苷酸衍生物的中间体。

本发明的第二个方面涉及由式(Va)或(Vb)表示的核苷3'-亚磷酰胺衍生物。式(Va)和(Vb)的化合物被称为用于合成寡核苷酸衍生物的单体。这些化合物也被称为恶唑磷烷(oxazaphospholidine)单体。由式(Vb)代表的化合物的糖部分被称为BNA和LNA(当R³是亚甲基时)。

在式(Va)和(Vb)，G¹～G⁴与上述相同，G⁵是羟基的保护基，且Bs从由式(VI)～(Ⅺ)或它们的衍生物表示的基团中选取。

Bs的实例为腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶、鸟嘌呤、尿嘧啶、5-甲基胞嘧啶、或它们的衍生物。

R²为氢、-OH、-SH、-NR^dR^d、-N₃、卤素、烷基、烯基、炔基、烷基-Y¹-、烯基-Y¹-、炔基-Y¹-、芳基-Y¹-、杂芳基-Y¹-、-OR^b,或-SR^b，其中R^b为阻断部分。

Y¹为O、NR^d、S或Se。

R^d独立地为氢、烷基、烯基、炔基、芳基、酰基、取代的甲硅烷基、氨基甲酸酯、-P(O)(R^e)₂或-HP(O)(R^e)。

R^e独立地为氢、烷基、芳基、烯基、炔基、烷基-Y²-、烯基-Y²-、炔基-Y²-、芳基-Y²-或杂芳基-Y²-，或阳离子Na⁺、Li⁺或K⁺。

Y²为O、NR^d或S。

烷基的优选实例是C_1-10烷基，烯基的优选实例是C_2-10烯基，炔基的优选实例是C_2-10炔基，芳基的优选实例为C_6-14芳基，杂芳基的优选实例是C_6-14杂芳基。

R³是-CH₂-、-(CH₂)₂-、-CH₂NH-或-CH₂N(CH₃)-表示的基团。

G⁵的实例为三苯甲基、4-单甲氧基三苯甲基、4,4'-二甲氧基三苯甲基、4，4'，4″-三甲氧基三苯甲基、9-苯基黄嘌呤-9-基(Pixyl)和9-(对-甲氧基苯基)黄嘌呤-9-基(MOX)。

Bs是腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶、鸟嘌呤或它们的衍生物。Bs是核碱基或修饰的核碱基。衍生物的实例被JP2005-89441 A公开，并以下式表示。

在上述式中，R⁸～R¹⁰各独立地是C_1-10烷基、C₆-C₁₀芳基、C₆-C₁₀芳烷基或C₆-C₁芳氧基。R⁸的优选实例是甲基、异丙基、苯基、苄基和苯氧基甲基。R⁹和R¹⁰的优选实例是C_1-4烷基。

作为第二个方面的优选实施例，核苷3'-亚磷酰胺衍生物由式(VA')或(Vb')表示。

在式(Va')和(Vb')中，G¹、G²、G⁵、Bs、R²和R³与上述相同。核苷3'-亚磷酰胺衍生物是用来产生立体控制的磷原子修饰的核苷酸和寡核苷酸的衍生物的手性单体。

核苷3'-亚磷酰胺衍生物的优选实施例是由式1a、1b、2a、2b、3a、3b、4a、4b、5a、5b、6a、6b、7a、7b、8a、8b、9a、9b、10a、10b、11a、11b、12a、12b、13a、13b、14a、14b、15a、15b、16a、16b、17a、17b、18a、18b、19a、19b、20a、20b、21a、21b、22a、22b、23a、23b或24a表示。实施例部分描述了这些公式。

DMTr表示4,4'-二甲氧基三苯甲基，TOM表示三异丙基硅氧基甲基。

例如，日本专利JP2005-89441 A公开于使用核苷3'-亚磷酰胺衍生物的实例。如其所公开的，通过重复缩合反应和脱保护反应的步骤，可延长寡核苷酸衍生物的链。

所述寡核苷酸衍生物的式子如式(X)所示。

在式(X)中，X表示硫(＝S)、C_1-3烷基、C_1-3烷氧基、C_1-3烷硫基、C₆-C₁₀芳基、C₆-C₁₀芳烷基或C₆-C₁₀芳氧烷基(aryloxialkyl)。优选地，X表示硫(＝S)。“n”是一个整数，表示1～150，1～100，1～50或1～30。“n”可以是优选为2～100，优选10～100，优选10～50，并且更优选为15～30。

本发明的第三方面涉及一种用于合成立体控制的磷原子修饰的寡核苷酸衍生物的方法。第一步是包含非手性H-膦酸酯部分的分子与第一活化剂和手性试剂或其盐反应，形成单体的步骤。手性试剂具有化学式(I)或(I')，单体可由式(Va)、(Vb)、(Va')或(Vb')。单体与第二活化剂和核苷反应，形成缩合中间体。下一步是将缩合中间体转化为包含手性的X-膦酸酯部分的核酸的步骤。所述方法主要基于国际公开第WO2010/064146号小册子的公开内容。即，基本步骤被公开为其中的途径A和途径B。在所述方法中使用了本发明的手性试剂。

第一个图示涉及合成手性寡核苷酸。

活化步骤

非手性H-膦酸酯部分经过第一活化剂处理，形成第一中间体。在一个实施例中，第一活化剂在缩合步骤中添加到反应混合物中。第一活化剂的使用取决于反应条件，如用于该反应的溶剂。第一活化剂的实例是碳酰氯、氯甲酸三氯甲酯、双(三氯甲基)碳酸酯(BTC)、乙二酰氯、Ph₃PCl₂、(PhO)₃PCl₂、N，N'-双(2-氧代-3-恶唑烷基)次膦酰氯(BopCl)，1,3-二甲基-2-(3-硝基-1,2,4-三唑-1-基)-2-吡咯烷-1-基-1,3,2-二氮杂磷杂环戊烷六氟磷酸盐(MNTP)，或3硝基-1,2,4-三唑-1-基-三(吡咯烷-1-基)磷鐺六氟磷酸盐(PyNTP)。

非手性H-膦酸酯部分的实例是在上述图示中示出的化合物。DBU表示1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯。H⁺DBU可以是，例如，铵离子、烷基铵离子、杂亚铵离子或杂环亚胺离子，其中任何一个是一级、二级、三级或四级，或一价金属离子。

手性试剂反应

第一活化步骤后，活化的非手性H-膦酸酯部分与由式(I)或(I')表示的手性试剂反应，形成式(Va)、(Vb)、(Va')或(Vb')的手性中间体。

立体定向缩合步骤

式Va((Vb)、(Va')或(Vb'))的手性中间体经过第二活化剂处理和核苷处理，形成缩合中间体。所述核苷可以被固体化。第二活化剂的实例是4,5-二氰基咪唑(DCI)、4,5-二氯咪唑、1-苯基咪唑鐺三氟甲磺酸盐(PhIMT)、苯并咪唑三氟甲磺酸盐(BIT)、苯并三唑、3-硝基-1,2,4-三唑(NT)、四唑、5-乙硫基四唑(ETT)、5-苄巯基四唑(BTT)、5-(4-硝基苯基)四唑、N-氰基甲基吡咯烷鐺三氟甲磺酸盐(CMPT)、N-氰基甲基哌啶鐺三氟甲磺酸盐、N-氰基甲基二甲基铵三氟甲磺酸盐。式Va((Vb)、(Va')或(Vb'))的手性中间体可作为单体被分离。通常，式Va((Vb)、(Va')或(Vb'))的手性中间体不被分离，并在同一锅(pot)内与核苷或修饰的核苷反应，提供手性磷酸酯化合物，即缩合中间体。在其它实施例中，当通过固相合成实施该方法时，所述包含该化合物的固体支持物可从副产物、杂质和/或试剂中过滤出来。

封端步骤

如果最终得到的核酸比二聚体大，则用阻断部分将未反应的-OH基团封端，且该化合物的手性助剂，也可以用阻断部分封端，以形成封端的缩合中间体。如果最终得到的核酸是二聚体，则无需封端步骤。

修饰步骤

该化合物通过与亲电试剂发生反应而被修饰。该封端的缩合中间体可发生(实施)修饰步骤。在本方法的一些实施例中，通过使用硫亲电试剂、硒亲电试剂或硼化剂进行修饰步骤。修饰步骤的优选实例是氧化步骤和硫化步骤。

在本方法的一些实施例中，硫亲电试剂是具有下式之一的化合物：

S₈(式B)，Z¹-S-S-Z²或Z¹-S-V-Z²。

Z¹和Z²独立地为烷基、氨基烷基、环烷基、杂环基、环烷基烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、酰基、酰胺、酰亚胺或硫代羰基，或Z^{1 不对称辅助基团专利购买费用说明}

Q：办理专利转让的流程及所需资料

A：专利权人变更需要办理著录项目变更手续，有代理机构的，变更手续应当由代理机构办理。

1：专利变更应当使用专利局统一制作的“著录项目变更申报书”提出。

2：按规定缴纳著录项目变更手续费。

3：同时提交相关证明文件原件。

4：专利权转移的，变更后的专利权人委托新专利代理机构的，应当提交变更后的全体专利申请人签字或者盖章的委托书。

Q:专利著录项目变更费用如何缴交

A：（1）直接到国家知识产权局受理大厅收费窗口缴纳,（2）通过代办处缴纳，（3）通过邮局或者银行汇款,更多缴纳方式

Q：专利转让变更，多久能出结果

A：著录项目变更请求书递交后，一般1-2个月左右就会收到通知，国家知识产权局会下达《转让手续合格通知书》。